不同光照强度对三叶青生长发育及其总黄酮的影响

目的：研究不同光照强度对三叶青的生物量、叶绿素含量及总黄酮含量的影响,筛选三叶青最佳光照条件。方法：选用“闽选1号”三叶青扦插苗移植于大棚中,用黑色遮阳网遮阴后光照强度分别为自然光照的5%～10%、20%～30%、30%～45%,每隔45 d进行测定和取材,共8次;叶绿素计测定叶绿素相对含量,以芦丁为对照,在波长500 nm测定三叶青藤茎、叶及块根的总黄酮含量。结果：随着光照强度的增强,三叶青地上部生物量与叶绿素的含量逐渐降低,而地下部生物量与块根中总黄酮含量逐渐上升,表明荫蔽环境有利于三叶青地上部的生长,而适度增加光照强度有利于三叶青块根的发育及总黄酮的累积。结论：透光度20%～30%的条件较适合三叶青的生长发育和黄酮类成分的累积。     

珍稀药用植物三叶青种质资源研究现状

三叶青是珍稀中药材,临床应用广泛,其野生资源濒危,人工栽培难度大,品种选育落后,导致生产中种质退化,品系混杂,严重影响了临床用药的安全稳定。本文综述了近年来三叶青种质资源分类、繁育、保存、鉴定及评价等方面取得的研究进展,分析了目前其种质资源研究与利用中存在的问题,以期为三叶青产业的可持续发展提供参考。     

不同工艺三叶青制剂对人肺癌A549裸鼠移植瘤生长抑制作用比较研究

目的:观察不同工艺加工的三叶青制剂抗人肺癌A549裸鼠移植瘤的作用.方法:将相同生药剂量的三叶青冻干粉、水煎剂和饮片粉灌胃人肺癌A549移植瘤裸鼠,测定其肿瘤生长动态体积和抑瘤率.结果:三种不同工艺制备的三叶青对人肺癌A549裸鼠移植瘤均有一定的抑制作用,抑瘤率在10.5％～28.0％之间,其中三叶青冻干粉和饮片粉高、中剂量均可明显抑制人肺癌A549裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05),但肿瘤体积的动态测定表明三叶青冻干粉发挥抑瘤作用的时间要早于饮片粉.水煎剂的抑瘤作用不显著(P＞0.05).结论:三叶青冻干粉和饮片粉抗人肺癌A549裸鼠移植瘤的作用强于水煎剂,而冻干粉发挥抑瘤效果的时间要早于饮片粉.     

氮素形态对三叶青块根主要化学成分含量及抗氧化活性的影响

目的 探讨氮素形态对三叶青块根主要化学成分含量和抗氧化活性的影响,为三叶青人工栽培科学施氮提供依据.方法 以三叶青为研究材料进行容器栽培实验.采用随机区组设计,3次重复,设置0∶100,25∶ 75,50∶ 50,75∶ 25,100∶ 0等5个不同NH4+-N/NO3--N处理及酰胺态氮、不施氮处理.连续施氮2年后,...     

三叶青质量标准研究

目的:完善三叶青药材质量标准,为三叶青药材及制剂的质量控制提供科学依据。方法:参照2015年版《中国药典》及2009年版《湖南省中药材标准》等法定标准,对三叶青药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物进行测定,并制定合理的含量限度;修订了三叶青的性状及显微鉴别特征;以芦丁对照品和三叶青对照药材为对照,对三叶青进行了薄层色谱鉴别,并进行方法学考察。结果:建立的三叶青药材性状、显微特征、薄层鉴别方法具有较强的专属性,可用于药材的真伪鉴别;十批药材含水量为6.8%～11.7%,总灰分为4.2%～8.7%,酸不溶性灰分为0.16%～1.12%,醇溶性浸出物为14.7%～22.6%。结论:该研究拟定的质量标准检测方法简便、准确、专属性强,可应用于三叶青药材及制剂的质量控制。     

濒危药用植物三叶青ISSR分子标记的建立

目的对三叶青的简单重复序列-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)体系和扩增程序进行优化,并将其应用于野生三叶青种质资源的遗传分子标记。方法采用单因素试验,对三叶青ISSR-PCR反应条件中的Mg2+、d NTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶浓度和退火温度等因素进行筛选,之后结合正交试验来选择多态性高、重复性好的ISSR引物。结果建立了ISSR-PCR最佳反应体系,为25μL反应体系中含有2.5 mmol/L Mg2+、0.2μmol/L引物、0.25mmol/L d NTP、50 ng DNA模板、0.5U Taq DNA聚合酶,并利用U810等16条引物,初步构建了15份三叶青种质资源的ISSR指纹图谱,平均多态条带百分率达57.0%。结论该反应体系的稳定性和多态性良好,可满足对三叶青野生资源的遗传变异水平和结构分析的研究考察。     

紫外可见分光光度法测定三叶青中总黄酮的含量

目的:建立测定三叶青药材中总黄酮含量的分析方法;探讨不同产地三叶青总黄酮含量的差异.方法:采用紫外可见分光光度法,以芦丁为对照品,在波长500nm处对样品中的总黄酮进行含量测定.结果:芦丁在7.52～45.12mg/L有良好的线性关系(r=0.9996),该法的平均加样回收率为99.10%的,RSD为1.30%(n=9).产地不同,总黄酮含量也存在差异.结论: 所建立的方法准确、简便、快速,重现性好,适用于三叶青药材中黄酮含量的测定.     

Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响

目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC)EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制。方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5~20 g·L~(-1))三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P0.05,P0.01),三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一。     

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓源性抑制细胞的作用

目的研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓源性抑制细胞(MDSCs)的作用,探讨三叶青黄酮抗肿瘤机制。方法 40只C57BL/6雌性小鼠随机分为5组,三叶青黄酮高(100 mg/m L)、中(50 mg/m L)、低剂量组(25 mg/m L)、造模组及正常组,每组8只。除正常组外各组小鼠建立肺癌模型,24 h后各组灌胃给药。14天后处死小鼠,剥取瘤组织,计算抑瘤率;流式细胞仪检测小鼠脾脏中MDSCs(GR-1~+CD11b~+)、CD4~+T和CD8~+T细胞的表达;酶联免疫吸附法测定小鼠外周血中一氧化氮合成酶(i NOS)和精氨酸酶1(Arg-1)表达。结果三叶青黄酮高、中、低剂量组抑瘤率分别为:44. 3%、29. 2%、15. 4%。与正常组比较,造模组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)及Arg-1、i NOS含量及CD8~+T比例增高(P 0. 01)、CD4~+T比例、CD4~+T/CD8~+T比值降低(P 0. 01)。与造模组比较,三叶青黄酮各组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)含量、CD8~+T细胞比例、Arg-1、i NOS含量降低,CD4~+T细胞比例、CD4~+T/CD8~+T比值升高(P 0. 01)。与三叶青黄酮高剂量组比较,三叶青黄酮中剂量及低剂量组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)含量、CD8~+T细胞比例、Arg-1含量升高,CD4~+T细胞比例、CD4~+T/CD8~+T比值降低(P 0. 05,P 0. 01),同时三叶青黄酮低剂量组i NOS含量增高(P 0. 01)。结论三叶青黄酮可通过改善荷瘤小鼠肿瘤免疫抑制状态发挥抗肿瘤作用,其机制可能与三叶青黄酮可下调MDSCs及其相关炎症因子的表达有关。     

海拔高度对三叶青产量和黄酮含量的影响

目的:通过研究浙江丽水市不同海拔高度三叶青产量和总黄酮含量变化,为扩大三叶青生产适宜区提供理论参考。方法:采用大田小区试验,三叶青产量以鲜品称重测定,总黄酮含量用紫外分光光度法测定。结果:三叶青产量随海拔升高逐步增加然后递减的变化规律,海拔618 m产量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05),305~618 m海拔范围三叶青平均产量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05)。三叶青总黄酮含量在413~730 m海拔范围内随海拔升高而增加,海拔730 m黄酮含量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05)。结论:305~618 m海拔范围有利于三叶青产量增加,520~730 m海拔范围有利于三叶青中黄酮含量增加,因此,在520~618 m范围有利于提高三叶青产量和黄酮含量,是三叶青最适宜种植海拔范围。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植性肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响

目的：观察三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。方法：采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物高、中、低剂量对瘤重、抑瘤率、脾指数、胸腺指数的影响,ELISA法检测血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α含量。结果：三叶青各剂量组瘤重均低于模型组（P〈0.05或P〈0.01）,并呈剂量依赖性;高、中剂量组脾指数、胸腺指数较模型组增高,差异具显著性（P〈0.05）;三叶青高、中剂量组IFN-γ、TNF-α含量高于模型对照组,差异具显著性（P〈0.05）。结论：中药三叶青乙酸乙酯提取物具有抑制Lewis肺癌移植瘤作用,且能保护实验动物的细胞免疫器官,提高免疫功能。     

三叶青提取物对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用及急性毒性实验

三叶青Radix Tetrastigmae为葡萄科植物三叶崖爬藤Tetrastigma hem sleyanumD iels et G ilg的干燥块根,分布于我国浙江,江西,福建,台湾,湖北,广东,广西,四川,贵州及云南等省区[1],具有清热解毒,祛风化痰,活血止痛的功能,主要用于治疗高热惊厥、腹痛、肺炎、哮喘及跌打损伤等症[2]。在民间有用三叶青治疗肝炎,但尚未见相关的实验报道。笔者采用CCL4致小鼠急性肝损伤药理模型,研究了三叶青提取物对肝损伤小鼠的保护作用,并考察了三叶青提取物的急性毒性,为其临床应用提供了药理学依据。1材料1.1药物和试剂三叶青干品,购于浙江省中医院中…     

三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用.方法 通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用.结果 三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并具有浓度依赖性.光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰.结论 三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,有抗肝癌的药用价值.     

不同月份三叶青中8种有效成分含量变化

建立高效液相色谱法同时测定三叶青中绿原酸、芦丁、虎杖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、槲皮素和山柰酚含量的方法,研究不同月份三叶青中8种有效成分的含量变化。方法:采用Zorbax SB C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～30 min,10%～30%A; 30～40 min,30%～95%A; 40～45 min,95%A; 45～60 min,95%～10%A);流速0. 8 m L·min-1;检测波长320 nm;柱温25℃。结果:绿原酸、芦丁、虎杖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、槲皮素和山柰酚在13. 7～549 mg·L~(-1)(r=0. 999 0),12. 6～253 mg·L~(-1)(r=0. 999 1),15. 8～316 mg·L~(-1)(r=0. 999 0),14. 7～147 mg·L~(-1)(r=0. 999 2),8. 8～88 mg·L~(-1)(r=0. 999 1),7. 9～79 mg·L~(-1)(r=0. 999 5),8. 6～172 mg·L~(-1)(r=0. 999 1),8. 9～89 mg·L~(-1)(r=0. 999 4)与峰面积线性关系好,有良好的准确度、精密度和重复性。7,8月份绿原酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和虎杖苷的相对含量最高; 6月份槲皮素的相对含量最高; 4,5月份白藜芦醇和山柰酚的相对含量高; 11月份紫云英苷的相对含量最高。结论:通过对不同月份三叶青块根中8种有效成分的含量动态变化监测,可为三叶青生产和药材质量控制提供参考。     

三叶青提取物抗人类免疫缺陷病毒活性研究

目的:探讨三叶青提取物对人类免疫缺陷病毒(HIV)活性的抑制作用。方法:以不同HIV-1病毒株(实验株HIV-1_(IIIB)、HIV-1耐药株HIV-174V、HIV-1临床分离株HIV-1_(KM018))为研究对象,通过合胞体抑制等多种方法检测三叶青提取物对不同病毒株的抑制作用,MTT法、ELISA法及荧光法分别检测三叶青提取物体外细胞毒性、提取物对HIV-1逆转录酶及蛋白酶活性的抑制作用。结果:三叶青提取物对C8166、MT4、PBMC的体外细胞毒性作用CC50值分别为158.73μg/m L、96.42μg/m L、120.67μg/m L。三叶青提取物对不同HIV-1病毒株有不同程度的抑制作用,EC50值在3.54~78.56μg/m L之间,TI值在2.03~43.18之间;其中实验株HIV-1_(IIIB)急性感染C8166细胞抑制HIV-1 p24抗原表达EC50值最大,C8166细胞形成合胞体TI值最大。提取物对HIV-1慢性感染细胞与正常T淋巴细胞C8166融合阻断、重组HIV-1逆转录酶抑制的EC50值分别为14.79μg/m L、170.15μg/m L。结论:三叶青提取物体外对HIV-1活性有一定的抑制作用,且可能是通过抑制HIV-1病毒至细胞及HIV-1逆转录酶活性达到抗HIV活性的目的。     

三叶青的蒸腾作用与气孔结构研究

目的 以浙江台州、福建闽侯和顺昌3个产地的1年生三叶青Tetrastigma hemsleyanum叶片为实验材料,研究不同光照强度对三叶青植株的蒸腾作用与气孔结构的影响。方法 采用扫描电镜技术观察不同品种三叶青叶片的气孔结构与变化,并测定在不同光照强度 [0～2 000 μmol/(m²·s)] 条件下叶片的蒸腾速率、气孔导度、水分利用率、净光合速率,寻找三叶青栽培中最适光照强度。结果 三叶青的气孔仅存在于叶片下表皮,呈环绕类型平行分布。相同温度下加重了光照强度,浙江台州产地和福建闽侯产地三叶青的净光合速率、气孔导度以及蒸腾速率随着光照强度增加表现出先升高后下降趋势。同时,福建顺昌产地三叶青的净光合速率、气孔导度以及蒸腾速率均显示上升趋势。福建闽侯产地三叶青的光饱和点为600 μmol/(m²·s),顺昌产地三叶青的光饱和点为1 900 μmol/(m²·s),水分利用率保持较高状态。结论 产地和外界光照强度都是影响三叶青蒸腾作用的重要因素,有利于三叶青的块根生长,促进植株体内黄酮类化合物积累。     

三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞株的抑制作用

目的:考察三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞AGS体外增殖的影响.方法:清洁级小鼠随机分为5组:三叶青水提物高、中、低(20,10,5 g ·kg-1)剂量组、环磷酰胺阳性对照( CTX,5 g·kg-1)组及阴性对照组(蒸馏水).各组均ig给药,每次20 mL· kg-1,每天2次,连续给药3d,最后1次给药后1h断头取血,4℃静置4h,3 000 r ·min-1离心20 min,分离血清,56℃灭活30 min后,用0.22 μm的滤膜过滤除菌,-20℃保存备用.对数生长期的AGS细胞经0.25％胰蛋白酶消化后,配成2.5×104/L的细胞悬液接种于96孔培养板,培养24 h后,加入不同浓度的三叶青水提物溶液及其含药血清,作用48 h后,采用MTT比色法在570 nm波长下测定A,观察不同浓度三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞的抑制作用.结果:1 ～40 g·L-1三叶青水提物对AGS细胞有显著的抑制作用(P＜0.01),IC50为13.15 g·L-1;三叶青水提物含药血清高、中、低(20,10,5 g·kg-1)剂量组也可显著地抑制AGS肿瘤细胞的增殖(P＜0.01),IC50为70.06 g·L-1.二者均呈现出剂量依赖性.结论:三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞均有较强抑制作用.     

三叶青黄酮干预荷癌小鼠Treg细胞生成及其CD152表达的研究

目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠脾脏Treg细胞生成及其CD152表达的影响。方法:将小鼠随机分为非造模组、生理盐水组、塞来昔布组、三叶青黄酮高、中、低剂量组,除非造模组外,其它各组皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,接种24 h后开始灌胃给药,每天1次,非造模组不灌胃。分别于给药14、23天后,处死半数动物,取脾脏,分离单个核细胞,流式细胞术测定脾脏单个核细胞中Treg细胞比例及CD152表达。结果:第23天时,与生理盐水组比较,塞来昔布组、三叶青黄酮高、中剂量组小鼠的瘤体明显减小,差异均有统计学意义(P0.01)。三叶青黄酮各剂量组间瘤体比较存在差异(P0.05),瘤体大小依次为:三叶青黄酮高剂量组三叶青黄酮中剂量组三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组抑瘤效果与中剂量组相近(P0.05)。与非造模组比较,其它各组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。第23天时,与生理盐水组比较,各给药组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。三叶青黄酮各剂量组间Treg细胞比例比较存在差异(P0.01),Treg细胞比例依次为:三叶青黄酮高剂量组三叶青黄酮中剂量组三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组Treg比例与中剂量组相近(P0.05)。塞来昔布组下调CD152表达效果最佳,与三叶青黄酮中、低剂量组比较有显著差异(P0.05),三叶青黄酮各剂量组间无明显差异(P0.05)。结论:三叶青黄酮的抑瘤效果可能与下调Treg细胞比例和CD152表达有关,逆转免疫抑制,从而起到抗肿瘤的作用     

三叶青扦插繁殖技术研究

目的 研究三叶青扦插育苗技术.方法 研究了生根剂、插穗年龄和基质对插穗生根的影响.结果 生根剂、插穗年龄对插穗生根的影响明显,基质对插穗生根的影响不明显.结论 2～3年生老枝1 000mg/LIBA浸溃10s后扦插于黄土中生根效果最佳.     

三叶青实验研究概述

从化学成分、药理作用、分离方法三方面总结三叶青实验研究概况,发现目前研究所得三叶青化合物种类、数量各异,三叶青化学成分的提取分离尚无统一标准;三叶青具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、镇痛、抗菌、保肝、调节免疫等药理作用,但其发挥作用的有效活性部位、作用机制等尚不明确,有待进一步探讨。