人肝癌细胞膜胰岛素受体的研究及临床意义

目的　研究临床上用胰岛素作为载体通过受体介导对肝癌进行靶向治疗的可行性及其临床价值。方法　以A14 12 5I 标记胰岛素 ,取人肝癌细胞及癌旁组织 ,制备细胞膜 ,测定细胞膜胰岛素受体密度并评价其受体结合活性。结果　A14 12 5I 胰岛素比放射性为 (46 1± 1 2 )TBq/mmol,放射化学纯度 >98% ;人肝癌及癌旁组织细胞膜胰岛素受体Bmax分别为 (1 9± 0 6 )pmol/mg蛋白及(1 4± 0 6 )pmol/mg蛋白 ,高亲和力Kd(解离常数值 )值为 (2 1± 0 6 )nmol及 (2 2± 0 8)nmol,低亲和力Kd值为 (2 5± 8)nmol及 (2 7± 8)nmol。人肝癌细胞膜胰岛素受体表达高于癌旁组织 (最大结合值Bmaxt=0 0 32 ,P <0 0 5 )。结论　A14 12 5I 胰岛素与人肝癌细胞膜胰岛素受体具有特异性的结合力     

胰岛素受体与肾脏

近几年研究发现胰岛素受体在肾脏中起重要作用.胰岛素通过跨膜受体与少数胰岛素样生长因子,激素相结合来调控细胞功能.本文就胰岛素受体的作用及肾小球和肾小管中胰岛素信号的最新进展作一综述.     

原发性肝癌细胞凋亡与端粒酶的表达研究

细胞凋亡和端粒酶都是近年来肿瘤基础研究的热点课题之一。了解两者的关系以及它们在肝癌生物学行为中的意义 ,有一定临床价值。1 资料与方法 :(1)一般资料 :原发性肝癌 (hepatocelluarcarcinoma,HCC)标本 4 5例 ,男 36例 ,女 9例。年龄 2 8～ 70岁。平均 4 5 2岁。术前均未行放疗和化疗。细胞凋亡检测标本采用石蜡包埋切片 ,另取旁组织作对照组。端粒酶检测标本于离体后 0 5h内采集 ,- 80℃冰箱内储存备测。HCC恶性程度按Edmondson分级标准 ,Ⅱ级 11例 ,Ⅲ级19例 ,Ⅳ级 15例。 (2 )方法 :细胞凋亡检测方法采用TUNEL法检测。试剂盒购…     

胃转流术对2型糖尿病大鼠胰岛细胞胰岛素受体及胰岛素受体底物2表达的影响

目的：探讨胃转流术对2型糖尿病大鼠胰岛细胞中胰岛素受体（IRc）及胰岛素受体底物2（IRS-2）表达的影响。 方法：高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组和胃转流组,另取正常大鼠作为正常对照组,胃转流组大鼠行胃空肠吻合术加空肠侧侧吻合,模型组与正常对照组大鼠均行假手术。检测术前及术后8周大鼠空腹血糖、血清胰岛素,计算胰岛素敏感指数（ISI）,用免疫组化法检测胰腺组织IRc及IRS-2的表达。 结果：与正常对照组比较,模型组与胃转流组术前空腹血糖均明显升高,ISI均明显降低,但术后胃转流组两项指标均较模型组明显改善（均P<0.05）;各组胰岛素水平手术前后均无统计学差异（均P>0.05）。术后8周,胃转流组胰岛细胞IRc和IRS-2表达量均明显高于模型组（均P<0.05）,其中IRc表达量仍低于正常对照组（P<0.05）,但IRS-2表达量与正常对照组接近（P>0.05）。 结论：2型糖尿病大鼠胰岛细胞中IRc及IRS-2表达下调,而胃转流术能够使其表达显著增加,这可能是该手术产生对2型糖尿病产生疗效的机制之一。     

原发性肝癌生长抑素受体 mRNA表达的研究

我们采用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测 39例原发性肝癌癌组织中 5个亚型的生长抑素受体 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＳＳＴＲ)ｍＲＮＡ的表达 ,现报告如下。资料与方法1.资料 :本组共 39例 ,男 34例 ,女 5例 ,年龄 32～ 75岁 ,其中肝细胞癌 38例 ,胆管细胞癌 1例。所有病例均经病理学证实。另取 10例患者的肝组织作为正常对照 (肝血管瘤5例 ,肝脏局限性结节性增生 3例 ,肝胆管结石 2例 )。2 .试剂 :总ＲＮＡ提取试剂 (美国Ｐｒｏｍａｇｏ公司 ) ,特异性引物和ＲＴ ＰＣＲ试剂 (日本宝生物公司 ,大连 )。3 .实验方…     

陷阱受体3基因的表达与肝癌抵抗药物诱导的细胞凋亡研究

陷阱受体3（DcR3）是新近发现的肿瘤坏死因子受体家族的新成员，可竞争Fas与FasL的结合，从而阻断由Fas介导的细胞凋亡。本研究旨在探讨原发性肝癌的DcR3基因过度表达在Fas系统介导细胞凋亡中的作用以及肝癌细胞是否通过DcR3表达抑制Fas介导的细胞凋亡而起耐药作用。     

LAMS拮抗肝癌细胞分泌物对T细胞转化的影响

昆布多糖硫酸酯 (ｌａｍｉｎａｒｉｎｓｕｌｐｈａｔｅ ,ＬＡＭＳ)是具有多种生物功能的昆布多糖衍生物〔1〕。本文旨在研究以ＬＡＭＳ拮抗肝癌细胞分泌物抑制Ｔ淋巴细胞 (ＴＬｃ)转化效果 ,为临床应用提供实验依据。材料与方法1.ＬＡＭＳ :按文献 2提取昆布多糖并制备昆布多糖硫酸酯。以苯酚 硫酸法〔3〕 测定其多糖为30 %。 16 40培养液稀释成所需浓度 ,0 2 2 μｍ滤器过滤。2 .肝癌细胞分泌物液 :取本科实验室常规培养ＳＭＭＣ 772 1、ＨｅｐＧ2细胞 72ｈ的培养液 ,离心 ,上清液置透析袋 ,用聚乙二醇 2 0 0 0 0浓缩为 6 ｇ/Ｌ ,0 2…     

胰岛素生长因子-2与肝癌的关系

肝癌病人常有胰岛素生长因子-2(ICF-2)过量表达,其基因调节和受体也往往发生改变。ICF-2不仅通过内分泌作用参与机体代谢过程,更重要的是还通过自分泌/旁分泌途径促进了肝癌细胞的增生繁殖和分化,甚至间接促进肝癌血管生成,从而成为影响肝癌发生发展的重要因子。     

血清瘦素及胰岛素与原发性肝癌相关性分析

目的 研究探讨瘦素、胰岛素在原发性肝癌发生发展中的作用.方法 采用放射免疫分析法(RIA)和电化学发光免疫法(ECL)检测70 例肝癌患者血清瘦素、胰岛素水平并进行比较分析.结果 肝癌患者较正常对照组血清瘦素、胰岛素显著升高,体重指数显著降低.结论 瘦素、胰岛素参与了肝癌患者营养不良的发生,可能与肝癌的发生有关.     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

腺苷2A受体激活抑制大鼠T淋巴细胞功能

目的研究激活腺苷2A受体对大鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞毒效应的影响。方法植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激小鼠脾脏来源的T淋巴细胞,并以终浓度为0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L及10μmol/L的腺苷2A受体激动剂CGS21680与其共培养。荧光抗体染色结合流式细胞术检测T淋巴细胞活化抗原CD69及CD25的表达及细胞增殖情况,ELISA法检测T淋巴细胞分泌IL-2及INF-γ的水平。结果各浓度的CGS21680均可明显抑制T淋巴细胞表面CD25及CD69分子的表达(P0.05,P0.01),抑制T淋巴细胞增殖(P0.01),也对IL-2及INF-γ的分泌产生明显抑制作用(P0.01)。结论激活腺苷2A受体能有效地抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化、增殖及细胞毒作用。     

阴道粘膜上皮细胞的分离培养和鉴定

目的 初步建立阴道粘膜上皮细胞体外培养方法,为阴道粘膜上皮研究提供实验模型.方法 取雌性新西兰大白兔阴道粘膜组织小块,胶原酶Ⅳ和胰蛋白酶联合消化分离法收集上皮细胞,接种于角朊细胞无血清培养液中静置培养、传代.动态观察细胞生长增殖情况,扫描和透射电镜观察超微结构,流式细胞仪测定细胞增殖周期,并进行免疫组织化学鉴定.结果 体外培养的阴道粘膜上皮细胞为二倍体细胞,增殖状态良好,细胞间可见桥粒连接,免疫组化角蛋白染色阳性.细胞的超微结构和免疫组化染色均具有上皮细胞特征.结论 在本实验条件下,体外培养的阴道粘膜上皮细胞具有较好的增殖能力,可作为阴道粘膜上皮研究的理想实验模型.     

大鼠骨髓基质细胞的体外培养和鉴定

目的探讨SD大鼠骨髓基质细胞（MSCs）的体外培养方法,为细胞治疗研究提供大量MSCs。方法取幼年SD大鼠股骨及胫骨骨髓,全骨髓法培养至第4代,观察各代生长情况;同时制备第3代细胞爬片行细胞鉴定。结果第1～3代细胞接种后4h即有细胞贴壁,部分细胞呈梭形改变,24h时可见细胞呈长梭形或多边形;成群生长的细胞呈漩涡状或平行排列,3～4d时即可达85%～90%融合;收获细胞平均密度为（3.4～3.6）&#215;10^4个/cm^2,台盼蓝染色拒染率为95%～97%,1～3代细胞总产量分别为4.08&#215;10^6个、2.44&#215;10^7个及2.85&#215;10^8个。第4代细胞生长较前减慢,需5～6d达85%～90%融合;收获细胞平均密度3.0&#215;10^4个/cm^2,拒染率为95%,细胞总产量为1.42&#215;10^9个,较原代细胞扩增近2000倍。第3代细胞免疫组化鉴定结果：CD105^＋细胞占61.9%,CD44^＋占45.4%,CD29^＋占16.8%,CD45^＋占8.2%,CD31^＋占13.7%,CD34^＋占8.3%,CD11b^＋占1.5%。结论全骨髓培养适合于MSCs体外的大量扩增,可满足细胞治疗研究的需要。     

In Vitro Effects of Prolactin and Dexamethasone on Rat Leydig Cell Aromatase Activity

In Percoll purified adult rat Leydig cells, the estradiol secretion, in presence of exogenous testosterone (200 ng/ml) is stimulated 2-fold by either LH (100 ng/ml) or dbcAMP (1 mM). The addition of prolactin (1 microgram/ml) or dexamethasone (10(-7) M) to the Leydig cell incubation medium induces a 20% increase of the basal estradiol production, whereas, under LH or dbcAMP stimulations, 46 and 41% decreases are noted; moreover, a synergistic effect between prolactin and dexamethasone was observed in presence of dbcAMP leading to a 53% diminution of the estradiol synthesis. There results suggest that either hyperprolactinemia or high doses of glucocorticoids might inhibit the Leydig cell aromatase activity in presence of LH.     

大鼠MSCs体外分离培养及骨向分化的实验研究

目的:建立骨髓MSCs体外分离培养体系,并进行骨向分化诱导,以证实其多向分化潜能,为骨髓MSCs进一步的临床应用研究提供实验依据。方法:用密度梯度离心法分离大鼠骨髓MSCs,并对其形态学特征进行观察。用诱导剂对骨髓MSCs向成骨细胞进行诱导分化,并进行形态学观察和免疫细胞化学检测。结果:用密度梯度离心法成功分离获得了高纯度的骨髓MSCs。经骨向诱导后,ALP和矿化结节染色阳性。结论:采用密度梯度离心法成功建立了大鼠骨髓MSCs体外分离和培养体系,并能够向成骨细胞分化。     

大鼠颌丰腺雄激素受体的免疫定位及与促性腺激素释放激素受体的共定位关系

目的：研究大鼠下腺雄激素受体（AR）的存在及其与促性腺激素释放激素受体（GnRHR）的免疫共定位关系，证明颌下腺是雄激素和GnRH的一个靶器官。方法：制备大鼠颌下腺石蜡连续切片，以免疫组化SABC法分别研究AR和GnRHR的免疫定位。结果：大鼠颌下腺奖浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有AR免疫反应性物质存在。阳性物质分布于细胞内，胞核阴性。邻片双标记染色结果显示：GnRHR免疫反应性物质也存在于上述细胞内。阳性物质分布在胞质，胞核阴性。结论：大鼠颌下腺存在AR，是雄激素的靶器官，而且，雄激素和GnRH在颌下腺有相同的靶细胞，雄激素对颌下腺可能具有潜在的生理调节功能。     

大鼠颌下腺雄激素受体的免疫定位及与促性腺激素释放激素受体的共定位关系

目的 :研究大鼠颌下腺雄激素受体 (AR)的存在及其与促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)的免疫共定位关系 ,证明颌下腺是雄激素和GnRH的一个靶器官。　方法 :制备大鼠颌下腺石蜡连续切片 ,以免疫组化SABC法分别研究AR和GnRHR的免疫定位。　结果 :大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有AR免疫反应性物质存在。阳性物质分布于胞质内 ,胞核阴性。邻片双标记染色结果显示 :GnRHR免疫反应性物质也存在于上述细胞内。阳性物质分布在胞质 ,胞核阴性。　结论 :大鼠颌下腺存在AR ,是雄激素的靶器官 ,而且 ,雄激素和GnRH在颌下腺有相同的靶细胞 ,雄激素对颌下腺可能具有潜在的生理调节功能     

内皮素受体拮抗剂联合内皮源血管松弛因子防治大鼠缺血性急性肾衰竭

目的:观察内皮素受体拮抗剂PD145065联合内皮源血管松驰因子NO生理性前体L-arginine对大鼠缺血性急性肾衰竭是否有防治作用.方法:采用阻断大鼠双侧肾脏血流45 min再灌注24 h之急性肾缺血再灌注动物模型,观察内皮素受体拮抗剂PD145065或内皮源血管松驰因子NO生理性前体L-arginine或两者联合应用,对再灌注24 h后大鼠肾组织病理变化和肾功能的影响.结果:PD145065或L-arginine单独作用均可明显减轻肾缺血再灌注后的肾组织病理损害,提高肾小球滤过率,改善肾功能.其中,两者联合应用的效果比单独使用的效果更好.结论:缺血性急性肾衰竭时,内皮素升高及其受体上调是缺血性急性肾衰竭发生发展的重要因素,外源性给予内皮素受体拮抗剂可阻断内皮素的生物作用,并且联合内皮源血管松弛因子的应用效果更佳.这是防治缺血性急性肾衰竭的又一新途径.     

EIF-GT/PCL纳米纤维电纺膜体外诱导hADSCs向表皮细胞表型转化的相关研究

目的 探讨表皮诱导因子复合体(Epidermal inducing factors,EIF)-明胶(Gelatin,GT)/聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)纳米纤维电纺膜,体外诱导人脂肪干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)向表皮细胞表型转化的可行性,以及相关的生物学特性。方法 采用混合静电纺丝法制备EIF-GT/PCL纳米纤维电纺膜(实验组)和GT/PCL纳米纤维电纺膜(对照组),进行形态学观察和力学测试;通过酶联免疫吸附测定法绘制EIF-GT/PCL纳米纤维电纺膜的药物释放曲线;将hADSCs接种于两种电纺膜上进行体外培养,扫描电镜观察细胞-纳米纤维电纺膜黏附情况,CCK-8法检测细胞增殖情况,免疫荧光法检测CK10及CD105的表达情况。结果 实验组和对照组具有相似的纳米级结构,形态、密度均匀,力学特性佳;实验组能够平稳释放EIF达15 d以上;hADSCs在实验组上黏附更好,增殖更快。培养7 d后,实验组上hADSCs表达CK10,间充质干细胞标志物CD105表达减弱。结论 EIF-GT/PCL纳米纤维电纺膜具有良好的生物学特性,可诱导hADSCs向表皮细胞表型转化。     

肌源性干细胞与胶原海绵复合培养的实验研究

目的：研究成午大鼠肌源性干细胞纯化培养方法以及与胶原海绵的细胞相容性，探讨构建组织工程化肌性吊带的可行性。方法：取成年雌性SD大鼠前肢肱三头肌，用胶原酶和Dispase进行消化，采用差速贴壁的方法纯化肌源性干细胞并与胶原海绵体外复合培养，构建组织工程化肌源性干细胞／胶原海绵复合体。结果：成功地分离培养了成年大鼠的肌源性干细胞，肌源性干细胞在胶原海绵上生长良好、增殖迅速。结论：采用差速贴壁的方法可以纯化肌源性干细胞，肌源性十细胞与胶原海绵有良好的细胞相容性，本实验为构建组织工程化肌性吊带的研究打下基础。