HIV-1B/C重组病毒感染者Gag特异性T淋巴细胞免疫应答的研究

目的 研究中国主要流行的HIV-1 B/C重组毒株感染者Gag特异性T淋巴细胞反应特征.方法 本研究以10例感染时间＜1年和25例感染时间＞3年未接受抗病毒治疗的HIV-1 B/C重组毒株感染者为研究对象,以10例HIV-1阴性健康人作为对照,用Elispot方法检测其针对HIV-1B/C同义B Gag重叠多肽产生γ干扰素的特异性T淋巴细胞反应.结果 8例(8/10)感染时间＜1年的HIV-1 B/C重组毒株感染者产生Gag特异性分泌γ干扰素的T淋巴细胞反应,主要识别散在分布的五条多肽;17例(68％)感染时间＞3年的感染者产生反应,主要识别p17区域内的一条和p24区域内六条多肽.感染时间＞3年组产生IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应强度与病毒载量呈明显正相关(P =0.0318,r=0.519),感染时间＜1年的感染者反应强度明显高于感染时间＞3年的感染者(P=0.021).健康人对照组无阳性反应.结论 HIV-1 B/C重组病毒感染者在疾病进程不同阶段识别Gag的不同区域.     

中国HIV-1 B/C重组毒株不同阶段感染者多聚酶蛋白特异性T淋巴细胞反应的研究

目的 研究中国主要流行的HIV-1 B/C重组毒株不同时期感染者多聚酶蛋白(Pol)特异性T淋巴细胞反应特征并确定主要识别的免疫优势区域.方法 本研究以11例感染时间<18个月和25例感染时间>3年的HIV-1 B/C重组毒株感染者为研究对象,以10例HIV-1阴性健康人作为对照,应用酶联免疫斑点检测技术综合测定了针对覆盖HIV-1 pol基因的249条重叠多肽产生IFN-γ的特异性T淋巴细胞免疫反应.结果 感染时间<18个月感染者中有8(72.73%)名检测到了分泌IUN-γ的HIV-1特异性T淋巴细胞免疫反应,主要识别位于逆转录酶区、氨基酸位置为Pol 481～631内的Pol5581、Pol5582、Pol5587、Pol5609、Pol5610和Pol5615六条多肽,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应广度与外周血CD4+T细胞数呈现明显负相关(P=0.0212,r=-0.762);感染时间>3年感染者中有15(60%)名检测到了分泌IFN-γ的HIV-1特异性T淋巴细胞免疫反应,主要识别位于逆转录酶区、氨基酸位置为Pol241～295内的Pol5521、Pol5525、Pol5526、Pol5531四条多肽和Pol 708～722内的Pol5638多肽,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应强度与病毒载量呈现明显正相关(P=0.006 95,r=0.660);健康人对照组无阳性反应.结论 中国HIV-1 B/C重组毒株不同阶段感染者主要识别多聚酶蛋白的不同区域.     

中国HIV-1 C/B'重组毒株和B'毒株感染者Nef特异性T细胞免疫应答的研究

目的 研究中国主要流行的HIV-1 C/B'重组毒株和B'亚型毒株感染者Nef特异性T细胞反应特征,确定两种亚型感染者共同识别的免疫优势区.方法 本研究以59名HIV-1 C/B'重组毒株、27名B'亚型毒株感染者为研究对象,用ELISPOT检测针对HIV-1型C/B'Nef重叠多肽产生IFN-γ的特异性T细胞反应.结果 44例(74.58%)HIV-1 C/B'重组毒株感染者产生Nef特异性T细胞反应,主要识别EVA7081.1、5、6、7、43、44、45、47、48、49这10条多肽,氨基酸序列为Nef63～115和117～139的区域.20例(74.07%)的HIV-1 B'毒株感染者产生Nef特异性T细胞反应,主要识别EVA7081.1、2、43、49这4条多肽,氨基酸序列为Nef 63～77和87～119的区域.两种亚型感染者特异性T细胞反应的强度和广度与病毒载量和CIM细胞数不相关.结论 中国HIV-1 C/B'重组毒株和B'亚型毒株感染者共同识别氨基酸序列为Nef63～77和87～115的免疫优势区,提示此区域可用于疫苗的设计.     

HIV-1蛋白诱导T细胞产生IFN-γ反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响

目的 探讨HIV-1特异性T细胞反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响.方法 通过合成重叠肽技术及ELISPOT技术,采用队列研究方法对37名HIV-1感染者的病毒特异性T细胞免疫反应进行分析.结果 83.78%(31/37)的HIV-1感染者对1个或多个合成肽反应(反应强度大于50 SFU/106 PBMCs).HIV-1B型病毒不同蛋白均可激发HIV-1感染者的特异性T细胞反应,其中HIV-1 Gag蛋白被识别的频率最高,81%的HIV-1感染者识别HIV-1 Gag而且HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度最高,相对强度达到28.25%,明显高于其他蛋白,差异具有统计学意义(F=17.969,P<0.001);重叠肽诱导T细胞分泌IFN-γ反应频率、反应强度在HIV-1感染无症状期和艾滋病期无明显区别,但是HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度在无症状期明显高于艾滋病期.结论 HIV-1B型病毒不同基因编码蛋白激发T细胞分泌IFN-γ反应小同,其中HIV-1 Gag蛋白特异性T细胞在控制病情进展方面发挥了重要作用.     

HIV/AIDS患者特异性细胞毒性T细胞功能的研究

目的 了解中国HIV／AIDS患者HIV特异性细胞毒性T细胞(CTL)功能。方法 将覆盖HIV-1 P15、P17和P24 Gag全长的94个重叠多肽作为抗原，用IFN-γ ELISPOT方法检测HIV／AIDS患者HIV-1特异性CTL功能。结果 HIV-1抗原多肽P17-15、P17-16、P24-7、P17-8，P24-28最易被HIV／AIDS患者特异性CTL识别。HIV感染者识别HIV-1多肽的数量和强度均高于AIDS患者。结论 我国HTV／AIDS患者体内存在识别不同HIV-1 Gag多肽的特异性CTL，且HIV特异性CTL功能与疾病进展相关。     

不同疾病进展阶段的HIV-1 B亚型毒株感染者对Gag、Nef肽段库的特异性CTL应答比例的比较和分析

目的 对不同疾病进展阶段的HIV-1B亚型毒株感染者Gag、Nef特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic Tlymphocyte，CTL）应答进行研究，比较和分析不同患者群对不同肽段库应答比例的异同，探讨针对不同肽段库的特异性CTL应答在延缓病程进展中所起的作用。方法 选取56例未经抗病毒治疗的中国HIV-1B亚型毒株感染者。其中包括长期无进展者（long-term nonprogressors，LTNP）、HIV感染早中期患者和AIDS患者3组不同疾病进展阶段患者。以覆盖HIV-1 Gag全长和部分Nef的14个肽段库为刺激原，应用IFN-γ ELISPOT法测定3组患者的特异性CTL应答，并比较3组患者对不同肽段库的应答比例。结果 3组不同进展阶段患者对14个肽段库总体的特异性CTL应答的平均反应宽度和强度间差异均无统计学意义。3组患者对14个肽段库的识别模式可分为两种类型：（1）对Gag-p24-1、Gag-p24-5、Gag-p 2/7/1/6-1以及Gag-p2／7／1／6-3这4个肽段库的识别比例高低与病情进展情况相平行。3组患者对4个肽段库整体的识别比例间差异有统计学意义（P=0．041）；（2）对其他10个肽段库的识别与病情进展不平行，在HTV感染早中期患者中比例高，而在LTNP中低。结论 针对不同肽段库的CTL应答可能在控制病毒复制过程中发挥不同的作用，对疾病进展的控制可能需要针对多个抗原表位的有效CTL应答。     

酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究

目的评价毕赤酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在Balb／c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb／c小鼠，检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1／IgG2a，同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应，其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应，而且重组痘苗初始免疫一蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CrL反应。结论酵母表达的HIV-1 Gag蛋白具有良好的免疫原性，在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用，能刺激动物产生更强的HIV-1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV-1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。     

宁夏回族自治区HIV-1感染者抗病毒治疗前免疫学与病毒学指标调查

目的了解该地区部分HIV．1感染者抗病毒治疗前CD4^＋T淋巴细胞、病毒载量分布及耐药性毒株存在情况。方法利用流式细胞技术对CD4^＋T淋巴细胞计数，使用NASBA方法测定病毒载量，利用lit-PCR获得目的基因序列，登陆http：／／hivdb．stanford．edu分析耐药突变位点。结果该地区感染人群中66．66％的患者CD4^＋T淋巴细胞数〉350个／mm^3，患者病毒载量对数平均值为3．784±1．048，检测样本中有2例出现耐药性。结论该地区HIV-1感染者目前多为无症状期，但病毒拷贝数较高，耐药性毒株流行水平较低。应在该地区加强抗病毒治疗的宣传。     

小鼠内源性逆转录病毒Gag抗原在胰岛的表达及单克隆抗体的制备

目的 探究一种新发现的与1型糖尿病(T1D)相关的T细胞抗原[内源性逆转录病毒(ERV)的组特异性抗原(Gag)]与T1D发病的关系。方法 首先对一个从非肥胖糖尿病(NOD)模型小鼠胰岛获得的Gag抗原(Gag 194)的氨基酸序列进行分析[多肽位置：193-210(VSRLRGRRDPPAVDSTTS)],确定Gag 194多肽作为靶点，制备单抗；然后，再利用ELISA和Western blot检测单抗的特异性；最后，在免疫组织化学实验中检测不同年龄的T1D敏感的NOD小鼠与抗性的C57BL/6小鼠胰腺Gag抗原表达的差异性。结果 成功制备了5株(1F4C8、2D4C6、3C3B9、4D6B3、5F9E4)IgG2b亚型的小鼠ERV Gag单抗；5株单抗的敏感性及特异性具有差异；其中，生物素化后的3株单抗(1F4C8、2D4C6、5F9E4)能特异识别NOD小鼠胰腺中表达的ERV Gag抗原且该抗原的表达可在3周龄的NOD小鼠检测到，Gag抗原多表达在NOD小鼠胰岛β细胞区域内，而非淋巴细胞浸润的区域。此外，C57BL/6小鼠的胰腺Gag抗原的表达为阴性。结论 在NOD小鼠幼年时期E...     

中国人群HIV-1B亚型Nef蛋白特异性细胞毒性T细胞反应的研究

目的探讨中国人群HIV-1B亚型Nef蛋白特异性细胞毒性T细胞(CTL)反应特征及其与病毒载量以及CD4细胞数量间的关系。方法选取33例HIV-1B亚型感染者。用合成的HIV-1B亚型Nef全基因序列肽库作为抗原,ELISPOT方法检测HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CTL反应,同时测定病毒载量及CD4细胞数量。结果70％的感染者对Nef产生特异性CTL反应,单一肽段能够被识别的频率不超过40％,应答强度为(1102±2136)SFC(斑点形成细胞数)／106 PBMC。HIV-1B亚型Nef特异性CTL应答的强度和频率之间没有显著的相关性。HIV-1 Neff特异性CTL反应强度与病毒载量间存在显著负相关,与CD4细胞数量间存在显著正相关。结论初步确定了Nef蛋白CTL应答的优势区域。这些区域主要集中在一些高度保守的氨基酸序列。提示HIV-1B亚型Nef特异性CTL应答在疾病进展中对机体具有保护性作用。     

Cytotoxic T lymphocyte responses to vaccinia virus antigens but not HIV-1 subtype E envelope protein seen in HIV-1 seronegative Thais

The HIV-1 prime boost phase I/II vaccine trial using a recombinant canarypox vector, vCP1521, containing subtype E env (gp120), and subtype B env (gp41), gag and protease has started in Thailand. We have demonstrated that although 4 from 15 human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) seronegative Individuals showed cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses to vaccinia virus antigens, none of them showed specific CTL responses to subtype E Env after in vitro stimulation. This preliminary study suggests that specific CTL responses to subtype E envelope detected in HIV-1 seronegative Individuals after vaccination should be considered as specific responses to the immunization.     

北京市性传播HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析

目的 了解北京市性传播HIV-1感染者流行毒株亚型特点和流行规律.方法 随机采集北京市2008年新确证性传播HIV感染者的抗凝全血标本100份,分离血浆,提取病毒RNA,用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 系统进化分析确定北京市性传播HIV-1感染者流行毒株存在8个亚型或流行重组型,分别为B亚型22份,B'亚型8份,C亚型1份,CRF01_AE 38份,CRF02_AG 2份,CRF07 BC 9份,CRF08_BC 3份,疑似C/CRF01_AE重组型1份.结论 CRF01_AE和B亚型分别占45.2%和26.2%,为性传播感染者主要的亚型,应该加强我市HIV-1亚型流行情况的监测.

Abstract：

Objective To investigate the subtype distribution and sequence characteristics of HIV-1 strains prevalent among sexual infectors in Beijing. Methods We collected the blood samples from 100HIV sexual infectors in Beijing during 2008 and separated plasma specimens. RNA was extracted from the plasma and the gag gene was amplified by RT-PCR and nest-PCR. The PCR products were sequenced directly and phylogenetic analyses of gag gene was performed using the MEGA4 software. Results Among 100 HIV-1 plasma samples,84 gag gene fragments were amplified and analyzed. Eight HIV subtypes including B(22 strains), B'(8 strains),C( 1 strain) ,CRF01_AE (38 strains) ,CRF02_AG (2 strains) ,CRF07_BC(9 strains) ,CRF08_BC(3 strains) and C/CRF01_AE recombinant like strain( 1 strain) were identified circulating in Beijing. Conclusion CRF01 _AE and subtype B were predominant in Beijing account for 45.2% and 26.2% and the surveillance of HIV gene variation should be paid more attention.     

Molecular evolution of human immunodeficiency virus type 1 subtype A in Senegal: 1988-1997

OBJECTIVE: Few studies have been able to track the genetic diversity of HIV-1 viruses in human populations over time. We analyzed the molecular evolution of subtype A over a 10-year period, in a cohort of female sex workers with a known time of infection. STUDY DESIGN/METHODS: We amplified and sequenced the C2-V3 region of the surface envelope glycoprotein from 73 HIV-1-infected women, infected between 1987-1997. RESULTS: Fifty-one patients were infected by subtype A viruses. The viruses demonstrated significant diversification (p < 0.001) with mean genetic distance increasing from 8.6% in 1989 to 15.9% in 1997. The slope of the fitted curve suggested a rate of diversification of 0.7% per year. The majority of subtype A viruses clustered with HIV-1 subtype A/G recombinant form (IbNG). CONCLUSION: The genetic diversity of HIV-1 subtype A infections doubled over the first 10 years of this high risk population's epidemic, suggesting that implementation of vaccines early in the epidemic may have a higher likelihood of success based on levels of genetic diversity. The A/G recombinant form (IbNG) has taken epidemic proportions in West Africa. This is of particular importance in understanding the epidemiology of HIV-1 subtypes in Africa and to further dissect the potential phenotypic and biological characteristics of these viruses.     

传染性单核细胞增多症患儿免疫功能变化及其临床意义

目的研究传染性单核细胞增多症（IM）患儿血清中的免疫球蛋白和外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。方法采用透射比浊法和APAAP法检测了36例生长发育正常的IM患儿血清Ig和T淋巴细胞亚群。结果IgG、IgA、CD4、CD4/CD8比值明显低于对照组（P〈0.01）,CD3、CD8明显高于对照组（P〈0.01）,IgM与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论EB病毒感染后引起机体体液和细胞免疫功能异常是IM发病的关键,为临床IM患儿的免疫治疗提供了理论依据。     

Enhanced immune responses after DNA vaccination with combined envelope genes from different HIV-1 subtypes

In a multisubtype approach to HIV-1 vaccination, mice were immunized with HIV-1 envelope gp160 genes from subtypes A, B, and C. Subsequently the mice were challenged with syngeneic primary splenocytes infected with a HIV-1/MuLV pseudovirus carrying a subtype B genome. HIV-specific immune responses and protection were strongest in the group of animals immunized with a combination of subtype A, B, and C specific gp160 genes as compared to subtype B only. Immunization with the combination of the cross-reactive subtypes A and C envelope genes induced HIV-specific immune responses but did not result in significant protection to challenge with subtype B infected cells. From this we conclude that immunization with the envelope genes from several HIV-1 subtypes may indeed enhance immune responses. This study shows that by using a mix of subtype envelope genes, an enhanced protective immunity can be obtained experimentally, potentially also in humans.     

慢性乙型肝炎患者HBV C、B基因型与特异性细胞毒性T淋巴细胞表面PD-1表达的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者HBV C、B基因型与HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表面程序性死亡受体-1（PD-1）表达的关系和意义.方法 共研究CHB患者71例,人白细胞抗原（HLA）-A2阳性,HBV DNA ＞103拷贝/ml,其中C基因型34例（47.89％）,B基因型36例（50.70％）.比较C、B基因型感染者外周血HBV特异性CTL表面PD-1的表达水平、HBV特异性CTL水平、HBV DNA水平、ALT和TBil的水平.结果 CHB C基因型感染者的HBV特异性CTL表面PD-1的表达水平（37.30±3.05％）高于B基因型感染者（26.19±3.06％）,t=15.47,P＜0.001,HBV特异性CTL水平（0.25±0.03％）低于B基因型感染者（0.45±0.13％）,t=21.54,P＜0.001,HBV DNA水平（6.75±0.77lo910拷贝/ml）高于B基因型感染者（4.96±1.12 log10拷贝/ml）,t=7.93,P＜0.001,ALT水平（487.39±87.36IU/L）高于B基因型感染者（235.25±90.91IU/L）,t=12.32,P＜0.001,TBil水平（49.73±6.45）高于B基因型感染者（28.48±5.89％）,t=9.01,P＜0.001.结论 CHB C基因型感染者外周血HBV特异性CTL表面PD-1表达水平高于B基因型感染者,导致C基因型感染者HBV特异性CTL水平低于B基因型感染者,HBV DNA水平高于B基因型感染者,因此,肝功能损害比B基因型感染者重.