IGFBP-5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义

目的〓〖HTK〗研究胰岛素样生长因子结合蛋白-5 (IGFBP-5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达,并探讨其临床意义。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用RT-PCR及免疫组织化学SP法检测28例正常宫颈组织、37例CIN、40例宫颈癌组织中IGFBP-5、cFLIP表达,二代杂交捕获法检测上述患者宫颈分泌物中高危型HPV DNA。〖HTW〗结果〓〖HTK〗IGFBP-5蛋白在正常组织、CIN、宫颈癌中表达差异有统计学意义（P<0.05）,在CINⅡ/Ⅲ组达高峰,在宫颈浸润癌中IGFBP-5表达下降,且与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移有关。IGFBP-5 mRNA在宫颈癌中高于正常组织,但低于CIN组（P<0.05）。cFLIP蛋白及mRNA在正常组织未见表达,在CIN及宫颈癌中随病变程度加深而表达量增加,各组表达差异有统计学意义(P<0.05)。HPV阳性率在CIN及宫颈癌中高于正常组（P<0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗IGFBP-5及cFLIP与宫颈病变的发展有关,可用于判断患者病情变化及预后。     

大鼠酒精性脂肪肝中Fbw7的表达

目的〓〖HTK〗分析大鼠酒精性脂肪肝Fbw7 mRNA及蛋白的表达量，研究其在酒精性脂肪肝发病机制中的作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗利用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性脂肪肝模型，于12周末处死大鼠。肝脏石蜡切片HE染色观察病理学改变，采用荧光定量PCR及Western blot方法测定大鼠肝组织Fbw7 mRNA含量及蛋白表达量。〖HTW〗结果〓〖HTK〗光镜下，模型组肝脏出现明显脂肪病变，肝组织中甘油三酯含量明显高于正常对照组（P＜0.01），Fbw7 mRNA及蛋白水平亦降低（P＜0.01），并与甘油三酯含量呈负相关。〖HTW〗结论〓〖HTK〗大鼠酒精性肝病时，Fbw7 mRNA及蛋白表达下降，可能在酒精性脂肪肝发病机制中发挥重要作用。     

中国北方汉族人VISA基因相关位点单核苷酸多态性分析

目的〓〖HTK〗分析中国北方汉族正常人群VISA基因相关位点单核苷酸多态性(SNP)的分布特征。〖HTW〗方法〓〖HTK〗用DNA序列测定技术分析100例正常人VISA 基因上下游侧翼序列、外显子及外显子/内含子连接区的核苷酸序列。用核酸序列分析软件与Genbank的VISA基因序列比对，分析SNP的基因型、等位基因分布特点，并与高加索人种比较。〖HTW〗结果〓〖HTK〗发现8个SNP，其中5个为已知的SNP,新发现3个；NCBI数据库中有报道而本研究人群中未出现的SNP位点有6个。中国北方汉族正常人群与高加索人VISA基因多个相关位点基因型及等位基因分布有差异(P＜0.05)。〖HTW〗结论〓〖HTK〗本研究结果对了解中国北方正常人群VISA 基因多态性分布特征有一定的参考价值。     

HLA-DRB1基因多态性与慢性肾小球肾炎相关性

目的〓〖HTK〗探讨慢性肾小球肾炎（CGN）与人类白细胞抗原（HLA）DRB1等位基因的相关性。〖HTW〗方法〓〖HTK〗以山东省3大省级医院近十年汉族CGN尿毒症患者1?073例为病例组，选择中国造血干细胞捐献者资料库山东分库汉族人7418名汉族健康志愿捐献者为对照组，对两组的HLA-Ⅱ类DRB1基因多态性进行分析比较，探讨HLA-DRB1基因多态性与CGN的关系；并随访了部分携有易感基因的患者，评价其预后。〖HTW〗结果〓〖HTK〗病例组中HLA-DRB1*18基因频率高于对照组(P＜0.001)，可能是CGN尿毒症的易感基因，且随访发现携有该类基因的患者预后较差。病例组中HLA-DRB1*16基因频率低于对照组(P＜0.001)，可能是CGN尿毒症的保护基因。〖HTW〗结论〓〖HTK〗山东汉族人群CGN与HLA-DRB1关联，且携有可能易感基因的患者预后较差。     

腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用

目的〓〖HTK〗探讨腺病毒介导HSV-TK/GCV系统对色素沉着绒毛结节滑膜炎(PVNS)滑膜细胞的体外杀伤作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗将含LacZ基因的重组腺病毒载体Ad-LacZ转染PVNS滑膜细胞, X-gal染色法确定腺病毒对该细胞的转染效率，PCR检测转染细胞中HSV-TK基因的表达，MTT法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应，流式细胞仪检测HSV-TK/GCV系统作用后细胞的凋亡及坏死。〖HTW〗结果〓〖HTK〗感染复数为120时，近100％的细胞可被转染。HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用十分明显，且存在明显的旁观者效应。HSV-TK/GCV系统作用后细胞出现明显的凋亡及坏死。〖HTW〗结论〓〖HTK〗HSV-TK/GCV系统可明显杀伤PVNS中过度增殖滑膜细胞，可望用于PVNS的治疗。     

正畸治疗中龈沟液天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶水平的变化

目的〓〖HTK〗探讨直丝弓正畸过程中龈沟液天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase，AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）水平的变化对衡量牙周组织健康状况的参考价值。〖HTW〗方法〓〖HTK〗选择使用直丝弓矫治器的青少年患者44名,治疗前及安装矫治器1、3个月后采集龈沟液，采用生化分析仪检测分析龈沟液中AST、ALP的水平变化，并检查牙龈指数（GI）。〖HTW〗结果〓〖HTK〗矫治1个月时AST、 ALP水平比治疗前显著增高(P＜0.05)，3个月时AST、ALP酶水平趋于正常；1个月时GI比治疗前显著升高(P＜0.05)；3个月时GI比1个月时显著降低(P＜0.05)，但与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05)。〖HTW〗结论〓〖HTK〗龈沟液AST、ALP可做为牙周组织炎性改变的重要衡量指标。     

前列腺组织特异性启动子介导的TAT-EGFP的靶向表达

目的〓〖HTK〗构建由前列腺特异抗原（PSA）启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列（TAT）的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白pPSA-TAT-EGFP表达载体，使TAT所携带的目的蛋白能够在靶组织中高效表达，提高其特异性及表达效率。〖HTW〗方法〓〖HTK〗以pEGFP-1载体为模板，设计包含TAT序列的引物，PCR技术扩增含有酶切位点的小片段Sal I-TAT-EGFP-Not I，经胶回收纯化，连接到T克隆载体。双酶切及测序鉴定后，提取质粒、双酶切后胶回收得到目的小片段。 含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后，胶回收含有PSA启动子序列的大片段。过夜连接目的小片段与PSA启动子大片段，得到pPSA-TAT-EGFP表达载体。转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定。将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况。〖HTW〗结果〓〖HTK〗成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体。转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达。〖HTW〗结论〓〖HTK〗引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的蛋白能够在前列腺癌组织中表达。     

人疱疹病毒8型感染的间接ELISA检测方法的建立

目的〓〖HTK〗建立人疱疹病毒8型（HHV-8）感染的间接ELISA检测方法，并初步探讨其应用价值。〖HTW〗方法〓〖HTK〗利用PCR技术获得HHV-8 ORF73C基因，插入到原核表达载体pGEX-6P-1中，在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达；以纯化的GST-ORF73C融合蛋白为包被抗原，利用方阵滴定法确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度，并通过阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验及与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法进行试验比较等评价其效果。〖HTW〗结果〓〖HTK〗SDS-PAGE及Western-blot检测结果显示，目的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达，且表达产物能被KS阳性血清［HIV(+)/KS(+)血清］特异性识别；方阵滴定试验显示：包被抗原的最佳浓度为1.5μg/mL，血清抗体的最佳稀释度为1∶80；阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性好；对86份HIV（+）/KS（-）血清样品进行检测的结果显示，该方法与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法的符合率为98.8％。〖HTW〗结论〓〖HTK〗GST-ORF73C-ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性，可用于HHV-8感染的血清学检测及流行病学调查。     

Tiam1表达与大肠癌外周血微转移的关系

目的〓〖HTK〗探讨Tiam1与大肠癌外周血微转移的关系。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用实时荧光定量逆转录PCR方法检测51例大肠癌患者外周血微转移标志物CK20 mRNA的表达以及Tiam1在大肠癌组织及距肿瘤边缘5～10cm的正常粘膜组织中的表达,应用SPSS11.5统计软件分析Tiam1 mRNA表达水平与大肠癌临床表现及病理特征的相关性。〖HTW〗结果〓〖HTK〗51例中18例（35.29%）检测到外周血微转移。Tiam1 mRNA在有外周血微转移的大肠癌组织及无外周血微转移的大肠癌组织中表达分别为（72.11±2.38）×10-4、（15.78±5.01）×10-4, 差异有统计学意义（P＜0.05）。大肠癌Tiam1 mRNA的表量与患者的性别、年龄、原发部位、肿瘤直径、外周血CEA值无相关关系（P>0.05）, 但与肿瘤外周血微转移、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期相关（P<0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗Tiam1与大肠癌外周血微转移、组织分化、淋巴结转移密切相关,检测Tiam1 mRNA含量有助于判断大肠癌的侵袭和转移,尤其是外周血微转移。     

老年人载脂蛋白A5与血脂、脂蛋白及血糖的相关性

目的〓〖HTK〗探讨老年人载脂蛋白A5（APOA5）与血脂、脂蛋白及血糖的相关性。〖HTW〗方法〓〖HTK〗应用AU1000/2700型自动生化分析仪对187例健康老年人进行血清总胆固醇（TC）、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A1(APOA1)、载脂蛋白B100(APO B100)和血糖（GLU）的检测。同时采用ELISA法测定血清APOA5。〖HTW〗结果〓〖HTK〗血清APOA5水平与血清TG水平之间呈显著负相关（P＜0.01），与血清胆固醇(CH)、LDL-C、APOB100水平有负相关的趋势，与HDL-C、APOA1和GLU水平之间有正相关的趋势（P＞0.05）；APOA5水平女性低于男性（P＞0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗①老年人血清APOA5水平与血清TG水平呈负相关，APOA5可能是TG代谢的重要调节因子之一；②性别对老年人血清APOA5水平无明显影响。     

CCN家族研究进展

新近发现的CCN基因家族包括CTGF，Cyr61,nov,elml,HICP和WISP-3等，它们由343-381个氨基酸残基构成4个结构模块，都含有38个保守的半胱氨酸，具有广泛的生物学特性，影响细胞的生长，分化，粘附和运动，在妊娠，发育和分化，血管生成，伤口修复，炎性作用，肿瘤生长等多种生物学过程中起重要作用。     

低氧对小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1表达的影响

目的 探讨低氧环境对小鼠成骨细胞富含半胱氨酸61（Cyr61/CCN1）表达的影响。 方法 分别在氧浓度和去铁敏诱导的低氧环境下培养小鼠成骨细胞,Real-time PCR和Western blotting于不同时间点检测成骨细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、Cyr61/CCN1和血管内皮生长因子的表达。分别敲除小鼠成骨细胞中HIF-1α和VHL基因,检测细胞Cyr61/CCN1的表达。 结果 两种低氧环境下,小鼠成骨细胞HIF-1α通路被激活,Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.05或P<0.01）。HIF-1α基因敲除小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著减少,VHL基因敲除成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.05或P<0.01）。 结论 低氧环境通过激活HIF-1α通路来上调小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1的表达。     

WISP-3与肿瘤的研究进展

Wnt-1诱导分泌蛋白3(WISP-3),是CCN家族成员之一,也称CCN6。它与大多数CCN家族成员的结构和功能相似,可编码多种细胞外基质蛋白,参与细胞的增殖分化与凋亡的调控,并可促进神经、血管、骨骼的发育。WISP-3表达水平的不同与多种恶性肿瘤的发生和发展有关,已成为CCN家族的研究热点之一。     

Cyr61基因的生物学功能及在肿瘤发生发展过程中的作用

Cyr61（cysteine-rich 61）是CCN家族第一个被克隆出来的、由生长因子诱导产生的富含半胱氨酸的即刻早期基因产物。作为一种重要的细胞基质调节因子,Cyr61在胚胎发育、伤口修复、血管性疾病及肿瘤的发生发展过程中均发挥重要的生物学作用。研究发现Cyr61在肿瘤组织中广泛表达,并且与肿瘤新生血管形成及肿瘤细胞的增殖与凋亡、转移密切相关。Cyr61在不同细胞中的表达受多种信号通路的调控,可与多种整联蛋白结合激活不同的下游通路,可能通过参与Wnt、NF-kB、Tyrosine Kinase（酪氨酸激酶）、Akt等信号转导通路调控其它癌基因、抑癌基因或凋亡调控因子的表达。     

肾母细胞瘤过表达基因促进肝癌细胞的侵袭与转移

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV CCN3)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中的CCN3的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中CCN3的mRNA表达水平,Western blot检测肝癌及癌旁组织中CCN3蛋白的表达量;通过肝癌细胞过表达CCN3分析CCN3蛋白对肝癌细胞转移的作用;运用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验研究CCN3过表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响?结果:50对样本中有39对CCN3的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,Western blot提示肝癌组织中CCN3蛋白表达量高于癌旁组织?体外肝癌细胞的功能试验中,过表达CCN3能促进MHCC-97H?SMMC-7721细胞的侵袭与转移?结论:CCN3在肝癌组织中高表达,过表达CCN3能促进肝癌的侵袭与转移,CCN3发挥作用机制的研究能为肝细胞肝癌的治疗提供新的思路?     

SARI及CCN1基因在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨SARI及其下游CCN1基因表达与结直肠癌发生、发展的关系及对预后的影响。方法 实时定量PCR检测32例冻存新鲜结直肠癌及癌旁组织SARI、CCNl mRNA表达,逆转录PCR检测人结直肠癌细胞株（Caco-2、HT-29、Lovo）SARI、CCNl mRNA表达。免疫组织化学法检测116例结直肠癌根治切除标本癌及癌旁组织SARI、CCN1蛋白表达。对SARI、CCN1蛋白表达进行关联分析,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。分析SARI、CCN1蛋白表达水平对患者预后的影响。结果 癌组织中SARI mRNA表达下调,而CCN1 mRNA表达上调（均P＜0.05）,在癌细胞株中二者表达趋势与在组织中一致。癌旁组织和癌组织SARI蛋白阳性表达率分别为76. 7％和28.4％,CCN1蛋白阳性表达率分别为26. 7％和74.1％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;癌组织中SARI蛋白表达与CCN1蛋白表达呈负相关（r= -0.24,P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者肿瘤分化程度差、浸润深度深及TNM分期高（均P＜0. 05）;CCN1蛋白阳性表达者,肿瘤浸润深度深且TNM分期高（均P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者,患者术后生存时间明显缩短(X2=8.47,P＜0.05),SARI蛋白阴性且同时CCN1蛋白阳性表达者,患者术后生存时间进一步缩短(X2=12.56,P＜0.05)。结论 SARI与CCN1异常表达与结直肠癌恶性生物学行为有关,且SARI蛋白阴性表达与结直肠癌患者不良预后有关。     

Cyr61基因与慢性粒细胞白血病的相关性研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中富半胱氨酸61基因（Cyr61）的表达水平及其临床意义。方法应用半定量RT PCR和免疫组化技术分别检测38例CML患者和10例正常对照者（正常对照组）骨髓单个核细胞中Cyr61mRNA和蛋白水平的表达情况,CML患者中慢性期20例（慢性期组）,加速期11例（加速期组）,急变期7例（急变期组）。结果38例CML患者中,慢性期组、加速期组、急变期组Cyr61mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05)。Cyr61基因在加速期及急变期的表达高于慢性期(P<0．05),Cyr61基因在加速期和急变期的表达虽升高,但两者差异无统计学意义(P>0．05)。Cyr61蛋白在CML中的表达明显高于正常对照组,CML加速期和急变期中Cyr61蛋白的表达高于慢性期（P均<0．05）。结论Cyr61基因参与了CML的发生、发展过程,且与CML的急变有关,可作为预示CML急变的实验依据。     

NOV基因对肾透明细胞癌细胞MMP表达的影响

目的 探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV)对肾透明细胞癌细胞基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响.方法 构建NOV蛋白表达真核细胞重组表达质粒pEGFP-C1-NOV,转染人肾癌细胞株786-O.通过实时定量RT-PCR的方法定量转染pEGFP-C1-NOV细胞(实验组)、转染空载体细胞(空载组)和未转染的786-O细胞(空白组)的基质金属蛋白酶(MMP)亚型(包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-13)的表达水平.方差分析法比较实验组与空载组及空白组各MMP亚型表达水平的差异.结果 实验组与空白组和空载组比较,MMP-1、MMP-3和MMP-13表达水平升高(P＜0.05),而MMP-2和MMP-7的表达水平下降(P＜0.05).实验组MMP-9的表达水平与空白组和空载组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NOV可调节肾透明细胞癌细胞MMP的表达,NOV对MMP的调节可能是NOV发挥功能的机制之一.     

Wnt-1诱导分泌蛋白-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的 通过检测Wnt-1诱导分泌蛋白-1 (Wnt-1 induced secreted protein-1,WISP-1)在人乳腺癌中的表达,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用.方法 采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化法检测WISP-1 mRNA和蛋白表达水平, 定量分析其表达与临床病理特征的关系.结果 WISP-1在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义(P=0.001).WISP-1 mRNA表达与肿瘤大小、分期、组织学类型、是否有淋巴结转移和表皮生长因子受体-2(HER-2)表达有关(P<0.05),与年龄和雌、孕激素受体无关(P>0.05).WISP-1蛋白表达与肿瘤组织学类型、是否有淋巴结转移和HER-2表达有关(P<0.05),与年龄,肿瘤大小,分期和雌、孕激素受体无关(P>0.05).结论 乳腺癌组织中WISP-1表达明显升高, 在乳腺癌的浸润与转移中具有重要作用.