酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的 观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据.方法 采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组.酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min.反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性.结果 细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16mg/L.而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P＜0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P＜0.05).结论 酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用.然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,衙高剂量有诱导作用.     

壮骨关节丸对大鼠肝微粒体P450的影响

[目的] 考察壮骨关节丸对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响。[方法] 壮骨关节丸及其两个新工艺按含生药2.1 g/kg连续给大鼠灌胃7 d,末次药后24 h断头处死大鼠并取肝脏,用钙沉降法制备肝微粒体。在体外用含氨苯砜、非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗的cocktail探针代谢来考察肝微粒体CYP3A、CYP1A2、CYP2C19、 CYP2E1的活性。[结果] cocktail探针在体外肝微粒体系统中代谢1 h后,包括壮骨关节丸及其两个新工艺的给药组剩余氯唑沙宗浓度显著高于对照组,而奥美拉唑、非那西丁、氨苯砜浓度与对照组之间差异无统计学意义。[结论] 壮骨关节丸可以抑制大鼠肝脏CYP2E1活性,但对CYP1A2、CYP3A及CYP2C19无显著影响。     

环孢素A及其联合用药对人和大鼠肝CYP3A活性的影响

目的：探讨环孢素A(CsA)及其与甲基强的松龙(MP)、氟康唑(Flu)合用时对大鼠和我国正常成人肝脏CYP3A活性的影响。方法：制备大鼠和人肝微粒体，用不同浓度的CsA作用、加或不加MP、Flu，以红霉素为底物，经过NADPH系统孵育后，利用分光光度法测定人和大鼠肝微粒体的红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性。结果：CsA单独作用时，在人肝微粒体中，CsA40、20、40μmol／L剂量组与对照组相比具有显著性差异；在大鼠肝微粒体中，CsA除低剂量组外，各组与对照组相比亦具有显著性差异，总体上，随着CsA浓度增加，CYP3A活性下降。此外，在大鼠肝微粒体中，MP、Flu与CsA联合作用较CsA单独作用相比，CYP3A的活性有显著性降低；但在人肝微粒体中，只在Flu与CsA联合作用时，CYP3A的活性有显著性降低。结论：CsA是CYP3A的一种活性抑制剂；Flu与CsA合用时加强了CsA对CYP3A活性的抑制作用。     

维格列汀对非酒精性脂肪肝病大鼠脂肪酸 w氧化关键酶 CYP1 A1及 CYP2 E1表达的影响

目的：探讨维格列汀对高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪肝病（ NAFLD）大鼠肝脏细胞色素P4501A1（CYP1A1）以及P4502E1（CYP2E1）表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为空白对照组（n＝20）、高脂饮食组（n＝20）及维格列汀干预组（n＝20）,高脂饮食组及维格列汀干预组给予高脂饲料3个月建立NAFLD大鼠模型,模型建立成功后维格列汀干预组给予维格列汀10 mg／（ kg? d）灌胃治疗,高脂饮食组给予生理盐水灌胃参照,分别在治疗4周和8周后处死大鼠各半,观察其对肝脏切片HE染色特点、肝功能以及血脂、CYP1A1及CYP2E1的表达特点。结果肝脏病理学检测：治疗4周后,空白对照组几乎没有脂肪颗粒,高脂饮食组存在明显的肝脏脂肪沉积,维格列汀干预组肝脏脂肪颗粒沉积明显减少,治疗8周后维格列汀干预组看不到任何脂肪空泡,但仍有一定的炎症反应;治疗4周后,维格列汀干预组与高脂饮食组相比,LDH、AST、ALT明显降低（ P＜0．05）,γ－GT没有变化;治疗8周后,LDH、AST以及ALT进一步降低;治疗4周后大鼠TC、LDL－C、HDL－C以及TG明显低于模型组（P＜0．05）,治疗8周后,相较于治疗4周后进一步降低。大鼠CYP1A1以及CYP2E1 mRNA及蛋白表达4周时即出现明显的下降（P＜0．05）,8周时基本维持在4周的水平。结论维格列汀可通过调节大鼠脂肪酸w氧化关键酶CYP1A1以及CYP2E1的表达,进而调节脂代谢,改善肝功能,最终缓解NAFLD的症状。     

刺五加对大鼠及人肝微粒体酶CYP450的作用观察

以１０ｇ／１００ｇ体重的刺五加给予大鼠灌胃５天，检测大鼠肝微粒体酶活力。结果表明，给药组肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ１活性受抑；正常人组服用高于临床剂量的刺五加１周，利用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）以咖啡因为代谢探针间接反映人肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ２活性。结果表明，正常人组该酶活性在用药后受抑；ＣＹＰＩＡ１、ＣＹＰＩＡ２能够催化多种前致癌物在机体内的活化，根据刺五加对这些酶的抑制，说明该药在一定程度上能防御肿瘤的发生     

CYP3A和MDR1基因多态性对环孢素A药代动力学的影响

环孢素A（CsA）属环状多肽化合物,作为基础免疫抑制剂广泛用于实体器官移植后的抗排斥反应,其主要经P-糖蛋白（P-gp）转运,细胞色素P450（CYP）3A酶代谢,CYP3A及多药耐药基因1（MDR1）的多态性可能影响CYP3A酶和P-gp的表达水平和生物活性,进而可能对CsA的药代动力学过程产生影响。本文就CYP3A和MDR1基因多态性对CsA药代动力学的影响进行综述,以期指导临床制定合理的个体化用药方案。     

探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用

目的观察苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用与CYP3A4酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法采用SD大鼠肝微粒体体外孵育法,设阴性对照组、阳性抑制剂对照组和苦碟子注射液组。利用高效液相色谱法测定底物睾酮的减少量,计算得到IC50,评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4酶的抑制活性,以酮康唑为阳性对照药。结果在体外人肝微粒体孵育体系中,当Tris-HCl缓冲液浓度为0.1mol/L,p H为7.4,温度为37℃时,睾酮最佳反应底物浓度为100μmol/L,最佳孵育时间为40min,最佳蛋白浓度为0.5mg/m L。阳性抑制剂酮康唑的IC50值为0.0707μmol/L,表明孵育体系满足CYP3A4酶抑制活性的评价要求。9个不同体积终浓度(0、0.01%、0.10%、0.20%、0.50%、1.00%、2.00%、5.00%、10.00%)的苦碟子注射液对CYP3A4酶的相对抑制率分别为0,2.94%、16.44%、22.70%、31.44%、37.47%、46.37%、51.74%和60.40%,半数抑制率IC50值为3.46%,高于其日用药量浓度。结论在体外正常剂量下,苦碟子注射液对人CYP3A4无明显抑制作用,可以与其底物联合用药。     

丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学

目的研究丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢,以及选择性细胞色素P450(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法超速离心法制备大鼠肝微粒体,采用高效液相-质谱联用方法测定孵育液中丹参酮ⅡA原形药物的浓度。研究丹参酮ⅡA的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint)。同时观察不同浓度和不同种类的CYP酶特异性抑制剂对丹参酮ⅡA代谢的影响。结果丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的Vmax为(1.20±0.18)nmol/(min·mg);Km为(4.35±0.67)nmol/mL;CLint为(0.28±0.06)mL/(min·mg)。噻氯匹啶和酮康唑能够显著抑制丹参酮ⅡA的代谢,奎尼丁对丹参酮ⅡA的代谢也有一定的抑制作用,而其他CYP酶抑制剂对丹参酮ⅡA的代谢无明显影响。结论CYP2C19和CYP3A1主要参与了丹参酮ⅡA的代谢,CYP2D6也起到了部分代谢作用;这些CYP酶的抑制剂可能使丹参酮ⅡA的代谢受到抑制,造成药物药效或毒性的增加。     

CYP3 A4和CYP2 D6基因多态性对阿片类药物术后镇痛效应影响的研究进展

阿片类药物作为术后镇痛常用药物,其缓解术后疼痛的效果呈现较大的个体差异。国内外多个研究发现,基因多态性是影响阿片类药物术后镇痛效果的重要因素之一。研究表明,细胞色素P450(CYP)是体内参与药物生物转化的主要酶系,其家族中CYP3A4和CYP2D6基因对多种镇痛药的代谢均有关键性作用,CYP3A4和CYP2D6基因多态性通过影响阿片类镇痛药物的代谢速率和活性药物的血药浓度而影响其镇痛效果甚至毒性不良反应作用,因此,本文就CYP3A4和CYP2D6基因多态性对常用镇痛药物的药代动力学和药物效应动力学影响进行总结和介绍,为进一步探索基因多态性对术后镇痛用药的指导意义提供一定的研究方向。     

姜黄和乙醇对染苯小鼠CYP2E1活性及血液学毒性的影响

目的 观察染苯小鼠CYP2E1活性改变及血液学毒性的影响,继之研究乙醇、姜黄对苯毒性的干预作用.方法 昆明种小鼠80只,每组20只,随机分为4组,A组为生理盐水对照组,B组为单纯染苯组(苯中毒模型),即皮下注射苯制剂2 ml/kg;C组为乙醇干预组,即在B组处理的基础上,自由饮用10%乙醇;D组为姜黄干预组,即在给苯前,腹腔注射姜黄提取液.结果 (1)B组与A组比较,外周血及骨髓红细胞微核率上升出现高峰,同时外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)等指标明显低[(2.6±1.0)×109/L、(93±11)g/L、(593±81)×109/L],达到了苯中毒模型的标准.(2)C组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT等指标均低(均P<0.05);CYP2E1活性上升显著;骨髓嗜多染红细胞微核率高于B组,且差异有统计学意义[(8.8±1.8)‰比(6.5±1.0)‰,P<0.01].(3)D组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT数值均高(均P<0.01),但未达到正常水平;CYP2E1活性低于B组(P<0.01).结论 (1)对照比较CYP2E1活性改变后,染苯小鼠血液学毒性发生了变化;(2)乙醇诱导了CYP2E1活性,从而在体内增加了苯的血液学毒性;(3)姜黄在体内降低CYP2E1活性,一定程度上减轻了苯的血液学毒性.姜黄作为一种中药在防治苯中毒、抗炎、抗氧化、护肝及护胃等方面有着广泛的生物活性.     

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的 研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶（CYP450）CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法 采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量RT-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果 给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达（P <0.05）。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论 连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。     

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。     

细胞色素氧化酶3A4启动子报告基因的构建及其活性检测

目的建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达阳性的肿瘤细胞中检测其转录活性。方法利用PCR扩增CYP 3A4的启动子区远端调控序列(-7836/-7208)和近端调控序列(-362/+52)序列;将上述序列克隆至p GL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测CYP 3A4报告基因的活性。结果在肝癌细胞系中,PXR的激动剂利福平能够剂量依赖性地诱导远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50为(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μmol/L;PXR的拮抗剂酮康唑能够剂量依赖性地抑制利福平诱导的远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRELuc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50为(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L。此外,多种化疗药物(PXR的潜在配体)能够在PXR阳性的肿瘤细胞系中诱导远端调控序列荧光素酶报告基因和近端调控序列荧光素酶报告基因的活性。结论成功构建了CYP 3A4启动子报告基因,在此基础上建立了在不同肿瘤细胞中检测PXR转录活性的方法。     

甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP2E1表达及活性的影响

目的通过检测细胞色素氧化酶CYP2E1的表达和活性变化,从分子水平探讨中药配伍禁忌"十八反"理论中甘遂配伍甘草的药理机制.方法利用RT-PCR检测大鼠肝脏CYP2E1 mRNA水平;通过Western blot检测大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达;采用高效液相色谱(HPLC)法测定CYP2E1酶活性.结果甘遂组、甘草组和甘遂甘草配伍组均明显诱导大鼠肝脏CYP2E1的表达与活性上升,并发现甘草组和甘遂甘草配伍组对CYP2E1活性的诱导作用显著高于甘遂组.结论甘遂可能通过诱导肝脏CYP2E1的表达与活性上升,促使其所含的前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物,导致对机体的毒性作用;甘遂甘草配伍使用时,甘草对CYP2E1活性的诱导能力更强,故而甘草可促进甘遂所含前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物的过程,并导致对机体毒性作用的增强,从而表现出"十八反"中药物配伍禁忌的特征.     

黄芩苷对Chang Liver细胞CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响

目的 在Chang Liver细胞中观察黄芩苷处理对CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响.方法 在Chang Liver细胞中分别加入DMSO 0.1% (v/v) (溶剂对照) 和不同浓度的黄芩苷 (0.01、0.1和1 μM) 24、36和48h后,用半定量RT-PCR的方法分别检测CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达量的改变.结果 用不同浓度黄芩苷分别处理Chang Liver细胞24和36 h,CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达均呈现出增强的趋势;但是黄芩苷处理48 h后各浓度对CYP3A4和CYP2C9的表达产生显著的抑制效应 (P<0.01) . 结论黄芩苷对细胞中CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达具有影响作用,这种影响作用随药物处理时间不同而表现出双向效应.     

穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型的影响

目的 通过体内、体外试验,观察穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型的影响.方法 大鼠尾静脉注射给予不同浓度的穿琥宁注射液(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)或生理盐水,连续给药7d,第8d给予探针药物咖啡因灌胃,6h后断头取全血,用HPLC法测定空白对照组和各试验组全血中咖啡因的代谢率,利用Western blot技术测定穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型蛋白表达的影响;在肝微粒体温孵体系中,加入探针药物非那西丁,通过HPLC法测定大鼠肝微粒体中非那西丁的代谢物对乙酰氨基酚的生成速率的影响.结果 穿琥宁注射液低、中、高剂量组的咖啡因代谢率分别为(72.82±17.90)%、(81.31±19.21)%和(77.11±14.71)%,空白对照组代谢率为(67.12±15.13)%,各试验组与空白对照组的咖啡因代谢率无显著性差异(P>0.05),CYP1A2蛋白表达无显著性差异.肝微粒体温孵试验低、中、高3个剂量组和空白对照组的对乙酰氨基酚生成速率分别为(0.53±0.18) pmol/(min·gp)、(0.50±0.14) pmol/(min·gp)、(0.35±0.14)pmol/(min·gp)和(0.49±0.16) pmol/(min·gp),各试验组与空白对照组比较对乙酰氨基酚的生成速率均无显著性差异(P>0.05).结论 体内、体外试验结果均表明穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型无诱导或抑制作用.     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响。结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min。异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50>1 000μmol/L。结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药。     

芦荟大黄素的体外肝微粒体代谢动力学和代谢酶表型研究

目的 研究芦荟大黄素在人肝微粒体(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)的代谢特征,并确定其代谢酶表型.方法 将芦荟大黄素分别与加入不同辅酶因子的人和大鼠肝微粒体孵育,LC-MS/MS法定量分析芦荟大黄素的剩余含量,考察芦荟大黄素的代谢稳定性和酶动力学.将芦荟大黄素分别与一组重组人源CYP同工酶(CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、3A4)孵育,或在HLM中加入各同工酶的特异性抑制剂,确定其CYP酶代谢表型.结果 在HLM和RLM中,芦荟大黄素均可发生依赖于NADPH的Ⅰ相代谢消除.经加热法确定,Ⅰ相代谢主要由CYP酶介导,30 min的代谢百分率分别为85.8%和81.7%,消除半衰期t1/2分别为(10.3±0.3)min和(11.5±3.3)min;内在清除率CLint分别为(420.1±10.9)和(573.4±188.2)ml/(min·kg);表观酶动力学参数Km分别为(2.4±0.9)和(3.9±1.4)μmol/L,Vmax分别为(1492±170.5)和(2783±595.8)nmol/(min·g protein).在RLM中还观察到芦荟大黄素的葡糖醛酸结合反应,30 min代谢转化率为38.5%,消除半衰期t1/2为31.6 min,CLint为(197.1±15.5)ml/(min·kg).CYP酶代谢表型研究表明,芦荟大黄素的肝微粒体代谢由多个CYP同工酶介导,其中CYP1A2、3A4、2B6和2C9的整体归一化贡献率分别为35.4%、21.9%、6.6%和6.8%.结论 芦荟大黄素在HLM和RLM中,主要发生多个CYP同工酶介导的Ⅰ相代谢消除,其中CYP1A2和3A4的代谢贡献率>20%;HLM和RLM代谢存在一定的种属差异,RLM还存在葡糖醛酸结合反应.