大豆磷脂对羟自由基引起培养心肌细胞损伤的保护作用

目的　观察大豆磷脂脂质体浓度的累积对羟自由基引起心肌细胞损伤的保护作用。方法　采用FeSO4/Cysteine体系产生羟自由基作用于培养的乳鼠心肌细胞 12h ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)的含量 ,采用MTT法测定心肌细胞存活率和线粒体内的琥珀酸脱氢酶 (SDH)含量。结果　大豆磷脂脂质体可使氧化损伤心肌细胞培养液中的LDH释放明显减少 (P <0 0 1) ,SDH含量明显升高 ,细胞死亡率也明显减少 (P <0 0 1)。结论　大豆磷脂脂质体对外源性羟自由基引起的心肌细胞损伤具有明显的保护作用。     

黄芩苷对羟自由基致培养心肌细胞损伤的保护作用

目的研究中药黄芩苷（baicalin,Bai）对羟自由基致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法原代SD大鼠乳鼠心肌细胞培养,48小时后加入Fe^2＋和半胱氨酸产生羟自由基造成心肌细胞损伤,损伤前30分钟加入不同浓度的黄芩苷作为保护剂。24小时后甲基四唑兰（MTT）法测定心肌细胞活性;试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活力、心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;并应用原位末端标记法（TUNEL）标记细胞后应用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果Fe^2＋和半胱氨酸能明显造成心肌细胞损伤,表现为：细胞活性下降、LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活力下降;流式细胞仪显示细胞凋亡率增高。黄芩苷4．5μmol／L、9μmol／L、18μmol／L对损伤心肌细胞有保护作用,使结果受损程度有所改善,并随浓度增加保护作用加强。结论黄芩苷能减轻羟自由基对心肌细胞的损伤作用,降低羟自由基导致培养心肌细胞损伤的凋亡率。     

镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用

目的 观察镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用。方法 本实验ＦｅＳＯ４／Ｈ２Ｏ２自由基产生体系,观察羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,基上清液中乳酸脱氢酶 （ＬＤＨ）和一醛（ＭＤＡ）含量的变化,以及镁离子对这种作用的影响。结果 （１）羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,其上清液中ＬＤＨ和ＭＤＡ的含量增加。（２）镁离子能减少羟自由基引起的ＬＤＨ和ＭＤＡ含量的增加,且呈一定浓度、时间依赖关系。结论     

卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响

目的　观察卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响 .方法　采用培养的第 2代心肌细胞 ,随机分成 4组 :1正常对照组 :仅用 DMEM培养 ;2羟自由基组 :OH-终浓度为 10 - 4 m ol· L- 1 ;3卡托普利组 :卡托普利终浓度为 10 - 5mol· L- 1 ;4卡托普利 +羟自由基组 :卡托普利10 - 5mol· L- 1 +10 - 4 mol· L- 1 OH- .观察心肌细胞存活率和形态学 ,流式细胞仪双标法检测细胞凋亡率 .结果　 1羟自由基组心肌细胞存活率降低 ,和对照组比较有显著性差异(P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组细胞存活率较羟自由基组高 (P<0 .0 5 ) . 2 Annexin V+/PI- 细胞即凋亡细胞在羟自由基组有较高的发生率 ,明显高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组的细胞凋亡率显著低于羟自由基组 (P <0 .0 5 ) . 3羟自由基组凋亡心肌细胞呈特征性超微结构 .结论　卡托普利能减轻外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡     

羟自由基诱导血管内皮细胞、心肌细胞凋亡与卡托普利的干预作用

越来越多的证据表明 ,细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)与心血管病的发生和发展关系密切。目前 ,国内外对心血管细胞凋亡 (血管内皮细胞、心肌细胞等 )的研究已逐步深入。我院心内科自 1996年起陆续建立羟自由基 (ＨＦＲ)诱导血管内皮细胞凋亡和心肌细胞凋亡的体外实验模型 ,并观察卡托普利的干预作用 ,以期探索血管紧张素转换酶抑制剂 (ＡＣＥＩ)卡托普利对心血管细胞凋亡有否保护作用。在国内尚未见类似报道。本文将我们进行的两项实验研究综合报告如下。1　实验方法1.1　血管内皮细胞凋亡与卡托普利干预的实验方法采用改良的Ｊａｆｆｅ′ｓ…     

自由基在心肌细胞缺氧性DNA损伤和凋亡中的作用

目的　研究自由基在心肌细胞缺氧性DNA损伤和凋亡中的作用。方法　将培养的大鼠心肌细胞随机分成 5组 ,即对照组、缺氧 2 4h组、SOD组、CAT组和SOD +CAT组。然后除对照组外 ,分别加入SOD、CAT或SOD +CAT的各用药组和缺氧2 4h组均缺氧培养 2 4h(其中SOD和CAT的浓度均为 4 0 0 μg/ml) ,终止培养后分别用单细胞微量凝胶电泳检测心肌细胞DNA的损伤和TUNEL标记检测细胞凋亡。结果　缺氧 2 4h后 ,各组心肌细胞核DNA明显受损 ,细胞发生凋亡。与单纯缺氧 2 4h组相比 ,SOD组、CAT组和SOD +CAT组的DNA损伤程度明显减轻 ,受损的细胞数明显减少 (P <0 .0 5 ) ,其中SOD +CAT组更显著(P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡的数量也明显减少 (P <0 .0 5 )。结论　自由基参与了心肌细胞缺氧过程中细胞核DNA的断裂损伤和细胞凋亡 ,使用自由基清除剂能减轻其缺氧损伤 ,对心肌细胞有保护作用     

镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用

目的　观察镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用。方法　本实验利用FeSO4/ H2O2 自由基产生体系,观察羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,其上清液中乳酸脱氢酶(LDH) 和丙二醛( MDA) 含量的变化,以及镁离子对这种作用的影响。结果　(1) 羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,其上清液中LDH 和MDA 的含量增加。(2) 镁离子能减少羟自由基引起的LDH 和MDA 含量的增加,且呈一定浓度、时间依赖关系。结论　羟自由基使培养乳鼠心肌细胞LDH 漏出增加及脂质过氧化终产物MDA 含量增加,镁离子对这一损伤有保护作用     

卡托普利对羟自由基致心肌损伤的保护作用

为观察卡托普利对羟自由基致心肌损伤的治疗效果，采用外源性羟自由基灌注复制再灌注家兔心肌损伤模型，实验分为正常对照组，羟自由基对照组及卡托普利组，观察３组心肌力学指标，血清脂质过氧化分解产物等的变化。羟自由基对照组在自由基灌注后左室等容收缩期压力最大上升速率，右室等容舒张期压力最大下降速率迅速下降，血清丙二醛显著长高及心肌组织中谷胱甘肽含量明显减少；而卡托普利纯组上述指标均无明显变化。     

吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立

目的：探讨吡柔比星（THP）对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法：常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度（1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^-4 mol·L^-1、1×10^-3 mol·L^-1和1 μmol·L^-1、3 μmol·L^-1、5 μmol·L^-1、7 μmol·L^-1、9 μmol·L^-1和10 μmol·L^-1 THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、12、24、36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧（ROS）探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛（MDA）水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）和活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,1、5和9μmol·L^-1 THP组H9C2细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高（P<0.05或P<0.01）,SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平降低（P<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论：THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5 μmol·L^-1是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。     

银杏叶提取物对羟自由基所致DNA损伤保护作用的研究

目的:研究银杏叶提取物(Ginkgo-bilobaExtract,EGb)对羟自由基(·OH)所致DNA氧化损伤的保护作用。方法:采用生物化学发光技术,应用硫酸铜-邻菲罗啉-抗坏血酸-过氧化氢(CuSO4-phen-VitC-H2O2)化学发光体系中测定EGb清除·OH的数据,并通过发光抑制率分析EGb对DNA氧化损伤的保护作用。结果:EGb能显著降低发光体系的发光,而且EGb浓度愈大,发光抑制率愈大。结论:EGb具有较强的抗氧化作用,能保护DNA免受·OH的氧化损伤。     

人参总皂甙对培养乳鼠心肌细胞的组织化学的影响

本文探讨了人参总皂甙对缺氧缺糖培养的乳鼠心肌细胞的组织化学影响。将Wistar系大白鼠乳鼠心肌原代培养4～6天,取生长良好的培养瓶共40瓶,将其分为4组:对照组、缺氧缺糖组、缺氧缺糖组滴入0.35mg人参总皂甙组和糖原对照及酶对照组。4个组都在37℃恒温培养箱里培养60分钟,取出盖玻片进行PAS反应并显示SDH活性。结果加药组PAS反应呈强阳性,SDH活性增强。总之,人参总皂甙对缺氧缺糖心肌具有良好的供能、保护作用。     

黄芪注射液对培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的保护作用

目的研究黄芪注射液抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用。方法采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为六组:A正常对照组,B缺氧组,C黄芪20组,D黄芪100组,E黄芪200组,F黄芪400组。黄芪各组缺氧过程中给予不同浓度黄芪,缺氧4 h,复氧2 h。比较缺氧复氧前后心肌细胞存活率,培养液中心肌酶含量。结果各组缺氧前后谷草转氨酶(GOT)均有差异。复氧后2 h,B、C、D组培养液中心肌酶含量均有不同程度升高(P<0.05)。E、F组GOT值较基础值降低(P<0.05)。与正常组比较,各组细胞经过缺氧复氧后,存活数均有不同程度下降(P<0.01)。与缺氧复氧组比较,加入黄芪保护的黄芪20,黄芪100,黄芪200组均优于单纯缺氧复氧组。黄芪200组存活率最高(P<0.01)。结论黄芪能够减轻培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤。     

Vit C,Trolox对阿霉素损伤鼠培养心肌细胞的作用

在原代培养的大鼠心肌细胞受阿霉素损伤的模型上,观察到合适浓度的维生素C(Vit C)能显著减少受损心肌细胞乳酸脱氢酶释放、减少细胞内丙二醛的形成,并改善细胞超微结构的变化,显示其具有抑制脂质过氧化,保护心肌细胞的作用.该作用与Vit c浓度密切相关,高浓度时反而加重细胞损伤.维生素E的水溶性类似物Trelox则没有上述作用。     

辅酶Q10及山莨菪碱对培养心肌细胞缺氧复氧的保护作用

目的：探讨辅酶Ｑ１０ 及山莨菪碱对培养心肌细胞缺氧复氧的作用机制。方法：观察培养液中ＬＤＨ 和ＣＰＫ－ＭＢ含量,细胞内ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ的活性变化。结果：辅酶Ｑ１０ 和山莨菪碱可减少氧自由基产生。结论：氧自由基是造成心肌细胞缺氧复氧损伤的重要原因;辅酶Ｑ１０和山莨菪碱能保护心肌细胞内ＳＯＤ及ＧＳＨ－ＰＸ的活性     

心复康对培养乳鼠心肌细胞心肌酶及膜流动性的实验研究

采用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,通过暂时停止供应心肌细胞生存必需的糖和氧 ,造成心肌细胞缺血样损伤。测定细胞培养液中心肌酶的活性 ,并用荧光分光光度计偏振法测定心肌细胞膜流动性 (MFU) ,观察中药心复康对心肌细胞缺血性损伤的影响。结果显示心复康明显降低培养液中心肌酶活性 ,增强心肌细胞膜流动性 ,研究表明心复康对心肌细胞的缺血性损伤具有保护作用     

硒对培养的心肌细胞抗老化作用的初探

本实验依据对心肌细胞的形态学观察,证明硒对人工培养的心肌细胞有抗老化作用。可以延缓或抵抗由于人工培养的心肌细胞所发生的退行性改变。     

缺氧、缺糖对培养心肌细胞形态和α-羟丁酸脱氢酶活性的影响

本实验在缺糖伴或不伴缺氧条件下,均可引起早期培养心肌细胞出现明显细胞损伤性反应,表现为细胞退行性变、细胞自律性搏动减慢以及心肌细胞释放α-羟丁酸脱氢酶增加。培养液中α-羟丁酸脱氢酶活性增加,是早期培养的心肌细胞损伤性反应敏感而稳定的指标,它为监护心肌缺血的动态变化和疗效观察提供了一种有价值的实验依据。     

MLC2—糜酶融合基因在培养乳鼠心肌细胞中的表达

采用不同程度删除启动子序列的糜酶结构基因和肌球蛋白轻链-2基因（MLC2）启动子相拼接，构建了系列融合基因表达克隆。接改进的磷酸钙介导细胞转染法转染分离培养的Wistar乳鼠心肌细胞，提取细胞总RNA。经Dot-blot杂交和光密度扫描分析显示，融合基因中的MLC2启动子能有效地调控糜酶基因在心肌细胞中转录表达，糜酶结构基因ATG前含有6bP糜酶自身启动子序列的融合基因M88克隆表达水平最高，随着ATG前糜酶启动子序列的增加，融合基因在心肌细胞中的表达水平逐渐降低。