乙肝病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA分布的分子生物学检测

应用原位杂交技术观察１２例血清乙肝病毒标志物阳性的肾炎病人肾组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状况。结果表明，采用地高辛素记ＨＢＶＤＮＡ全长段探针ＩＳＨ时１０例组织中显示有ＨＢＶＤＮＡ。这１０例Ｓ＋Ｃ段探针检测仍阳性者８例。ＨＢＶＤＮＡ最常见于肾小管上皮细胞内，呈核型或浆核型，其次是肾小球系膜区和毛细血管袢。     

原位杂交检测HBV相关性肾炎患者肾组织HBV DNA

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）对肾脏的致病作用。方法 应用地高辛素标记的ＨＢＶ ＤＮＡｘ＋ｃ段探针原位杂交,检测１３例ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检组织石蜡包理切片ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状况。结果 ＨＢＶ ＤＮＡ阳性７例（５３．８％）。阳性信号主要见于肾小管上皮细胞和肾小球系膜细胞,其次是肾小球上皮细胞。呈核型或浆核型。其病理类型均为膜性肾病。结论 ＨＢＶ相关性膜性肾病患者肾组织内存在ＨＢＶ ＤＮＡ,     

乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾组织中HBsAg、HBcAg的检测

目的观察乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)患者肾脏组织中HBsAg、HBcAg的表达情况.方法以63例HBV-GN患者为研究对象,另随机选择20例非乙型肝炎病毒相关性肾炎(NHBV-GN)患者、12例血清HBV标志阳性的其他肾病(肾结核、肾结石、肾细胞癌、肾萎缩等)患者作为对照组,用免疫组化方法检测肾穿刺活检组织HBsAg、HBcAg的表达.结果 HBV-GN患者肾脏组织中均可检出HBsAg、HBcAg阳性颗粒,阳性率分别为76.2%(48/63),42.9%(27/63);20例NHBV-GN患者肾组织HBsAg、HBcAg均未检出,与HBV-GN患者相比有统计学差异(P＜0.05);12例血清学HBV标志阳性的其它肾病患者肾组织HBsAg、HBcAg阳性率均为75%,与HBV-GN患者相比无统计学差异(P＞0.05).血清HBeAg 阳性与血清HBeAg阴性的HBV-GN患者相比,肾脏组织中HBsAg、HBcAg表达情况经统计学比较,无显著性差异(P＞0.05).结论 HBV在肾脏中定位及复制,不仅可引起肾脏损害,并与病毒的保存及乙型肝炎的传播可能有关.     

霉酚酸酯治疗乙肝病毒相关性肾炎的临床研究

目的前瞻性研究霉酚酸酯(MMF)治疗乙型肝炎病毒相关性肾炎的临床疗效和安全性.方法选择血清HBV标记物阳性、病理诊断为乙型肝炎病毒相关性肾炎的患者共18例,随机分为两组,每组9例,第一组采用MMF联合皮质激素治疗方案,MMF初始剂量1.0～1.5g/d,同时口服强的松0.5～0.8mg·kg-1·d-1.第二组采用皮质激素治疗,强的松0.5～0.8mg·kg-1·d-1.两组中有HBV-DNA复制的均给予干扰素-α或拉米夫定治疗.结果①治疗3个月时,MMF组尿蛋白定量如(2.7±2.5)g/d较治疗前的(4.9±2.9)g/d明显减少(P＜0.05),血浆白蛋白为(34.7±7.3)g/L较治疗前的(26.0±6.2)g/L明显升高(P＜0.05);对照组尿蛋白定量和血浆白蛋白与治疗前相比无显著改善(P＞0.05).治疗6个月时,MMF组尿蛋白定量为(1.4±0.7)g/24h较治疗前的(4.9±2.9)g/24h明显减少(P＜0.01),血浆白蛋白为(35.1±5.6)g/L较治疗前的(26.0±6.2)g/L明显升高(P＜0.01).对照组尿蛋白定量为(2.7±1.6)g/24h较治疗前的(5.6±2.2)g/24h明显减少(P＜0.05),血浆白蛋白为(33.8±9.5)g/L较治疗前的(26.2±6.0)g/L显著升高(P＜0.05).治疗6个月时MMF组尿蛋白定量为(1.4±0.7)g/24h显著低于对照组的(2.7±1.6)g/24h(P＜0.05).MMF组6个月时的完全缓解率(44.4%)与对照组(11.1%)比较无显著性差异(P＞0.05),总有效率(88.9%)与对照组(22.2%)相比有显著性差异(P＜0.05).②治疗6个月时MMF组患者的甘油三酯和胆固醇水平均较治疗前明显降低(P＜0.05),对照组则无显著变化.结论MMF联合低剂量皮质激素用于治疗乙型肝炎病毒相关性肾炎在总有效率及减少蛋白尿、降低血脂等方面均优于单纯应用皮质激素疗法,且耐受性好,未见明显毒副作用.     

乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎

乙型肝炎病毒(HBV)感染除导致急、慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌外,还可并发多种肝外损害,HBV相关性肾炎就是其一。现针对HBV相关性肾炎的流行病学、病因学、发病机制、病理类型、临床表现、诊断、鉴别诊断、治疗和预后等研究现状进行综述。     

小儿乙肝病毒相关性肾炎发病机理的研究进展

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染可引起多种多样的肝外病变，肾小球肾炎（ＧＮ）是肝外病变的主要表现之一。１９７１年Ｌｏｍｂｅｓ首次报道并论证了ＨＢＶ抗原对某些肾炎的致病作用，引起了国内外学者的重视与研究。但其发病机理上的联系尚未完全清楚，是直接相关还是间接影...     

成人原发性肾炎肾组织乙肝病毒抗原沉积的研究

探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与成人原发性肾小球肾炎（肾炎）发病的联系。方法：用间接免疫荧光法检测１６９例成人原发性肾炎患者肾活检冰冻切片组织ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的沉积情况。按血清ＨＢＶ感染标志物检测分血清阳性和阴性两组进行分析。结果：肾组织ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的阳性率分别为１４．２％和１０．９％。ＨＢＶ抗原（ＨＢＡｇ）总阳性率为１５．４％（２６／１６９）。其中系膜毛细血管肾炎、膜性肾病和系统     

肾炎肾组织中HBV DNA的检测及其存在意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交和免疫组化技术，检测１８例肾穿刺组织中ＨＢＶ ＤＮＡ和ＨＢＶ相关抗原的阳性情况。结果表明１５全ＢＶ ＤＮＡ阳性，其中８例成人和４例儿童为整合型，另３例儿童为游离型，有１３例ＨＢＶ抗原阳性。除肾小球外，肾小管亦表达ＨＢＶ抗原，提示ＨＢＶ ＤＮＡ在存在状态在成人主要为整合型，在儿童有整合型和游离型。     

乙肝病毒携带产妇血清、乳汁HBVDNA检测及临床意义

目的研究分析HBV携带产妇血清、乳汁中HBVDNA含量以及与血清HBV标志物之间的关系，探讨HBV携带产妇母乳喂养的安全性。方法采用荧光定量PCR技术检测HBV携带产妇血清、乳汁中HBVDNA含量。结果32例HBeAg阳性产妇血清和乳汁中HBVDNA阳性率分别为100％和78％（X^2=7．86，P〈0．05），其中HBVDNA〉10^7拷贝／mL各占75％和6％（X^2=31．35，P〈0．05）；38例HBeAg阴性产妇血清和乳汁中HBVDNA阳性分别为63％和26％（X^2=10．43，P〈0．05）。结论HBV携带产妇乳汁具有一定的传染性，乳汁的传染性低于血液；HBeAg阳性产妇经母乳传播HBV的机率高于HBeAg阴性产妇。     

尿HBV DNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎诊断中的价值

目的探讨尿HBV DNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊断价值。方法本研究共入组152例患者,分为3组：乙型肝炎病
毒相关性肾炎组66例,非乙型肝炎病毒相关性肾炎组66例,慢性乙型肝炎无肾损害患者20例。应用PCR方法检测血尿HBV
DNA;乙肝五项定量采用酶联免疫法检测。结果乙型肝炎病毒相关性肾炎患者中尿HBV DNA阳性率33%（22/66）,两对照组
中无1例阳性。尿HBV DNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊断特异性高达98%,具有良好的阳性预测值（0.96）和阴性预测值
（0.60）。尿HBV DNA或尿HBV DNA与血清HBeAg联合诊断价值优于尿HBV DNA与血清HBV DNA、血清HBsAg、血清
HBeAg联合对乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊断价值。结论尿HBV DNA可能作为乙型肝炎病毒相关性肾炎的一种新无创辅
助诊断指标。
     

原位PCR检测肾组织内的乙型肝炎病毒

采用原位ＰＣＲ技术检测了肾小球肾炎患者活体组织。证实乙型肝炎病毒＜ＨＢＶ＞相关性肾脏中ＨＢＶ的存在。从分子病理学水平为探讨ＨＢＶ相关性肾炎发病机理提供了新的依据。     

Preliminary Studies of in situ Hybridization in Routine Paraffin Embedded Liver Tissue Sections with iotinylated HBV DNA Probe:Localization and Morphology of HBV DNA in Various Types of Liver Diseases

The in situ hybridization of HBV DNA with biotinylated probe informalin-fixed and paraffin-embedded liver tissue sections was performed and thelocalization and morphology of HBV DNA in various types of chronic liver diseases wereobserved.25 out of the 75 cases studied were HBV DNA positive (33.3%).HBV DNA inhepatocytes was demonstrated as numerous coarse grains in cytoplasm and occasionally afew grains in individual nuclei.The distribution of the HBV DNA positive hepatocytes inthe sections was in 3 types,i.e.,the diffuse type (Type I,4/25,16%),the focal type (Type Ⅱ,20/25,80%),and the scattered type (Type Ⅲ,1/25,4%).The HBV DNA grains incytoplasm might be condensed (Type a) or sparsed (Type b) depending on the number of theHBV DNA grains.The different distribution patterns and the amount of HBV DNAgrains might be a reflection of the replication activity and the state of infectivity of HBV.HBV DNA positive hepatocytes were found only in the tissues contiguous to the cancertissue in cases with hepatocellular carcinoma with cirrhosis.     

非放射性分子杂交法检测HBV感染

用非放射性标记的ＨＢＶ－ＤＮＡ探针检测３７１份至少有一项ＨＢＶ免疫学标志阳性血清和５１０份对照血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５１０份对照血清和７９份仅抗－ＨＢｓ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ均为阴性，８２份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率为１００％，１０３份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性血清的检出率为７９．６％，７６份ＨＢｓＡｇ阳性。ＨＢｅＡｇ阴性、但抗－ＨＢｅ阳性血清的检出率为８０．３％，２９２份ＨＢＶ不同感染阶段血清总检出率为７５％。非放射性分子杂交法可直接检测出ＨＢＶ的复制，由于该法亦可定量，故还可用于判断血清传染程度和血清病毒的含量。     

乙型肝炎病人血清HBV DNA水平与血清标志物的关系

目的研究乙型肝炎病人血清标志物与HBV DNA的关系。方法血清HBV DNA定量检测应用FQPCR法,抗原、抗体检测应用ELISA法。抗原、抗体分别与DNA定量进行相关性分析。结果HBeAg的OD值与DNA定量呈正相关（P＜0.001）,HBeAg的OD值与HBV DNA定量不相关（P＜0.2）,抗-HBe与DNA定量呈负相关（P＜0.001）。结论血清HBeAg的OD值可很好反映体内HBV的复制程度,HBeAg的OD值与病毒复制程度无关。HBeAg转化为抗-HBe后病毒复制水平下降。     

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBVDNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法　采用实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测 2 0 0份HBV感染者血清中HBVDNA含量 ,同时用全自动免疫分析仪检测HBV 5项血清标志物。结果　 2 0 0份血清中 ,乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBVDNA阳性率有差异 ,HBsAg、HBeAg和 (或 )HBcAb阳性组阳性率约为 98.1% ,其中 96 %以上HBVDNA≥ 10 4copy/ml;HBsAg、HBcAb和 (或 )HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为 76 .5 % ,但其中 90 %以上HBVDNA≤ 10 4copy/ml;单纯HBV抗体阳性组HBVDNA阳性率约为13.0 % ,但均为HBVDNA≤ 10 3 copy/ml。三组间HBVDNA阳性率及分布均有明显差异 (P <0 .0 5 )。而且HBVDNA含量与疾病严重程度相关。结论　FQ PCR检测HBVDNA含量结合血清病毒标志物的检测结果对乙型肝炎的临床诊断与病情判断有重要意义     

原位杂交研究慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织内HBV DNA清除模式

用地高辛素探针原位杂交技术研究52例慢性HBV感染者肝内HBV DNA分布,发现在病毒高复制期,HBV DNA阳性肝细胞以弥漫性分布为主,肝细胞HBV DNA表型为胞浆型和核型,在病毒低复制期肝内HBV DNA阳性肝细胞以小叶聚集分布为主,多分布于灶性坏死和碎片状坏死区,在病毒非复制期,HBV DNA阳性肝细胞以局灶性分布为主,表型多为包涵体型和核型。提示在漫长的HBV感染过程中,肝内HBV DNA阳性肝细胞的分布经历弥漫性—小叶聚集性—局灶性的演变过程,该过程反映肝组织内HBV的清除模式。HBeAg(+)的慢性HBV无症状感染者肝组织病变轻可能是由于HBV DNA易装配为完整的病毒排出肝细胞的结果。说明免疫活性细胞攻击的靶细胞主要是含有HBV DNA的肝细胞。     

检测慢乙肝病人外周血HBV DNA含量的临床意义

目的研究荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎病人血清HBV DNA含量的临床意义。方法血清HBV DNA定量检测采用荧光PCR法（FQ—PCR）;采用免疫组化ABC法标记相应肝组织中aBcAg,研究二者之间的关系。结果血清HBV DNA含量较低组（A、B组）,肝组织中aacAg的表达呈阴性或少数阳性;而血清HBV DNA含量较高组（C、D组）,肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性,随着血清HBV DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加。结论血清HBV DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

应用分子杂交技术检验白细胞内HBV DNA

本研究应用斑点分子杂交技术检测了157例慢性HBV感染者及80例一般人群(含20例献血员)的血清和白细胞内HBV DNA的状况。在157例慢性HBV感染者中血清HBV DNA阳性率为39%,白细胞内HBV DNA为36%,两者同时阳性者为18%。而在60例血清HBV DNA阳性者中白细胞内HBV DNA同时阳性者为48%,血清HBV DNA阴性的93例中仍有30%的病例白细胞内HBV DNA为阳性。说明在血清HBV DNA阴性的慢性HBV感染者中仍有1/3的病例的白细胞内存在HBVDNA。80例一般人群经RIA法筛选发现:单纯HBsAg阳性6例,其中3例白细胞内HBV DNA阳性。HBsAg与HBeAg同时阳性者4例,其白细胞内HBV DNA均为阳性。单纯抗-HBs阳性的24例中仅1例白细胞内存在HBV DNA。单纯抗-HBc阳性者为12例,白细胞内HBV DNA无1例阳性。值得注意的是,在血清HBV标志全阴性的34例中也发现了2例白细胞内HBV DNA阳性。由于HBV可以感染人的白细胞,而且影响白细胞的免疫功能,其在形成HBV感染的慢性化上可能起着重要的作用,因而在肝炎的转归、流行病学的意义及发病机制等问题上它的作用尚需进一步探讨。     

肝细胞内HBV DNA原位杂交的研究

应用生物素标记HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)作探针,对129例肝病患者肝组织作原位杂交研究。HBV DNA在慢性活动性肝炎中检出率最高(80.7％),显著高于肝硬化、慢性小叶性肝炎、急性肝炎及原发性肝癌组。具有乙肝复制指标阳性患者的肝细胞内HBV DNA检出率(82.0％)明显高于非复制组(63.0％),P<0.05。本研究观察到;HBB DNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切,多位于肝细胞坏死灶中间或(和)周边,其中以局灶型分布的HBVDNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切。提示HBV复制与肝细胞坏死有关。