血管内皮细胞生长因子与缺血性脑血管病

血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是迄今为止已知的最强的促血管生长因子，其由多种正常细胞产生和分泌，特异性作用于存在VEGF受体即flt—l(VEGFR—1)或KDR(VEGFR-2)的血管内皮细胞(VEC)而实现其生物学效应。除人们所熟知的可以增加血管通透性，促进血管生成，维持血管功能，修复损伤后血管的功能外，更有研究表明其对神经细胞有直接保护作用并可促进神经元的生成。缺氧为VEGF／VEGFR表达的最强调节因素。许多实验都证实了脑缺血过程中均伴有VEGF及其受体的表达，与缺血性脑血管病的发生发展密切相关。目前VEGF作为一种功能强大且能产生多种效应的细胞因子因其潜在的治疗前景引起国内外的广泛关注。     

血管内皮生长因子、血管生成素与缺血性脑损伤

在啮齿动物的胚胎发育过程中，脑血管的发育主要是通过血管发生（angiogenesis），而在成年人类和啮齿动物脑内，新生血管的生成则只在如低氧、缺血等病理生理条件下发生，原先存活的毛细血管经发芽或潜在吻合血管枝增大形成新血管，过程包括内皮细胞趋化移动、增殖，形成新管腔，周细胞、血管平滑肌细胞等血管周围细胞的移入、黏附至内皮层形成完整的血管壁；血管丛经重塑（修剪）形成成熟的血管系统等。在新生血管生成过程中，两条调节途径起到非常重要的作用：一条是血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受体（flt-1等）调节通路，另一条是血管生成素（angiopoietin，Ang）及其受体（Tie）调节通路，这两条途径协同作用，共同促进机体血管形成。     

缺氧时内皮细胞中血管内皮生长因子受体的表达

目的 探讨脐带静脉内皮细胞在缺氧条件培养下血管内皮生长因子特异受体的表达，为进一步研究血管内皮生长因子及其受体在新血管生成中的作用提供理论依据。方法 体外培养脐带静脉内皮细胞，不同缺氧时间处理及血管活性因子刺激，提取组织总RNA，应用Northern杂交和逆转录聚合酶连扩增反应（RT－PCR）等方法，观察基因表达的变化。结果 内皮细胞无缺氧和缺氧3h均未见flt-1表达，缺氧6h可见flt-1摸板核糖核酸（mRNA)的表达。内皮细胞缺氧6h，内皮素（ET）、一氧化氮（NO）、LNNA对flt-1表达有影响。ET促进flt-1 mRNA的表达，NO抑制其表达，而LNNA部分恢复其表达。在无缺氧和缺氧3，6h KDR基因均有表达。内皮细胞缺氧6h，ET、NO、LNNA对KDR无影响。LNNA阻断了内源性NO后，明显促进KDR mNRA的表达，其他无作用。结论 在缺氧条件下血管内皮细胞生长因子的受体flt-1表达明显增加并受血管活性因子调节，KDR有表达且部分受血管活性因子调节。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤蛋白激酶C与c—fps基因表达关系的探讨

目的探讨蛋白激酶C与 c-fos基因蛋白(c-Fos)表达在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时的作用机制.方法蛋白激酶C蛋白定量采用Lowry法;蛋白激酶C活性测定采用γ-32P催化活性测定法;c-Fos表达采用免疫组织化学染色法.结果与对照组相比,缺血、缺氧20分钟后 0、4、12、24、48、72小时及7日组新生鼠脑皮质、海马神经细胞胞膜蛋白激酶C活性降低(t=3.50,P<0.05;t=3.35,P<0.01);脑皮质神经细胞胞浆蛋白激酶C活性增高(t=4.26,P<0.01);海马神经细胞胞浆活性变化不大;上述改变在缺血、缺氧后14日组基本恢复正常.新生鼠缺血、缺氧后即刻脑组织各部分即有不同程度的 c-Fos表达,且于缺血、缺氧后4小时达高峰,以后强度逐渐降低,并持续至72小时.c-Fos表达在脑皮质以Ⅱ～Ⅴ层明显,海马以CA1、海马齿状回明显,CA3也有表达,丘脑c-Fos表达稍有增加.结论缺血、缺氧激活的蛋白激酶C可调节c-fos基因表达,持续的蛋白激酶C活性降低及c-Fos表达参与了神经细胞的损伤过程.     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的 从组织形态学和行为学来探讨高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用。方法 将117只健康7日龄Sprague—Dawley新生大鼠随机分为正常对照组（CON组）、HIBD组、高压空气治疗组（HBA组）和高压氧治疗组（HBO组）。采用Rice法制作HIBD模型。HBO组和HBA组于缺氧缺血处理后即行HBO或高压空气治疗，每天1次，共治疗7d。大鼠9日龄时采用原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测皮质和海马细胞凋亡情况，14日龄时检测左／右脑重比值及体重增长率，30日龄时进行放射型迷宫觅水测试，试验结束后（35日龄）采用Nissl染色法检测海马CA1区锥体细胞密度。结果 ①HIBD组体重增长率和左／右脑重比值均明显低于CON组（P〈0．01）；HBA组与HBO组治疗后体重增长率均无明显改善，但左／右脑重比值均明显增加，尤其是HBO组（P〈0．01）。②与CON组比较，HIBD组皮质和海马中均存在大量的凋亡细胞，CA1区锥体细胞密度明显下降（均P〈0．01）；与HIBD组比较，HBO组凋亡细胞明显减少，CA1区锥体细胞密度明显增加（均P〈0．01）；HBA组凋亡细胞和CA，区锥体细胞密度均无明显改变。③行为学检测结果显示，HIBD组觅水时间、错误次数和重复次数均明显高于CON组（P〈0．05）；HBO组各项指标均明显低于HIBD组（P〈0．05），而HBA组改善不明显。结论 HBO治疗在近期内能够减轻脑组织缺血后损伤，对远期学习记忆功能的恢复也有良好的促进作用。     

血管内皮生长因子与缺血性脑损伤

血管内皮生长因子 (vascularendothelial growthfactor ,VEGF)由Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来[1] ,又称血管通透因子 (vascularpermeabilityfactor ,VPF) ,是一种内皮细胞特异的有丝分裂原 ,通过与其受体结合而发挥促进内皮细胞增殖 ,加速新生血管形成 ,提高血管通透性等生物学特性。本文就VEGF及其受体的生物学特点 ,在缺血性脑损伤中的表达及作用的研究作简要介绍。1VEGF及其受体1.1生物学特性　VEGF是热稳定的分子 ,相对分子量为 ( 3 4-4 6)× 10 3 ( 3 4-4 6KD) ,序列高度保守 ,具有生物活性的是糖…     

缺氧缺血性脑损伤鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的表达及其意义

目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)mRNA的表达及其意义.方法将112只新生7 d Wistar大鼠随机分为假手术对照组以及HIBD后3、8、24 h以及3、6和14 d组,每组16只.其中8只应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测病变侧脑皮质caspase1 mRNA的表达情况;另外8只进行脑组织苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察脑组织病理变化.结果假手术对照组中有少量caspase-1 mRNA表达,HIBD 24 h组其表达水平开始增加(与假手术对照组比较P<0.01),6 d达高峰(与其余各组比较P均<0.01),14 d时其表达下降,但仍高于假手术对照组(P<0.01).组织病理学检查发现,HIBD后24 h～6 d神经元大量变性、坏死、丢失,同时胶质细胞显著增生.结论 HIBD后caspase-1 mRNA的表达增加,其变化规律与光镜观察到的脑损伤进展时间完全吻合,提示caspase-1可能参与了新生鼠HIBD的病理损伤过程.     

血管内皮细胞生长因子及其基因治疗缺血性脑血管病的最新研究

脑梗死缺血中心区的神经细胞产生不可逆损伤，而缺血边缘区脑组织的损伤是可逆的，尽快恢复该区域的血流，保护神经细胞是治疗脑梗死的关键。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelal growth factor，VEGF)是新近发现的一种促进血管生长因子，具有促进血管生长和侧支循环的建立的作用。VEGF具有促进新生血管形成及侧支循环的建立．通过改善脑血流及直接保护神经元，达到减轻缺血性损伤，提示可将其用于治疗缺血性脑血管疾病。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

生长因子治疗缺血性脑损伤的研究进展

生长因子是包括酸性成纤维细胞生长因子 (ａＦＧＦ)、碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)、血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)、转化生长因子 β(ＴＧＦβ)、胰岛素样生长因子 (ＩＧＦ)等在内的一个大家族。大量的研究表明脑缺血后生长因子的表达增加 ,认为内源性的生长因子对缺血脑组织有神经保护作用 ,从而引起了人们尝试应用外源性生长因子治疗缺血性脑损伤的兴趣。本文就这方面的进展作一概述。1　生长因子对缺血性脑损伤的治疗作用1 1　减小脑梗死的体积　Ｆｉｓｈｅｒ等[1]通过永久性大脑中动脉闭塞 (ＭＣＡＯ)复制鼠缺血性脑损伤的模型 ,…     

当归注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后VEGF表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮生长因子(VEGF)在不同时间点的表达及当归注射液对其表达的影响.方法线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型,雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺血损伤组和当归治疗组,采用免疫组织化学和RT-PCR方法观察VEGF表达变化.结果免疫组织化学显示缺血损伤组和当归治疗组大鼠VEGF蛋白表达均在24 h达到高峰后减弱;RT-PCR显示缺血损伤组VEGF mRNA在3 h开始表达增强,6 h达到高峰,后很快降低,至第7天恢复到基线水平;当归治疗组VEGF mRNA在3 d达到高峰后缓慢降低,至第7天仍有大量表达,且各时间点VEGF的表达比缺血损伤组明显增加.结论当归可促进局灶性脑缺血再灌注损伤后VEGF的表达.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后VEGF、Flt-1、Flk-1mRNA的表达及意义

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后VEGF及其受体Flt-1、Flk-1 mRNA在不同时间点的表达及意义。方法线栓法制作大鼠脑缺血不同时点模型，采用RT-PCR方法观察VEGF及其受体Flt-1、Flk-1的表达。结果VEGFmRNA在3h开始表达增强，6h达到高峰，后很快降低至第7天恢复基线水平；Flt-1、Flk-1mRNA在3h表达增强，3d达到高峰后逐渐降低至第7天仍有表达。结论局灶性脑缺血再灌注损伤可诱导VEGF及其受体的表达。     

血管内皮生长因子及其受体在胃肠间质瘤中的表达

1983年Mazur[1]首次提出胃肠道间质瘤(gastrointestinalstromal tumors,GISTs)的诊断以后,作为一种独立的消化道疾病一直是研究热点。GIST可发生自食管至肛门的胃肠道全长范围,瘤细胞显示CD117及CD34有较高的阳性表达率[2,3]。血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR-2)被认为是     

血管内皮生长因子在脑复发胶质瘤中的表达

背景:脑胶质瘤病灶介质中富含新生血管,血管内皮生长因子表达不同可能与其病理表现和复发存在一定的相关性。目的:分析血管内皮生长因子在复发脑胶质瘤中表达的特征。设计:对照实验。单位:四川大学华西医院神经外科。对象:从华西医院1996-06/2001-06手术切除且病理证实为脑胶质瘤143例石蜡标本中,收集临床资料完整且相同的个体复发前、后脑胶质瘤标本44例(22对)。取首次手术及第1次复发手术标本。其中Ker-nohan评分Ⅰ级8例;Ⅱ级10例;Ⅲ级14例;Ⅳ级12例。分为初发和复发2组,每组22例。方法:采用免疫组织化学SP法,一抗羊抗人血管内皮生长因子IgG(单抗)、二抗兔抗羊IgG,工作度1:50,阴性对照为磷酸盐缓冲液置换一抗染色。检测44例复发前、后的脑胶质瘤病理组织中血管内皮生长因子蛋白表达水平,结合病理分级作对照分析。①胞浆内呈棕黄色颗粒为阳性信号。②在MPIAS-500型多媒体彩色病理图文分析系统上,对肿瘤细胞进行表达强度PU值(阳性单位)和细胞数测定。③PU值95%临界值,分别计数阳性细胞率。④常规苏木精-伊红染色Kernohan病理分级。主要观察指标:①脑胶质瘤复发前、后标本血管内皮生长因子表达强度PU值。②脑胶质瘤复发前、后组病理分级。结果:①脑胶质瘤血管内皮生长因子表达强度PU值:初发组为21.9273±6.607,复发组为33.0545±6.684。②病理分级:初发Ⅰ级8例,复发Ⅱ级2例、Ⅲ级5例、Ⅳ级1例;初发Ⅱ级6例,复发Ⅱ级2例、Ⅲ级1例、Ⅳ级3例;初发Ⅲ级6例,复发Ⅲ级2例、Ⅳ级4例;初发Ⅳ级2例,复发Ⅳ级2例。③脑胶质瘤复发前、后标本血管内皮生长因子蛋白表达PU值和肿瘤复发前、后病理分级各自对比检验差异均有显著性(P<0.05)。结论:血管内皮生长因子表达强度在脑胶质瘤复发较初发时增加明显,复发肿瘤恶化趋势与血管内皮生长因子的高表达在胶质瘤的复发中呈一致性。     

血管内皮生长因子在脑复发胶质瘤中的表达

背景：脑胶质瘤病灶介质中富含新生血管，血管内皮生长因子表达不同可能与其病理表现和复发存在一定的相关性。 目的：分析血管内皮生长因子在复发脑胶质瘤中表达的特征。 设计：对照实验。 单位：四川大学华西医院神经外科。 对象：从华西医院1996—06／2001—06手术切除且病理证实为脑胶质瘤143例石蜡标本中，收集临床资料完整且相同的个体复发前、后脑胶质瘤标本44例（22对）。取首次手术及第1次复发手术标本。其中Kernohan评分Ⅰ级8例；Ⅱ级10例；Ⅲ级14例；Ⅳ级12例。分为初发和复发2组，每组22例。 方法：采用免疫组织化学SP法，一抗羊抗人血管内皮生长因子IgG（单抗）、二抗兔抗羊IgG，工作度1：50，阴性对照为磷酸盐缓冲液置换一抗染色。检测44例复发前、后的脑胶质瘤病理组织中血管内皮生长因子蛋白表达水平，结合病理分级作对照分析。①胞浆内呈棕黄色颗粒为阳性信号。②在MPIAS-500型多媒体彩色病理图文分析系统上，对肿瘤细胞进行表达强度PU值（阳性单位）和细胞数测定。③PU值95％临界值，分别计数阳性细胞率。④常规苏木精一伊红染色Kemohan病理分级。 主要观察指标：①脑胶质瘤复发前、后标本血管内皮生长因子表达强度PU值。②脑胶质瘤复发前、后组病理分级。结果：①脑胶质瘤血管内皮生长因子表达强度PU值：初发组为21．9273&;#177;6．607，复发组为33．0545&;#177;6．684。②病理分级：初发Ⅰ级8例，复发Ⅱ级2例、Ⅲ级5例、Ⅳ级1例；初发Ⅱ级6例，复发Ⅱ级2例、Ⅲ级1例、Ⅳ级3例；初发Ⅲ级6例，复发Ⅲ级2例、Ⅳ级4例；初发Ⅳ级2例，复发Ⅳ级2例。③脑胶质瘤复发前、后标本血管内皮生长因子蛋白表达PU值和肿瘤复发前、后病理分级各自对比检验差异均有显著性（P〈0．05）。 结论：血管内皮生长因子表达强度在脑胶质瘤复发较初发时增加明显，复发肿瘤恶化趋势与血管内皮生长因子的高表达在胶质瘤的复发中呈一致性。     

Parathyroid hormone stimulates the endothelial expression of vascular endothelial growth factor

Background We showed previously that parathyroid hormone (PTH) may stimulate the endothelial expression of pro‐atherosclerotic and pro‐inflammatory markers. Considering the impact of PTH on vasculature, we decided to evaluate its effect on mRNA and intra‐cellular protein expressions of endothelial vascular endothelial growth factor (VEGF) taking into account that VEGF may play a role in the pathogenesis of endothelial dysfunctions. Materials and methods Human umbilical vein cords endothelial cells (HUVEC) were stimulated for 24 h with 10^?12–10^?10 mol L^?1 PTH. The VEGF‐165 mRNA expression (critical in stimulating endothelial cell proliferation) was evaluated by RT/PCR and the intra‐cellular VEGF protein expression by flow cytometry. The pathways by which PTH may have an effect on VEGF expression were also evaluated. Results PTH (10^?10 mol L^?1) significantly increased VEGF‐165 mRNA expression (P < 0·05). The addition of 50 nmol L^?1 protein kinase C (PKC) and 10 µmol L^?1 protein kinase A (PKA) inhibitors significantly reduced the VEGF‐165 mRNA expression (P = 0·01). We also examined whether nitric oxide (NO) may be involved in the PTH‐induced stimulation of VEGF‐165 expression. Pre‐treatment of the cells with 200 µmol L‐nitro arginine methyl ester (L‐NAME, NO synthase inhibitor) was found to inhibit VEGF‐165 mRNA expression (P = 0·006). VEGF protein could not be detected in the medium of HUVEC but it was present in the cell cytoplasm. PTH had no significant effect on cytoplasmatic VEGF protein expression. Conclusion The stimulatory effect of PTH on endothelial VEGF‐165 mRNA expression is partly through PKC and PKA pathways and is also NO dependent.     

Vascular endothelial growth factor and oxidative damage in cancer

OBJECTIVES: VEGF may be an indicator for the angiogenic potential of a tumor and stimulates NO which plays complex roles in cancer. In our study, we investigated the levels of MDA, NO and VEGF in the plasma of various types cancer patients (untreated, yet). DESIGN AND METHODS: The level of VEGF was determined by using ELISA. Plasma MDA, NO and VEGF levels were measured in 45 patients with various cancer types and in 21 healthy subjects. RESULTS: Plasma MDA and VEGF levels were significantly higher than those of the healthy subjects (p < 0,0001). NO levels of the patients were significantly lower vs. the healthy subjects (p < 0,001). CONCLUSIONS: Increased plasma VEGF and MDA concentrations and decreased plasma NO levels have been found in patients with various types of human cancer. Howewer, the prognostic and clinical significance of plasma VEGF in cancer patients is unknown.     

Expression of vascular endothelial growth factor in renal cell carcinoma is correlated with cancer advancement

Vascular endothelial growth factor (VEGF) functions as a regulator of neovascularization in malignant cells. VEGF as a mitogen is thought to alter renal cell carcinoma formation and tumor progression. We investigated the expression of the VEGF gene in order to evaluate its clinical significance in renal cell carcinoma. Tissue samples from 198 patients with renal cell carcinoma were examined with an immunohistochemical stain for the expression of the VEGF gene. The expression rate was compared to 34 normal renal cortical samples obtained from renal surgery from noncancer patients. There were significant differences between normal renal cortex (0%) and cancer tissue (54.5%) in positive staining of VEGF protein (P<0.001). With the progression of tumor grade, the positive rate of VEGF gene expression significantly increased. The expression rate of the VEGF gene in the advanced group, such as with lymph node involvement or vein invasion, was greater than that in the locally confined group (P<0.001). The results revealed that expression of the VEGF gene is proportional to the formation and progression of renal cell carcinoma, which may allow VEGF to be used as a prognostic marker for renal cell carcinoma.     

骨折局部注射结缔组织生长因子后骨保护素和血管内皮生长因子的表达

背景：研究发现结缔组织生长因子在软骨发育过程中起重要作用,并具有强烈的促血管增殖作用,但其对骨折愈合的影响尚不清楚。目的：观察局部注射结缔组织生长因子对骨折愈合过程中骨保护素和血管内皮生长因子表达的影响及作用机制。方法：40只SD大鼠随机分为2组,建立胫骨干骨折模型后实验组动物即刻在骨折断端注射结缔组织生长因子0.1μg/kg,对照组注射等量生理盐水,隔日1次。结果与结论：实验组骨痂组织的早期即可见大量软骨细胞;免疫组织化学染色显示实验组骨保护素和血管内皮生长因子的表达均较对照组明显增强（P〈0.05）,并且两者表达的高峰期与对照组相比有所延长,有效缩短了两者表达高峰期之间的时间间隔。提示局部注射外源性生长因子结缔组织生长因子能增加骨折愈合过程中骨保护素和血管内皮生长因子在骨痂组织中的表达,并能改变两者的表达高峰期进而促进骨折愈合。     

VEGF和八因子相关抗原在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 通过检测人脑胶质瘤细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和八因子相关抗原（Ⅷ-R Ag）的表达,探讨VEGF在脑胶质瘤发生和发展中的作用.方法 正常脑组织对照标本3例,取自脑外伤后内减压的病人.62例胶质瘤病人的手术标本,其中胶质母细胞瘤23例,间变胶质细胞瘤20例和星形胶质细胞瘤19例.采用VEGF多克隆抗体、兔抗人八因子相关抗原（Ⅷ-R Ag）行常规S-P免疫组化染色,观察并计算VEGF免疫活性指数和微血管密度值.结果 VEGF染色指数随着肿瘤恶性度的升高而增高;脑胶质瘤组织微血管密度随着肿瘤级别的升高而增高;脑肿瘤病理分级和VEGF（r=0.941）的表达及与MVD（r=0.907）之间呈正相关性.结论 VEGF可能通过促进肿瘤组织内血管生成,在人脑胶质瘤的形成与发展过程中起着重要作用,其表达水平对判断恶性程度及预后有指导意义.