白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72 h后各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测每组细胞上清液中KGF蛋白浓度的变化.提取各组细胞RNA,用聚合酶链反应(PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化.结果 ELISA及PCR结果显示:加入IL-1β的正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞培养上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均升高,同时KGF mRNA表达量较对照组有较明显的上升趋势.正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞加DEX的上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均降低,KGFmRNA表达量较对照组则有降低的趋势.结论 IL-1β对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌及表达KGF有促进作用;而DEX对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌和表达KGF有抑制作用.     

白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松对成纤维细胞增殖的影响

目的：检测白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松（DEX）对体外培养的口腔正常黏膜与口腔扁平苔藓（OLP）黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：应用MTT法检测3种浓度梯度的IL-1β和DEX对体外培养的14例OLP黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响。结果：MTT测定结果显示,IL-1β对OLP黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖均有促进作用,且随浓度增加促进作用增强;相反,DEX却抑制两种成纤维细胞的增殖,浓度越高抑制作用越强。结论：白细胞介素-1β可促进成纤维细胞的增殖,地塞米松则抑制成纤维细胞的增殖。     

甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的初步研究

目的：观察甘草甜素对经脂多糖刺激后体外培养的人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的作用。方法：取正常人颊黏膜,组织块法体外培养颊黏膜成纤维细胞,加入不同浓度的甘草甜素,培养24h、48h、72h后,经MTT法检测每孔的光密度值（OD）。用脂多糖（LPS）对细胞进行干预,用来模拟口腔扁平苔藓（0LP）的炎症状态。以第4代成纤维细胞为对照组、加入脂多糖为炎症组、同时加入脂多糖和甘草甜素为实验组,用ELISA法分别检测三组白细胞介素-6（IL-6）的浓度。结果：MTT法测出甘草甜素在一定范围内浓度越高、时间越长,抑制细胞的增殖作用就越强;ELISA法检测出炎症组较对照组上清液中IL-6浓度明显升高,实验组较炎症组上清液中IL-6浓度明显降低。结论：甘草甜素可明显抑制由脂多糖刺激的人颊黏膜成纤维细胞分泌IL-6。甘草甜素在治疗OLP的炎症反应中有重要作用。     

IL-1β对体外培养人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-β,IL-1β)对体外培养的人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metallproteinase-I,MMP-2)的影响。方法:利用免疫组化和明胶酶谱法,检测正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中MMP-2的表达、分泌和活性。结果:MMP-2在正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中均有表达,后者表达明显强于前者。明胶酶谱分析显示,与对照组相比,经IL-1β刺激的牙髓成纤维细胞中MMP-2的水平在48 h后持续显著升高。结论:IL-1β可能参与调节牙髓成纤维细胞合成和分泌MMP-2,从而促进牙髓炎症的发生。     

IP-10和IL-6在口腔扁平苔藓中表达的研究

目的:检测正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓(OLP)黏膜的上皮和固有层结缔组织中干扰素诱导蛋白10(IP-10)、细胞因子白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,探讨其在OLP中的作用。方法:应用荧光实时定量RT-PCR技术检测10例OLP黏膜和6例正常口腔黏膜的上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达量。结果:OLP黏膜上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达均较正常口腔黏膜明显升高(P<0.05),但IP-10、IL-6mRNA的表达量没有明显差异(P>0.05)。结论:OLP组织中趋化因子IP-10、细胞因子IL-6表达量改变可能与其发生发展有一定关系。     

口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞KGF的表达水平检测

目的 检测体外培养的正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞表达和分泌的角质细胞生长因子(KGF)的量。方法 应用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)技术检测体外培养的14例口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白的情况。提取各组细胞RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化。结果 ELISA测定结果显示,扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白量低于正常口腔黏膜,经检验差异有统计学意义(P0.05)。结论 与正常口腔黏膜相比,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白水平降低,而在基因水平上没有变化。     

人口腔黏膜成纤维细胞的原代培养和在聚乳酸羟基乙酸膜上的种植实验

目的探索人口腔黏膜成纤维细胞体外培养,观察其在聚乳酸羟基乙酸(PLGA)膜上生长情况。方法体外分离培养人口腔黏膜成纤维细胞,苏木精-伊红染色,光镜、倒置相差显微镜、扫描电镜(SEM)观察其形态结构、免疫组化Vimentin,鉴定其间叶来源。结果光镜、倒置相差显微镜、SEM观察显示培养的细胞形态结构符合成纤维细胞特征,免疫组化结果显示Vimentin染色阳性。结论成功培养人口腔黏膜成纤维细胞,且其在PLGA膜上生长良好。     

口腔扁平苔藓病损区白细胞介素12p40和干扰素-γ的表达及意义

目的 探讨白细胞介素12p40(IL-12p40)及干扰素-γ(IFN-γ)在口腔扁平苔藓(OLP)病损形成及发展中的意义.方法 正常口腔黏膜组织11例,OLP组织43例,采用免疫组织化学Envision二步法检测IL-12p40和IFN-γ的表达情况,分析其与OLP患者临床病理特征的关系.结果 1)OLP组IL-12...     

鼠口腔黏膜上皮干细胞的分离培养与鉴定

目的 探索和建立鼠口腔黏膜上皮干细胞体外分离与培养的技术方法。方法 利用纤维结合素-胶原包被的培养瓶快速黏附法分离鼠口腔黏膜上皮干细胞，以鼠成纤维细胞条件培养基和无钙EMEM培养基配．制表皮干细胞培养基进行培养。通过β1整合素和角蛋白15（K15）免疫组化染色对培养细胞进行鉴定。结果 鼠口腔黏膜上皮干细胞呈明显克隆性生长，β1整合素和角蛋白15（K15）免疫组化染色呈强阳性。结论 利用纤维结合素-胶原包被的培养瓶快速黏附法分离鼠口腔黏膜上皮干细胞，用鼠成纤维细胞条件培养基和无钙EMEM培养基配制的表皮干细胞培养基进行培养，可以初步实现对鼠口腔黏膜上皮干细胞体外分离与培养。     

槟榔碱对口腔黏膜肌成纤维细胞分化的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变组织中肌成纤维细胞的来源。方法通过体外口腔黏膜角质形成细胞和成纤维细胞共培养，用免疫组化、反转录聚合酶链反应等方法观察α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果体外培养的口腔黏膜下纤维性变成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的阳性率为（85.80±3.56）％，正常口腔黏膜成纤维细胞中阳性率为（3.82±0.76）％。槟榔碱直接干预成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白的表达与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；角质形成细胞与成纤维细胞共同培养组成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达增强；角质形成细胞经槟榔碱预处理后与成纤维细胞共同培养组α-平滑肌肌动蛋白的表达强于无干预共同培养组。结论口腔黏膜下纤维性变组织中成纤维细胞向肌成纤维细胞分化可能是槟榔成分与角质形成细胞共同作用的结果。     

端粒酶逆转录酶mRNA在OLP和OSCC中的表达

目的：探讨端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA在口腔扁平苔藓（OLP）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达以及在OLP癌变过程中的作用。方法：应用mRNA原位杂交法对正常口腔黏膜12例,非糜烂型OLP20例,糜烂型OLP20例及OSCC20例,进行hTERTmRNA的检测。结果：正常口腔黏膜、非糜烂型OLP、糜烂型OLP及OSCC中hTERTmRNA阳性表达率分别为8.33％（1／12）、15％（3／20）、45％（9／20）、80％（16／20）。其中,除正常口腔黏膜与非糜烂型OLP中hTERT mRNA阳性率无显著性差异外,其余各组间均有显著性差异（P〈0.05）。而且,正常口腔黏膜与非糜烂型OLP的hTERT mRNA染色强度明显低于糜烂型OLP及OSCC（P〈0.05）。结论：hTERT mRNA可能在糜烂型OLP的癌变过程起着一定的作用。     

TL1A和IDO在口腔扁平苔藓患者外周血中的表达研究

目的 研究肿瘤坏死因子样配体1A（tumor necrosis factor-like ligand 1A,TL1A）和吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达及其是否存在相关性。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测30例OLP患者和30例健康人外周血单个核细胞中TL1A、IDO的基因表达水平。结果 在OLP患者中,TL1A、IDO的基因表达水平均高于对照组（P＜0.05）,结果经2-ΔΔCT转换后,OLP组TL1A、IDO mRNA表达水平分别是健康对照组的1.7872、2.0763倍。TL1A、IDO mRNA的表达水平无明显相关性（P>0.05）。结论 TL1A、IDO mRNA在OLP的发病中起了一定作用,两者的作用机制有待于进一步研究。     

口腔扁平苔藓患者Th1／Th2失衡表达的研究

目的：观察口腔扁平苔藓（oral liclaen planus,OLP）患者外周血中Th1、Th2型细胞转录因子T-het和GATA-3以及Thl、Th2型细胞因子的表达,进一步探索OLP的发病机制。方法：通过密度梯度离心法分离20例充血糜烂型,16例光滑型OLP病例和19例正常对照组人群的外周血单个核细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组外周血单个核细胞中T—betmRNA和GATA-3 mRNA的表达;ELISA法检测各组血清中干扰素-γ（interferon gamma,IFN-1）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的表达。结果：充血糜烂型和光滑型OLP患者中T—betmRNA、IFN-γ的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;而充血糜烂型和光滑型OEP患者中GATA-3 mRNA、IL-4的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。T—bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达在充血糜烂型及光滑型OLP患者组间的差异有统计学意义（P〈0．01）;而IFN-γ和IL-4的表达在充血糜烂型及光滑型OLP患者组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Th1／Th2失衡表达与OLP发病机制密切相关,为临床治疗OLP提供参考。     

少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白在口腔扁平苔藓组织中的表达

目的：探讨少突胶质细胞谱系基因一髓鞘碱性蛋白（genes of the oligodendrocyte lineage—myelin basic protein,Golli—MBP）在口腔扁平苔藓（orallichenplanus,OLP）组织中的表达及其与OLP发病的关系。方法：采用实时荧光定量PCR的方法,检测39例OLP患者病损组织和16例健康口腔黏膜组织中Golli—MBP的基因表达水平,采用免疫组化法检测38例OLP及20例正常口腔黏膜组织石蜡标本中Golli—MBP的表达情况。结果：Golli一删即mRNA在OLP组中的表达显著高于正常对照组（P〈0．001）。OLP患者石蜡标本中Golli—MBP的表达水平亦显著高于对照组（P〈0．001）;固有层淋巴细胞中Golli—MBP的表达高于对照组（P〈0．05）;上皮细胞中Golli—MBP的表达在OLP患者及对照组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Golli—MBP在OLP组织中高表达,可能在OLP的发病机制中起一定作用。     

双氯芬酸钠对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞IL-1β和TNF-α表达的影响研究

目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

端粒酶逆转录酶mRNA在口腔扁平苔藓中的表达

目的 探讨端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA在口腔扁平苔藓(OLP)中的表达及临床意义。方法 采用原位杂交(ISH)的方法,检测了20例糜烂型扁平苔藓(erosive oral lichen planus,eOLP)、20例非糜烂型扁平苔藓(non-erosive oral lichen planus,neOLP)和12例正常口腔黏膜TERT mRNA的表达。结果 糜烂型OLP的TERT mRNA阳性率明显高于非糜烂型OLP的TERT mRNA阳性率(P<0.05)。糜烂型OLP与非糜烂型OLP染色强度相比有统计学意义(P<0.05)。结论 糜烂型OLP的上皮细胞可能比非糜烂型OLP的上皮细胞处于更高的增殖状态。