中国人基因组粘粒文库的构建

用ＳｕｐｅｒＣｏｓｌ粘粒载体构建中国人基因组文库，共得到５．９７×１０~５个有效克隆，插入外源ＤＮＡ片段长度为３２～４５ｋｂ，平均４０ｋｂ，约８．１２倍于人类基因组３×１０~９碱基ＤＮＡ长度。用分布于不同染色体上６个已知标志做ＰＣＲ鉴定，结果皆有特异扩增，表明这些位点均包含在库中。     

河豚鱼基因组细菌人工染色体文库的构建

目的 研究模式生物－－河豚鱼的基因组以及利用河豚鱼基因组“小而全”的特点研究人类基因组,方法 以红鳍东方豚的精子ＤＮＡ为材料,以ｐＢｅｌｏＢＡＣ１１为载体文库的构建河豚鱼基因组的细菌人工染色体格式化文库。结果 该文库包含２３０４０个克隆,分别保存在２４０块９６孔细胞培养板中,经对１００个随机抽样的克隆分析表明,郫入片段平均大小为１００ｋｂ,因此,该文库相当于河豚鱼单倍 基因组的６倍,好６个库容量,     

从粘粒文库分离目的基因的简便方法

改良了粘粒（ｃｏｓｍｉｄ）文库分离目的基因的第二次筛选方法用一张硝酸纤维素（ＮＣ）膜，接种近百个初筛阳性菌落，进行第二次筛选获得的三个阳性信号，复筛全部为阳性克隆节约了昂贵的ＮＣ膜，操作简便快捷     

新疆O139群霍乱弧菌93006菌株基因组文库的构建

目的：构建我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株(93006菌株)的基因组文库,为研究我国O139群霍乱弧菌的来源及其基因组特征提供资料。方法：制备霍乱弧菌高相对分子质量的基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组。DNA部分酶切成平均大小为32∽40kb的片段,将部分酶切并经碱性磷酸酶(CIAP)处理的DNA片段与经XbaI、CIAP、BamHI处理的粘粒载体SuperCosl的载体臂相连接,连接产物经体外包装并转染大肠杆菌XL-BluelMR,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,构建霍乱弧菌的基因组文库。结果：该文库共获得了1200个单克隆,平均插入片段的大小为32kb,空载率为0．05％,相当于9个库容量,从本文库中筛选到任一霍乱弧菌的DNA单拷贝序列的机率为99．98％,该文库能承受7次反复冻溶。结论：成功构建了我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株93006的基因组文库,为进一步克隆霍乱弧菌的基因和研究我国O139群霍乱弧菌的来源奠定了基础。     

5株不同群型霍乱弧菌黏粒文库构建及JS9803株文库应用

目的研究5株不同群型霍乱弧菌（VC）黏粒文库的构建。方法染色体DNA提取、酶切,质粒DNA提取、酶切及去磷酸化,连接、包装、转染、铺板,克隆子鉴定和保存、菌落原位杂交,PCR和测序。结果成功构建吴江-2株（EVC流行株产毒株）、86015株（EVC流行株非产毒株）、JS32株（EVC非流行株非产毒株）、JS9803株（0139群VC产毒株）和GD98200株（0139群VC非产毒株）等5株霍乱弧菌的染色体基因组黏粒文库,文库克隆子中插入35～45kb的染色体DNA片段,库容量分别为3000～5000克隆子。从JS9803株文库中筛选出分别携带CTXφ或net—CTXφ基因组的克隆子,后一克隆子携带的rstR—ig2基因为新类型。结论成功构建5株不同群型霍乱弧茵染色体基因组黏粒文库,并对JS9803株文库进行应用。     

人酸性成纤维细胞生长因子基因重组腺病毒粘粒载体的构建

目的　构建人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)重组腺病毒粘粒载体。方法　抽取人胎脑组织mRNA ,经RT PCR获取aFGF基因 ,测序后将其插入腺病毒粘粒载体 pAxCAwt的SwaI位点。 结果　RT PCR合成的DNA片段经克隆、测序后证实为aFGF基因 ,酶切结果显示 ,aFGF腺病毒重组粘粒 (pAxCAwt aFGF)中aFGF的插入方向正确。结论　构建的aFGF腺病毒重组粘粒 (pAxCAwt aFGF)可用于进一步的基因治疗的研究中 ,为心肌缺血区促血管生长因子基因转染作准备     

Raji细胞基因组文库的构建与筛选

目的:构建Raji细胞基因组文库,用EBV DNA探针对文库进行筛选.方法:Raji细胞基因组DNA经Bam HI酶切消化后,低熔点琼脂糖回收9～23 kb的酶切DNA片段,通过匹配黏性末端与磷酸化的Lambda DASH Ⅱ Bam HI酶切载体臂连接,在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体,测定原始文库与扩增文库的滴度,用同位素标记的EBV DNA探针对Raji细胞基因组文库进行筛选.结果:Raji细胞原始文库与扩增文库的滴度分别为1.8×105和2.8×108 pfu/mL.文库经筛选获得4个阳性克隆,随机挑取1个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定,发现所有噬菌斑均有杂交信号,证明该克隆确为阳性克隆.抽提该阳性克隆DNA,进行BarnHI酶切鉴定,证实插入片段的长度为8.5 kb.经测序、BLAST序列比对,结果显示插入片段一侧为EBV Bam HI W片段,另一侧与人类15号染色体RP11-665A22克隆高度同源.结论:Raji细胞基因组文库的成功构建,为进一步克隆包含EBV整合位点的细胞基因组序列、探讨EBV整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础.     

新疆中麻黄基因组DNA文库的构建

目的:构建新疆中麻黄(EphedraIntermedia)的基因组DNA文库。方法用Sau3AI对所提新疆中麻黄基因组DNA进行酶切,回收15-23Kb之间的酶切产物片段,然后与LambdavectorBamHIArms进行连接、包装形成文库,计算文库重组噬菌体滴度、包装效率。结果,所建文库的重组噬菌体滴度为1×106pfu/ml、包装效率为2×106重组子/μg载体DNA。结论成功构建了基因组DNA文库,为进一步研究奠定了基础。     

传染性软疣病毒MC148基因腺病毒重组粘粒构建

目的 构建传染性软疣病毒（MCV）MC148基因腺病毒重组粘粒。方法 从软疣小体中提取病毒DNA，经PCR扩增后构建于pUC19克隆载体上。对克隆产物测序后，与粘粒pAxCAwt定向重组。结果 克隆出MC148基因并构建了pAxCAwt-MC148粘粒重组体。结论 本方法建立为研究MC148基因转染对趋化因子的拮抗作用奠定基础。     

中国地鼠基因组微卫星富集文库的构建与分析

目的筛选中国地鼠微卫星位点,为中国地鼠种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。方法中国地鼠基因组DNA经超声打碎,用2%琼脂糖凝胶电泳回收500～1000 bp的DNA片段,与SNX连接头连接,连接产物与生物素标记的14种微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附、洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模板,通过PCR扩增,与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH10B,构建中国地鼠微卫星DNA富集文库。结果测序结果发现,微卫星DNA序列的阳性克隆占70.3%。结论中国地鼠微卫星文库的建立和微卫星的筛选将为下一步进行中国地鼠遗传连锁图谱的构建、分子进化和系统发育研究提供大量的微卫星标记。     

庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定

目的：在已建成庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）转基因小鼠模型的基础上,研究ＨＧＶ包膜蛋白Ｅ２在转上鼠体内的表达及定位。并探讨ＨＧＶ在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法：取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法,以ＨＧＶ Ｅ２蛋白的单克隆抗体对ＨＧＶ包膜蛋白Ｅ２的表达进行分析和定位,通过血清ＡＬＴ检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。结果：免疫组织化学结果表明,ＨＧＶ Ｅ２主要表达于转基因小鼠     

论创新型图书馆文化的构建

介绍了图书馆文化的概念和创新型图书馆文化的内涵,提出了建立创新型图书馆文化的6个途径,即营造图书馆文化的创新环境、树立图书馆文化的创新精神、确立图书馆文化的创新价值观、塑造创新进取的图书馆形象、实现技术进步与人文关怀的有机结合和培养馆员的创新群体。     

大库容量人源性天然单链抗体库的构建

目的：构建一个大库容量（＞10^8）的人类天然单链抗体库。方法：从正常人400mL外周血分离林巴细胞,提取mRNA后反转录出cDNA第一链, 行半套式PCR扩增VH和VL基因片段,依次插入含Loxp和Loxp511序列的pDNA5,电转化TG1大肠杆菌,构建初级库进一步用初级库感染BS1365使其VH,VL发生重组从而获得次级库。结果：所有VH,VL亚类基因都得到了扩增,scFv克隆效率为99．9％,重组效率为每个单克隆BS1365中含至少8种不同的scFv基因。初级库容量为10^7,次级库容量至少为10^11。结论：我们采用细胞内重组的方法构建了10^11的人类天然抗体库。     

噬菌体展示随机十五肽库的构建

为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编码随机十五肽的基因。将扩增后的目的基因经过Sfi Ι,Not Ι两个限制性内切酶双酶切后,与经同样双酶切的5′去磷酸化的噬菌粒载体连接,将重组产物电转入大肠埃希菌TG1感受态细胞。集合菌落后进行库容和多样性检验。所建肽库库容可达5×10⁸。随机挑取20个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机十五肽库。     

屋尘螨cDNA表达文库的构建及初步鉴定

目的构建屋尘螨cDNA表达文库. 方法用RNAiso Reagent试剂盒提取屋尘螨Total RNA,用Poly AT tract mRNA分离试剂盒提取mRNA,用Clontech公司SMARTTM PCR cDNA library kit反转录合成第1链cDNA,用LD-PCR合成第2链cDNA并扩增,PCR产物与MaxPlax TM试剂盒体外连接包装,建成未扩增的cDNA文库,计算其滴度和重组效率后进行文库扩增并测定扩增文库的滴度. 结果cDNA文库未扩增时滴度为9.148×106,重组效率达93.88%以上,文库扩增后滴度为7.628×109,插入片段平均1.63 kb. 结论成功地构建了高质量的屋尘螨cDNA表达文库.     

基于Web 3.0的医学资源库构建研究

在分析Web 2.0与Web 3.0核心理念的基础上,提出了构建智能化医学资源库的设想。同时,介绍了智能化数据库应具备的特点、性能、结构及实现该功能的思路及难点,并指出个人信息、浏览栏目、浏览频次及浏览时间对数据库智能化水平及搜索结果的准确性有极大帮助。