龟鹿二仙膏的质量标准研究

龟鹿二仙膏由龟甲、鹿角、党参、枸杞子4味中药组成。具有温肾益精、补气养血之功效。用于久病肾虚，腰酸膝软。精血不足。遗精阳萎等症。原方始载于1569年《医便》中。1764年《兰台轨范》更有详尽记述。本方以龟鹿二仙胶收载于《中国药典》1963年版一部，以龟鹿二仙膏收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册(WS3-B-0287—90)。为控制龟鹿二仙膏质量，保证临床用药安全有效，本文对其质量标准进行了研究。     

龟鹿二仙膏的药理学研究

龟鹿二仙膏为古方 ,明代 ( 1569年 )王三才著《医便》记述详细[1] ,为胶剂。 194 9年后 ,本方仍以胶剂收入《中国药典》1963年版一部。 1990年 ,载入《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册 ,为煎膏剂。最近 ,龟鹿二仙膏被列入第一批国家非处方药目录。本品具有温肾益精 ,补气养血作用。临床用于久病肾虚、腰酸膝软、精血不足 ,遗精阳萎[2 ] 。其药理学研究文献报道不多 ,现就手边资料参考国内文献综合概述如下。1　龟鹿二仙胶加减方药理学研究近年来 ,国内医药科技工作者将龟鹿二仙胶原方加减研制成龟鹿二仙胶丸[3] 、龟鹿补肾丸[4 ] 、龟鹿…     

龟鹿二仙膏提高耐力作用研究

目的：研究龟鹿二仙膏的温肾益精、补气养血作用。方法：采用负荷游泳时间及常压密闭环境存活时间试验方法。结果：龟鹿二仙膏可明显延长小鼠负荷游泳时间及在密闭环境中的存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好提高耐力作用。     

龟鹿二仙膏助阳药理作用研究

目的：观察龟鹿二仙膏助阳的药理作用。方法：测定去势大鼠性腺器官指数及皮质激素阳虚模型小鼠的自主活动增加及常压耐寒冷环境中的存活时间。结果：龟鹿二仙膏能显著增加去势大鼠前列腺及精囊腺指数，使腺细胞增生、扩大、萎缩明显改善；龟鹿二仙膏还能明显提高肾阳虚小鼠自主活动，显著延长在寒冷状态下存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好助阳作用。     

两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用＊

目的 探究两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用。方法 32只8周龄SD大鼠，体质量200 g-220 g，随机分4组，分别为空白组（Control）、模型组（Model）、龟鹿二仙胶饮片膏组（GLEX_T）、龟鹿二仙胶颗粒膏组（GLEX_G），每组8只；空白组灌胃等体积蒸馏水，其余4组给与腺嘌呤混悬液灌胃，连续灌胃30天；从31天起，空白组及模型组灌胃等体积蒸馏水，龟鹿二仙胶饮片膏组予龟鹿二仙胶饮片膏灌胃，龟鹿二仙胶颗粒膏组予龟鹿二仙胶颗粒膏灌胃，连续灌胃至60天。每日灌胃剂量10 mL?kg^-1。给药完毕后处死，检测血清性激素（T、E2、FSH、LH）、精液参数（精子活力、活率、密度）和睾丸HE染色实验。结果 龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏组都能调节性激素分泌、改善大鼠精液参数（P < 0.01，P < 0.05），且在干预效果上无显著差异（P > 0.05）；龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏都对大鼠睾丸组织有保护作用。结论 两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠有干预作用且疗效相近，可能与其对下丘脑-垂体-睾丸轴的调控、内分泌激素的改变，睾丸组织的保护有关。     

龟鹿二仙膏加味治疗老年性记忆障碍症26例

龟鹿二仙膏由龟板、鹿角、党参、枸杞四味药组成，具有温肾益精、补气养血作用。近年来，笔者以龟鹿二仙膏加味治疗26例老年性记忆障碍症患者，取得了较好的疗效，现总结如下。     

龟鹿二仙膏方证探讨及临床应用

目的：探讨龟鹿二仙膏的方证思想和临床应用价值。方法：选取2012年1月-2013年7月大学附属医院妇科收治的围绝经期综合征患者96例进行分析,采用龟鹿二仙膏治疗,观察临床疗效及治疗前后临床症状评分。结果：龟鹿二仙膏治疗痊愈64例,好转26例,无效6例,总有效率为93.75%,治疗后中医临床症状评分较治疗前明显下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：龟鹿二仙膏具有补气养血、补精益髓的功效,能够有效提高围绝经期综合征的疗效,缓解患者的临床症状,效果显著。     

龟鹿二仙膏治疗肾虚腰痛120例临床观察

龟鹿二仙膏由龟版、鹿角、党参、枸杞子组成 ,功能温肾益精 ,补气养血。主治久病肾虚 ,腰酸膝软 ,精血不足 ,遗精阳萎。为了进一步评价其治疗肾虚腰痛疗效 ,我们于 1 999年 7月～ 2 0 0 0年 2月以本品与龟鹿补肾丸进行了临床对比观察 ,兹报告如下。1　临床资料1 .1　诊断标准1 .1 .1　腰痛诊断标准　参照《中药新药治疗腰痛的临床研究指导原则》中医诊断标准制订。有典型的一侧或两侧腰部疼痛症状 ;可有反复发作病史 ;排除淋证、水肿、肿瘤、腰骶骨关节疾患以及妇科的月经不调、妊娠等而有腰痛症状者。1 .1 .2　肾虚证辨证标准　参照《中药…     

龟鹿二仙膏在儿科疾病中的运用

龟鹿二仙膏功能为滋补精髓,由鹿角900g,龟版450g,杞子、党参各200g组成.笔者用该方辨证加味,冬季熬膏让患者久服,治疗儿科多种疾病取得满意疗效,现举医案3则如下.     

加味龟鹿二仙汤时辰用药调节乳腺癌化疗后骨髓造血功能的临床研究

目的:探讨加味龟鹿二仙汤及时辰用药方案在防治乳腺癌化疗后骨髓抑制方面的作用。方法:共纳入乳腺癌术后患者120例,随机分为3组,其中西药对照组36例(化疗后予利血生、鲨肝醇、V itB4服用);中药(加味龟鹿二仙汤)不拘时口服组43例;中药时辰用药组(加味龟鹿二仙汤组酉时服用)41例。结果:经统计学分析,中药不拘时口服组与时辰用药组在减轻乳腺癌化疗后血液学毒性方面(白细胞、血红蛋白、血小板减少方面)均优于西药对照组(P=0.000),而在白细胞数减少方面,中药时辰用药组尚优于中药不拘时服用组(P=0.035)。此外,中药组相比于西药对照组,可以明显减少集落细胞刺激因子粒生素的使用量(P<0.01)。结论:补肾中药加味龟鹿二仙汤能明显改善乳腺癌患者化疗后骨髓造血功能,尤以按时辰用药(酉时服用)效果为著。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对体外软骨细胞表型BMSCs凋亡的影响

目的:观察龟鹿二仙胶汤含药血清干预软骨细胞表型化骨缱质基质干细胞(BMSCs)凋亡的影响.方法::抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将龟鹿二仙胶汤含药血清诱导出的软骨细胞表型化BMSCs,用IL-1β诱导凋亡,分别于24h、48h、72h后,采用透射电子显微镜、免疫荧光组织化学、流式细胞仪等实验技术,研究龟鹿二仙胶汤对软骨表型化BMSCs凋亡的影响.结果:龟鹿二仙胶汤能减少软骨表型化BMSCs凋亡的数量及程度,降低细胞凋亡率.结论:龟鹿二仙胶汤可以明显抑制或逆转软骨表型化BMSCs凋亡,能显著延缓软骨表型化BMSCs的凋亡.     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

龟鹿二仙膏对阳虚型少弱精子症大鼠的改善作用及CFTR蛋白表达的影响

目的:观察龟鹿二仙膏对少弱精子症大鼠的改善作用以及睾丸囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)蛋白表达的影响.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、龟鹿二仙膏组、右归丸组和左卡尼汀组,除正常组外,其余均采用灌胃腺嘌呤造成少弱精子症模型,正常组和模型组给予生理盐水,其余各组灌胃相应药物28 d,最后一次灌胃后2...     

基于肾脑相关的龟鹿二仙膏抗阿尔茨海默病作用及其机制

目的 基于“肾脑相关”理论,探讨龟鹿二仙膏对氢化可的松联合β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型的作用及其机制。方法 采用腹腔注射氢化可的松并脑室注射Aβ诱导大鼠AD模型,龟鹿二仙膏不同浓度进行干预。测定大鼠的海马、肾脏和肾上腺指数;采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清样品中皮质酮（CORT）及睾酮（T）水平;液相色谱-质谱联用（LC-MS）代谢组学技术采集和分析模型大鼠血清代谢数据;利用中药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）和中医药综合数据库（TCMID）收集龟鹿二仙膏活性成分及相应靶点;利用人类基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）检索得到的AD相关靶标信息;构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）代谢通路富集分析、基因本体论（GO）富集分析;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）的表达水平。结果 与模型组比较,龟鹿二仙膏高、中、低剂量组海马指数、肾脏指数和肾上腺指数均显著升高,其中龟鹿二仙膏高剂量组升高最为显著（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、低剂量组大鼠穿越平台次数均显著增加（P<0.05,P<0.01）,Ⅲ象限路程（%）和Ⅲ象限时间（%）均显著延长（P<0.05,P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠血清CORT含量均显著降低（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠海马组织中IL-6表达水平均显著降低（P<0.01）。代谢组学技术共鉴定了24个与AD相关的血清差异代谢物;网络药理学方法共筛选出50个治疗AD的高频共性化合物,高频共性靶点187个,得出磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路在AD复杂的病理机制网络中起到重要作用。结论 龟鹿二仙膏可显著改善氢化可的松并Aβ诱导的AD模型大鼠认知功能障碍,降低血清CORT,抑制海马组织炎症因子IL-6表达,并调节AD模型大鼠的代谢水平,为其临床应用提供依据。     

Comparative Analysis of Amino Acid Composition between Granules and Traditional Paste of Guilu Erxian JiaoFormula and Their Effect on Serum Levels of Immunoglobulin in Rats

目的 对比龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏中的13种氨基酸类成分以及二者对大鼠血清免疫球蛋白的影响。方法 采用柱前衍生-UPLC法分析19批龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏样品，建立二者的指纹图谱，并采用标准品对照，对其中氨基酸成分进行定性分析，并取其中含量最高的几种成分进行定量分析。建立大鼠阳虚型模型，分别采用龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏进行干预，检测各组大鼠血清中IgA、IgG、IgM免疫球蛋白的含量。结果 成功建立龟鹿二仙颗粒膏与饮片膏的指纹图谱，发现19批膏方的相似度接近（P > 0.99），采用标准品确定其中13种氨基酸成分，其中各批次中成分含量较高的4种氨基酸，L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸含量无明显差别。且二者对阳虚型大鼠血清免疫球蛋白的影响也基本相似（P > 0.05）。结论 龟鹿二仙胶配方颗粒膏较与传统饮片膏比较，氨基酸类成分的定性与主要氨基酸类成分的定量分析均无明显区别，其基本的药理作用也较为接近。但配方颗粒成膏技术较传统成膏技术更加简便与高效，具有巨大的市场潜力与发展前景，值得深入研究     

龟鹿二仙胶对雷公藤多苷诱导弱精子症大鼠精子线粒体结构和功能及SLC22A14表达的影响

目的：研究龟鹿二仙胶对雷公藤多苷(GTW)诱导弱精子症(AZS)大鼠精子线粒体结构和功能及溶质载体家族22成员14(SLC22A114)表达的影响。方法：60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,龟鹿二仙胶低、中、高剂量组、五子衍宗丸组,各10只;除正常组外,各组均给予GTW40 mg·kg^-1·d^-1连续灌胃4周造模AZS大鼠模型;造模结束后正常组、模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃4周,龟鹿二仙胶低、中、高剂量组分别给予龟鹿二仙胶混悬液0.25、0.50、1.00 g·kg^-1·d^-1,五子衍宗丸组给予1.00 g·kg^-1·d^-1五子衍宗丸混悬液,灌胃4周;采用HE染色观察睾丸组织形态;计算机辅助精子分析检测大鼠精液质量;流式细胞术分析检测精子线粒体膜电位;透射电镜观察精子线粒体结构;实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法检测精子线粒体SLC22A114蛋白及mRNA表达。结果：龟鹿二仙胶可减轻AZS大鼠模型睾丸组织病理损伤,改善精液质量,且龟鹿二仙胶...     

高效液相色谱法测定龟鹿二仙膏中甜菜碱含量

龟鹿二仙膏由龟甲、鹿角、党参、枸杞等4味中药组成，具有温肾益精、补气养血的功效，用于久病肾虚，腰膝酸软，精血不足．遗精阳痿等症。为了更好的控制本品的质量，对其中所含甜菜碱进行含量测定研究。     

龟鹿二仙胶治疗气血两虚型慢性疲劳综合征32例临床观察

目的:观察龟鹿二仙胶治疗气血两虚型慢性疲劳综合征的疗效.方法:将60例气血两虚型慢性疲劳综合征患者随机分为中药治疗组(龟鹿二仙胶加味方)和对照组(梅花针叩刺背俞穴),治疗半月判定疗效.结果:治疗组总有效率90.6%,对照组总有效率78.5%,两组有明显差异(P<0.05).结论:对气血两虚型慢性疲劳综合症,龟鹿二仙胶加味方的疗效优于梅花针叩刺背俞穴,痛苦少,起效快,效果显著,值得临床应用.     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对关节软骨细胞增殖的作用

目的:分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞药理血清对大鼠关节软骨细胞的调节作用,探讨中药治疗骨性关节炎的机理。方法:使用酶消化法,建立大鼠关节软骨细胞培养体系;采用MTT法,筛选出龟鹿二仙胶汤、鹿茸、龟板、人参和枸杞作用软骨细胞的最佳药理血清浓度。通过形态学、细胞超微结构观察、MTT法、流式细胞仪细胞增殖指数测定,分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞含药血清以及IGF-I对照组对软骨细胞增殖的影响。结果:建立了大鼠关节软骨细胞培养体系。通过MTT法筛选了龟鹿二仙胶汤及其拆方最佳药效的药理血清。龟鹿二仙胶汤药物血清组、IGF-I对照组能显著促进软骨细胞的增殖,其余各拆方组与正常组比较,无显著性差异,药效低于全方组。结论:证实了药物血清的制备与获得应通过实验筛选得出。龟鹿二仙胶汤能显著促进软骨细胞的增殖,全方药效优于拆方各组,体现了中药复方配伍的优越性。深化了中医"肾主骨"理论与软骨细胞增殖的关系的认识,进一步丰富了中医"肾主骨"理论的现代科学内涵。     

高效液相色谱法测定加味龟鹿二仙膏中甜菜碱含量

目的:建立HPLC测定加味龟鹿二仙膏中甜菜碱含量的方法。方法:采用薄层色谱法鉴别加味龟鹿二仙膏的龟甲、甘氨酸;采用HPLC对制剂中甜菜碱进行含量测定,色谱柱:GL Inertsil ODS-SP色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);柱温:25℃;检测波长:196nm;流动相:乙腈-0.1%三乙胺溶液(磷酸调PH值至7)(80:20);流速:0.8 mL/min。结果:龟甲、甘氨酸的薄层鉴别斑点清晰、专属性强;甜菜碱在10.4606~104.6064μg之间呈良好的线性关系(r=0.9997,n=6),平均回收率为97.57%,RSD%为1.41%(n=9)。结论:所用方法操作简单、重现性好、灵敏度高、结果准确可靠,能有效控制加味龟鹿二仙膏的质量。