CD11／CD18介导PMN－EC粘附在烧伤早期PMN损伤血管内皮细胞中的作用

将烧伤早期病人中性粒细胞（ＰＭＮ）与体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）孵育，观察内皮细胞的病理形态变化和检测培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量，以反映细胞损伤程度。并计数ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率。发现烧伤早期ＰＭＮ可使ＨＵＶＥＣ变形、细胞收缩、细胞间裂隙形成、胞浆出现小空泡、核固缩、部分内皮细胞从培养皿上脱落。培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量升高。预先用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８单抗（ｍＡｂ）和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ处理ＰＭＮ后，降低了ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率，ＨＵＶＥＣ损伤也明显减轻，尤其是二者联合应用时。结果提示：烧伤早期ＰＭＮ可引起ＥＣ损伤，损伤与ＣＤ１１／ＣＤ１８介导的ＰＭＮ－ＥＣ粘附相关，应用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ可部分阻断ＰＭＮ对ＥＣ的粘附和损伤。     

内毒素条件下参与中性粒细胞－血管内皮细胞粘附过程的分子基础

利用抗中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）表面表达的粘附因子ＣＤ１８、内皮细胞白细胞粘附分子－１（ＥＬＡＭ－１）及细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）单克隆抗体作为阻断因素，用细胞微管吸吮技术所测得的ＰＭＮ－ＶＥＣ间单细胞粘附力作为观察指标，观察了内毒素刺激所致ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附性增加过程中上述三种粘附分子各自的功能特征。结果发现：ＣＤ１８的表达为ＰＭＮ快相增加粘附力的主要分子基础，而ＥＬＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１则为ＶＥＣ慢相增加粘附力的主要分子基础。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM—1,ELAM…

目的；探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多表核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法；采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ：将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９０孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响，ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达，测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变     

烧伤血清对中性粒细胞CD11／CD18和内皮细胞ICAM—1表达的变化

目的：探讨烧伤血清作用下中性粒细胞ＣＤ１１／ＣＤ１８和内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的变化。方法：流式细胞术检测烧伤病人伤后第１、３、５、７天多核中性粒细胞（ＰＭＮ）ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８的表达和烧伤血清刺激后人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１的表达，并应用名单胶体金银染色观察烧伤血清刺激ＰＭＮ后１、３、６、１２、２４ｈ表达ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８和ＣＤ１１ｎ／ＣＤ１８情况。结果     

烟雾吸入性损伤血清对PMN粘附的影响

目的：通过大鼠烟雾吸入务血清体外刺激培养的内皮细胞和中性粒细胞（ＰＭＮ）,了解ＰＭＮ粘着的变化,以及抗ＣＤ１１ａ和抗ＩＣＡＭ－泽ＰＭＮ粘着的影响,探讨粘附因子在烟协和有入性损伤中的作用。方法：在体外实验中用荧光标记ＰＭＮ,测定ＰＭＮ与烟雾吸入性损伤血清刺激的内皮细胞的粘着率,并本阻断技术,测定了粘附因子ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ和ＩＣＡＭ－１在ＰＭＮ粘着的作用。结果：吸入伤血清能粘着率增高,１２－２４     

急性胆管炎时肝组织ICAM—1与循环PMN表面CD11b,CD18的表？…

目的：观察急性胆管炎时大鼠肝组织ＩＣＡＭ－１与循环ＰＭＮ表面ＣＤ１１ｂ,ＣＤ１８的表达变化。方法：应用原位分子杂交和斑点杂交技术胆道感染时ＩＣＡＭ－１ ｍＲＮＡ在肝组织的定位及转录表达强度;用流式细胞仪测定ＰＭＮ表达ＣＤ１１ｂ及ＣＤ１８的阳性率。结果：ＩＡＭ－１ｍＲＮＡ原位杂交显示胆道感染３ｈ后肝窦内皮细胞,枯否细胞和肝小叶中央静脉内皮细胞阳性反应增强,１２ｈ阳性反应最强。     

ICAM—1和VCAM—1单抗影响活化淋巴细胞粘附HUVEC的机理研究

目的：研究细胞粘着分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘着分子－１（ＶＣＡＭ－１）单抗对ｒＩＬ－２活化的脐血淋巴细胞粘附人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的机理。方法：（１）利用２４孔板培养ＨＵＶＥＣ,在相应孔中分别加入ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１单抗,３０ｍｉｎ后测定活化的脐血淋细胞和未活化的淋巴细胞粘附百分率;（２）采用桥联酶标法（ＡＰＡＡＰ）测定粘附的表型。结果：（１）ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１单抗     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１）经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ分析证实     

HIGH DENSITY CULTIVATION OF GENETICALLY-ENGINEERED CHO CELL LINES WITH MICROCARRIER CULTURE SYSTEMS

ＨＩＧＨＤＥＮＳＩＴＹＣＵＬＴＩＶＡＴＩＯＮＯＦＧＥＮＥＴＩＣＡＬＬＹ－ＥＮＧＩＮＥＥＲＥＤＣＨＯＣＥＬＬＬＩＮＥＳＷＩＴＨＭＩＣＲＯＣＡＲＲＩＥＲＣＵＬＴＵＲＥＳＹＳＴＥＭＳ￥ＸｉａｏＣｈｅｎｇｚｕ；（肖成祖）；ＨｕａｎｇＺｉｃａｉ（黄子才）；Ｌｉ...     

ICAM-1在缺氧-再氧化引起的白细胞内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子(ICAM-1是否介导缺氧-再氧化引起的中性粒细胞(PMN)和血管内皮细胞(VEC)的粘附反应.方法血管内皮细胞(VEC)经缺氧再氧化(H/R)处理后,加入PMN,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ICAM-1及ICAM-1mRNA表达.结果VEC经H/R处理后,PMN与其粘附率增高1倍(P＜0.01),ICAM-1单克隆抗体(mAb)与CD11a/CD18mAb可明显降低粘附率的增高,H/R能增加VEC的ICAM-1及ICAM-1mRNA表达.结论ICAM-1介导H/R后的PMN-VEC间粘附反应.     

NAC对体外循环血清诱导的多形核粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响

目的 观察N－乙酰－L－半胱氨酸（NAC）对体外循环（CPB）血清诱导的培养血管内皮细胞细胞间粘附分子1（ICAM－1）的表达及对多形核粒细胞（PMN）粘附的影响,探讨NAC对体外循环后全身炎症反应的作用及机制。方法 以CPB血清加NAC处理培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用中性粒细胞－血管内皮细胞粘队模型研究HUVEC对PMN的粘附作用,以免疫组化方法观察培养血管内皮细胞表达ICAM－1的表达。结果 NAC加入CPB血清共同处理HUVEC,能抑制CPB血清诱导的HUVEC对PMN的粘附增加,下调CPB血清诱导的HUVEC表面ICAM－1表达的增高。结论 NAC通过抑制内皮细胞表达ICAM－1的表达,可抑制体外循环诱导的PMN与血管内皮细胞的粘附,从而可能在体外循环后全身炎症反应的防治中发挥作用。     

急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞与低氧-复氧内皮细胞的黏附性

①目的探讨急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞（PMN）与低氧-复氧（H／R）血管内皮细胞黏附性，以及抗ICAM-1单抗对其的影响。②方法培养的人类脐静脉内皮细胞株ECV-304经（或不经）H／R和抗ICAM-1单抗处理后，分别加入脑梗死病人外周血PMN并检测黏附率。⑧结果ECV-304经H／R处理后与脑梗死病人外周血PMN黏附率明显增高；抗ICAM-1单抗可显著抑制脑梗死病人外周血PMN与H／RECV-304黏附。④结论脑梗死病人外周血PMN活化，H／R使血管内皮细胞与PMN黏附性进一步增强；ICAM-1参与介导脑梗死后PMN与血管内皮细胞黏附，抗ICAM一1单抗可起部分阻断作用。     

缺氧对大鼠心肌微血管内皮细胞与中性粒细胞粘附的影响

研究缺氧对心肌微血管内皮细胞与中性粒细胞粘附的影响。方法：采用细胞培养技术观察体外培养的心肌微血管ＥＣ与未活化的ＰＭＮ粘附，高倍镜计数粘附的ＰＭＮ数；采用免疫组化ＡＢＣ法检测缺氧微血管ＥＣ上细胞间粘附分子的表达。结果：心肌微血管ＥＣ缺氧２和６ｈ与ＰＭＮ的粘附显著增加，分别为对照组的１．４９倍和１．９６倍；进一步用抗ＩＣＡＭ－１和抗淋巴细胞功能和相关抗原单克隆抗体阻断实验发现，两种抗体在５μｇ／ｍｌ     

Effects of Propyl Gallate on adhesion of polymorphonuclear leukocytes to human endothelial cells induced by tumor necrosis factor alpha

Objective:To investigate the effects of Propyl Gallate(PrG) on cellular adhesion between human umbilical vein endothelial cells(HUVEC) and polymorphonuclear leukocytes(PMN) as well as the expression of intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1,CD54) and E-selectin(CD62E) on the VEC surface.Methods: A human VEC inflammation model was induced by tumor necrosis factor alpha(TNF-α).VECs were preincubated with varying concentrations of PrG(0.001-5 mmol/L) or 1‰DMSO(v:v) or 10 mmol/L acetylsalicylic acid(ASA) f...     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

VS-1基因转染对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的构建Ad-VS-1基因转染HUVEC的体外缺氧/复氧模型,探讨VS-1转基因治疗对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法①建立HUVEC缺氧/复氧（H/R）损伤模型,分为4组：空白组,H/R组,空载腺病毒转染＋H/R组,Ad-VS-1转染＋H/R组;②测定内皮细胞活力（MTT）,超氧化物歧化酶活力（SOD）、丙二醛（MDA）、eNOS、NO表达、炎症因子ICAM-1、VCAM-1、TNF-α的表达情况;③在Ad-VS-1转染＋H/R组基础上增设Hb、KT5823、SB203580和W ortm an in 4个信号抑制组,流式细胞仪测定细胞凋亡率进行统计学分析。结果①成功构建Ad-VS-1转染HUVEC表达后H/R模型;②与空白组比较,H/R组和空腺病毒感染＋H/R组的MTT、SOD含量、eNOS、NO表达显著降低,而MDA、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α含量显著增加（P〈0.05）;与H/R组和空载腺病毒感染＋H/R组比较,VS-1转染＋H/R组MTT、SOD、eNOS、NO表达含量明显回升,而MDA、ICAM-1,TNF-α生成量明显回落（P〈0.05）;③与H/R组和空载腺病毒感染＋H/R组比较,VS-1转染组细胞凋亡率明显降低,而4组信号抑制剂组的细胞凋亡率较VS-1转染组均明显回升（P〈0.05）。结论Ad-VS-1成功转染HUVEC,并通过PI3K/Akt-eNOS-NO-cGMP-PKG和P38MPAK等信号途径,抑制氧化应激和炎症反应,产生显著的抗血管内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,为今后VS-1抗心肌缺血/再灌注损伤研究奠定基础。     

参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1抗神经、血管内皮、星形胶质细胞缺氧/缺糖损伤的研究

目的研究参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用,揭示参麦注射液脑保护作用的细胞机制,并初步确定其主要效应成分.方法培养神经、血管内皮、星形胶质三种细胞,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液模拟造成缺氧/缺糖损伤,台盼蓝染色、MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率评价药效.结果参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对正常培养的三种细胞均无明显毒性损伤;与缺氧/缺糖再给氧损伤模型组比较,参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1各组的LDH漏出率、细胞死亡率显著下降(P<0.001),细胞存活率显著提高(P<0.001～P<0.05).结论参麦注射液的脑保护作用机制与其对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质三种细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用有关,人参皂苷Rb1、Rg1是其脑保护作用的主要效应成分;提示参麦注射液能够应用于中风病急性期的治疗.     

小陷胸汤合丹参饮含药血清对Ang-Ⅱ损伤人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的从影响淋巴细胞与血管内皮细胞粘附的角度探讨小陷胸汤联合丹参饮抗动脉硬化作用的机制。方法采用Ang-Ⅱ损伤体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为病理模型,研究小陷胸汤合丹参饮对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附的影响及其分子机制。结果用Ang-Ⅱ损伤HUVEC后,细胞ICAM-1mRNA表达、ICAM-1蛋白含量以及淋巴细胞粘附率显著升高,而不同浓度的小陷胸汤合丹参饮含药血清则能降低ICAM-1mRNA表达、ICAM-1蛋白含量,减少HUVEC与淋巴细胞粘附,且基本呈浓度相关。结论通过降低细胞表面粘附分子的表达而减少淋巴细胞与内皮细胞的粘附,可能是小陷胸汤合丹参饮抗AS作用的机制之一。     

七氟烷预处理对缺氧/复氧损伤的心肌细胞H9c2 LC3蛋白表达的影响

目的观察七氟烷预处理对缺氧/复氧（H/R）损伤的H9c2大鼠心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响,探讨自噬在七氟烷预处理延迟性保护中的作用。方法 H9c2心肌细胞随机分为5组：空白对照组（CON）;缺氧/复氧组H/R（缺氧2 h,复氧1 h）;七氟烷预处理组（SEVO）予2.5%七氟烷预处理1 h,24 h后进行H/R;3-MA＋SEVO组,七氟烷预处理前15 min在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,24 h后进行H/R;3-MA组,即在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,25 h后进行H/R。取复氧后心肌细胞,MTT法检测各组H9c2心肌细胞存活率,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达。结果与CON组相比H/R组和SEVO组细胞存活率均降低（均P〈0.05）;与H/R组相比SEVO组、3-MA组和3-MA＋SEVO组细胞存活率均增高（均P〈0.05）。Western blot结果显示,与CON组相比SEVO组、H/R组自噬蛋白LC3-Ⅱ表达均上调（均P〈0.05）,与H/R组相比SEVO组LC3-Ⅱ蛋白表达均下调（均P〈0.05）,而3-MA组和3-MA＋SEVO组表达均显著下调（均P〈0.01）。结论七氟烷预处理对H/R损伤H9c2心肌细胞具有延迟性保护作用,自噬可能参与了七氟烷预处理的延迟性保护机制。