热休克对心肌细胞中αB—晶状体蛋白移位及表达的影响

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行处理,观察αB-晶状体蛋白在细胞内的分布及其表达变化。结果：（1）Western-blot显示热休克后胞浆中可溶性αB-晶状全蛋白迅速移位至细胞内的不溶性结构中,2h左右基本复位;（2）免疫双荧光细胞化学显示热休克导致αB-晶状体蛋白在热休克时主要移向Z线及核膜等细胞骨架部位;（4）Norhern-blot显示热休克诱心肌细胞αB-晶状体蛋白mRNA的表达增加。热休克处理使αB-晶状体蛋白迅速移位至细胞骨架,表明其在心肌预适应早期相中可能发挥保护作用。而αB-晶状体蛋白的诱导表达,可能是心肌预适应延迟相保护的重要机制之一。     

晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的 研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P＜0.01),稳转CRYAB siRNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64％,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关.     

HSF4b基因敲除下调αB-晶状体蛋白表达介导白内障发生

目的阐明热休克转录因子4b（HSF4b）对αB-晶状体蛋白（αB-crystallin, CRYAB）的调控在白内障发病过程中的作用及其机制。方法采用qPCR、Western印迹法和免疫荧光检测Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB和HSF4的表达情况;通过凝胶迁移实验、染色质免疫共沉淀、双报告基因检测等方法研究HSF4b对CRYAB的调控作用;通过免疫荧光分析和免疫共沉淀研究CRYAB与波形蛋白（vimentin, VIM）的相互作用。结果Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB表达下调;体外试验证实HSF4b和CRYAB的表达呈现正相关性;HSF4b直接与CRYAB启动子结合,激活CRYAB表达的转录过程;CRYAB与VIM存在相互作用。结论阐明了Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠中晶状体发育异常和白内障形成的分子机制。鉴定出CRYAB是HSF4b的下游调控分子。CRYAB对VIM具有稳定作用,有可能是抗白内障药物的作用靶点。     

αB—晶状体蛋白在保护过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行预处理,以诱导αＢ－晶状体蛋白的表达,并观察其对１ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１的过氧化氢所致心肌细胞损伤的保护作用。发现：热休克预处理组心肌细胞中αＢ－晶状体蛋白表达明显增加,Ｈ２Ｏ２所致的细胞死亡率及ＬＤＨ释放率降低,总抗氧化能力增强;Ｈ２Ｏ２可引起αＢ－晶状体蛋白从胞浆向胞核及微丝位。     

αB—晶状体蛋白在大鼠心肌缺血预适应早期相中的作用

以大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ离体灌流心脏为模型,观察αＢ－晶状体蛋白在预适应早期保护阶段的变化。结果显示：经缺血预处理后胞浆中可溶性αＢ－晶状体蛋白迅速移位至细胞内的不溶性结构中,１５ｍｉｎ,３０ｍｉｎ逐渐复位,６０ｍｉｎ时已接近全部复 预适应后的心肌对缺血再灌注损伤的耐受性明显增强,表现为心肌收缩力及冠脉流量明显高于缺血－再灌损伤组,肌酸磷酸激酶释及心肌丙二醛含量明显低于缺血－再灌损伤组。提示缺     

热休克蛋白及其研究概况

1　热休克蛋白的概况　　热休克蛋白 (heatshockproteins ,HSPs)是一种进化上高度保守的细胞应激蛋白 ,存在于细菌到人类的各种生物中。早在 196 2年 ,Ritossa发现果蝇在温度升高 (热休克 )时 ,其唾液腺多染色体发生蓬松现象并有转录活性 ,推测这一现象是由于与氧化磷酸化的解偶联相关的某些化学修饰引起的 ,他把这种现象称为“热休克反应”。在研究过的所有的生物中 ,从原核的细菌到哺乳动物包括人类 ,对热的反应有共同之处 ,即温度升高时细胞内的大多数的蛋白质合成停止 ,而HSPs却大量生成 ,即使某些嗜热性微生物 ,其适宜生长温度在 5 …     

热休克蛋白70与脑缺血

热休克(heatshock,HS)现象是Ritossa(1962)在观察果蝇幼虫唾液腺细胞染色体在过热环境中发生形态变化时首先发现的。当环境温度高于正常生理体温(4～6)℃时,染色体上会出现特殊的膨突。Tissiers(1974)等发现这一现象与细胞中一类特殊蛋白质合成有关,他们称这种蛋白质为热休克蛋白(heatshockprotein,HSP),这种现象广泛存在于原核生物和真核生物中,在细菌到哺乳动物体内均可见HSP表达[1]。现已证明除热外,其它如缺血缺氧、重金属离子、乙醇、H2O2 、氨基酸类似物、病毒感染等许多应激因素均可造成热休克反应,诱导细胞合成HSP。HSPs的主要生物功能是提高细胞对应激因素的耐受,维持细胞蛋白自稳,使细胞维持正常生理功能。根据HSP的同源性和分子量大小,Morimoto将其大致分为4个家族:HSP90家族(83-90kD)、HSP70家族(66 -78kD)、HSP60家族和小HSP家族。其中HSP70与心脑缺血、癫痫、多发性硬化、感染、肿瘤等关系密切,被认为其主要作用是促进新生多肽键的正确折叠,维持解聚蛋白恰当构型,分子重排以及新生多肽链在细胞内、跨膜转运有重要的辅助作用,...     

热休克蛋白70的肺保护作用研究

热休克蛋白(HSP)是生物细胞受到伤害性刺激时,由HSP基因编码合成的一类生物进化上最保守的蛋白,具有抗炎、抗氧化、抑制凋亡以及分子伴侣作用,HSP对各种刺激还具有迅速的反应能力,在许多细胞活动中扮演着重要的角色。而其中最受关注的是HSP70,尽管其在生理状态下,表达量较少,但可通过热预处理、基因转染以及药物等方法诱导其产生,从而发挥脏器保护作用。文章综述其在急性肺损伤中的作用以及相关机制的机制研究进展。     

CT-B Conjugates顺行示踪显色α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维保护作用的实验研究

目的 观察α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维的保护作用.方法 将成年Long evens大鼠26只,其中10只用于提取α-晶状体蛋白,另外16只分成4组,分别为正常对照组和伤后2,4,6周组,每组4只.损伤神经后分别右眼经玻璃体腔注射浓度为1×10 -5g/L的α-晶体蛋白5 μl,左眼牛血清白蛋白5 μl,分别于伤后2,4,6周进行视神经取材.取材前48 h,在每只眼玻璃体腔中注射CT-B(霍乱毒素B亚单位)Conjugates 2.5 μl,取材固定脱水并行冰冻切片后进行激光共聚焦照相(488 nm波长光)观察.结果 CTB Conjugates标记的夹伤视神经中可见线状条索神经纤维染色,并呈现一定扭曲,夹杂点状或者小团块状染色.α-晶状体蛋白组的荧光强度显著高于牛血清白蛋白组.结论 CTB Conjugates顺染视神经示踪技术是观察和研究损伤后视神经病理变化的有效和简便的方法,α-晶状体蛋白对损伤后的视神经纤维具有保护作用.     

αB-晶状体蛋白促进体外培养人RPE细胞的增殖

目的 测定αB-晶状体蛋白在体外培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)中的表达,探讨αB-晶状体蛋白对体外培养人RPE细胞增殖的影响.方法 传代培养人A-RPE19细胞系,免疫荧光技术检测αB-晶状体蛋白在RPE细胞中的表达.用不同稀释浓度(体积比分别为1/102、1/103、1/104、1/105、1/106)的αB-晶状体蛋白以及其抗体干预各组(对照组、蛋白组、抗体组)细胞,MTT方法检测不同时间点各组细胞光密度值,流式细胞术检测各组细胞不同时间点的周期及凋亡情况.结果 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达;在48 h,浓度为1/104～1/102时,3组细胞的光密度值差异有统计学意义(P＜0.05);蛋白组与对照组相比,0～48 h蛋白组的G1期比例减小,S、G2期比例增加,抗体组与对照组相比,G1期比例增加,S、G2期比例减少(P＜0.05,P＜0.01);48 h时3组之间凋亡细胞的构成比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达,并对体外培养人RPE细胞增殖起明显促进作用.     

α晶状体蛋白与白内障的研究进展

晶状体是人体内蛋白含量最高的组织结构。白内障被认为是一种构象性疾病,当α晶状体蛋白受到氧化损伤,晶状体蛋白错误折叠增多,加剧蛋白质变性、聚集和光散射,这可能是白内障发生的关键环节。α晶状体蛋白分子伴侣活性保护因子的发现,将对白内障发病机制和临床治疗研究开辟新领域。本文综述了近年来对α晶状体蛋白结构功能,表达部位及分子伴侣活性影响因素的研究。     

热休克蛋白90α与胃癌的关系

热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP 90α)是主要的分子伴侣蛋白质,为生物进化过程中高度保守的蛋白质,在体内与体外有很多生物学活性,有关的基础研究颇多,近来发现其与肿瘤的关系密切,但与胃癌关系的研究报道极少。作者对近几年来HSP 90α的基础研究、HSP 90α与肿瘤关系的研究以及HSP 90α与胃癌的关系作一综述。     

组成型αB晶体蛋白在热休克蛋白核转录因子1敲除小鼠心肌中的表达

目的:了解热休克蛋白核转录因子1(HSF1)对小鼠心肌组成型αB晶体蛋白(αB-Crystallin,αBC)表达的影响.方法:用western blot和免疫组织化学的方法,测定组成型αBC在HSF1基因野生型(hsf1+/+)和HSF1基因敲除型(hsf1-/-)小鼠心肌中的表达.结果:αBC在hsf1-/-和hsf1+/+小鼠心肌表达量分别为68.42±4.16和100.00±7.58(心肌可溶性组分,P＜0.05),20.35±1.01和37.55±1.91(心肌不可溶性组分,P＜0.05);免疫组化显示αBC在hsf1-/-心肌细胞内的表达信号较hsf1+/+明显减弱.结论:HSF1基因是介导组成型αBC基因表达重要的、但不是惟一的因子.     

α晶状体蛋白研究进展

晶状体是人体内蛋白含量最高的组织结构。包含有α-、β-和γ-晶状体蛋白，其中主要是α晶状体蛋白占50％。自内障被认为是一种构象性疾病，当α晶状体蛋白受到氧化损伤、紫外线辐射、糖基化等修饰，其分子伴侣活性下降，丧失对其它晶状体蛋白及酶的保护，使高分子量蛋白片断增多，晶状体内蛋白质从可溶性晶状体蛋白转为不可溶性晶状体蛋白，晶状体蛋白错误折叠增多，     

热休克蛋白B1抑制HBV复制的研究

目的 探讨热休克蛋白B1 (heat shock protein B1,HSPB1)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响.方法 采用Western blot检测正常肝细胞系(HepRG)和HBV稳定复制细胞系(HepAD38和HepG2.2.15)中HSPB1的蛋白水平.在HBV稳定复制细胞系(HepAD38和HepG2.2.15)中转染pCMV6-HSPB1质粒及对照质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对HBV复制中间体表达的影响;qRT-PCR检测HSPB1过表达对HBV3.5 kb mRNA表达的影响;ELISA检测HSPB1过表达对HBV s抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)分泌的影响.在肝癌细胞系Huh-7中共转染pCH9/3091和pCMV6-HSPB1质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对瞬时转染的HBV复制中间体表达的影响.结果 HSBP1在HepAD38和HepG2.2.15中的表达明显低于HepRG.HSPB1在HepAD38和HepG2.2.15细胞中成功过表达,在过表达HSPB1的HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV复制中间体水平以及3.5 kb mRNA水平均降低,细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的分泌水平也降低.HSPB1在转染pCH9/3091的Huh-7细胞中成功过表达,HSPB1过表达抑制了瞬时表达的HBV的复制水平.结论 HSPB1可以抑制HBV复制.     

热休克蛋白90在抑制细胞凋亡中的作用

目的：探讨热休克蛋白90（HSP90）是否能够抑制肿瘤坏死因子α（TNF-α）和放线菌酮（CHX）协同诱导的细胞凋亡.方法：采用电穿孔技术建立稳定过表达HSP90的细胞克隆,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.结果：在稳定过表达HSP90的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡;在TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡中,HSP 90持续稳定存在12 h以上.结论：HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.     

组成型αB晶体蛋白在热休克蛋白核转录因子1敲除小鼠心肌中的表达(英)

目的:了解热休克蛋白核转录因子1(HSF1)对小鼠心肌组成型αB晶体蛋白(αB-Crystallin,αBC)表达的影响。方法:用western blot和免疫组织化学的方法,测定组成型αBC在HSF1基因野生型(hsf1+/+)和HSF1基因敲除型(hsf1-/-)小鼠心肌中的表达。结果:αBC在hsf1-/-和hsf1+/+小鼠心肌表达量分别为68.42±4.16和100.00±7.58(心肌可溶性组分,P<0.05),20.35±1.01和37.55±1.91(心肌不可溶性组分,P<0.05);免疫组化显示αBC在hsf1-/-心肌细胞内的表达信号较hsf1+/+明显减弱。结论:HSF1基因是介导组成型αBC基因表达重要的、但不是惟一的因子。     

热休克蛋白对心肌缺血再灌注损伤的细胞保护作用

心肌缺血是缺血性心脏病的主要病理改变。对于心肌缺血在急性心肌梗塞过程中的发病机理的研究已深入到分子水平，心肌缺血后的再灌注在某些情况下会引起损伤（再灌注损伤）。本篇主要探讨热休克蛋白对心肌缺血－再灌注损务的细胞保护作用。