基因导入途径与脑内表达的关系研究

目的比较不同途径(股静脉、颈内动脉、侧脑室及鞘内)导入转铁蛋白靶向脂质体介导的LacZ基因(transferrintargeted LacZ gene pegylated liposomes,Tf-PLs)在大鼠脑内的表达,寻找出适合临床的安全有效的基因导入方法。方法 120只雄性SD大鼠随机分为静脉导入组、动脉导入组、侧脑室导入组、鞘内注射组和治疗组,其中治疗组分别将Tf-LacZ通过股静脉、颈内动脉、侧脑室立体定向及鞘内的方式注射入大鼠体内。术后24和48h分别取脑(每项检测指标每组随机选取8只大鼠),光学显微镜下观察LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶(beta-gal)的表达,Real time-PCR比较不同组别LacZ mRNA的表达,试剂盒检测β-半乳糖苷酶的活性。结果免疫组化提示动脉导入组及静脉导入组可以实现β-半乳糖苷酶在脑内的广泛性表达,并且动脉导入组LacZ mRNA及β-半乳糖苷酶的表达高于静脉组(P<0.05)。侧脑室及鞘内注射组只能实现β-半乳糖苷酶的局限性表达,且LacZ mRNA及β-半乳糖苷酶的表达要低于动脉及静脉导入组(P<0.05)。结论动脉导入将外源基因转入大鼠脑内的效果最好,静脉导入的效果优于侧脑室注射和鞘内注射的方式。在可行性方面,经过静脉导入途径是较为方便、易行、有效。     

戊四氮致痫大鼠延髓内脏带内Fos, GFAP和TH的表达

目的 研究戊四氮诱导大鼠癫痫发作后延髓内脏带（MVZ）内神经元和星形胶质细胞的反应。方法 用抗Fos蛋白，抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH)和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的三重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术。显示癫痫发作1h后MVZ内反应性神经元与星形胶质细胞的分布。结果 MVZ内的Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多，三重免疫组化方法显示反应性神经元（Fos阳性）与反应性星形胶质细胞（GFAP阳性）关系密切，发现3种不同标记的“神经元-星形胶质细胞复合体（N-ASC）”：即TH /Fos /GFAP 三标记复合体TH /GFAP /Fos-和Fos /GFAP /TH-二标记复合体。结论 MVZ内的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作时反应强烈。可能以N-ASC作为功能单位参与癫痫发病的调节。     

大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达的变化及意义

目的 研究脊髓损伤后神经元中神经丝蛋白（NF200）及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化及其关系，探讨不同细胞在再生修复中的作用。方法 SD大鼠30只，分为正常，伤后1d,3d,7d,14d,21d 6组，每组5只，用免疫组化染色及图象分析方法观察神经元NF200及星形胶质细胞GFAP的表达，并对二者进行相关性分析。结果 脊髓损伤后NF200及GFAP的表达均呈进行性增高，二者有显著的相关性；GFAP表达的增高早于NF200的增高，而前角神经元NF200的表达早于后角神经元。结论 脊髓损伤后，星形胶质细胞可能是刺激神经元功能活跃，促进神经纤维再生的一个重要因素，不同类型神经元对损伤的反应存在着差异。     

大鼠上唇皮下注射Formalin后脑内星形胶质细胞的反应及其与神经元的关系-光镜研究

目的：观察大鼠脑内星形胶质细胞对上唇皮肤伤害性刺激的反应及其与神经元的关系。方法：将Formalin注入大鼠一侧上唇皮下，成活1，3，6h后，用抗FOS蛋白，抗酷氨酸羟化酶（TH）和抗胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的三重免疫组化方法显示反应神经元与星形胶质细胞的定位及其相互关系。结果：（1）FOS阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞均特异地表达于与痛觉传递或镇痛相关的机能区；（2）三重免疫组化显示反应性神经元（FOS阳性）与反应性星形胶质细胞（GFAP阳性）关系密切，形成三种复合体，即TH＋／FOS＋／GFAP＋三标记复合体，TH＋／GFAP＋／FOS－二标记复合体和FOS＋／GFAP＋／TH二标记复合体。（3）Formalin注射后3h，复合体的数目达高峰。结论：神经元－星形胶质细胞复合体在口唇伤害性刺激信息处理过程中可能起着重要作用。     

苯丙胺对大鼠海马结构内胶质原纤维酸性蛋白质表达的影响

目的：观察苯丙胺对大鼠海马结构内星形胶质细胞的影响。方法：SD大鼠130只按随机数字表法分为正常组43只,生理盐水组43只和苯丙胺组44只。苯丙胺组给予大鼠每天肌肉注射O．5mg／kg剂量的苯丙胺1次;生理盐水组注射等体积的生理盐水,正常组不予处理。用水迷宫训练苯丙胺组和生理盐水组大鼠建立空间辨别性学习记忆模型,用免疫组织化学方法和Western免疫印迹定性和定量胶质原纤维酸性蛋白质（GFAP）的表达。结果：苯丙胺组和生理盐水组海马各亚区的GFAP免疫阳性产物的灰度值与正常组相比明显降低,差异有显著性（P〈0．05）,其中苯丙胺组的灰度值最低;苯丙胺组大鼠海马结构内GFAP蛋白表达量比其他两组明显增加（P〈0．05）,苯丙胺组内海马结构GFAP蛋白表达量在模型42d内,随时间增加而增加。结论：在本实验条件下,苯丙胺可引起大鼠海马结构GFAP表达显著升高。     

大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达的变化及意义

[目的]研究脊髓损伤后神经元中神经丝蛋白(NF200)及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化及其关系,探讨不同细胞在再生修复中的作用。[方法]SD大鼠30只,分为正常、伤后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d6组,每组5只,用免疫组化染色及图象分析方法观察神经元NF200及星形胶质细胞GFAP的表达,并对二者进行相关性分析。[结果]脊髓损伤后NF200及GFAP的表达均呈进行性增高,二者有显著的相关性;GFAP表达的增高早于NF200的增高,而前角神经元NF200的表达早于后角神经元。[结论]脊髓损伤后,星形胶质细胞可能是刺激神经元功能活跃,促进神经纤维再生的一个重要因素,不同类型神经元对损伤的反应存在着差异。     

模拟失重大鼠下丘脑不同部位的Fos和GFAP表达

目的 了解长期模拟失重状态下大鼠下丘脑功能活动状态。方法 用Fos和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的ABC法，分别检测4周模拟失重大鼠下丘脑神经元和星形胶质细胞（AS）的变化。结果 二表达仅见于室旁核尤其大细胞部、视上核和视交叉上核，而其它部位未见表达；AS胞体变大、突起增粗增长。结论 下丘脑这些核团参与了对长期失重的反应，且可能与加压素分泌增加有关。     

正常大白鼠经伽玛刀照射后脑组织胶质纤维酸性蛋白的变化

目的：用伽玛刀照射正常鼠脑组织后,研究不同时间脑组织中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及脑组织水含量变化,了解伽玛刀照射后脑组织损伤的变化过程。方法：用伽玛刀将160Gy的剂量照射正常SD鼠脑组织,分别于照射后第1d,第7d,第14d,第28d断头取脑,免疫组化方法检测脑组织中GFAP水平,微比重法测定脑组织比重,江镜下观察受照射侧脑组织病理改变。结果：（1）免疫组化检测：照射后第1d,靶区GFAP阳性星形细胞开始增多,随着时间的延长,GFAP染色加深,胶质细胞增生明显,第28d,靶区中央区出现直径约4mm的坏死灶,坏死区周边可见明显增多的GFAP阳性星形细胞（P＜0．01）。（2）光镜观察：照射后第1d可见脑实质内细胞肿胀,第7d红细胞从血管漏出,血管外间隙增宽,第14d靶区伊文氏兰漏出。（3）照射后14d可见照射侧脑组织比重明显减轻。结论：GFAP可作为衡量脑放射性损伤的指标。同时,在照射后早期即出现脑水肿反应和血脑屏障破坏。     

转化生长因子β1对体外大鼠星形胶质细胞形态及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:研究转化生长因子β1 ( TGF-β1) 对培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞形态及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响. 方法:体外培养的大鼠皮层星形胶质细胞随机分为对照组(无血清培养基培养)和实验组(分别含1, 2, 4 μg/L TGF-β1的无血清培养基培养). 培养24 h后,用相差显微镜观察星形胶质细胞的形态学变化,用RT-PCR和免疫印迹法检测GFAP mRNA和蛋白的表达. 结果:随着TGF-β1浓度的增加,细胞变形趋势越来越明显,GFAP mRNA和蛋白表达也随之增加. 结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞 GFAP的表达并且诱导细胞发生形态改变.     

大鼠急性脊髓损伤后GFAP和VEGF表达及相关性

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化,并分析其相关性.方法 SD大鼠36只,随机分为损伤后6 h、12 h、1 d、3 d、7 d组及假手术组共 6 组,每组6只,其中假手术组只做椎板切除.采用免疫组化SABC法检测GFAP和VEGF的动态表达情况,并进行相关...     

碱性成纤维细胞生长因子转基因治疗对放射性脑损伤大鼠星形胶质细胞相关蛋白表达的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转基因治疗对全脑放射后脑损伤(radiation injuries of brain,RIB)模型鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达的影响,为探索治疗RIB的新途径提供实验基础.方法 分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑单次25Gy照射建立RIB模型,bFGF转基因治疗组采用侧脑室注射bFGF-pcDNA3.1(±)质粒,并设未照射组为对照.在照射前及照射后20 d和60 d分别观察各组脑组织GFAP和VIM表达情况.结果 照射组病理检查显示海马和皮层神经元轻度变性,胞体萎缩,白质区域较对照组呈现组织结构梳松、血管周隙扩大等表现;bFGF治疗组病变程度明显较照射组轻.各组大鼠照射后GFAP表达均增加,20 d时bFGF治疗组GFAP阳性细胞数[(65±6.2)个]高于照射组[(49±5.8)个]和对照组[(18±2.4)个](P＜0.05),60 d时bFGF治疗组GFAP阳性细胞数(44±5.1)较20 d时明显减少(P＜0.05),其他各组GFAP阳性细胞数与20 d时无显著性差别(P＞ 0.05).bFGF治疗组照射后20 d VIM表达(0.94 ±0.12)较照射组(1.45±0.26)明显减少(P＜0.05),60 d时各组VIM表达量无显著性差别.结论 25 Gy射线照射可提高RIB鼠脑GFAP和VIM急性期表达量,bFGF转基因治疗可增加急性期GFAP的表达,降低VIM表达.     

急性实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白的表达

目的 研究急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化及其对血-视网膜屏障(BRB)功能的影响.方法 建立大鼠急性EAE模型后8、14、21 d自股静脉注射伊凡思蓝(EB)了解BRB情况,并行视网膜免疫组织化学染色观察GFAP的表达变化. 结果在各时间点对照组大鼠视网膜内渗漏的EB含量明显低于EAE组大鼠(P<0.01);各时间点对照组大鼠视网膜仅在神经节细胞层及神经纤维层见GFAP阳性表达;EAE组在免疫后8 d视网膜神经纤维层、神经节细胞层内GFAP阳性表达增多,内丛状层出现少量表达,免疫后14 d GFAP不仅在神经纤维层及节细胞层中表达增加,内丛状层和内核层中GFAP也大量表达,甚至可见GFAP阳性染色呈丝状贯穿内外核层,免疫后21 d GFAP仍有大量阳性表达主要集中在神经纤维层、神经节细胞层、内丛状层及内核层.结论 急性EAE可导致大鼠BRB破坏,且BRB破坏可能与星形胶质细胞活化密切相关.     

脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞共同培养建立血脑屏障模型

目的：建立能够模拟在体血脑屏障的体外模型。方法：培养大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞，用免疫组织化学染色的方法鉴定细胞，分别接种两种细胞于多聚酯多孔膜的两面，相关显微镜及HE染色观察细胞在多聚酯膜上的生长情况。结果：培养的脑微血管内皮细胞多数为梭形铺路石样外观，而星形胶质细胞呈具有多个突起的典型形态，免疫组织化学染色鉴定细胞的纯度分别在90％和95％以上，两种细胞能够以单层细胞的形式生长于多聚酯多孔膜的两面。结论：通过脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共同培养能够形成与在体血脑屏蔽类似的结构，是一种建立血脑屏障模型的可行方法。     

疾病状态下血-脑屏障的病理性开放

血-脑屏障（BBB）可阻止大多数化合物从血液流向大脑，从而维持中枢神经系统（CNS）正常功能。但在疾病状态下，BBB可出现病理性开放，不同疾病引起BBB通透性增高的机制不同。随着BBB研究的快速进展，其破坏机制逐渐被认识，将有助于明确BBB的保护策略并防治与BBB相关的疾病，同时也有助于解决治疗药物通过BBB进入CNS的难题。作者就血-脑屏障病理性开放作一综述。     

抗癫癎药物诱导对血脑屏障上P-糖蛋白功能与表达的影响

目的研究长期使用抗癫疒间药物（AEDs）对大鼠脑中P-糖蛋白（P-gp）功能活性和表达水平的影响。方法选择苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平三个典型AEDs,在大鼠体内连续给药21天,然后观察脑组织中皮质和海马P-gp的改变。结果底物罗丹明123转运实验表明P-gp功能增强,进一步通过Western Blot分析表明P-gp表达增强,并用免疫组化染色显示其细胞定位在血脑屏障上。结论长期AEDs诱导可以同时导致大鼠血脑屏障上P-gp功能活性和表达水平的升高。     

黄芪对创伤性脑损伤大鼠脑紧密连接相关蛋白表达及血脑屏障通透性的影响

目的 探讨黄芪对创伤性脑损伤后紧密连接相关蛋白( claudin-5)表达和血脑屏障通透性的影响. 方法 70只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和黄芪组各35只,两组各30只采用自由落体致伤原理造模成功. 黄芪组在制作大鼠脑损伤模型前7 d至处死时,每隔12 h腹腔注射黄芪,对照组用等量生理盐水腹腔注射. 两组分别于大鼠脑损伤模型制成后6 h、1 d、3 d、5 d、7 d各取2只大鼠,用Western Blot法测定脑组织claudin-5的表达,采用伊文蓝(EB)法测定血脑屏障通透性. 结果 脑损伤后各个时间点黄芪组脑组织claudin-5蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),脑组织EB含量均明显低于对照组(P<0.05). 结论 调节claudin-5的表达,进而调节血脑屏障的通透性可能是黄芪抑制脑水肿形成的机制.     

脑表面大体摄影评价小鼠局灶性脑缺血后24 h内血脑屏障通透性变化

目的:建立脑表面大体摄影结合图像分析的方法,观察小鼠局灶性脑缺血后24 h内血脑屏障通透性的变化.方法:采用线栓法诱导小鼠局灶性脑缺血,于缺血后10、30 min和1、3、6、12、24 h取脑,用数码相机拍摄全脑及脑切片照片,观察脑表面和切面的出血和伊文思蓝(EB)渗出,以及血脑屏障通透性变化;并用荧光法测定脑内EB含量,以干湿重法检测脑水分含量. 结果:脑表面图像分析显示,缺血后3 h 开始出现明显的出血和EB渗出,与脑切片的结果一致,具有较好的相关性;荧光法显示缺血后30 min缺血侧脑组织EB含量开始增高,缺血后1 h脑水分含量开始增加.结论:脑表面大体摄影结合图像分析,可对局灶性脑缺血后血脑屏障通透性的变化进行半定量评价,还发现脑缺血后早期血脑屏障的通透性就有增加.     

体外循环对大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨体外循环（CPB）对大鼠血脑屏障（BBB）功能及脑血管内皮紧密连接蛋白表达的影响。方法 24只成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（S组）和体外循环组（C组）。S组进行相应的麻醉和手术操作但不进行CPB,C组进行CPB 60 min并继续观察2 h。每组随机取6只测脑组织伊文思蓝（EB）含量,另6只做脑组织含水量测定、紧密连接蛋白Oc-cludin和ZO-1的表达以及大鼠BBB超微结构的观察。结果与S组比较,C组大鼠海马区脑组织EB含量和含水量升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。与S组比较,C组大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。S组BBB基膜均匀一致,完整性良好,内皮细胞间的紧密连接完整;C组基底膜变厚,微血管腔狭窄,内皮细胞间紧密连接不清楚。结论 CPB使大鼠BBB的结构发生变化、通透性增加,其机制可能与大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白改变有关。     

新生鼠脑皮层星形胶质细胞培养及鉴定

目的：旨在获得较纯的星型胶质细胞，为进一步研究奠定基础。方法：采用细胞分离培养一差速粘附法。胰酶消化及机械吹打，分离SD新生1周大鼠大脑皮层细胞，用含20％血清DMEM／F12培养基培养。并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果：经原代及传代培养，获得大量几乎为单一种类细胞，其特点为胞体较大，形状不规则，胞质较丰富，细胞核圆形或卵圆形，常偏于胞体一侧，细胞突起较多较长，符合星形胶质细胞形态。GFAP-FITC免疫荧光染色绝大多数细胞为强阳性。结论：细胞分离培养-差速粘附法可获得较纯的星形胶质细胞。     

外源性bFGF对新生大鼠脑GFAP蛋白表达影响的动态研究

目的: 探讨缺氧缺血对新生大鼠脑星形胶质细胞酸性蛋白(GFAP)和内源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的作用以及外源性bFGF对缺氧缺血后GFAP表达的影响.方法:采用免疫组化染色方法观察GFAP表达强度的变化.结果:生后7 d时正常新生鼠脑内有微弱GFAP表达.生后14 d,GFAP阳性细胞数量及染色强度呈高峰状态,主要见于脑白质区.生后28 d海马、脑白质内有少量GFAP阳性细胞.缺氧缺血后GFAP表达增加,以缺氧缺血后48 h明显.外源性bFGF增加GFAP的表达,以用药后24 h作用明显,并持续至用药后5 d.正常新生鼠脑有一定程度的内源性bFGF表达,生后10 d表达呈高峰状态.以后一直有少量bFGF表达,其组织学分布与GFAP大致相似.结论:缺氧缺血可诱导内源性bFGF及GFAP的表达.外源性bFGF可增强缺氧缺血时新生鼠脑GFAP的表达,补充内源性bFGF的不足,在缺氧缺血时神经元损伤修复中发挥一定保护作用.