lncRNA MALAT1靶向调控miR-146b-5p影响膀胱癌细胞侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)影响膀胱癌细胞侵袭和迁移的机制。方法:在膀胱癌BIU-87细胞中转染MALAT1 siRNA,以real-time PCR方法测定转染效果,Transwell法测定侵袭及迁移能力,Western blot法检测细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(vimentin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的变化。生物信息学软件预测MALAT1与miR-146b-5p有靶向互补位点,利用双萤光素酶报告系统鉴定靶向关系。用real-time PCR方法检测下调MALAT1后BIU-87细胞中miR-146b-5p表达的变化。将MALAT1 siRNA和miR-146b-5p inhibitor共转染至BIU-87细胞中,用上述方法分析细胞侵袭、迁移及vimentin、E-cadherin和MMP-2蛋白表达的变化。结果:转染MALAT1 siRNA可明显下调BIU-87细胞中MALAT...     

lncRNA NEAT1靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响北大核心CSCD

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养PANC-1细胞株,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(siRNA-NC组)、沉默NEAT1组(NEAT1-siRNA组)、共转染组(NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组)。采用实时荧光定量PCR法检测NEAT1、miR-497-5p水平;CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测增殖细胞核抗原(Ki-67)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及EMT标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测NEAT1与miR-497-5p靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与NG组、siRNA-NC组比较,NEAT1-siRNA组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著升高(P<0.05),NEAT1水平、Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NEAT1-siRNA组比较,NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-497-5p是NEAT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-497-5p-inhibitor-NEAT1-WT组荧光素酶活性显著高于miR-497-5p-inhibitor-NC-NEAT1-WT组(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1表达能够靶向上调miR-497-5p表达,抑制胰腺癌细胞增殖及EMT过程,并诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌新的潜在治疗靶点。     

lncRNA MALAT1通过上调miR-30a-5p促进乳腺癌细胞增殖

目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响。CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响。结果过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达。结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖。     

lncRNA ZFAS1调节miR-136-5p/IGF1R轴对多囊卵巢综合征小鼠胰岛素抵抗的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)锌指结构反义转录本1(ZFAS1)调节miR-136-5p/胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）轴对多囊卵巢综合征（PCOS）小鼠胰岛素抵抗（IR）的影响。方法 随机把C57BL/6J小鼠分为Ctrl组、PCOS组、Si-NC组、Si-ZFAS1组、antagomir-NC组、miR-136-5p antagomir组、miR-136-5p antagomir+Si-ZFAS1组,采用高脂饮食联合脱氢表雄酮建立PCOS小鼠模型（Ctrl组除外）,检测性激素指标、糖代谢指标水平变化;H-E染色观察卵巢组织形态学特征;RT-qPCR检测卵巢组织ZFAS1、miR-136-5p表达水平;Western blot检测卵巢组织IGF1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因法（DLR）验证ZFAS1/miR-136-5p、miR-136-5p/IGF1R靶向关系。结果 与Ctrl组比较,PCOS组小鼠性激素水平紊乱,卵巢呈多囊样改变,伴随明显胰岛素抵抗,同时卵巢组织中ZFAS1、IGF1R表达增加,miR-136-5p表达减少;下调ZFAS1表达后,PCOS小...     

LncRNA TUG1调控miR-142-5p/PD-L1轴促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1, TUG1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞生物学行为的影响及分子机制。方法 采用qRT-PCR、Western blot分别检测组织(NSCLC癌组织、癌旁组织)和细胞(人正常气管上皮细胞HBE及NSCLC细胞A549、H2009、H1975)中TUG1、miR-142-5p及PD-L1的表达。将pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-142-5p mimics、si-TUG1+anti-miR-142-5p分别转染于A549,qRT-PCR、Western blot分别检测细胞中TUG1、miR-142-5p及PD-L1表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶基因实验分别检测TUG1和miR-142-5p、miR-142-5p和PD-L1的关系;RNA免疫共沉淀检测miR-142-5p与TUG1的相互作用。结果 NSCLC组织中...     

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的：探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法：采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型，随机分为：对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组；qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达；流式细胞术检测细胞凋亡率；ELISA检测TNF-α、IL-6水平；双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系；Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高，miR-205-5p表达降低（P<0.05）；与si-NC...     

LncRNA TUG1/miR-525-5p/NLRC5在缺氧复氧大鼠心肌细胞中的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(TUG1)对缺氧复氧心肌细胞焦亡、自噬的影响及调控机制。方法建立缺氧复氧大鼠心肌细胞H9c2损伤模型;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTqPCR)法检测TUG1、miR-525-5p、NOD样受体家族CARD结构域包含分子5(NLRC5)在细胞中的表达;用脂质体分别转染pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-525-5p mimics、anti-miR-525-5p、pcDNA-NLRC5、si-NLRC5至H/RH9c2细胞;或共转染pcDNA-TUG1和miR-525-5pmimics、 miR-525-5pmimics和pcDNA-NLRC5至H/R H9c2细胞;双荧光素酶报告基因检测细胞的荧光活性。流式细胞术检测细胞焦亡率;Western blot检测细胞自噬标志基因自噬相关基因(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(LC3),焦亡相关基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-1)的蛋白表达。结果与H9c2细胞相比,H/R H9c2细胞中TUG1、NLRC5表达显著升高,miR-525-5p表达显著降低(P0.05)。TUG1能够靶向miR-525-5p,miR-525-5p又可靶向NLRC5。过表达TUG1可明显增强H/R对H9c2细胞的焦亡诱导和自噬抑制作用,并上调NLRP3、caspase-1,下调Beclin1、LC3。回复miR-525-5p能够部分逆转TUG1对H/R H9c2细胞的调控,回复NLRC5也可部分逆转miR-525-5p对H/R H9c2细胞的调控作用。结论 LncRNA TUG1促进缺氧复氧心肌细胞焦亡,抑制自噬的机制与靶向miR-525-5p/NLRC5通路相关。     

miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达下调

目的探讨miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达变化,及其对白血病细胞功能的影响。方法用real-time PCR方法检测miR-31-5p在白血病患者及正常人外周血单个核细胞中的表达;用miR-31-5p模拟物转染人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞,通过CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和单核系分化;用荧光报告基因和Western blot方法检测靶基因HuR的表达;用RNAi方法干扰内源性HuR的表达,并检测THP-1细胞的增殖和单核系分化。结果 miR-31-5p在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达显著低于正常对照(P0.05);在THP-1细胞中过表达miR-31-5p可以抑制细胞增殖,并促进细胞向单核方向分化成熟;HuR为miR-31-5p的靶基因;干扰THP-1内源的HuR表达也会对THP-1的增殖和单核分化产生调控作用。结论 miR-31-5p在急性髓系白血病发生中可通过靶向抑制HuR发挥抑癌基因功能。     

lncRNA COLCA1/miR-423-5p/FAM172A分子轴对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)COLCA1在皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响、分子机制.方法 采用qRT-PCR法检测COLCA1在正常皮肤组织和CSCC组...     

lncRNA TDRG1通过调节miR-101-3p促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)睾丸发育相关基因1(TDRG1)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制是否与微小RNA-1010-3p(miR-101-3p)相互作用有关.方法:收集40对CRC组织及相应的癌旁组织.采用RT-qPCR方法检测TDRG1和miR-101-3p在CRC组...     

牛磺酸上调基因1对肿瘤发生发展的调控作用

<正>基因的失调控(异常表达)是肿瘤发生发展的重要原因(诱因)业已被学术界所公认,而在这一过程中非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)起到了极为重要的调控作用~([1-2])。小RNA(small RNA;包括微小RNA,microRNA,miRNA,miR)和长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)均属于ncRNA~([3-4])。     

增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

背景：目前牙周炎的发生发展机制仍不十分明确,治疗靶点有待探讨。近年研究发现,miR-185-5p在多种疾病中表现出抗炎作用,其在牙周炎中的作用尚不清楚。目的：探讨调节miR-185-5p表达对小鼠实验性牙周炎炎症反应的影响。方法：C57B/6J小鼠24只随机分为正常对照组、牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组,每组6只。除正常对照组外,其余组均构建实验性牙周炎模型。造模4周后,在牙周炎mi R-mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙近远中牙龈乳头注射100μL含0.5 mmol/L miR-185-5p mimics的生理盐水,在牙周炎miR-NC组注射100μL含0.5 mmol/L阴性对照miR-NC的生理盐水,在正常对照组、牙周炎对照组注射等量生理盐水。给药8周后处死小鼠,Micro-CT检测左下颌骨,qRT-PCR检测左下颌牙龈miR-185-5p、MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6基因表达,免疫组织化学染色检测小鼠右下颌牙龈MZB1、磷酸化p65核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达。结果与结论：(1)Micro-CT检测显示,与牙周炎对...     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<...     

妊娠糖尿病患者血清miR-330-3p、lncRNA SNHG17表达水平及临床意义

目的 探究妊娠糖尿病（GDM）患者血清miR-330-3p、长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)表达水平及对不良妊娠结局的预测价值。方法 招募2021年1月至2022年2月西北妇女儿童医院产科产检及分娩的160例GDM孕妇（GDM组）和160例糖耐量试验正常的健康孕妇（对照组）为研究对象。荧光定量PCR反应检测血清miR-330-3p、lncRNA SNHG17表达水平;Pearson法分析lncRNA SNHG17与miR-330-3p及二者与空腹血糖（FBG）等生化指标的相关性;多因素Logistic回归分析GDM孕妇妊娠结局的影响因素;受试者操作特征（ROC）曲线分析lncRNASNHG17、miR-330-3p对GDM孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果 与对照组相比,GDM孕妇血清糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FBG）、OGTT后2 h血糖、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、miR-330-3p水平较高（P<0.05）,HOMA-β、lncRNA SNHG17较低（P<0.05）。GDM孕妇血清miR...     

lncRNA FEZF1-AS1调控miR-363-3p影响LPS诱导的血管内皮细胞活力及凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)FEZF1-AS1调控微小RNA-363-3p(miR-363-3p)影响脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞活力及凋亡的作用机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),分别将pcDNA-NC、pcDNA-FEZF1-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-363-3p、miR-NC及miR-363-3p mimics转染至HUVECs,并给予LPS刺激24 h;采用RT-qPCR检测FEZF1-AS1和miR-363-3p的表达量;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双萤光素酶报告基因实验验证FEZF1-AS1与miR-363-3p的靶向调控作用;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cleaved caspase-3和Ki67的表达量。结果:与control组比较,LPS组FEZF1-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-363-3p的表达水平显著升高(P<0.05);与pcDNA-NC+LPS组比较,pcDNA-FEZF1-AS1+LPS组细胞存活率...     

lncRNA HCG18调节miR-3619-5p/ITGB2轴对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)能否通过调控微小RNA(mi R)-3619-5p/整合素β2(ITGB2)轴参与乳腺癌细胞的迁移和侵袭。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系及人乳腺上皮MCF-10A细胞系，qRT-PCR和Westernblot检测lncRNAHCG18、miR-3619-5p、ITGB2的表达水平；Starbase数据库预测lncRNA HCG18、ITGB2与miR-3619-5p的结合位点；利用转染技术将MCF-7细胞分为Control组、si-NC组、siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组、si-HCG18+miR-3619-5p inhibitor组、miR-NC组、miR-3619-5p mimics组、miR-3619-5p mimics+pcDNA-NC组、miR-3619-5p mimics+ITGB2组，qRT-PCR和Western blot技术检测各组lncRNA HCG18、miR-3619-5p与ITGB2的表达水平，CCK-8、细胞划痕和Transwell实验分别...     

下调lncRNA HEIH负调控miR-214-3p逆转乳腺癌细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HEIH对顺铂(cisplatin,DDP)耐药乳腺癌细胞耐药性的影响及作用机制。方法收集30例乳腺癌患者癌组织和对应的癌旁组织,实时定量聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测组织中lncRNA HEIH和miR-214-3p表达量。体外培养乳腺癌细胞MCF-7及对DDP耐药乳腺癌细胞MCF-7/DDP,qRT-PCR检测细胞中lncRNA HEIH表达量。将MCF-7/DDP细胞分为si-NC组、si-HEIH组、si-HEIH+anti-miR-NC组和si-HEIH+anti-miR-214-3p组,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(B lymphocyte tumor-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(B lymphocyte tumor...     

LncRNA TUG1靶向miR-141-3p影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 检测LncRNA TUG1在甲状腺癌细胞中的表达,初步探讨LncRNA TUG1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 采用qRT-PCR法检测甲状腺癌B-CPAP、TPC-1细胞株中LncRNA TUG1和miR-141-3p的表达水平,应用生物信息学预测lncRNA TUG1和miR-141-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证。将lncRNA TUG1干扰序列转染TPC-1细胞,应用qRT-PCR法检测lncRNA TUG1和miR-141-3p的表达,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力。结果 与正常甲状腺上皮细胞相比,BCPAP、TPC-1中LncRNA TUG1表达水平明显升高（P<0.05）,miR-141-3p表达水平明显下降（P<0.05）,生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA TUG1可以靶向调控miR-141-3p。转染TUG1干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA TUG1的表达,上调miR-141-3p的表达（P<0.05）;沉默lncRNA T...     

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移北大核心CSCD

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。