睾丸特异的核孔蛋白BS—63与transportin（karopherin beta2）结合区域的确定以及体外结合的证明

目的：确定睾丸特异的核孔蛋白BS－63与transportin(karopherin beta2)的结合区域,体外验证BS－63与transportin的结合作用。方法：将BS－63 C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结构区域。分别于大肠杆菌中表达上述相互作用片段,并进一步运用pull down实验在体外验证BS－63与transportin的结合作用。结果：BS－63 C端与transportin相结合的区域从起始的1．6kb确定至包括一个Ran binding domain(RanBD)在内0．6kb范围内。Pulldown以及Western blot证实此区域在体外可与transportin相结合。结论：在生精细胞中,位于胞则的睾丸特异的核 孔蛋白BS－63将被转动物向核内的转运过程可能是由transportin协助完成的。     

结直肠腺瘤中核孔蛋白88的表达及临床意义

目的:观察核孔蛋白88 (Nucleoporin 88,Nup88)在结直肠腺瘤中的表达,分析其与临床病理特征间的关系.方法:采用SP免疫组织化学法检测163例结直肠腺瘤、43例结直肠癌和23例正常肠黏膜组织中Nup88蛋白的表达,统计学分析比较3组间Nup88蛋白表达的差异,及Nup88表达与结直肠腺瘤临床病理特征间...     

视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

目的：从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子（ROP）并建立ROP－绿色荧光蛋白（GFP）融合基因转基因小鼠模型。方法：用PCR法从基因组内扩增ROP，通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体，并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pMOP-EGFP表达质粒经Not I酶切线性化后，用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核，制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建小鼠，基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传化后，取眼球进行冰冻切片，在荧光显微镜下观察视网膜下GFP的表达。结果：从基因组内扩增出了2.1kb的小鼠ROP，成功构建了小鼠ROP－GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建，分别命名为C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU21,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论：成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠，它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制，还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。     

增强子结合蛋白家庭的一个新基因HP8定位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带

目的:探讨增强子结合蛋白(C/EBP)家族一个新基因HP8的人染色体定位.方法:按常规方法制备分裂期人淋巴细胞切片,用生物素标记HP8基因 3’-端 2.1kb cDNA作探针,进行荧光原位杂交(FISH).对FISH信号及染色体上DAPI结合条带同时拍照,二者重迭信号进行计数,结果:100个有丝分裂图中,有72个显示阳性信号位于同一对染色体,并且无其他非特异性杂交带,杂交效率约为70%.参照DAPI结合条带,阳性信号位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带.结论:HP8基因定位于人19号染色体长臂 13.1-13.2区带.     

人睾丸特异表达基因TDRG1 单克隆抗体的制备及鉴定

目的：构建原核质粒表达TDRG1重组蛋白,制备其单克隆抗体（mAb）并鉴定其生物学特性。方法：用逆转录聚合酶链反应法从成人睾丸组织中扩增TDRG1编码序列,将其克隆到pET21原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）内进行诱导表达TDRG1重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体（mAb）。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌mAb的效价和类型,Western 印迹和免疫组织化学染色鉴定mAb的特异性。 结果：成功构建了pET21/TDRG1原核表达质粒并获得纯度较高的重组蛋白。筛选出2株能稳定分泌抗TDRG1的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶1.6×106,免疫球蛋白类型均为IgG1类。Western 印迹和免疫组织化学染色显示该mAb能特异结合成人睾丸组织中的TDRG1蛋白。结论：所获得的重组TDRG1蛋白纯度高,免疫抗原性强,并成功制备了抗TDRG1的单克隆抗体。     

荧光原位杂交和免疫组化法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的 对比研究乳腺癌中免疫组化法(IHC)检测Her-2蛋白表达和荧光原位杂交法(FISH)检测Her-2基因扩增检测结果的差异性和相关性,并评估其临床应用价值. 方法 应用IHC和FISH技术检测50例乳腺癌组织中Her-2蛋白表达及Her-2基因扩增状况,并进行对比分析. 结果 50例乳腺癌中,8例Her-2蛋白表达IHC(+++)的病例中有7例Her-2基因扩增(87.5%),7例IHC(++)的病例有6例Her-2基因扩增(85.71%),3例IHC(+)的病例有2例Her-2基因扩增(66.67%),而在32例IHC(0)的乳腺癌中仍出现2例Her-2基因扩增(6.25%).IHC和FISH两种方法检测结果的总符合率为88.0%,两者呈显著相关(P＜0.001). 结论 IHC是初步筛查乳腺癌Her-2状态的首选方法,Her-2蛋白高强度表达IHC(+++)与基因扩增有较好的一致性,而弱中强度表达IHC(+～++)者有必要进一步行FISH法检测基因状态来指导临床的诊疗.     

乳腺癌中HER-2蛋白表达及基因扩增检测的比较研究

目的 比较免疫组化（IHC）法与荧光原位杂交（FISH）法检测乳腺癌组织HER-2状态,分析二者相关性.方法 应用IHC法与FISH法对56例女性新发乳腺癌行HER-2蛋白表达及基因扩增的检测.结果 56例受试者中HER-2蛋白表达（-）、（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）者分别为9例（16.1%）、29例（51.8%）、11例（19.6%）、7例（12.5%）;有26例（46.4%）HER-2基因扩增,30例（53.6%）无扩增.HER-2基因扩增主要表现在HER-2（＋＋）和（＋＋＋）中,基因扩增率分别为72 7%和100%.HER-2（＋）中有11例（37.9%）出现基因扩增,HER-2（-）中未见基因扩增.两种方法检测结果的阳性率差异有统计学意义（χ2=19.778,P＜0.01）.HER-2（-）及HER-2（＋＋＋）与FISH结果一致性很好（Kappa=0.969）.HER-2（＋）及HER-2（＋＋）与FISH结果一致性较差（Kappa=0.271）.结论 IHC是HER-2表达初步的筛查方法,HER-2（-）和（＋＋＋）者与基因扩增情况有很好的一致性,可直接指导临床治疗.HER-2（＋）和（＋＋）者中有部分HER-2基因扩增阳性,如行靶向治疗需进一步行FISH检测.     

乳腺癌HER2蛋白阳性表达的基因状态及其与P53蛋白相关性研究

目的研究乳腺癌HER2蛋白表达阳性的基因状态及其与P53蛋白相关性,探讨其与乳腺癌发生、发展的内在关系。方法选取257例HER2蛋白表达阳性的浸润性乳腺癌样本,分别应用荧光原位杂交（FISH）法和免疫组织化学EliVisionTMplus法对标本中的HER2基因和P53蛋白、ER和PR受体进行检测并做相关性分析。结果①HER2基因扩增率64．59％（166／257）;其中IHC（2＋）56．48％（109／193）,（3＋）89．06％（57／64）;HER2基因扩增和其蛋白阳性表达比较有显著相关性（P〈0．01）。②P53蛋白表达率52．92％（136／257）,P53蛋白表达率、HER2基因扩增率与ER、PR受体表达及腋窝淋巴结转移差异有显著性（P〈0．05）;与肿瘤大小、病理学类型、年龄无统计学意义（P〉0．05）。结论HER2基因扩增率与P53蛋白表达率呈正相关,两者指标的联合检测对乳腺癌的转移、预后评估具有重要的参考意义。     

核孔滤膜技术在高血糖研究上的应用

目的:用核孔滤膜法测定高血糖病人红细胞变形能力(Erythrocyte Deformability,ED)与血糖水平的变化关系,以红细胞变形性入手来研究糖尿病及其并发症的机制。方法:用核孔滤膜红细胞测定仪检测62例高血糖患者的红细胞滤过指数(Filtrationindex IF)测定出红细胞变形能力。与年龄、性别、血脂相近的正常人进行比较观察。结果:在高血糖患者中,与血糖正常对照组红细胞变形能力进行对比,经统计处理,两组高血糖患者与对照组进行比较明显高于对照组(t=18.69,t=15.26,P<0.01)。,高血糖与红细胞变形能力呈负相关。结论:高血糖患者由于糖代谢紊乱,使红细胞膜上脂类和红细胞浆成分发生变化。红细胞ED降低与血糖增高有密切关系。因此,研究红细胞变形性变化,成为研究高血糖控制良好与否的重要指标。     

一种新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因

目的 铁氧还蛋白系铁硫蛋白，在多种反应体系中起着传递电子的作用，也参与抗滴虫药物甲硝咪唑杀虫作用的激活。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因，以便进一步探讨其生理功能。方法 构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，分离cDNA进行克隆、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个新的铁氧还蛋白基因。该基因读码框全长312bp，相应蛋白质序列具103个氨基酸；在该蛋白质前体的N端带有10个氨基酸残基的氢酶体靶片段(MLSQCSPLRF)。序列分析显示该铁氧还蛋白(TvFd2)与已报道的阴道毛滴虫铁氧还蛋白(TvFd)有高度同源性(69％)；TvFd2与铁氧还蛋白(2Fe-2S)的两大亚类(氧化酶铁氧还蛋白和光合铁氧还蛋白)均具较低的同源性；可与(2Fe-2S)结合的4个半胱氨酸排列成典型的铁氧还蛋白保守序列(-C-X5-C-X2-C-Xn-C-)。结论 分析表明TvFd2是一新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白，其功能有待进一步研究。     

宫颈病变与端粒酶及端粒酶基因

宫颈癌是妇产科常见的恶性肿瘤之一,在宫颈癌的发生过程中,人乳头瘤病毒（HPV）感染是重要的环境致瘤因素,但由于HPV并不能单独致瘤,细胞内遗传性因素的改变可能具有更重要的意义。端粒酶基因是近年提出的遗传易感因素之一,本文就端粒酶基因相关研究进展进行综述。     

斑马鱼rnf141基因结构与表达分析

目的:探讨斑马鱼rnf141基因在物种间进化以及在斑马鱼胚胎发育和成体中表达分布特点.方法:采用生物信息学方法分析斑马鱼rnf141基因结构特征;运用胚胎整体原位杂交和多组织RT-PCR技术分别检测斑马鱼胚胎发育不同阶段和成体各组织rnf141基因表达情况.结果:斑马鱼RNF141蛋白与人类和小鼠同源蛋白(ZNF230、Znf230)分别具有79.8%、78.5%的同源性,其中C3HC4型锌指结构域及其保守的半胱氨酸和组氨酸残基组成与人类(或小鼠)的同源性分别为84.8%、100%;而且,斑马鱼RNF141蛋白与人类ZNF230蛋白在C3HC4型锌指区域具有完全相同的二级结构.杂交结果显示,rnf141基因在斑马鱼胚胎中广泛表达,尤以端脑、小脑和后脑表达丰度为高.RT-PCR结果表明,rnf141基因在受检的成体组织中均有表达,但在睾丸组织中表达丰度较高.结论:斑马鱼rnf141基因为脊椎动物保守基因,并可能在胚胎发育和精子发生过程中起着重要作用.     

葡萄胎发病新基因F10与滋养细胞肿瘤侵袭相关性研究

目的 探讨葡萄胎差异表达新基因F10在不同类型滋养细胞肿瘤中的表达及其与恶性滋养细胞肿瘤侵袭的关系。方法 采用原位杂交方法检测12例葡萄胎、6例侵袭性葡萄胎、8例绒癌中F10表达情况。结果 F10在全部葡萄胎、侵袭性葡萄胎、绒癌中均呈阳性表达,其在葡萄胎、侵袭性葡萄胎、绒癌中的表达强度递增,有显著性差异(P<0.001)。结论 F10可能与滋养细胞肿瘤的发生及其侵袭行为相关,在侵袭或滋养细胞恶变中起一定作用。     

端粒酶基因在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义

[目的]探讨人类染色体端粒酶(hTERC)基因在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义。[方法]收集2008年3月~2009年3月就诊于大连医科大学附属第一医院妇产科患者的宫颈脱落细胞标本,选取细胞学及组织学均正常的20例标本建立阈值,并选取100例细胞学异常或组织学异常标本,共120例宫颈脱落细胞标本参与实验,荧光原位杂交(FISH)方法检测脱落细胞hTERC基因。[结果]CINⅡ/Ⅲ及宫颈癌组与正常组及CINⅠ组比较,hTERC基因阳性表达率均明显增高(P<0.05),且宫颈癌组表达率高于CINⅡ/Ⅲ组(P<0.05)。细胞学分级AS-CUS及以上各组与正常组比较,hTERC基因阳性表达率均增高(P<0.05),且HSIL组及宫颈癌组表达率均较AS-CUS组及LSIL组增高(P<0.05)。组织学分级中,CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌的基因扩增异常细胞数目均高于正常组(P<0.05)。CINⅡ及以上级别病变基因扩增异常细胞数目约为(27±17)%,其单侧95%可信区间为μ>23.6%。hTERC基因对ASCUS样本的高级别病变阳性预测值为91%,阴性预测值为94%。[结论]hTERC基因在CINⅡ/Ⅲ和宫颈癌中表达异常,且随病变程度增加阳性表达率增加。hTERC基因扩增异常细胞数≥24%可能成为检测CINⅡ及以上高级别病变的独立生物学指标并对ASCUS分流有一定的指导意义。     

Rap1基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的时空表达谱研究

目的：选择斑马鱼作为实验动物模型,研究Rap1基因在胚胎早期发育过程中的时空表达规律。方法从斑马鱼胚胎cDNA中克隆Rap1基因片段,将Rap1基因片段和pCS2＋质粒进行体外连接重组,重组质粒经双酶切、菌落聚合酶链反应（PCR）及测序鉴定正确后,经T3RNA体外转录体系合成DIG标记的Rap1基因反义mRNA探针,采用整胚原位杂交方法检测Rap1在斑马鱼胚胎早期发育过程的表达情况。结果在斑马鱼胚胎0．75 hpf的细胞分裂连接处、3．70 hpf和6．00 hpf的动物极、12．00～72．00 hpf的脊索神经部位均可见Rap1基因的阳性杂交信号。结论 Rap1基因在斑马鱼脊索神经系统的早期发育过程中可能起到重要的调控作用。     

荧光原位杂交法检测乳腺癌HER-2/neu表达及临床意义

目的探讨用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)方法检测乳腺癌HER-2/neu基因表达的临床意义。方法应用FISH法对2008年1月至2008年7月在首都医科大学附属北京天坛医院就诊的33例女性新发乳腺癌患者进行HER-2/neu基因检测,分析基因表达程度与临床病理特征之间的关系,比较基因和免疫组化(IHC)法蛋白表达的差别。结果33位受试者中HER-2/neu基因过表达率为39.4%,其过表达与肿瘤大小、绝经与否、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。该基因在有腋淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),ER阴性组高于ER阳性组,差异有统计学意义(P<0.01)。PR阴性组与阳性组间差异无统计学意义。P53基因阳性组显著高于阴性组(P<0.05)。HER-2/neu基因过表达者11例为免疫组化HER-2蛋白强阳性病例;2例为中度阳性病例。结论FISH技术可稳定检测乳腺癌中HER-2/neu基因的表达程度,其过表达与绝经与否、肿瘤大小、临床分期无关,与腋淋巴结转移和P53基因表达成正相关,与ER呈密切负相关。HER-2蛋白高强度表达(3+)与基因扩增有极好的一致性,而中等强度表达(2+)必须进一步行FISH法基因检测。     

Clinical significance of hTERC gene amplification detection by FISH in the screening of cervical lesions

This study evaluated the clinical significance of hTERC gene amplification detection by fluorescence in sire hybridization （FISH） in the screening of cervical lesions. Cervical specimens of 50 high risk patients were detected by thin liquid-based cytology. The patients whose cytological resuits were classified as ASCUS or above were subjected to the subsequent colposcopic biopsies. Slides prepared from these 50 cervical specimens were analyzed for hTERC gene amplification using interphase FISH with the two-color hTERC probe. The results of the cytological analysis and those of subsequent biopsies, when available, were compared with the FISH-detected hTERC abnormalities. It was found that the positive rates of hTERC gene amplification in NILM, ASCUS, LSIL, HSIL, and SCC groups were 0.00, 28.57%, 57.14%, 100%, and 100%, respectively. The positive rates ofhTERC gene amplification in HSIL and SCC groups were significantly higher than those in NILM, ASCUS and LSIL groups （all P〈0.05）. The mean percentages of cells with hTERC gene amplification in NILM, ASCUS, LSIL, HSIL, and SCC groups were 0.00, 10.50%, 36.00%, 79.00%, and 96.50%, respectively. Patients with HSIL or SCC cytological diagnoses had significantly higher mean percent- ages of cells with hTERC gene amplification than did patients with NILM, ASCUS or LSIL cytological diagnoses （all P〈0.05）. It was concluded that two-color interphase FISH could detect hTERC gene amplification to accurately distinguish HS1L and ISIL of cervical cells. It may be an adjunct to cytology screening, especially high-risk patients.     

肿瘤浸润性淋巴细胞的Caltractin 基因过表达

[目的]发现新的肿瘤相关基因,并确定肿瘤组织细胞Cahractin基因的表达状况。[方法]用荧光差异显示法对2例乳腺癌的基因表达进行分析,锁定呈高表达的Caltractin基因。用Northern印迹杂交法测定Caltractin基因在10例恶性肿瘤（乳腺癌5例、肝癌1例、胃癌3例及胃平滑肌肉瘤1例）中的表达。而用原位杂交法检测Caltractin基因在乳腺癌2例及胃癌2例表达的细胞类型。[结果]荧光差异法显示Caltractin基因在乳腺癌组织中呈现过表达。Northern印迹杂交检测显示在10例恶性肿瘤中均出现Caltractin基因的过表达。原位杂交法示肿瘤浸润性淋巴细胞出现caltractin mRNA信号。[结论]caltractln基因在肿瘤浸润性淋巴细胞中呈过表达。关键词：Caltractin基因;肿瘤浸润性淋巴细胞;差异显示法;原位杂交