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双胸蚓纤溶酶的分离纯化及性质研究 总被引:9,自引:2,他引:7
通过选择性热变性、大豆胰蛋白酶抑制剂-Sepharose4B亲和层析,DEAE-纤维素离子交换层析和Arg-Sepharose4B亲和层析,从双胸蚓中分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究 总被引:11,自引:2,他引:11
目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究 总被引:12,自引:1,他引:12
以野生环毛蚓(Pheretima)为材料,经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE—纤维素离子交换柱层析等纯化步骤,得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶(EFE),具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用,但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制,说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na^ 、K^ 、Mg^2 对此酶有一定的抑制作用,Hg^2 对EFE有强烈抑制作用,而Ca^2 可提高此酶活力。 相似文献
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目的 建立纤溶酶反相高效液相色谱纯度测定方法。方法 采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18 SG300(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.1%三氟乙酸溶液-乙腈(95:5)为流动相A,以0.08%三氟乙酸溶液-乙腈(20:80)为流动相B,进行梯度洗脱,体积流量为0.7 mL·min-1,检测波长280 nm,柱温40℃。参照2020年版《中国药典》四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行专属性、检测限、耐用性考察。应用所建立的方法和分子排阻色谱法对3批样品纯度进行检测。结果 建立的反相色谱法专属性强,检测限为0.01%,耐用性强。对3批样品进行检测,质量分数在93.5%~96.9%,结果准确。结论 建立反相色谱法测定纤溶酶纯度,分辨率更高、重现性更好,可进行更好的质量控制。 相似文献
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组织纤溶酶原激活物的分离纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
用亲和层析法从猪心组织分离纯化纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA),以纤维蛋白-sepharose-4B 和 lys-sepharose-4B 两种亲和胶,从5 kg 新鲜猪心组织中分离出 t-PA1.46mg,比活性为235000 IU/mg,得率为34%,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定为一条带,分子量为68000。 相似文献
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分离纯化参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶,并对其活性及氨基酸序列进行分析。采用凝胶层析等方法进行蛋白质的分离纯化,SDSPAGE法进行分子质量的测定,纤维平板法测定纤溶活性,氨基酸自动分析仪分析氨基酸组成,并对一个具有纤溶活性的蛋白酶进行了序列分析。分离纯化得到4种酶,其中EQY-4活性较强。其N-端序列为:Gln-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Phe-Pro-Pro-Gln-Leu-Ser-Gln-Thr。与文献报道中赤子爱胜蚓及粉正蚓中分离得到的蛋白酶对比,主要序列相近,但也有不同。 相似文献
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用亲和色谱柱纯化蚯蚓纤溶酶 总被引:3,自引:0,他引:3
蚯蚓纤溶成分具有良好的抗栓、溶栓作用,也未见毒副反应。利用亲和柱色谱分离可获得纯度极高的产品,本研究用国产对氨基苯砜乙基交联琼脂代替进口Sepharose4B,可降低生产成本,是一种较为实际的纯化方法。 相似文献
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长白山白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化 总被引:9,自引:1,他引:8
从长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化具有溶栓功效的纤溶酶。方法:用 DEAE Sephadex A50离子交换、Sephadex G75凝胶过滤层析和 DEAE Sephadex A 50三步柱层析分离方法,对长白山白眉蝮蛇蛇毒进行分离纯化,得到了一种纤溶酶活性组分。结果:经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征该酶为单一蛋白,其分子量为 23.367 kD。结论:为进一步研究其结构和功能提供了可靠依据。 相似文献
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豆豉纤溶酶的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
豆豉纤溶酶是从我国豆豉中分离得到的一种蛋白酶,具有良好的溶解血栓作用。文章综述了豆豉纤溶酶产生菌的菌种特性,酶的理化性质、发酵工艺、分离纯化、酶活测定、分子生物学及溶栓实验方面的研究现状,并对其应用和发展前景做了展望。 相似文献
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蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究 总被引:2,自引:2,他引:0
目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6~ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。 相似文献
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目的分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U.mg?1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。 相似文献