不同移植手术治疗角膜缘干细胞缺损的实验研究

目的探讨以人羊膜为载体培养的角膜缘干细胞，自体及异体移植治疗全角膜缘干细胞缺损。方法制作兔眼角膜缘干细胞完全缺损3个月的模型。实验动物随机分为自体移植组和异体移植组，前者取对侧眼角膜缘组织，后者取异体兔眼角膜缘组织，均以去除上皮细胞的羊膜基底膜为载体，培养12d后行角膜缘干细胞羊膜移植术。术后观察3个月，以角膜上皮染色、角膜浑浊和新生血管3项指标进行临床疗效评定，通过病理检查评估术后角膜上皮修复情况，印迹细胞学检查移植前后角膜上皮的细胞表型。结果体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上粘附生长并增生，体外培养12d可形成复层。自体移植组和部分异体移植组术后角膜上皮逐渐愈合，透明度提高，基质细胞浸润减轻，新生血管减退或消失。印迹细胞学检查显示：移植前角膜上皮细胞PAS阳性，而移植后转为阴性；组织病理学显示：移植前角膜上皮大部分缺损，移植后呈现角膜上皮结构。部分异体移植组术后出现了免疫排斥反应。结论兔自体角膜缘干细胞羊膜移植术可重建眼表；免疫排斥反应仍是异体角膜缘干细胞羊膜移植术失败的主要原因。     

羊膜和角膜干细胞移植治疗眼表疾病临床观察

目的探讨羊膜移植、自体角膜干细胞移植及自体体外培养角膜干细胞移植重建眼表治疗眼表疾病的疗效。方法眼表疾病43例46眼（瘢痕性结膜囊狭窄、睑球粘连6例6眼，角结膜化学、热烧伤10例13眼，原发和复发性翼状胬肉切除术后结膜缺损27例27眼）进行羊膜移植、自体角膜干细胞移植及自体体外培养角膜干细胞移植，观察植片及角结膜上皮愈合、组织浸润和新生血管情况。结果羊膜移植术重建结膜囊效果满意，睑球粘连松解。羊膜、自体体外培养角膜干细胞移植术治疗角结膜烧伤均可使眼表上皮化，基质炎性浸润减轻，新生血管明显减少；自体体外培养角膜干细胞移植对角膜缘干细胞损伤严重的患者效果显著。自体和自体体外培养角膜干细胞移植治疗翼状胬肉均有良好效果，术后不适症状轻时间短，角膜创面愈合快，随访（1～2）y两种术式各复发1眼。自体体外培养角膜干细胞移植对复发性翼状胬肉切除术后较大的结膜缺损更为适合。结论羊膜移植、自体角膜干细胞移植和自体体外培养角膜干细胞移植对重建眼表都有重要的功效，手术方式的选择必须根据角膜干细胞损伤的程度、范围进行选择。     

自体角膜缘干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭症

目的　探讨自体角膜缘干细胞移植在角膜缘功能衰竭症治疗中的作用。方法　将 83例 90眼初发性翼状胬肉、外伤性角膜缘板层缺损及角膜缘碱烧伤患者随机分为A、B组。A组为自体角膜缘干细胞移植组 (干细胞治疗组 ) 4 2例 4 5眼 ,其中 30眼翼状胬肉行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术 ,外伤性角膜板层损伤 10眼、角膜缘碱烧伤 5眼行自体角膜缘干细胞移植术 ;B组为传统单纯翼状胬肉切除 ,外伤性角膜缘板层损伤、碱烧伤行结膜瓣移植术 (对照组 ) ,4 1例 4 5眼 ,其中翼状胬肉 30眼行单纯翼状胬肉切除 ,外伤性角膜缘板层缺损 11眼、碱烧伤 4眼行结膜瓣移植术 ,术后观察角膜上皮修复时间、角膜缘新生血管、角膜透明度、泪膜破裂恢复时间以及胬肉复发率 ,术后随诊 6～ 2 4月。结果　A组术后角膜上皮修复时间 2～ 4d、BUT(6 .7± 0 .8)d ,无角膜缘新生血管生长 ,术后翼状胬肉复发率为 0 ,角膜透明 ;B组术后角膜上皮修复时间 5～ 7d ,BUT(7.9± 0 .5 )d ,角膜缘有 3～ 8支新血管生长 ,角膜有不同程度的云翳 ,翼状胬肉复发率 13.33% ,A、B 2组各项指标比较有统计学差异。结论　自体角膜缘干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭症是一种简单、安全、有效的手术方法。     

角膜缘干细胞移植治疗眼部早期化学伤和热烧伤

目的 探讨角膜缘干细胞移植治疗眼部早期化学伤和热烧伤的临床效果。方法 采用自体或异体角膜缘干细胞治疗25例（26只眼）务和热烧伤后角膜表面缺损及血管翳性混浊。结果 25例中，上皮稳定愈合22例，角膜透明18例，视力均有明显提高。结论 角膜缘干细胞移植术能较好的促进角膜上皮的愈合，阻止结膜上皮向内生长，有效的抑制角膜血管化及假性胬肉的形成。     

重视角膜缘干细胞移植术后效果的合理评价

各种原因破坏角膜缘干细胞将导致角膜上皮缺损、新生血管长入、角膜结膜化等角膜缘干细胞衰竭.角膜缘干细胞移植是一种可供选择的方法.但是,由于此手术方式、移植条件不同,术后评价指标差异很大,因此,各种角膜缘干细胞移植术后的效果缺乏可比性,应制定移植术后合理的评价方法.     

兔同种异体角膜缘移植角膜印迹细胞学检测

目的 研究兔角膜缘干细胞缺乏和同种异体角膜缘移植后临床和角膜上皮表型的改变。方法 建立兔角膜缘干细胞缺乏模型,1个月后对治疗组进行同种异体角膜缘移植,术后联合使用免疫抑制剂。比较治疗组与非治疗组的临床表现和角膜表型的改变。结果 兔角膜缘干细胞缺乏后,角膜混浊,新生血管化,持续性上皮缺损;角膜上皮为结膜细胞表型。移植术后角膜上皮完整,新生血管减少,角膜透明度增加;上皮恢复角膜表型。结论 兔同种异体角膜缘移植联合术后使用免疫抑制剂是治疗角膜缘干细胞缺乏症的有效方法。印迹细胞学检查是角膜缘干细胞缺乏症诊断和角膜缘移植术后的评价手段。     

组织工程角膜上皮治疗兔角膜缘干细胞缺乏症的研究

目的 评价以纤维凝胶膜为载体,体外培养自体角膜缘干细胞移植术治疗角膜缘干细胞缺乏症的临床效果。方法 制作兔眼角膜缘干细胞完全缺乏模型,取对侧眼角膜缘组织进行干细胞培养,并以纤维凝胶膜为载体制成组织工程角膜上皮。将实验动物随机分为4组,其中Ⅰ-Ⅲ组为实验组,行组织工程角膜上皮移植术,Ⅰ组移植术后观察3个月,Ⅱ组移植术后观察1个月,Ⅲ组移植术后观察2周。Ⅳ组为对照组,移植不含干细胞的凝胶膜,术后观察3个月。以角膜上皮染色、角膜混浊及新生血管3项指标进行临床疗效评定,通过病理检查评估术后不同时期角膜上皮修复情况,印迹细胞学检查移植前后角膜上皮的细胞表型,免疫组织化学染色观察角膜上皮特异性角蛋白K3、MUCSAC及转录因子p63在移植角膜上皮的表达。结果 实验组角膜上皮逐渐愈合,透明度提高,新生血管减退或消失;对照组角膜呈持续混浊,上皮缺损迁延不愈,最终大量新生血管长入,上皮结膜化。临床指标评分比较,差异有统计学意义（P=0．021）。角膜上皮印迹细胞学检查显示对照组为PAS（＋）的结膜细胞表型,而实验组上皮细胞PAS（-）。组织病理学显示实验组为正常角膜上皮结构,对照组为结膜化生的上皮,可见血管和杯状细胞。免疫组织化学显示实验组角膜上皮表达角膜上皮特异性角蛋白l（3（AE5）,不表达结膜特异性MUCSAC,在上皮基底部表达转录因子p63。对照组上皮持续表达MUCSAC。结论 组织工程角膜上皮移植术是一种有效的治疗角膜缘干细胞缺乏症的方法,可重建眼表,修复角膜上皮的损伤,抑制角膜上皮结膜化和新生血管。纤维凝胶膜为一种新型的组织工程材料,吸收快,透明度高,具有良好的组织相容性,是一种较理想的移植载体材料。（中华眼科杂志．2006．42：679-685）     

自体角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗眼表疾病

目的:探讨角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗眼表疾病的临床效果。方法:对翼状胬肉420例(452眼),持续性角膜上皮缺损合并基底部溃疡20例(20眼),采用自体角膜缘干细胞移植联合人羊膜移植术进行治疗,并随访观察1～7a。结果:翼状胬肉452眼,上皮愈合良好,角膜病变区光滑透明,18眼复发,复发率为4.0%。持续性角膜上皮缺损合并基底部溃疡21眼,角膜溃疡修复、上皮缺损区界面光滑平整、清亮。结论:角膜缘干细胞为病灶角膜提供了健康干细胞来源,恢复了角结膜屏障功能;人羊膜本身无抗原性,术后不发生免疫排斥反应,且具有抗炎、抑制新生血管及抗纤维化作用;在促进伤口愈合中起重要作用,使其成为角膜上皮移行及生长的支架。自体角膜缘干细胞联合羊膜移植是一种有效的治疗眼表疾病的手段。相对于角膜缘干细胞而言,羊膜仅起着角膜上皮生长移行支架物的作用,角膜缘干细胞移植是不能被羊膜移植所替代的。     

自体结膜角膜缘联合羊膜贴敷术治疗眼化学伤

目的 探讨早期自体结膜角膜缘移植联合羊膜贴敷术治疗早期重度眼部化学伤疗效。方法 分别对自体结膜角膜缘移植术和自体结膜角膜缘移植联合羊膜贴敷术两组的疗效进行回顾性分析。结果 自体结膜角膜缘移植联合羊膜贴敷组比自体结膜角膜缘移植组角膜上皮修复快，角膜新生血管少，假性胬肉少，视力好。结论 早期自体结膜角膜缘移植联合羊膜贴敷术是治疗早期重度眼部化学伤的有效方法。     

培养兔自体角膜缘干细胞移植的实验研究

目的 观察以羊膜为载体的兔角膜缘于细胞膜片移植治疗兔角膜缘于细胞缺损的效果。方法 制造兔角膜缘干细胞缺损的动物模型,以右眼为实验眼,从兔左眼取角膜缘组织,将兔角膜缘干细胞消化下来,接种于铺有羊膜的无菌六孔培养板中,待细胞形成多层角膜上皮细胞后,对兔角膜缘干细胞缺损动物模型行角膜缘干细胞羊膜移植术,并对治疗后的角膜进行裂隙灯及病理学检查。结果 临床和组织病理学染色证实：体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上继续增生、分化为多层角膜上皮细胞;角膜缘干细胞移植术后兔角膜缘轻度充血、角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少或消失。结论 应用角膜缘干细胞羊膜移植术可恢复其角膜上皮结构的完整性,减少角膜新生血管的形成,维持角膜缘的细胞屏障功能。     

大鼠角膜缘上皮细胞培养与同体移植的实验研究

目的：观察以明胶为载体培养的角膜缘上皮细胞移植治疗角膜缘干细胞缺乏症的疗效。 方法：大鼠角膜缘上皮细胞在铺有明胶载体的细胞培养板上进行培养5d后,角膜上皮细胞移植术前24h用3H胸腺嘧啶核苷标记培养的角膜缘上皮细胞,培养标记的角膜缘上皮细胞对角膜缘干细胞缺乏的大鼠动物模型行角膜缘上皮细胞同体移植术,对移植术后角膜进行观察、病理学检查及同位素检测。 结果：大鼠角膜缘上皮细胞可以在明胶载体上培养、增殖、分化为密集角膜上皮细胞层;角膜缘上皮细胞移植术后角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少。病理学检查角膜缘及周边部上皮细胞为多层结构,角膜新生血管消失及基质中炎性细胞浸润减轻。角膜缘上皮细胞移植术后4wk受眼角膜仍可测到3H胸腺嘧啶核苷。 结论：角膜缘上皮细胞移植治疗角膜缘干细胞缺乏症可恢复角膜缘干细胞缺乏病变角膜上皮结构的完整性,减少角膜新生血管的形成,维持角膜缘干细胞的屏障功能,为角膜移值提供更好的条件。     

翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术患者围术期角膜缘部上皮厚度的变化规律

目的 探究翼状胬肉切除联合带角膜干细胞的自体结膜移植术患者围术期角膜缘部上皮厚度变化规律.方法 选取行翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术患者30例(30只眼)为观察组和健康体检者30例(30只眼)为对照组,对比两组研究对象的一般资料、对照组和观察组手术后不同时间点的鼻侧角膜缘上皮厚度、观察组手术后不同时间点的角膜荧光染色缺损面积.结果 观察组患者术后1、2、3、5、7天的鼻侧角膜缘内1mm的上皮厚度较对照组薄(P＜0.05),观察组患者术后1、2、3、5天鼻侧角膜缘内2mm的上皮厚度较对照组薄(P＜0.05),术后7天的鼻侧角膜缘上皮厚度和对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);观察组术后1天的角膜荧光染色缺损面积为(39.29±22.68) mm2,术后2、3、5、7天的角膜荧光染色缺损面积均较前一时间点的角膜荧光染色缺损面积缩小(P＜0.05).结论 翼状胬肉切除联合带角膜缘干细胞的自体结膜移植术后角膜上皮缺损的愈合由缺损的周围向中央愈合,而其角膜缘部上皮的厚度则由角膜中央向周围逐渐恢复正常.     

羊膜培养兔角膜缘上皮细胞及自体移植--角膜缘干细胞缺损的治疗

目的　探讨以人羊膜为载体培养兔角膜缘上皮细胞及其自体移植治疗全角膜缘干细胞缺损。方法　在8只兔右眼用正庚醇脱上皮和角膜缘环切的方法构建全角膜缘干细胞缺损模型2月。其中6只兔为实验组,活体取左眼角膜缘浅层小块,置羊膜上常规和气_液培养42天后进行自体移植治疗右眼角膜缘干细胞缺损;2只兔为对照组,直接用解冻无细胞人羊膜移植治疗右眼角膜缘干细胞缺损。进行细胞和术眼活体观察、组织学观察和电镜观察。结果　角膜缘上皮细胞在羊膜上生长良好,形成复层,细胞间的联结结构存在,细胞与羊膜组织粘附牢固。实验组移植手术后角膜迅速上皮化,恢复角膜表面光滑和透明,组织学观察和电镜观察呈现生理角膜上皮层的结构特点。但眼睑闭合不全可导致手术失败。对照组术后出现角膜缘干细胞缺损导致的角膜病变。结论　以羊膜为载体培养角膜缘上皮细胞后自体移植可有效地治疗角膜缘干细胞缺损导致的角膜病变。     

带角膜缘的自体结膜瓣移植术治疗翼状胬肉的疗效

目的:观察用带角膜缘的自体结膜瓣移植术治疗翼状胬肉的临床效果。方法:翼状胬肉50例56眼,采取显微手术取同侧眼上方带角膜缘的游离结膜瓣进行移植。行翼状胬肉切除联合带角膜缘的自体结膜瓣进行移植,缝合时注意移植片移植床上角膜缘各自准确对位吻合,术后对角膜上皮化及植片生长情况随访观察。结果:术后随访6～12mo,角膜上皮平整光滑,泪膜正常,供区角结膜创面正常愈合,术后角膜透明或仅遗留少许云翳,无新生血管长入,无1例复发。结论:用带角膜缘的自体结膜瓣移植术治疗翼状胬肉,有利于重建角膜缘功能,是一种治疗翼状胬肉安全有效的手术方法。     

角膜缘干细胞与结膜移植治疗翼状胬肉

目的:观察角膜缘干细胞与结膜移植治疗翼状胬肉的疗效。方法:采用自体角膜缘干细胞与结膜移植术,对38例43眼初发和复发性翼状胬肉患者进行治疗,术后随访3～30月,平均10月。结果:38例43眼中34例38眼上皮愈合稳定,角膜恢复正常光滑、透明,胬肉无复发。4例5眼失访。结论:自体角膜缘上皮移植为病变区角膜和结膜提供新的干细胞来源,是治疗翼状胬肉的理想方法。眼科学报1999;15:89—90。     

表皮生长因子在翼状胬肉术后的应用观察

目的 观察重组人表皮生长因子（rhEGF）在角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉术后的效果。方法 切除翼状胬肉后取术眼下方角膜缘上皮连同部分结膜上皮组织制成移植片，移植于角膜上皮缺损处，治疗原发性和复发性翼状胬肉68例（72眼），术后实验组给予rhEGF滴眼剖局部治疗。随访6～12月。结果 术后角膜创面上皮修复自近移植片的周边部向中央移行，对照组角膜上皮痊愈时间为7天，实验组角膜上皮痊愈时间5天，两者差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 自体角膜缘干细胞移植术联合rhEGF局部滴眼能缩短角膜上皮缺损的愈合时间。     

自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉

目的探讨用自体角膜缘干细胞移植方法，作术眼角膜缘重建术治疗翼状胬肉的疗效。方法进行期翼状胬肉17例(18眼)，复发性翼状胬肉4例(4眼)，共21例(22眼)，在手术显微镜下切除胬肉的基础上，联合自体带结膜瓣的角膜缘游离植片进行角膜缘移植术。术后对角膜上皮的重建和生长情况严密跟踪观察。结果经过平均13月的随访观察胬肉术后无复发，角膜上皮稳定。供区角膜创面与结膜创面愈合正常。结论在常规切除翼状胬肉的同时联合同侧带结膜瓣自体角膜上皮(干细胞)移植行角膜缘重建术，对防止胬肉复发的效果是肯定的。     

自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状胬肉

目的 观察自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状胬肉及合并睑球粘连等并发症的疗效。方法 对25例(27只眼)复发性翼状胬肉,其中,5例(6只眼)并发睑球粘连,1例(1只眼)合并上皮囊肿,施行复发性翼状胬肉切除、睑球粘连分离、囊肿切除联合自体角膜缘干细胞移植及羊膜移植术,术后随访(18.76±8.05)月,观察眼表上皮修复、炎症反应、新生血管、视力等。结果 角膜上皮愈合时间为(3.03±0.46)天,无睑球粘连及上皮囊肿再发,翼状胬肉复发7.41％(2／27),视力提高74.07％(20／27),症状改善88.89％(24／27)。结论自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植能够有效重建眼表,修复角膜缘缺损,改善角膜缘基质微环境,促进上皮修复,是治疗角膜缘干细胞功能衰竭、减少复发性翼状胬肉再发的良好方法。     

不同术式治疗原发性翼状胬肉的临床效果分析

目的:比较分析羊膜移植术、自体角膜缘干细胞移植术及术中应用0.2g/L丝裂霉素C治疗原发性翼状胬肉的临床效果。方法:回顾性分析我院232例曾行原发性翼状胬肉手术的患者,其中82例行羊膜移植术治疗,90例行自体角膜缘干细胞移植术治疗,60例在术中应用0.2g/L丝裂霉素C治疗,比较三种术式术后复发率及并发症。结果:自体角膜缘干细胞移植术和术中应用0.2g/L丝裂霉素C治疗原发性翼状胬肉的复发率低于羊膜移植术(P<0.05);而自体角膜缘干细胞移植术和术中应用0.2g/L丝裂霉素C之间复发率无差异(P>0.05)。角膜上皮缺损,流泪和畏光在0.2g/L丝裂霉素组发生比例较其他两组高(P<0.05),在自体角膜缘干细胞移植组和羊膜移植组两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结膜充血及结膜下出血在三组间无统计学差异(P>0.05)。结论:与其他两种术式相比,自体角膜缘干细胞移植术治疗原发性翼状胬肉,有着复发率低、并发症少的优点。     

兔角膜缘上皮细胞培养后自体移植修复

目的：运用培养角膜缘上皮细胞联合人羊膜行自体移植的方法，观察植片修复兔眼角膜上皮的疗效。方法：选用健康新西兰白兔20只，制成右眼角膜缘干细胞缺乏的兔眼模型，其中12只兔行角膜缘上皮细胞培养联合羊膜自体移植，另外8只兔只进行单纯羊膜移植。术后每周对眼表情况进行评分，术后1mo眼角膜进行苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜观察。结果：移植了含有自体角膜上皮细胞的兔眼，术后早期都形成了角膜上皮化并明显抑制了新生血管的再生，HE染色和电镜观察表明培养并移植的角膜上皮与正常的角膜上皮无明显差异；而只接受羊膜移植的兔眼，术后又出现角膜混浊和明显的新生血管，表明角膜表面被结膜上皮覆盖。结论：该方法术后早期可以恢复角膜上皮化，重建正常眼表，疗效明显优于单纯羊膜移植。