表皮生长因子诱导糖尿病难愈性创面成纤维细胞增殖的对照观察

目的：探讨表皮生长因子对糖尿病难愈性创面成纤维细胞增殖的影响。方法：选择2004-01／2005-12广西医科大学第一附属医院烧伤整形康复中心住院糖尿病足患者5例（糖尿病组）。平均年龄72岁；病程14年，经严格内科及换药治疗创面超过8周仍不愈合。另选同期健康志愿者7人（对照组），平均年龄74岁。实验在广西医科大学实验中心完成。将糖尿病难愈性创面及对正常对照组成纤维细胞于Dulbecco＇s改良的Eagle＇s培养基中培养，待细胞培养成对数生长期，分别加入浓度为0．1，0．25，0．5，0．75，1，5，10μg／L的表皮生长因子于Dulbecco＇s改良的Eagle＇s培养基中培养24h，与未加入表皮生长因子的成纤维细胞（空白对照组）进行比较，分别改用加有不同浓度表皮生长因子的培养液继续培养，以四甲基偶氮唑盐法测定成纤维细胞增殖活性，各孔细胞在490nm处的光吸收值（A值）越大表示细胞增殖越强。结果：在不同浓度的表皮生长因子刺激下，两组成纤维细胞的增殖活动均较未加入表皮生长因子的空白对照组有明显提高，差异具有显著性意义（P〈0．05）；糖尿病组最大吸光值为0．35&;#177;0．13，表皮生长因子刺激的最适浓度为0．5μg／L，对照组最大吸光值为0．58&;#177;0．07，表皮生长因子刺激的最适浓度为0．25μg／L。两组表皮生长因子刺激的最适浓度及成纤维细胞最大增殖程度差异有显著性意义（P=0．026）。结论：表皮生长因子能促进糖尿病难愈性创面成纤维细胞的增殖．但是糖尿病难愈性创面成纤维细胞对于表皮生长因子的增殖应答被削弱。     

碱性成纤维细胞生长因子影响犬平滑肌细胞增殖的合理剂量

目的:评价碱性成纤维细胞生长因子调控平滑肌细胞增殖的合理剂量,及其对平滑肌细胞在生物可降解材料上生长的影响。方法:实验于2004-05/12在首都医科大学宣武医院外科实验室完成。原代培养的狗主动脉平滑肌细胞,取其第3代作为实验用细胞。①按给予培养的平滑肌细胞的碱性成纤维细胞生长因子的剂量,分为50,25,10,5,3,1μg/L组,正常对照组(普通体积分数为0.2的胎牛血清的DMEM培养液),空白对照组共8组。分别于作用后24h,48h,4d进行四甲基偶氮唑盐检测,测定光吸收值,计算相对增殖率犤相对增殖率=(实验组吸光值-空白对照)/(正常对照组吸光值-空白对照)×100%犦,比较不同剂量碱性成纤维细胞生长因子组之间的平滑肌细胞增殖情况。②用含3μg/L碱性成纤维细胞生长因子的培养液在生物可降解载体上培养平滑肌细胞作为实验组,对照组加入常规培养液,作用后24h,48h,72h进行四甲基偶氮唑盐检测,测定光吸收值,比较两组间平滑肌细胞增殖的情况。结果:①不同剂量碱性成纤维细胞生长因子组之间的平滑肌细胞增殖情况:各组相对增殖率随时间推移而逐渐增加,在低浓度时(<10μg/L)增殖率于48h达到高峰,以后逐渐降低。②碱性成纤维细胞生长因子的培养液在生物可降解载体上培养平滑肌细胞增殖的情况:应用含3μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养液培养的平滑肌细胞在载体上的增殖明显高于对照组(P<0.05)。结论:碱性成纤维细胞生长因子能够明显刺激平滑肌细胞的增殖,其合理剂量为3μg/L,应用3μg/L碱性成纤维细胞生长因子能明显增加平滑肌细胞在载体上的增殖,在构建组织工程化动脉时可以应用碱性成纤维细胞生长因子进行调控。     

碱性成纤维细胞生长因子影响犬平滑肌细胞增殖的合理剂量

目的：评价碱性成纤维细胞生长因子调控平滑肌细胞增殖的合理剂量，及其对平滑肌细胞在生物可降解材料上生长的影响。方法：实验于2004-05／12在首都医科大学宣武医院外科实验室完成。原代培养的狗主动脉平滑肌细胞，取其第3代作为实验用细胞。①按给予培养的平滑肌细胞的碱性成纤维细胞生长因子的剂量，分为50，25，10，5，3，1μg／L组，正常对照组(普通体积分数为0．2的胎牛血清的DMEM培养液)，空白对照组共8组。分别于作用后24h，48h，4d进行四甲基偶氮唑盐检测，测定光吸收值，计算相对增殖率[相对增殖率=(实验组吸光值-空白对照)／(正常对照组吸光值-空白对照)&;#215;100％]，比较不同剂量碱性成纤维细胞生长因子组之间的平滑肌细胞增殖情况。②用含3μg／L碱性成纤维细胞生长因子的培养液在生物可降解载体上培养平滑肌细胞作为实验组，对照组加入常规培养液，作用后24h，48h，72h进行四甲基偶氮唑盐检测，测定光吸收值，比较两组间平滑肌细胞增殖的情况。结果：①不同剂量碱性成纤维细胞生长因子组之间的平滑肌细胞增殖情况：各组相对增殖率随时间推移而逐渐增加，在低浓度时(&;lt;10μg／L)增殖率于48h达到高峰，以后逐渐降低。②碱性成纤维细胞生长因子的培养液在生物可降解载体上培养平滑肌细胞增殖的情况：应用含3μg／L碱性成纤维细胞生长因子培养液培养的平滑肌细胞在载体上的增殖明显高于对照组(P&;lt;0．05)。结论：碱性成纤维细胞生长因子能够明显刺激平滑肌细胞的增殖，其合理剂量为3μg／L，应用3μg／L碱性成纤维细胞生长因子能明显增加平滑肌细胞在载体上的增殖，在构建组织工程化动脉时可以应用碱性成纤维细胞生长因子进行调控。     

血小板衍化生长因子β对体外人牙周膜细胞增殖分化的影响

背景:牙周支持组织破坏及附着丧失是导致失牙的最主要原因,细胞因子能促进牙周组织再生形成新附着。目的:观察血小板衍化生长因子β在人牙周膜成纤维细胞增殖过程中的作用。方法:体外利用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,对传代后细胞进行组织来源鉴定,通过波丝蛋白、角蛋白免疫组化染色进行定性分析,并加入生物因子血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞进行增殖诱导,采用MTT法测定吸光度值。结果与结论:加入质量浓度为10μg/L的血小板衍化生长因子β后,细胞增殖加速,在加入生长因子血小板衍化生长因子β后,实验组的吸光度显著高于对照组,说明血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的增殖具有明显的促进作用。     

血小板衍化生长因子β对体外人牙周膜细胞增殖分化的影响

背景：牙周支持组织破坏及附着丧失是导致失牙的最主要原因,细胞因子能促进牙周组织再生形成新附着。目的：观察血小板衍化生长因子β在人牙周膜成纤维细胞增殖过程中的作用。方法：体外利用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,对传代后细胞进行组织来源鉴定,通过波丝蛋白、角蛋白免疫组化染色进行定性分析,并加入生物因子血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞进行增殖诱导,采用MTT法测定吸光度值。结果与结论：加入质量浓度为10μg/L的血小板衍化生长因子β后,细胞增殖加速,在加入生长因子血小板衍化生长因子β后,实验组的吸光度显著高于对照组,说明血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的增殖具有明显的促进作用。     

EGF和bFGF在创伤修复中的作用和临床应用

重组人表皮生长因子(rhEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)两种重要的细胞因子,可刺激成纤维细胞分泌胶原等细胞外基质,刺激血管内皮细胞形成新生毛细血管,刺激成纤维细胞的分裂增殖,并形成创面处的新生肉芽组织.     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞增殖的影响

背景:肌源性干细胞在体外培养过程中存在纯化、扩增、定向分化等难题,碱性成纤维细胞生长因子作为生物活性因子的一员,因其生物活性的多效性而备受关注.目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞体外增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-04/07在沈阳医学院完成.材料:健康雄性Wister大鼠5只,由沈阳医学院实验动物中心提供.碱性成纤维细胞生长因子为珠海生物制品有限公司产品.方法:无菌条件下取大鼠左前肢肱三头肌,采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.取第2代肌源性干细胞,分别用终浓度为6.25,12.50,25.00,50.00,100.00μg/L碱性成纤维细胞生长因子进行干预;以单纯加入200 μL生长培养基作为空白对照组,以加入200μL生长培养基+肌源性干细胞作为阴性对照组.分别于培养24,48,72,96 h加入MTT溶液.主要观察指标:免疫细胞化学法鉴定大鼠肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况.结果:肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应,少数呈Desmin阳性反应.①不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞的促增殖效应:与阴性对照组比较,各浓度碱性成纤维细胞生长因子组对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应(P<0.05);浓度为6.25-50.00 μg/L时促增殖作用随其质量浓度升高而显著增强(P<0.01),至50.00 μg/L时其促增殖作用接近顶峰.②碱性成纤维细胞生长因子在不同培养时间点对肌源性干细胞的促增殖效应:随培养时间的延长肌源性干细胞明显增殖,与阴性对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组出现显著促增殖效应(P<0.01)的时间为培养96 h.结论:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠肌源性干细胞增殖,且呈浓度一时间依赖性增加,50.00 μg/L与96 h为较佳的体外培养质量浓度和时间.     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用

背景：碱性成纤维细胞生长因子是具有多功能的细胞生长因子,对来源于中胚层及神经外胚层的细胞有明显的促进增殖作用。目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用。方法：将第5代人牙周膜细胞,以1×108 L-1的浓度分别接种到96孔板,随机分成4组,分别加入含0,1,10,100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为15%胎牛血清的α-MEM培养基进行培养。在第1,3,5,7天测定细胞的增殖情况,在第1,7天检测碱性磷酸酶活性。结果与结论：4组之间人牙周膜细胞增殖情况的差异有显著性意义（F=6.586,P=0.024）,随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增大,吸光度值均增大,其中100μg/L碱性成纤维细胞生长因子组的吸光度值均大于其他组（P 〈0.05）;碱性成纤维细胞生长因子各组的碱性磷酸酶活性均低于对照组（P=0.000）,浓度越大,活性越低（P 〈0.05）。结果显示碱性成纤维细胞生长因子在1-100μg/L范围内质量浓度越高,促进人牙周膜细胞增殖和抑制碱性磷酸酶活性的作用越强。     

脂肪干细胞来源的生长因子与口腔黏膜成纤维细胞增殖

背景：近年来脂肪干细胞被证实对软组织创伤修复具有促进作用,关于其机制的研究中,更多的学者倾向于脂肪干细胞的旁分泌机制,即脂肪干细胞分泌的各种细胞因子对创伤部位细胞的修复功能具有促进作用。但脂肪干细胞分泌的因子种类,每种因子的含量,以及对软组织创伤修复,尤其是口腔黏膜的作用,鲜有报道。目的：观察脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子对口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：采用蛋白芯片技术,检测脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子的含量。分别于1,2,3,4,5d时,采用CCK-8法检测0,1,10,20,50,100μg/L血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子以及在脂肪干细胞条件培养液中分别加入上述各因子的中和抗体后,对口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响。结果与结论：脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子信号值均大于300。脂肪干细胞条件培养液对成纤维细胞的增殖有明显的促进作用,其中,血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的促进作用非常明显,且随着因子浓度的变化而呈现峰值性改变,血小板源性生长因子的促进作用在50μg/L时达到峰值,碱性成纤维细胞生长因子的促进作用在1μg/L时达到峰值（P≤0.05）,两者的中和抗体均能抑制脂肪干细胞条件培养液对口腔黏膜成纤维细胞的促进作用;而血管内皮细胞生长因子对成纤维细胞增殖无明显的促进作用。实验结果提示脂肪干细胞条件培养液可促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖,其中所含有的血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的促进作用非常明显,且具有浓度依赖性,因此应注意选择适宜的细胞因子浓度,从而有效地促进成纤维细胞增殖。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用,为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法:实验皮肤标本来源于2002-07/2003-07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者,取冗余全层皮肤组织,患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞,实验分为异搏定组:包括1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9,1×10-10mol/L组,分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液;氢化可的松组:在细胞培养孔中加入2mL浓度为1×10-7mol/L氢化可的松的培养液;对照组:在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0.005的新生牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色;细胞增殖状况测定应用3氚标记的胸腺嘧啶掺入法;观察细胞增殖抑制率[抑制率(I%)=(阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值)/阴性对照每分钟脉冲数值],取各例样本的平均值。结果:①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果:对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖,24h达到高峰,48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应:各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用,其中1×10-6mol/L异搏定与1×10-7mol/L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异(t=0.135,P=0.896>0.05)。③浓度为1×10-6mol/L异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应:氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(60.67±18.94)%比(-19.69±21.26)%,(10.89±11.61)%,(37.03±12.17)%,q=10.867,6.732,3.197;P<0.05];异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(51.42±15.30)%比(-16.83±16.90)%,(1.09±11.62)%,(17.41±13.41)%,q=10.566,7.791,5.265;P<0.05];在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松(t=2.423,P=0.042<0.05)。结论:不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。