SEA诱导Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的:观察葡萄球菌肠毒素ASEA对Hep-2细胞株诱导凋亡机制.方法:应用MTT比色法和流式细胞术检测SEA对Hep-2细胞增殖抑制率和对细胞增殖周期的影响,同时应用同位素法检测Hep-2细胞内CAMP水平.结果:SEA对Hep-2细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.流式细胞术分析,SEA能阻止G1期细胞向S期的过程,G1期细胞堆积.同位素分析,Hep-2细胞内CAMP水平下降.结论:SEA能诱导Hep-2细胞凋亡,抑制Hep-2细胞增殖,具有细胞毒性效应.     

SEA诱导Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的：观察葡萄球菌肠毒素ASEA对Hep－2细胞株诱导凋亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞术检测SEA对Hep－2细胞增殖抑制率和对细胞增殖周期的影响,同时应用同位素法检测Hep－2细胞内CAMP水平。结果：SEA对Hep－2细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。流式细胞术分析,SEA能阻止G1期细胞向S期的过程,G1期细胞堆积。同位素分析,Hep－2细胞内CAMP水平下降。结论：SEA能诱导Hep－2细胞凋亡,抑制Hep－2细胞增殖,具有细胞毒性效应。     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl—2表达下调的研究

探讨表没食子儿茶素没食子酸酯「（－）－ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ,ＥＧＣＧ」诱导胃癌ＭＣＧ－８０３细胞和肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞凋亡的作用及其凋亡在基因ｂｃｌ－２产物表达的改变。方法：用ＭＴＴ法,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测ＥＧＣＧ处理,ＭＧＣ－８０３细胞和ＢＥＩ－７４０２细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化。结果：ＥＧＣＧ以剂量依赖的方     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的　探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ） 对ｂｃｌ２ 基因的表达调控及诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法　应用ＭＴＴ方法比较两条人工合成的ＡＳＯＤＮ 直接作用及其以脂质体（ＤＯＴＡＰ） 为载体对胃癌细胞的抑制效果。应用流式细胞术和ＲＴＰＣＲ 方法检测ＡＳＯＤＮ 对ｂｃｌ２ 蛋白和ｍＲＮＡ 表达量的调控。应用相差显微镜、电子显微镜、流式细胞术等方法,观察ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ 诱导ＢＧＣ８２３ 胃癌细胞凋亡的效果。结果　ＭＴＴ实验显示两条ＡＳＯＤＮ 抑制胃癌细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性,且靶位点于ｍＲＮＡ蛋白编码区（ＡＳＯＤＮ２） 和以ＤＯＴＡＰ 为载体的ＡＳＯＤＮ 对胃癌细胞的增殖抑制效果为佳。ＡＳＯＤＮ作用于胃癌细胞,降低ｂｃｌ２ 蛋白和ｍＲＮＡ 表达。ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ处理胃癌细胞,观察到肿瘤细胞缩小、凋亡小体出现、染色质浓缩、凋亡峰等凋亡特征性改变。结论　ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ可降低ｂｃｌ２ ｍＲＮＡ和蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡     

Bcl-2基因家族与细胞凋亡

细胞凋亡(apoptosis)在多细胞器官的发育和平衡中起着重要的作用,从线虫到人类的遗传学和分子生物学研究表明这一过程高度保守,受基因调控。近年来,调节细胞凋亡的分子研究已取得了很大的进展,特别值得注意的是,细胞凋亡的正负调节因子常是同一基因家族成员,它们决定细胞...     

中期因子诱导肝癌细胞Hep3B抵抗失巢凋亡

目的：探讨肝素结合分子中期因子（midkine,MK）对肝癌细胞Hep3B抵抗失巢凋亡的影响。方法：采用悬浮培养法建立人肝癌来源细胞系Hep3B失巢凋亡模型,以不同质量浓度（10、50、100 ng/ml）MK或PBS（对照组）处理失巢培养的肝癌细胞Hep3B,采用流式细胞术检测Hep3B细胞的凋亡,采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果：随着悬浮培养时间的延长,肝癌细胞Hep3B失巢凋亡率逐渐升高,培养72 h后悬浮培养的Hep3B细胞凋亡率显著高于贴壁培养的Hep3B细胞凋亡率\[（38.76±4.23）% vs （6.76±1.43）%,P<0.01\]。不同质量浓度MK处理24 h后,悬浮培养Hep3B细胞的凋亡率均明显低于对照组,且与MK的浓度呈负相关关系（r=0.951,P=0.049）;同时,MK处理后Hep3B细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加,而促凋亡蛋白caspase-3则明显下降。结论：MK可能通过上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白的表达来提高肝癌细胞Hep3B在失巢状态下抵抗凋亡的能力。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

辣椒素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的研究

目的研究辣椒素对人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察辣椒素对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,通过DNA凝胶电泳进行DNA片段化分析,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法分析DNA酶抑制剂（ICAD）蛋白的表达。结果辣椒素可诱导A375-S2细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性。250μmol／L辣椒素处理24h,A375-S2细胞出现明娩的亚二倍体峰;处理36h,Hoechst 33258荧光染色有明显的凋亡小体出现,DNA电泳出现阶梯状图谱。在辣椒素作用下,caspase激活的ICAD蛋白表达量随时间延长而减少。结论辣椒素对A375-S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,降低ICAD蛋白的表达为其诱发A375-S2细胞凋亡的机制之一。     

放射线诱发Lewis肺癌细胞株凋亡的研究

对６０Ｃｏ照射的Ｌｅｗｉｓ细胞及其小鼠移植瘤进行电镜、ＤＮＡ电泳和流式细胞术观察,研究照射Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡的时间、剂量效应关系,以及对小鼠移植瘤的影响。发现照射后Ｌｅｗｉｓ细胞出现的凋亡随照射剂量增加和照射后培养时间延长而升高;在移植瘤中持续出现的细胞凋亡与照射后培养时间的长短相关。可以认为放射线诱发Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡的模型对肺癌的放疗有一定的参考意义;Ｌｅｗｉｓ细胞凋亡可能存在多种发生机制。     

三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制的探讨

目的：探讨三磷酸腺苷(ATP)诱导U937细胞凋亡过程中p73 mRNA的表达变化，以进一步研究p73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法：用ATP诱导U937细胞凋亡，凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法；采用半定量反转录PCR(RT-PCR)检测p73 mRNA的表达变化。结果：ATP可诱导U937细胞凋亡。0.25 g／L的ATP作用于U937细胞24 h，光镜下见细胞出现较明显的聚集现象，胞膜皱缩，细胞体积缩小，Wright's+Giemsa．染色见胞核浓缩、核碎裂等现象，DNA片断电泳见清晰的梯形条带；流式细胞仪检测：0.25 g／L ATP作用于U937细胞24 h、36 h、48 h，细胞的凋亡率分别为2.33％、11.90％、35.49％，并使细胞阻滞在G2～M+S期，而对照组细胞凋亡率仅为1.09％；半定量RT-PCR结果：与对照组相比，仅48 h组p73 mRNA的表达下调。结论：ATP可诱导U937细胞凋亡。在U937细胞凋亡早期，p73 mRNA表达差异无显著性。     

吲哚-3-甲醇诱导人鼻咽癌细胞凋亡作用及机制的初步研究

背景与目的： 了解吲哚-3-甲醇在体外对人鼻咽癌CNE细胞增殖的影响及其诱导CNE细胞凋亡的作用及其可能机制。 材料与方法： 采用WST-1法检测吲哚-3-甲醇在体外对人鼻咽癌CNE细胞增殖的抑制作用;用Hochest33258荧光染色法及TUNEL法观察吲哚-3-甲醇诱导CNE细胞的凋亡;用Western blotting方法检测凋亡相关信号分caspase-9、caspase-3蛋白表达情况,实验同时设空白对照组及溶剂对照组。 结果： 吲哚-3-甲醇在体外可以明显抑制人鼻咽癌细胞增殖,诱导细胞凋亡并呈剂量依赖性,且在细胞凋亡过程中,半胱天冬酶家族成员caspase-9和caspase-3 活化片段表达阳性。 结论： 吲哚-3-甲醇在体外可抑制人鼻咽癌CNE细胞增殖并诱导其发生凋亡,且凋亡的发生可能与caspase-9、caspase-3活化有关。     

苦参碱促进三苯氧胺诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的机制研究

[目的]研究三苯氧胺(TAM)联合低剂量苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制及作用机制.[方法]用MTT法检测各组细胞的抑制率,克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.[结果]TAM对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,与低剂量苦参碱联合,其抑制作用明显增强.药物作用24、48、72h后,与对照组相比,TAM组的凋亡率均明显增高(P＜0.01);与TAM组相比,联合组的凋亡率均明显增高(P＜0.01).Western blot检测发现,与对照组相比,TAM组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;与TAM组相比,联合组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低.[结论]低剂量苦参碱能促进TAM对Bcap-37细胞增殖抑制作用,其作用机制与增加p53、Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

氧化砷诱导结肠癌细胞凋亡及其分子机制

 目的　观察不同浓度As2O3对结肠癌Lovo、LS-174T细胞株生长的影响。方法　0.125～2μ mo1/L的As2O3与结肠癌细胞株Lovo、LS-174T共同孵育,观察不同浓度As2O3作用不同时间对结肠癌细胞的生长抑制作用、细胞形态学改变、DNA的变化。结果　1～2μ mol/L As2O3作用的结肠癌细胞呈凋亡特征性改变：细胞膜不发生破裂,细胞核出现核浓缩、核碎裂和凋亡小体形成;流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性条带。结论　1～2μ mol/L As2O3可诱导结肠癌细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡与Fas、Fas-L表达有关。     

化疗药物诱导肾癌细胞凋亡的研究

目的 :探讨化疗药物Cryptophycin(CPP)、长春新碱 (VCR)、阿霉素 (ADM)诱导肾癌细胞凋亡的时间效应与剂量效应关系。方法 :采用HE染色、荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测 3种药物不同的药物浓度、不同作用时间所诱导的癌细胞凋亡的结果。结果 :在一定的药物浓度作用下 ,用光镜、荧光显微镜、流式细胞仪均能观察到肾癌细胞凋亡的典型形态学改变。凝胶电泳证实有DNA裂解的现象。诱导凋亡的效率CPP >VCR >ADM。结论 :抗肿瘤药CPP、VCR、ADM可诱导肾癌细胞凋亡的发生 ,对指导临床肾癌的治疗有积极的意义。     

Cryptophycin诱导肾癌细胞凋亡的研究

目的 探讨诱导肾癌细胞凋亡的新方法及其机制。方法 采用ＨＥ滩色、荧光染色、琼脂糖电池等方法，分别对Ｃｒｙｔｏｐｈｙｃｉｎ（ＣＰＰ）不同的药物浓度（０，１，５，１０，５０ｐｍｏｌ／Ｌ）和不同增减时间段（４～２４ｈ）所诱导的凋亡细胞形态、出现时间和密度比例进行观察和比较。结果 在光镜下能观察到ＣＰＰ诱导的肾癌细胞凋亡的典型形态，用ＡＯ／ＥＢ荧光染色能区分出４种不同细胞，ＤＮＡ电泳证实有ＤＮＡ裂解的现象     

番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Westernblot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0 μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

法尼基转移酶抑制剂ManumyCin诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:采用MTT(Methythiazolyltetrazolium)法观察法尼基转移酶抑制剂Manumycin对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等技术检测细胞凋亡,应用Westernblot方法检测bcl-2、p53、bax的蛋白水平变化。结果:法尼基转移酶抑制剂Manumycin能明显抑制HepG2细胞的生长且呈浓度依赖性,其IC50为(17.65±0.58)μmol/L。荧光显微镜检查显示Manumycin处理的HepG2细胞DAPI染色后,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核。DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形带。流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡与Manumycin作用的时间和浓度相关。Manumycin能时间依赖性地诱导HepG2细胞发生G2/M期阻滞。Manumycin处理HepG2细胞后,Westernblot检测结果显示p53蛋白表达明显增加,而bcl-2蛋白和bax蛋白表达无明显变化。结论:法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌细胞株HepG2有强烈的细胞毒作用,其分子机制可能是诱导HepG2细胞凋亡。Manumycin诱导HepG2细胞凋亡与bcl-2蛋白和bax蛋白表达水平无关,而p53蛋白表达水平的上调可能在此过程中起了一定