产金属β-内酰胺酶细菌的筛选及基因型鉴定

目的 了解深圳市福田人民医院临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药革兰阴性杆菌产金属β-内酰胺酶的情况.方法 收集2010年6月～12月临床分离碳青霉烯类耐药菌株.用EDTA双纸片增效试验筛选分离的耐药细菌中的产金属β-内酰胺酶株,增效试验阳性菌株用聚合酶链反应(PCR) 扩增并通过对阳性扩增产物测序来确证金属酶基因型.结果 16株亚胺培南或美罗培南耐药细菌中铜绿假单胞菌10株,鲍曼不动杆菌4株,大肠埃希菌2株.双纸片增效试验阳性6株,PCR扩增阳性3株,1株VIM-2型和2株IMP-4型.结论 临床已出现产VIM-2型和IMP-4型金属β-内酰胺酶的碳青霉烯类抗生素耐药菌株,应加强对细菌耐药性监测及院内感染的管理控制,防止耐药菌株播散.     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性分析

目的对多重耐药的鲍曼不动杆菌进行β-内酰胺类抗生素耐药性分析。方法K-B法、琼脂稀释法检测35株鲍曼不动杆菌对14种β-内酰胺类抗生素的敏感性;碘—淀粉测定法、三维试验、协同法、纸片扩散确证试验检测青霉素酶、头孢菌素酶(AmpCs)、金属β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);PCR扩增β-内酰胺类抗生素耐药基因Tem-1。结果35株菌株有28株表现为对β-内酰胺类抗生素多重耐药,其中产青霉素酶的菌株16株,产AmpCs的菌株10株,产金属β-内酰胺酶的菌株2株,产ESBLs的菌株3株;9株同时产青霉素酶和AmpCs,2株同时产金属β-内酰胺酶和ESBLs。多数耐药菌株均扩增出Tem-1基因。结论鲍曼不动杆菌产生β-内酰胺酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的临床调查研究

目的调查临床分离铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶株分布情况及耐药现状，为临床合理应用抗生素提供依据。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌，采用κ—B法筛选对亚胺培南和头孢他啶同时耐药菌株，E—test法检测产金属伊内酰胺酶菌株，最后用最低抑菌浓度（MIC）法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度。结果300株铜绿假单胞菌中同时耐亚胺培南和头孢他啶者34株，占11．3％（34／300）；其中检出产金属伊内酰胺酶15株，占5．0％（15／300），产酶株分布较为集中，产酶株对亚胺培南和头孢他啶等抗生素高水平耐药，对阿米卡星和环丙沙星部分耐药。结论铜绿假单胞菌产金属伊内酰胺酶检出率升高，产酶株的多重耐药较严重，应高度重视产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的监测与控制。     

脑膜炎败血黄杆菌产金属β-内酰胺酶的检测及基因型的研究

目的了解杭州市脑膜炎败血黄杆菌的流行及产金属β-内酰胺酶的情况并对其基因型进行研究。方法对100株分离自4所综合性医院的多重耐药脑膜炎败血黄杆菌,用三维试验、改良三维试验和2-巯基丙酸抑制试验检测金属β-内酰胺酶,用Bla-B和GOB的通用引物对表型试验阳性的菌株进行聚合酶链反应(PCR)和测序分析金属β-内酰胺酶的基因型。并用脉冲场凝胶电泳对其中的菌株进行同源性分析。结果用三维试验、改良三维试验和2-巯基丙酸抑制试验检测到61株菌株产金属β-内酰胺酶,用Bla-B和GOB通用引物进行扩增和测序,有60株菌株扩增到金属β-内酰胺酶,其中有51株检测到BlaB基因型,有36株检测到GOB基因型。检测到的Bla-B基因型主要为BlaB-1、2、3、5和BlaB-11这5种类型;检测到的GOB基因型主要为GOB-1、2、4、6和GOB-85种类型。其中产生一种金属β-内酰胺酶的有33株,产两种金属β-内酰胺酶的有27株。浙大医学院附属一院和附属二院主要是BlaB-3和BlaB-11型为主,浙大医学院邵逸夫医院主要是GOB-4和GOB-8为主,杭州市中医院主要是GOB-8基因型。其中1菌株表型试验检测阳性而未能检测到基因型,可能为一种新的基因型有待今后进一步研究。经同源性分析,杭州市中医院的菌株具有很好的一致性,而与其他医院的结果完全不同。结论杭州市多重耐药的脑膜炎败血黄杆菌的主要耐药机制之一是产金属β-内酰胺酶,基因型主要为Bla-B和GOB型。4所医院流行的基因型均不相同。而杭州市中医院的脑膜炎败血黄杆菌具有一定的同源性,区别于其他3所医院,表明系院内感染菌。     

烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及基因型检测

目的研究烟台地区产金属伊内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性,基因型及菌株的同源性,为监控产酶菌株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据。方法EDTA纸片复合法和E—test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,PCR扩增耐药基因imp、vim、spm和gim,用MIC法测定产金属G内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度,用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应（ERICPCR方法）确定菌株之间的同源性。结果42株耐亚胺培南和头胞他啶铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选出18株金属酶菌株、E—test法15株、PCR法12株;PCR法检测到imp阳性菌株4株,vim阳性菌株8株;产金属β-内酰胺酶菌株呈多重耐药,且PCR法阳性产金属酶菌株呈现为高水平耐药;ERIC—PCR结果显示,18株产金属伊内酰胺酶菌株呈现7种基因模型,其中10株为同一基因模型。结论经济简便快捷的EDTA纸片复合法可作为首选方法来对产金属酶铜绿假单胞菌进行筛选,烟台地区临床分离的铜绿假单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因型以vim型为主,阿米卡星、环丙沙星具有较好的抗菌活性,某医院在一定时期曾出现爆发流行。     

鲍曼不动杆菌耐药性和金属β内酰胺酶的检测

目的 了解本院鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性以及对碳青霉烯类抗生素和头孢他啶耐药菌株是否产金属β内酰胺酶。方法 对2002年4月—2003年1月本院临床分离的101株鲍曼不动杆菌采用NCCLS推荐的琼脂双倍稀释法测定了对15种抗菌药物的最低抑菌浓度（MICs），将对亚胺培南耐药或对头孢他啶高度耐药的菌株用金属螯合剂-抗生素稀释法检测是否产金属β内酰胺酶。结果 101株鲍曼不动杆菌最常分离自痰，分布于全院16个临床科室，但有1／3以上来自于ICU病房。这101株对抗菌药物的耐药性突出，仅对亚胺培南、美罗培南和头孢吡肟保持较高的敏感率，分别为90．1％、88．1％和81．2％；而对包括头孢他啶的其他11种抗菌药物的敏感率均低于50％；而且多重耐药菌株常见。共有19株鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药和（或）对头孢他啶高度耐药。金属螯合剂．抗生素稀释法检测出9株产金属β内酰胺酶。结论 本院鲍曼不动杆菌分离率高、分布广，对抗菌药物耐药严重；仅碳青霉烯和四代头孢菌素保持较高的敏感性；存在对亚胺培南耐药和（或）对头孢他啶高度耐药的鲍曼不动杆菌，其中部分耐药株产金属β内酰胺酶。     

纸片协同试验检测产金属β内酰胺酶细菌

我们建立了一种采用 2 巯基丙酸的纸片协同法来检测产金属 β内酰胺酶 (金属酶 )细菌的方法。一、材料与方法1.菌株来源 :试验所用的菌株来自本院 2 0 0 2年 1月～2 0 0 3年 1月临床标本分离的耐亚胺培南细菌 3 1株 ,其中绿脓假单胞菌 2 3株、不动杆菌属 3株、嗜麦芽窄食单胞菌 5株。产IMP 1金属β内酰胺酶绿脓假单胞菌由浙江大学医学院附属第一医院俞云松教授惠赠。2 .试剂 :培养基与药敏纸片分别购自中国药品生物制品检定所和北京天坛生物制品所 ,2 巯基丙酸购自美国ACROSORGANICS公司。3 细菌培养和鉴定 :细菌培养根据临床检验…     

亚胺培南-EDTA琼脂扩散法检测金属β-内酰胺酶

[目的] 了解金属β-内酰胺酶存耐亚胺培南铜绿似单胞菌的分布：[方法] 采用亚胺培南-EDTA琼脂扩散法检测金属β-内酰胺酶。[结果]67株耐亚胺培南的铜绿似单胞菌检出金属β-内酰胺酶阳性株9株，阳性率为13.4％。[结论] 亚胺培南-EDTA琼脂扩散法可作为金属β-内酰胺酶的初筛试验，筛选出细菌是否产金属β-内酰胺酶，从而为临床指导用药提供依据。     

106株铜绿假单胞菌耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

目的分析医院铜绿假单胞菌的分布、耐药性及产金属β-内酰胺酶的现状,为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供合理用药的实验依据。方法将VITEK-2全自动鉴定仪鉴定出的106株铜绿假单胞菌,采用琼脂纸片扩散(K-B)法进行体外耐药性监测及统计耐药率,同时用双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶的百分率。结果 106株铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的22株,占20.8%。金属β-内酰胺酶阳性与阴性的铜绿假单胞菌耐药率相比较,对头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢哌酮的耐药率差异有统计学意义(P<0.05);而对氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星、庆大霉素呈现的耐药率二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论产金属β-内酰胺是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一,临床应根据药敏结果及产酶情况综合考虑合理用药,以减少耐药菌株的产生。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌金属β内酰胺酶的检测和同源性分析

目的了解亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的耐药性、同源性及金属β内酰胺酶类型。方法收集我院2006年1—9月临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌29株，用琼脂稀释法测定10种抗菌药物的MIC；通过改良Hodge试验、双纸片协同试验、PCR、序列分析等方法分析金属β内酰胺酶类型，紫外分光光度法测定金属β内酰胺酶的活性；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果29株细菌均为多重耐药株，仅对哌拉西林一他唑巴坦和阿米卡星敏感率较高，分别为69．7％和60．6％。29株细菌PFGE图谱分为16个基因型，A型主要集中在呼吸内科病房，B、C型来自神经外科ICU，D、E型来自器官移植病房，F型来自创伤外科病房，G型来自神经内科病房，其余为散在分布。29株菌中有2株产VIM-2金属β内酰胺酶（6．9％）。结论本院亚胺培南耐药铜绿假单胞菌主要为医院感染流行株，且呈多重耐药，有2株菌产VIM-2型金属β内酰胺酶。     

产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌协同试验方法评价

目的在临床微生物实验室建立简便的纸片扩散试验方法,用于产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的检测。方法以头孢他啶、亚胺培南为底物,乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）和2-巯基乙醇（2-ME）为酶抑制剂,在MH平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感试验,并与聚合酶链反应（PCR）检测金属β-内酰胺酶基因结果进行比较。结果任一药敏纸片与含酶抑制剂纸片间出现抑菌环扩大现象则表示受试菌产金属β-内酰胺酶表型初筛试验阳性,在144株受试菌中,协同试验阳性29株,PCR检测金属肛内酰胺酶阳性26株。结论CAZ-EDTA纸片协同法在检测产IMP-1型金属酶的铜绿假单胞菌时的特异性和敏感性可与PCR技术相媲美,适用于临床微生物实验室对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的日常初步鉴定。     

产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌协同试验方法评价

[目的]在临床微生物实验室建立简便的纸片扩散试验方法,用于产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的检测。[方法]以头孢他啶、亚胺培南为底物,乙二胺四乙酸二钠（EDTA—Na2）和2-巯基乙醇（2-ME）为酶抑制剂,在MH平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感试验,并与聚合酶链反应（PCR）检测金属β-内酰胺酶基因结果进行比较。[结果]任一药敏纸片与含酶抑制剂纸片间出现抑菌环扩大现象则表示受试菌产金属β-内酰胺酶表型初筛试验阳性,在144株受试菌中,协同试验阳性29株,PCR检测金属β-内酰胺酶阳性26株。[结论]CAZ—EDTA纸片协同法在检测产IMP-1型金属酶的铜绿假单胞菌时的特异性和敏感性可与PCR技术相媲美,适用于临床微生物实验室对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的日常初步鉴定。     

不同金属β-内酰胺酶检测方法的比较与评价

目的比较双纸片协同法和双纸片增效法在临床金属酶表型鉴定中的应用价值;对多重PCR法检测临床分离菌株中的金属β-内酰胺酶方法进行评价。方法 56株已知金属β-内酰胺酶阳性菌株[其中新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)阳性9株,维罗纳整合子编码金属β-内酰胺酶(VIM)阳性32株,亚胺培南酶(IMP)阳性15株]用于评价两种表型检测方法。通过优化PCR引物的设计,设计3对引物,在1个管中同时检测3种金属β-内酰胺酶(IMP、VIM、NDM),进而对该方法进行评价。结果双纸片协同法对金属酶表型鉴定的特异度为80.36%(45/56),双纸片增效法为100.00%(56/56)。多重PCR检测的准确度为100.00%(56/56),同时还可以通过扩增片段的大小来分辨3种金属β-内酰胺酶类型。结论双纸片增效法相较于双纸片协同法,更适用于临床应用;多重PCR法对金属β-内酰胺酶的检测具有简便、快速,准确度高的特点,适合临床微生物实验室日常使用,将有助于临床及时有效地用药。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的：了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法：用SHV型β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应(PCR)检测；编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析；对产SHV型β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测。结果：58株产ESBLs大肠埃希菌中，只有3株细菌产生SHV型β内酰胺酶(5．2％)，其中1株产生SHV—11(非ESBLs)，另2株产生SHV—12(ESBLs)；3株产SHV型β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。结论：临床分离产ESBLs大肠埃希菌中，SHV型β内酰胺酶的基因型为SHV—11和SHV—12，SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型β内酰胺酶菌株间克隆传播。     

泛耐药铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制研究

目的探讨泛耐药(pan-drug resistant,PDR)铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制。方法以相应方法分别检测PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制:常见β内酰胺酶的表达,膜孔蛋白OprD的缺失,及耐药结节分化家族(RND)主动外排系统的激活。结果 20株PDR铜绿假单胞菌中,可检出的产β内酰胺酶的菌株16株(80%):产AmpCs酶菌株16株(80%),其中产超广谱AmpCs酶(extended-spectrum AmpCβ-lactamases,ESACs)12株(60%),产ES-BLs菌株14株(70%),产金属β内酰胺酶(MBLs)1株(5%);膜孔蛋白OprD呈不同程度缺失的菌株11株(55%);主动外排系统中MexA-MexB-OprM、MexC-MexD-OprJ、MexE-MexF-OprN、MexX-MexY-OprM呈过度激活的菌株分别为5株(25%)、3株(15%)、4株(20%)、1株(5%)。65%PDR铜绿假单胞菌存在2种或2种以上耐药机制,以高产β内酰胺酶合并膜孔蛋白OprD缺失最多见。结论高产AmpCs和(或)ESBLs,合并膜孔蛋白OprD的缺失或主动外排泵的激活,是PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制。     

小檗碱对革兰阴性杆菌产β-内酰胺酶分离菌株的抑菌作用

目的了解产β-内酰胺酶病原菌分布情况和探讨小檗碱对产β-内酰胺酶的革兰阴性杆菌的抑菌作用。方法从感染性疾病患者中分离出产β-内酰胺酶病原菌,并采用琼脂稀释法检测小檗碱对产β-内酰胺酶分离菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果共分离出产β-内酰胺酶G-杆菌79株,产β-内酰胺酶大肠埃希菌42株,产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌有25株,产β-内酰胺酶铜绿假单胞菌13株,MIC分别以浓度62.5g/L,31.25g/L,60.25g/L的小檗碱为主。结论产β-内酰胺酶的G-杆菌在感染疾病中比较常见,而浓度为31.25g/L和60.25g/L的小檗碱对产β-内酰胺酶细菌株抑菌作用最强,值得临床上进一步研究和推广,为临床开发新一代抗菌药物打下基础。     

铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶与耐药相关性分析

目的调查本院铜绿假单胞菌(PA)耐药性与产β-内酰胺酶现状,并探讨产酶与耐药之间的相关性。方法收集院内感染PA菌株112株,进行药敏、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、金属β-内酰胺酶(MBL)和头孢菌素酶(Amp C)的检测。构建PA产β-内酰胺酶与耐药之间的Logistic回归方程,ROC曲线评价产酶预期概率(PRE)与多重耐药(MDR)在筛查PA产酶菌株中的价值。结果我院PA菌株对阿米卡星、美洛培南、亚胺培南、环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦和头孢他啶的敏感率都70%,ESBLs、MBL和持续高产Amp C酶的阳性率分别为3.6%、8%和16.1%。PRE筛查产β-内酰胺酶菌株的灵敏度和特异度可达100%和93%,分别高于MDR的96.2%和74.4%。结论临床应加强对PA产β-内酰胺酶的监测,以Logistic回归PRE值为指标筛查产β-内酰胺酶菌株,要优于以MDR为指标。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性分析及金属β-内酰胺酶的检测

目的调查盐城市第一人民医院住院患者送检标本分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药水平及其产金属β-内酰胺酶(MBLs)的情况。方法临床标本分离的铜绿假单胞菌采用法国生物梅里埃细菌鉴定及药敏检测系统进行细菌鉴定与药物敏感性试验;采用纸片协同实验来检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的情况。结果 236株铜绿假单胞菌中有63株对亚胺培南耐药,耐药率为26.69%,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、氨曲南部分耐药,耐药率分别为45.12%、50.33%、59.74%、61.43%、62.12%和63.16%;对头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林、美罗培南耐药率较高;63株耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的检出率为38.10%(24/63)。结论金属β-内酰胺酶的产生是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制之一,实验室应加强对产酶菌株的监测,为临床合理选用抗生素提供有效依据。     

对大肠埃希菌产生β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶的探讨

目的：探讨大肠埃希菌产β－内酰胺酶和超广谱β－内酰胺酶（ESBL）之间的关系及耐药性。方法：采用纸片扩散法（K－B法）、Nitrocefin法对该字感染标本中分离的108株大肠埃希氏菌分别进行药敏试验、β－内酰胺酶、ESBL的检测。结果：108株大肠埃希氏中60株产β－内酰胺酶（56％）、ESBL发生率为36％（39株），其中产两种酶的有36株，有3株产ESBL而不产β－内酰胺酶。产β－内酰胺酶株对青霉素，一、二代头孢菌素耐药率为62％－100％，对三代头孢菌素的耐药率为39％－40％；产ESBL的菌株，对青霉素类，一、二、三代头孢菌素均耐药。泰能的敏感率为100％，舒普深为95％。结论：常规检测β－内酰胺酶、ESBL，有利于耐药机制的探讨，对指导临床合理用药，控制ESBL菌株的爆发流行有重要价值。     

2-巯基丙酸协同试验检测细菌金属β内酰胺酶

我们采用 2 巯基丙酸 (2 mercaptopropionicacid ,2 MPA)和头孢他啶 (CAZ)双纸片琼脂扩散协同试验检测细菌金属β内酰胺酶 ,并与EDTA协同试验进行比较。一、材料与方法1.菌株来源 :185株菌株均为临床分离的革兰阴性菌 ,质控菌包括大肠埃希菌ATCC2 5 92 2 ,产IMP 1绿脓假单胞菌 ,产超广谱 β内酰胺酶肺炎克雷伯菌及高产AmpC酶阴沟肠杆菌。2 .主要试剂 :2 MPA购自Sigma公司 ,培养基及CAZ纸片(30 μg/片 )系梅里埃公司产品 ,EDTA纸片含 2 0mmol/L的EDTA溶液 2 0 μl,2 MPA纸片含 2 MPA 3μl。3.金属 β内酰胺酶检测 :将…