三氧化二砷联合热疗对大鼠肝脏移植瘤模型凋亡相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)联合热疗对大鼠肝脏移植瘤细胞的凋亡、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、p53和增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法 建立大鼠肝脏移植瘤模型,分别对荷瘤大鼠给予生理盐水、As₂O₃、热疗及As₂O₃联合热疗,观察肿瘤生长情况,用免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡及肿瘤组织中HSP70、p53及PCNA的表达。结果 As₂O₃ 联合热疗的抗肿瘤作用最明显,坏死及凋亡细胞数量增加。对照组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为30.12%±3.60%,27.64%±4.90%和74.23%±6.35%,三氧化二砷联合热疗组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为87.4%1±5.70%,90.06%±6.42%和22.10%±6.17%。与对照组(仅给予As₂O₃或热疗处理)比较,经As₂O₃联合热疗处理后,HSP70、p53表达显著升高(P=0.000＜ 0.05),PCNA表达则显著降低(P=0.000 ＜0.05)。结论 As₂O₃与热疗联合应用治疗大鼠肝癌有明显的协同作用;As₂O₃联合热疗通过诱导HSP70及p53的表达和降低PCNA的表达抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡。     

乳腺癌保留乳房手术可吸收性PDT/Fe3O4复合物瘤床标记物研究

目的制备贴合人体组织、安全有效的可吸收性乳腺癌术后放疗指示标记夹,同时为其他组织修复标记材料的设计和构建提供理论指导。方法以外消旋丙交酯(DLLA)、三亚甲基碳酸酯(TMC)为原料,一定条件下,将DLLA与TMC共聚合成共聚物PDT[poly-(D,L-lactide-co-TMC)],将PDT样品与制备的磁性纳米Fe₃O₄颗粒通过溶液共混,制备出分散性良好的磁性纳米复合材料。分别在X射线及CT下观察材料显影效果,并结合所研究材料的表征,筛选最佳磁性纳米Fe₃O₄颗粒浓度。结果PDT/Fe₃O₄复合材料电镜下具有较好的均一性,材料的力学强度随着磁性纳米Fe₃O₄颗粒的质量分数变化而改变,弹性模量最高为399.66MPa,对应Fe₃O₄颗粒的质量分数为0.5%,最低为160.34MPa,对应Fe₃O₄颗粒的质量分数为0%;材料与乳房局部组织的CT值有阳性差异,最大CT值为1762.2HU,利于医学影像学显影。结论PDT/Fe₃O₄复合材料具有良好的生物可吸收性,具备良好的影像学显影功能,降解全程满足放疗周期,可用作乳腺癌术后放疗指示标记夹。     

Ras和磷酸化ERK信号通路参与三氧化二砷逆转耐药作用机制的研究

  目的   体外实验研究三氧化二砷(As₂O₃)对人胃癌阿霉素耐药细胞株(SGC7901/ADM)的逆转耐药机制。   方法   MTT法检测磷酸化ERK(p-ERK)激动剂G-CSF作用前后As₂O₃的逆转耐药倍数; 免疫细胞化学法测定As₂O₃及G-CSF作用前后SGC7901/ADM细胞内Ras和p-ERK的变化; 流式细胞仪测定G-CSF和As₂O₃干预后SGC7901/ADM的细胞周期和凋亡率。   结果   SGC7901/ADM对ADM耐药, As₂O₃可逆转耐药, 其中0.5μmol/L As₂O₃作用48 h后逆转耐药倍数约为6.29。G-CSF干预后, 逆转耐药倍数降至4.72;SGC7901/ADM中Ras表达高于亲本细胞株SGC7901/S, 而p-ERK无明显差异, As₂O₃可下调Ras及p-ERK的表达。G-CSF干预后, As₂O₃下调Ras及p-ERK表达的能力较干预前显著降低。0.1μmol/L和0.5μmol/L As₂O₃组的G₀~G₁期细胞比例和凋亡率均显著高于各个对照组; G-CSF干预后同一剂量的As₂O₃组G₀~G₁期细胞及凋亡率较干预前均显著降低。   结论   As₂O₃可逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM对ADM的耐药作用, 其机制与下调Ras/p-ERK信号传导通路中Ras、磷酸化ERK的表达有关。      

葛根素与三氧化二砷协同作用通过Akt/p38途径促进人胶质瘤细胞凋亡

  目的  研究葛根素（PRN）是否通过Akt/p38途径协同三氧化二砷（As₂O₃）促进人胶质瘤细胞的凋亡。  方法  MTT检测细胞的存活率,流式细胞仪（FCM）技术检测细胞的凋亡状态,蛋白免疫印迹（Immunoblotting）检测细胞phosphorylated Akt和p38-MAPK,Cleaved Caspase-3蛋白的表达,PCR检测Caspase-3的mRNA的表达。  结果  PRN协同As₂O₃降低人胶质瘤细胞U87的存活。与对照组相比,PRN（16 μM）组,As₂O₃（2μM）组显著增加细胞内钙水平（1.13±0.015）,（1.18±0.33）。此外,PRN能够协同As₂O₃增加细胞内钙（1.34 ± 0.72）,下调蛋白phosphorylated Akt,上调phosphorylated p38-MAPK和Cleaved Caspase-3蛋白及Cleaved Caspase-3 mRNA表达水平。  结论  PRN协同As₂O₃增加胶质瘤细胞内钙水平,抑制细胞存活。此外,PRN联合As₂O₃下调phosphorylated Akt,增强phosphorylated p38-MAPK和Cleaved Caspase-3的表达,进而促进肿瘤细胞凋亡。PRN可能成为临床上辅助As₂O₃治疗肿瘤中的潜在的辅助治疗药物。      

三氧化二砷与传统及新型药物协同抑制皮肤T细胞淋巴瘤细胞系增殖

  目的  探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）与传统药物地塞米松（Dexamethasone,DXM）、依托泊苷（Etoposide,VP-16）、甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）和新型药物硼替佐米（Bortezomib,BTZ）、组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA）联合对人皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞系Hut-78、Hut-102细胞的增殖抑制作用。  方法  不同浓度的As₂O₃单药或与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合作用于Hut-78、Hut-102细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否具有协同效应。  结果  As₂O₃、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA单药对Hut-78、Hut-102细胞的增殖均具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,培养48h的半数抑制浓度分别为5 μmol/L、500 μg/L、2.5 μg/L、1 μg/L、10 μmol/L、2.5 μmol/L。As₂O₃与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合时具有协同效应,抗肿瘤作用更为显著。  结论  As₂O₃单药及其与DXM/VP-16/MTX/ BTZ/SAHA联合在体外可有效抑制CTCL细胞增殖。As₂O₃是一种很有前景的治疗CTCL的药物,As₂O₃与DXM/VP-16/MTX/BTZ/ SAHA等传统或新型药物联合可为CTCL临床的治疗提供实验依据。      

雄黄抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 研究中药雄黄主要成分As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 不同浓度As₄S₄(20 μmol/L、40 μmol/L、60 μmol/L、80 μmol/L),处理SKOV3细胞24 h,48 h,72 h后,透射电镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化;RT-PCR法和Westernblot法检测As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达影响。结果 不同浓度As₄S₄处理的卵巢癌细胞株SKOV3,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的浓度、时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞仪进行细胞周期DNA成分分析结果显示,随着As₄S₄浓度的增加SKOV3细胞G₀/G₁期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比上升;Bcl-2的表达随药物作用浓度的增加而递减,Bax的表达随药物作用浓度的增加而增强。结论 四硫化四砷具有抑制SKOV3细胞生长增殖的作用,其作用机制与诱发细胞凋亡和调节Bcl-2与Bax表达有关。     

三氧化二砷对人食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)对食管癌离体肿瘤细胞EC-1的放射增敏作用,并探讨其机制。方法利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,观察As₂O₃对食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用。流式细胞法观察As₂O₃对细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果As₂O₃对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应,3 μmol/L As₂O₃作用48 h的放射增敏比为1.285。药物作用后G₂／M期细胞比例增加,G₀/G₁期和S期细胞比例减少;细胞凋亡指数增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应。放射增敏的机制可能与As₂O₃抑制EC-1细胞的修复能力、使细胞周期阻滞在G₂／M期、G₀/G₁期和S期细胞减少以及凋亡增加有关。     

p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒联合磁流体热疗对肝癌细胞的抑制作用

目的:建立p[5HRE] AFPp-p53/PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性.方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5 HRE] AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功;用共沉淀法制备磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4,利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱仪等对PEI-Fe3O4进行表征检测.MTT法检测PEI-Fe3O4转染p[HRE] AFPp-p53至不同细胞系后的细胞增殖及磁流体热疗和基因治疗联合作用对肝癌细胞HepG2的增值抑制作用.结果:成功制备载有靶向治疗基因的p[5HRE] AFPp-p53/PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒,由其介导的基因治疗组与阴性及纳米颗粒对照组相比,明显抑制肝癌HepG2(AFP阳性)细胞[(0.592 ±0.041) vs (1.052 ±0.031)、(1.012-±0.021),P＜0.01]和SMMC7721(AFP阴性)细胞(0.813 ±0.042) vs(1.073±0.032)、(1.182±0.052),P＜0.01]的增殖活性,但对非肝癌细胞(L929和Lovo)增殖抑制作用无明显影响(P＞0.05).基因治疗和磁流体热疗联合组与单独使用热疗组及基因治疗组相比显著增加HepG2细胞的增殖抑制率(76.11％ vs 35.22％、42.92％,均P＜0.01).结论:p[5HRE] AFPp-p53/PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对肝癌细胞具有特异性杀伤作用,并且能与磁流体热疗产生协同效应,是一种选择性高、治疗效果好的肿瘤治疗方法.     

三氧化二砷联合环腺苷酸拟似物诱导骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：近年来随着新型药物和免疫疗法的成功应用，多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者的缓解率、缓解深度和无病生存率较以往显著提高，然而仍有相当一部分MM患者属于复发/难治性病例。我们的前期研究发现，环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）拟似物和三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）可以抑制MM细胞增殖并诱导其凋亡，成为MM治疗的新途径。该研究进一步探究As₂O₃单独和联合环腺苷酸拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸［8-(4-chlorophenylthio) adenosine 3’, 5’-cyclic monophosphate，8-CPT-cAMP］对MM细胞的影响及可能作用机制。方法：以不同浓度As₂O₃和8-CPT-cAMP单独和联合处理MM细胞系U266细胞，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测其增殖，应用药物联合指数（combination index，CI）分析两药是否存在协同效应，同时采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率，进一步利用蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果：U266细胞经As₂O₃和8-CPT-cAMP单独或联合处理72和120 h后，联合用药组细胞增殖抑制率分别为（18.01±0.13）%和（28.01±0.14）%，明显高于单独用药组［As₂O₃组为（11.35±0.01）%和（16.01±0.14）%，8-CPTcAMP组为（12.26±0.30）%和（15.43±0.23）%，P均<0.05］；但两药联合处理U266细胞的CI值均大于1。联合用药组72和120 h后U266细胞凋亡率分别达到（22.26±0.13）%和（31.03±0.14）%，显著高于单药组［As₂O₃组为（10.06±0.01）%和（12.35±0.14）%，8-CPT-cAMP组为（13.26±0.30）%和（18.76±0.23）%，P均<0.05］。同时联合用药组U266细胞内caspase-3蛋白剪切活化和Bcl-2表达下降。结论：As₂O₃联合8-CPT-cAMP对MM细胞凋亡诱导效应强于单药，但无协同效应。     

三氧化二砷联合吉西他滨及多西他赛治疗晚期转移性骨肉瘤26例临床分析

  目的   探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）联合吉西他滨及多西他赛治疗骨肉瘤肺转移的临床疗效。   方法   收集26例对一线化疗药物耐药的骨肉瘤肺转移患者,男性14例,女性12例,年龄11~62岁,平均31.2岁,所有患者均接受过传统规范化疗后出现肺转移。应用As₂O₃（剂量为10 mg/d,d1~28）联合吉西他滨（剂量为800 mg/m2,d1、d8）及多西他赛（剂量为75 mg/m2,d8）每3周重复给药,每2个化疗疗程复查疗效。   结果   接受化疗的患者总体有效率（CR+PR）为34.6%（9/26）。中位随访时间28.2（1~48）个月,中位总生存期（OS）为16.7个月（95%CI:7.561~18.058）和中位无进展生存期（PFS）为10.3个月（95%CI:6.541~ 8.754）,1、2和4年生存率分别是61.5%、38.4%和15.4%。治疗后最常见的不良反应为骨髓抑制,而常见的非血液学不良反应包括心脏毒性、消化道反应及肝肾功能异常,对症处理后均明显缓解。   结论   As₂O₃联合吉西他滨及多西他赛作为二线化疗药物治疗骨肉瘤肺转移的近期临床疗效较好,且有较好的耐受性。      

TRAIL联合三氧化二砷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：研究TRAIL和三氧化二砷共同作用于骨肉瘤OS732细胞对其产生的的杀伤作用,来探寻临床上骨肉瘤的治疗新策略。方法：选取骨肉瘤OS732细胞作为研究对象,将TRAIL及三氧化二砷分别独自或者共同作用于骨肉瘤细胞,对骨肉瘤细胞的杀伤作用通过MTT法来测定,以抑制率的形式体现出来,并在倒置显微镜、荧光显微镜下分别观察肿瘤细胞的形态改变。结果：50ng/ml的TRAIL与2μmol/L三氧化二砷共同作用于骨肉瘤细胞24小时后,肿瘤细胞抑制率为51.32%±4.71%,此作用明显强于单独应用TRAIL（50ng/ml）时的9.85%±0.97%及单独应用三氧化二砷（2μmol/L）时的20.36%±3.84%（P〈0.01）。从细胞形态结构的改变上体现出此种杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的。结论：TRAIL与三氧化二砷可以协同杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的。     

内磁场在磁靶向治疗胆道恶性肿瘤中作用的实验研究

Objective： To evaluate the effect of magnetic nanoparticle containing 5-fluorouracil （5-FU） targeting in treating cholangiocarcinoma based on internal magnetic fields built inside the tumor. Methods： 32 nude mice of BABL/C bearing ectopic tumor were built by subcutaneouly injecting cholangiocarcinoma cell line QBC 939. Three weeks after tumor inoculation, the animal models were divided equally into four groups at random including： （a） group A, consisting of internal magnetic field built by magnetic biliary stent wires inserted into tumor tissue and receiving magnetic nanoparticles containing 5-FU administered via tail vein injection at 250 mg/kg for consecutive five days; （b） group B, receiving placebo （sodium chloride）; （c） group C, receiving pure magnetic biliary stent wires without the applying of magnetic nanoparticles; （d） group D, consisting of external magnetic fields and the same treatment of magnetic nanoparticles containing 5-FU as group A. The tumor volumes were measured every 3 days, totally six times from treatment started. Tumor tissues were observed by transmission electron microscope when the nude mice were killed after the observation period. Results： The experimental group （group A） showed significantly therapeutic efficacy. Moreover, apoptosis of tumor cells could be easily detected in this group. Conclusion： Magnetic particles containing 5-FU combined with internal magnetic field can effectively treat cholangiocarcinoma, and its therapeutic efficacy is better than that of the traditional method based on external magnetic fields.     

磁流体联合紫杉醇对宫颈癌细胞的磁热化疗效应

目的 研究磁流体联合紫杉醇对宫颈癌细胞的磁热化疗作用.方法 采用共沉淀法制备磁流体并用油酸钠修饰,透射电子显微镜、傅立叶变换红外线光谱等对其进行表征.四甲基偶氮唑蓝(MYr)比色法检测磁流体联合紫杉醇对宫颈癌Caski细胞热化疗后的细胞生长情况.结果 所制备的磁流体呈球形,粒径约为20～30 nm,Zeta电位为-11mV至-16mV,在中频交变磁场中具有升温能力,且能达到热化疗的有效温度(41℃～46℃);磁流体联合紫杉醇热化疗能抑制宫颈癌Caski细胞株的生长,且较单纯磁流体热疗及单纯紫杉醇化疗明显.结论 磁流体联合紫杉醇热化疗可同时发挥热疗和化疗的双重作用,且热疗可增强紫杉醇的细胞毒性,效果优于单一疗法.为临床治疗宫颈癌提供新的思路.     

TK基因转染骨肉瘤U-2细胞体外实验研究

目的 研究脂质体介导的TK/GCV系统对人骨肉瘤细胞的杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21以及鉴定测序,提取、纯化重组质粒DNA,培养和转染人骨肉瘤细胞株U-2 OS,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,用转染后的培养液的上清加入TK （-） U-2 OS中观察旁观者效应.结果 成功地构建出包含有TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计.荧光显微镜下观察U-2 OS （TK＋）呈现绿色荧光.U-2 OS TK/GCV培养上清液可明显诱导细胞凋亡.但将上清液用0.2μm的滤膜滤过后,诱导凋亡作用消失.结论成功构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,体外实验表明人骨肉瘤细胞系U-2 OS对脂质体介导的TK/GCV系统敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径.     

索拉非尼、奥沙利铂单药及不同联合方案对人肝癌细胞HepG2的抑制作用

【摘 要】目的 探讨索拉非尼、奥沙利铂单药和两药联合应用对人肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择人肝癌细胞株HepG2并分为6组处理：奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（O）、索拉非尼（2.0 μmol／L）组（S）、同时联合用药（奥沙利铂 0.5 μg／ml,索拉非尼2.0 μmol／L）组（O+S）、奥沙利铂（0.5 μg／ml）序贯索拉非尼（2.0 μmol／L）组（OS）、索拉非尼（2.0 μmol／L）序贯奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（SO）和加入100 μl普通培养液的阴性对照组（C）;分别采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光技术、迁移与侵袭实验,观察奥沙利铂、索拉非尼单药和两药联合应用对HepG2细胞增殖、侵袭与转移的作用。结果 MTT法显示,48 h后用药组对HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用,O+S组的细胞抑制率最高,为（72.13±0.99）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;流式细胞术及荧光显微镜观察显示,O+S组处理HepG2细胞48 h的凋亡率最高,达65.33％,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;细胞迁移实验表明,O+S组的细胞迁移抑制率为（71.67±6.66）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;O+S组和OS组均表现为两药协同作用（P＜0.01）,SO组则表现为两药相加作用（P＜0.05）。细胞侵袭实验表明,O+S组的细胞侵袭抑制率为（76.00±5.57）％,明显高于O组、S组（P＜0.01）;O+S组与OS组均表现为两药协同作用。结论 同时联用奥沙利铂和索拉非尼或序贯应用两药较其各自单药对人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭抑制作用更强,其中先用奥沙利铂序贯索拉非尼与同时联用奥沙利铂和索拉非尼的协同增效作用相似,均优于先用索拉非尼序贯奥沙利铂。     

全反式维甲酸和三氧化二砷抑制子宫内膜癌细胞生长及其与NDRG1基因的关系

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（As2O3）对人子宫内膜癌HEC-2B细胞体外生长的抑制作用及其与分化相关基因1（NDRG1）的关系。方法 采用MTT法比较不同浓度（1×10-7、5×10-7、1×10-6、5×10-6和1×10-5mol／L）ATRA和（1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol／L）As2O3对子宫内膜癌HEC-2B细胞的增殖抑制作用,Western blotting检测HEC-2B细胞中NDRG1蛋白的表达情况。结果 镜下观察,经ATRA和As2O3作用48h后的子宫内膜癌HEC-2B细胞呈现凋亡的特征性改变。1×10-7～1×10-5mol／L 的ATRA和1.0～16.0μmol／L的As2O3能够抑制子宫内膜癌HEC-2B细胞的生长,呈剂量和时间依赖性。ATRA和As2O3能够从蛋白水平调节NDRG1的表达,其表达随药物浓度的增加逐渐下调。结论 ATRA和As2O3能够抑制子宫内膜癌HEC-2B细胞的生长,该抑制作用可能与NDRG1蛋白下调有关。     

三氧化二砷对尤文肉瘤细胞迁移和侵袭能力抑制作用的体外研究

 目的　研究三氧化二砷在体外对尤文肉瘤细胞系迁移和侵袭能力的抑制作用 。方法　通过噻唑蓝（MTT）实验选择对尤文肉瘤细胞系（A-673、RD-ES）无毒性的三氧化二砷浓度（＜2 μmol／L）后,Transwell迁移和侵袭实验检测三氧化二砷作用下尤文肉瘤细胞的迁移和侵袭能力。Western blot实验及明胶酶谱实验检测PI3K-AKT通路相关作用蛋白及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达变化。结果　迁移和侵袭穿过Transwell基底膜的尤文肉瘤细胞的数量随着三氧化二砷浓度的增加而逐渐降低,经不同浓度三氧化二砷处理过的A-673迁移平均数量分别占未处理组的54.3 %、49.0 %和17.0 %,差异有统计学意义（F＝112.78,P＜0.01）,在侵袭实验中分别为52.7 %、32.3 %和10.3 %,差异有统计学意义（F＝183.76,P＜0.01）;经过不同浓度三氧化二砷处理后的RD-ES细胞迁移平均数量分别占未处理组的46.0 %、39.0 %和8.0 %,差异有统计学意义（F＝408.25,P＜0.01）,在侵袭实验中分别为58.7 %、22.3 %和9.0 %,差异有统计学意义（F＝373.25,P＜0.01）。PI3K-AKT通路相关蛋白和MMP-9表达水平下降。结论　低浓度三氧化二砷可以通过下调PI3K-AKT信号通路的表达来抑制尤文肉瘤细胞系的转移能力。     

三氧化二砷对骨肉瘤细胞株MG63/dox多药耐药的逆转作用及其机制

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对骨肉瘤阿霉素（ADM）耐药细胞株MG63/dox的逆转作用及其机制。方法 采用不同浓度ADM（1～1000 ng／ml）和As2O3（0.25～16 μmol／L）分别单独作用于MG63和MG63/dox细胞48 h,并选取2 μmol／L As2O3联合不同浓度ADM（1～1000 ng／ml）作用于MG63/dox细胞24、48、72 h,同时设不加任何药物处理的对照组。应用CCK-8法检测两种药物对MG63和MG63／dox细胞增殖的影响,流式细胞术检测2 μmol／L As2O3、200 ng／ml ADM单独或联合处理48 h后MG63／dox细胞的周期分布和凋亡率,蛋白免疫印迹法检测2 μmol／L As2O3、200 ng／ml ADM单独或联合处理48 h后MG63／dox细胞中P-gp、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 As2O3和ADM单药作用于MG63/dox细胞48 h,细胞增殖均未受到影响;4、8、16 μmol/L As2O3和100、200、400、500、1000 ng/ml ADM分别作用于MG63细胞48 h,细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）。As2O3联合ADM抑制MG63／dox细胞增殖的作用明显高于ADM单药组和对照组（P＜0.05）,且抑制作用呈时间依赖性。与对照组相比,两药联合处理组的细胞凋亡率升高,G0／G1期细胞比例降低,G2／M期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。两药联合处理组MG63／dox细胞中Bax蛋白表达水平明显升高,而P-gp和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 As2O3联合ADM能够抑制骨肉瘤耐药细胞MG63／dox的增殖,这一作用可能与诱导细胞凋亡、上调Bax表达以及下调P-gp和Bcl-2表达有关。     

Proteinolytic activity against IGF-binding proteins involved in the paracrine interactions between prostate adenocarcinoma cells and osteoblasts.

PA-III rat prostate adenocarcinoma cells are capable of inducing osteoblastic reaction after inoculation onto rat skeleton. In this study PA-III cells and osteoblast-derived rat osteosarcoma cells (UMR 106 cells) were employed to characterize the cellular interactions in the PA-III cell-induced bone tumors, in vitro. Insulin-like growth factor-I (IGF-I) and conditioned media (CM) of UMR 106 cells stimlated tritiated-thymidine incorporation into the DNA of PA-III cells growing in serum-free media. This effect was inhibited by monoclonal anti-hIGF-I antibody. In addition PA-III cell CM contained proteinolytic activity for the IGF-binding proteins of UMR 106 cell CM (IGFBP-1 and -2). This proteinase activity hydrolyzed also benzyloxycarbonyl-lysine thiobenzyl ester (BLT) and its action on IGFBPs and BLT was inhibited by benzamidine and aprotinin. Proteinase activity of PA-III cell CM when bound covalently to tritiated-dilsopropylfluoro-phosphate (DFP) and then analyzed on SDS-PAGE gel electrophoresis, revealed the presence of radioactivity linked with a 35 kDa protein band. This proteinase was eluted in the void volume of the G-50 sephadex column and was retained on and eluted from p-benzamidine affinity column. The 35 kDa proteinase was retained on and was eluted from cartridges of the C18 silica by 80% acetonitrile over 0.1% trifuroacetic acid. This partially purified material hydrolyzed BLT substrate and IGFBPs of UMR 106 cell CM and its effect was inhibited by benzamidine and aprotinin. These data indicate that PA-III cell CM contains a 35 kDa proteinase capable of digesting the IGFBPs and thus increases the bioavailability of osteoblast-derived IGFs. This mechanism may participate in the pathophysiology of the PA-III cell-induced bone tumor and its subsequent osteoblastic reaction.     

CIK细胞用于中晚期非小细胞肺癌一线维持治疗的临床观察

目的 探讨自体细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞免疫治疗在中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）一线维持治疗中的疗效及安全性。方法 选取本院2009年6月至2011年3月接受一线治疗且疗效评价稳定（SD）或以上的NSCLC患者112例,随机分为治疗组（n=56）和对照组（n=56）。在接受一线化疗方案原药或减药的维持化疗基础上,治疗组加用CIK细胞免疫治疗,检测CIK细胞治疗前后外周血T细胞亚群的变化;根据药物毒副反应判定标准NCI-CTC 4.0,观察两组患者的毒副反应情况并随访远期生存。结果 CIK治疗后较治疗前T细胞亚群状态改善,未见3～4级不良反应。治疗组的中位无进展生存期（PFS）为8.6个月,高于对照组的7.5个月（P＜0.05）,中位生存时间（OS）分别为19.2个月和18.6个月,差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗组中一线疗效≥50％PR-CR者（靶病灶最大径之和缩小50％～100％）的中位PFS为11.5个月,高于疗效＜50％PR-SD者（靶病灶最大径之和缩小0～50％）的79个月（P＜005）,但中位OS的差异无统计学意义（P＞0.05）;对照组中一线疗效≥50％PR-CR者和疗效＜50％PR-SD者中位PFS及OS的差异均无统计学意义（P＞0.05）;一线疗效≥50％PR-CR者中,治疗组的中位PFS为11.5个月,亦高于对照组的88个月（P＜0.05）,但中位OS的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 CIK细胞免疫治疗在中晚期NSCLC维持治疗中,可以改善患者免疫功能,提高自身抗肿瘤能力,延长PFS,而且具有良好的安全性,可提高NSCLC维持治疗的疗效。