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1.
目的 探讨高表达Kiss-1基因对结肠癌SW480细胞增殖及迁移的影响.方法 将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480细胞设为实验组,将pEGFP-N1质粒转染至SW480细胞设为阴性对照组,将SW480细胞设为空白对照组,采用Western blot法检测各组细胞中Kiss-1表达量;采用CCK-8法分析Kiss-1对SW480细胞增殖的影响;并用划痕实验评估Kiss-1对SW480细胞迁移能力的影响.结果 将pEGFP-N1和pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,检测实验组Kiss-1表达量增加,实验组细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05),且实验组细胞划痕损伤愈合的速度明显下降.结论 高表达Kiss-1可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,降低细胞迁移速度. 相似文献
2.
目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组:阴性对照组(转染pEGFP-N1空载体)、实验组(转染pEGFPN1-Kiss1)及空白对照组(未转染)。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组(P〈0.05)。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。 相似文献
3.
目的 检测SOX15在结肠癌细胞株中表达水平以及对细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的影响.方法 应用RT-PCR检测SOX15在Cac02、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞以及正常结肠组织中的表达水平.通过脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒pEGFP-N1-SOX15及空质粒pEGFP-N1转染进Caco2细胞,应用RT-PCR及Western blot分别检测SOX15在Caco2细胞中的mRNA以及蛋白表达水平;CCK-8检测SOX15对Caco2细胞活力的影响,克隆形成实验观察细胞增殖变化,Transwell检测SOX15对细胞迁移及侵袭能力的调控,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 SOX15在Caco2、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞中mRNA及蛋白质表达明显低于其在正常组织中的表达水平(P <0.01).pEGFP-N1-SOX15转染组细胞mRNA(1.23 ±0.10)和蛋白(1.13±0.08)表达显著高于pEGFP-N1对照组[(0.54±0.06)、(0.19±0.03),P<0.01]及空白对照组[(0.51±0.03)、(0.14±0.02),P<0.01];与空白对照组及pEGFP-N1对照组相比,pEGFP-N1-SOX15转染组可明显抑制细胞增殖及迁移侵袭能力(P<0.01),并诱导细胞发生凋亡(P<0.01).结论 SOX15在结肠癌细胞中低表达,过表达SOX15可明显抑制结肠癌细胞Caco2的增殖及迁移、侵袭能力,并促进细胞凋亡. 相似文献
4.
目的:探讨Chemerin对结肠癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法:采用不同浓度的Chemerin(0、100、200、300、400、500 ng/mL)处理结肠癌细胞系HCT116、SW480,通过Transwell法检测细胞的侵袭与迁移能力;以HCT116、SW480细胞为材料进一步研究,分为4组,pEGFP-N1阴性对照组(vector control)、si-Chemerin阴性对照组(si-NC)、pEGFP-N1-Chemerin组与si-Chemerin组,转染后检测各组细胞的侵袭与迁移能力,采用qRT-PCR检测上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin, E-cad)、神经钙黏附蛋白(N-cadherin, N-cad)和波形蛋白(vimentin)mRNA水平,采用Western blot法检测E-cad、N-cad和vimentin蛋白表达水平。结果:外源性Chemerin可提升结肠癌细胞HCT116、SW480侵袭率与迁移数(P<0.05),且存在剂量依赖性,细胞迁移数与侵袭率pEGFP-N1-Chemerin组>vector control组... 相似文献
5.
目的探讨在体外转化生长因子β1(TGF-β1)的真核表达载体对结肠癌细胞增殖?细胞周期及侵袭性的影响。方法将构建的重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1转染入结肠癌细胞系SW480中,应用荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测TGF-β1基因的表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析SW480细胞周期变化;Transwell侵袭实验验证TGF-β1对细胞侵袭能力的影响。结果转染重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot检测到TGF-β1基因的转录及蛋白表达增强(P0.05);细胞周期分析显示TGF-β1使细胞停留在G1期,S期细胞明显减少(P0.05),且SW480细胞的增殖受到明显抑制;Transwell侵袭实验显示:SW480细胞的侵袭能力明显增强(P0.01)。结论TGF-β1能抑制SW480细胞的增殖,使细胞停留在G1期,但同时能增强其侵袭能力。其作用可能与免疫抑制/逃逸、增加血管生成以及增加肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用有关。 相似文献
6.
目的 构建人细胞外金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)重组质粒,观察其在胃癌SGC-7901细胞中的表达及对细胞侵袭和迁移的影响。方法 从结肠癌细胞株SW-480中提取总RNA,通过RT-PCR获得EMMPRIN基因,连接至载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN,通过脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌SGC-7901细胞;RT-PCR和Western blotting分别检测EMMPRIN mRNA和蛋白在SGC-7901细胞中的表达,Transwell实验检测EMMPRIN对SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响。结果 重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN构建成功,并在SGC-7901细胞中表达,RT-PCR和Western blotting检测示转染后SGC-7901细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达均增加,Transwell实验检测示转染后SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力均显著增强。结论 EMMPRIN可显著增强肿瘤细胞的侵袭与迁移能力。 相似文献
7.
目的:研究miR-122-5p对TPA诱导人结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及侵袭迁移的影响。方法:利用生物信息学筛选结直肠癌差异基因,预测其靶基因miRNA。用TPA(100nM)处理SW480细胞,通过RT-qPCR、Western blot法检测基因和蛋白表达水平;明胶酶谱法检测MMP-9细胞外分泌情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移能力。结果:MMP-9在结肠癌组织中高表达,筛选出上游靶基因miR-122-5P;TPA诱导MMP-9 mRNA表达呈时间依赖性上调(P<0.01),诱导miR-122-5p的表达下调(P<0.01);过表达miR-122-5p明显下调TPA诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且MMP-9胞外分泌减少,细胞的侵袭、迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:miR-122-5p可能通过调控TPA诱导MMP-9的表达,进而抑制结直肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力,为克服结直肠癌转移研究提供新的思路。 相似文献
8.
目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法设计合成特异性Msi1 siRNA序列,转染人结肠癌SW-480细胞;利用Western blotting检测Msi1和MMP-9蛋白的表达;细胞免疫化学检测MMP-9蛋白的表达;划痕实验观察Msi1 siRNA对细胞迁移能力的影响;Transwell实验观察其对细胞侵袭能力的影响。结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1蛋白的表达;并且使其迁移和侵袭能力明显下降,和对照组相比有统计学意义(P<0.05),同时MMP-9在蛋白表达水平明显降低。结论沉默Msi1基因后可以显著抑制人结肠癌SW-480细胞的迁移和侵袭能力,MMP-9基因表达下降可能参与这一过程。 相似文献
9.
目的探讨抑制靶向转录信号传导子与激活子-3(STAT-3)基因表达对结肠癌细胞增殖以及侵袭转移行为的影响。方法实验分三组:空白对照组、转染NC-siRNA(阴性对照组)及转染特异性STAT-3-siRNA组(RNAi组)。人结肠癌细胞HCT116瞬时转染特异性siRNA,24、48、72 h后MTT法检测三组细胞的增殖活性,48 h后RQPCR检测STAT-3基因mRNA表达。RQ-PCR及细胞免疫化学法检测MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果 RNAi组与其他两组相比细胞增殖受抑明显(均P〈0.01);细胞生长减慢,RNAi组较阴性对照组STAT-3mRNA下降了71.91%(P〈0.01)。RNAi组与其他两组相比MMP-9在mRNA和蛋白水平表达均明显下降(均P〈0.01);侵袭实验RNAi组较空白对照组侵袭力下降了49.75%(P〈0.01),而两对照组之间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论下调STAT-3基因表达可有效抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭转移,抑制MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达。沉默STAT-3基因抑制结肠癌细胞侵袭能力的机制之一可能是通过下调MMP-9途径。 相似文献
10.
目的构建骨桥蛋白(OPN)基因真核表达载体,转染人结肠癌细胞SW480,研究其对SW480细胞增殖及生存能力的作用机制。方法构建重组表达载体pEGFP-N1/OPN,转染人结肠癌SW480细胞。采用RT-PCR及免疫印迹法(Westernblotting)分别检测SW480细胞OPN基因及蛋白表达量;Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力。Western blotting检测脆性组氨酸三联体基因(FHIT)和蛋白激酶B(PKB/Akt)蛋白在SW480细胞中的表达。结果重组质粒pEGFP-N1/OPN转染SW480后,OPN基因获得很好转录,OPN蛋白表达增高,细胞增殖率(光吸收值)显著高于转染阴性组(P<0.05),细胞软琼脂克隆形成速度增快,数量明显多于对照组和空载体组(P<0.05);FHIT蛋白在实验组表达降低,Akt蛋白在各组中的表达无显著性差异。结论 OPN基因通过抑制FHIT基因表达,促进SW480细胞增殖、独立存活能力。 相似文献
11.
目的探讨MMP-2、MMP-9及MMP-14在结直肠癌患者血清中的表达水平,并分析其与结直肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等病理参数的关系,以更好的指导临床工作。方法应用ELISA(酶联免疫吸附实验)分别检测200例结直肠癌患者(观察组)、60例健康成人(对照组)血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的含量。结果观察组血清中MMP-2、MMP-9及MMP-14表达量显著高于对照组(P<0.01),观察组中不同临床特征患者血清MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达与肿瘤分化程度、Dukes分期以及淋巴结转移有关(P<0.01),经相关性分析,MMP-2和MMP-9、MMP-9和MMP-14的表达呈正相关(P均<0.05)。结论MMP-2、MMP-9和MMP-14在结直肠癌患者血清中高表达,三者可能在结直肠癌发生发展中起重要作用;早期联合检测MMP-2、MMP-9和MMP-14可能对判断患者的预后及指导临床治疗有重要价值。 相似文献
12.
目的:探讨MMP-1、MMP-2、MMP-9在胶质瘤中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法对78例石蜡包埋的胶质瘤组织和12例正常脑组织进行标记和分析。结果:MMP-1、MMP-2、MMP-9在正常脑组织中几乎不表达;而在胶质瘤中的阳性率分别为66%、64%、75%,联合检测率为62%,采用Spearm an进行相关性分析,它们与胶质瘤的恶性程度均呈正相关(rs=0.2671~0.5631,P〈0.05)。结论:联合检测这3个指标对判断胶质瘤的恶性程度和侵袭能力具有重要的意义。 相似文献
13.
目的:探讨环氧化酶-2选择性抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测不同浓度nimesulide作用体外培养的MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞株48 h,MMP-2、MMP-9 mRNA的变化.结果:50 μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA的表达,100 μ mol/L时其几乎完全抑制;100 μ mol/L nimesulide显著抑制MCF-7细胞MMP-2 mRNA的表达,200 μ mol/L时完全抑制其基因的表达.50μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞MMP-9 mRNA的表达,随着浓度的增加,MMP-9 mRNA逐渐被抑制.结论:nimesulide以剂量依赖性方式下调MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,而MDA-MB-231细胞对nimesulide更敏感,这种作用是COX-2非依赖性途径,为nimesulide用于转移乳腺癌的治疗与预防提供了实验依据. 相似文献
14.
目的观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠基质金属蛋白酶-2,基质金属蛋白酶-9(MMP-2、MMP-9)的变化,探讨HHcy致动脉粥样硬化(As)的机制。方法30只Wistar雄性大鼠随机分为对照组,蛋氨酸组及干预组。对照组给予普通饲料,蛋氨酸组普通饲料中添加2%蛋氨酸喂养,干预组普通饲料中添加2%蛋氨酸喂养同时每日给予叶酸0.5mg,维生素B12(VitB12 )25μg灌胃,实验期为8周。检测血清Hcy、MMP-2和MMP-9。用HE染色法对颈总动脉进行病理学检查。结果干预组和蛋氨酸组血清Hcy、MMP-2、MMP-9浓度均高于对照组(P<0.05),干预组血清Hcy、MMP-2、MMP-9浓度均低于蛋氨酸组(P<0.05);蛋氨酸组MMP-2和MMP-9与Hcy呈正相关。镜下观蛋氨酸组颈总动脉内膜平滑肌细胞增生排列紊乱,弹力纤维融合。结论HHcy诱导MMP-2和MMP-9表达增加,可能是HHcy致As的机制。可以通过补充维生素B12和叶酸来预防HHcy,从而防止As的发生。 相似文献
15.
MMP-2和MMP-9在甲状腺癌中的表达及其意义 总被引:3,自引:3,他引:0
目的探讨基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)在甲状腺腺瘤及甲状腺癌组织中的表达及意义.方法应用免疫组化SP法检测12例甲状腺腺瘤及32例甲状腺癌组织中MMP-2和MMP-9的表达.结果 MMP-2、MMP-9在甲状腺癌中的表达明显高于甲状腺腺瘤,且甲状腺癌患者中有淋巴结转移组MMP-2、MMP-9的表达明显高于无淋巴结转移组.结论 MMP-2和MMP-9在甲状腺癌组织中有高表达且在甲状腺癌细胞向外扩散、转移中起着重要作用,参与了甲状腺癌的转移过程. 相似文献
16.
大鼠皮肤实验性枪弹伤后MMP-1和MMP-3的表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3随时间变化的表达情况,为枪弹伤后的损伤时间判断提供依据.方法 建立大鼠对照组和实验组模型.对照组断颈处死后直接取材;实验组分别于枪弹伤后0、1、3、6、12、18、24、48、72 h取材(n=3).取材后用Northern blot法对MMP-1和MMP-3的mRNA进行半定量检测.结果 MMP-1和MMP-3在枪弹伤后即刻其表达就有增加,以后表达继续升高,一直旱上升趋势(P<0.01,P<0.05);而阴性对照组几乎没有表达.结论 枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3表达增加的规律性,对枪弹伤后损伤时间的推断有一定的价值. 相似文献
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应用组织芯片技术研究非小细胞肺癌中MMP-2、MMP-9的表达及临床病理意义 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 利用组织芯片技术,结合免疫组化方法,研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及临床病理意义.方法 80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,免疫组化(S-P)法检测MMP-2、MMP-9表达.结果 MMP-2、MMP-9在NSCLC中均有较高表达率,分别为81.25%(65/80)和73.75%(59/80),而且二者表达呈高度正相关;MMP-2、MMP-9的表达在NSCLC性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度上无显著差异(P>0.05);有淋巴结转移的患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为84.72%(61/72)及77.78%(56/72),无淋巴结转移的患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为50%(4/8)及37.50%(3/8)(P<0.05);临床分期为Ⅰ+Ⅱ期患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为57.14%(16/28)及53.57%(15/28),Ⅲ期患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为94.23%(49/52)及84.61%(44/52)(P<0.05).结论 利用组织芯片技术,结合免疫组化法可以快速、高效地检测MMP-2、MMP-9在NSCLC中的表达;MMP-2、MMP-9在NSCLC中的表达与患者性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度无关,而有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组,且随着临床分期增加表达明显升高;MMP-2、MMP-9的过度表达与NSCLC的发展、淋巴结转移有密切关系,可作为临床评估NSCLC进展的重要指标之一. 相似文献
18.
血清MMP-2,MMP-9水平对急性冠脉综合征的诊断及预后判断价值 总被引:5,自引:1,他引:4
近年来,人们认为基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是造成冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的重要原因之一.MMPs可致斑块脂核及纤维帽的基质降解,从而导致斑块破裂[1,2]. 相似文献
19.
中医祛腐生肌法祛腐作用机理的实验研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:用现代医学方法探讨中医祛腐生肌法祛腐作用的可能机理.方法:以生肌红粉膏作为中医祛腐生肌法的代表药,对家兔创伤感染性创面模型进行换药,动态对比观察祛腐药在换药过程中对创面MMP-1、MMP-3、细胞凋亡、创面溶菌酶含量的影响.结果:生肌红粉膏能够提高创面MMP-1、MMP-3、创面溶菌酶含量、并促进创面成纤维细胞原位凋亡.结论:中医祛腐生肌法祛腐作用的可能机理是促进金属蛋白酶MMP-1、MMP-3的活性,增强巨噬细胞溶菌酶作用以及刺激局部细胞凋亡等,促进局部腐烂坏死组织的清除,从而达到祛腐作用. 相似文献
20.
MMP-2和MMP-9在乳腺癌中的表达及其临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]探讨基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9在乳腺癌中表达及与淋巴结转移的关系。[方法]应用免疫组化SP方法检测乳腺癌组织88例(淋巴结转移54例,无淋巴结转移34例)和53例乳腺良性病变组织中MMP-2和MMP-9表达水平。[结果]MMP-2和MMP-9在88例乳腺癌组织中,阳性表达率分别为78.4%(69/88)和61.4%(54/88),在乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为39.6%(21/53)和28.3%(15/53),两者比较,差异有显著性意义(P〈0.01);淋巴结转移组MMP-2和MMP-9的阳性表达率分别为90.7%(49/54)和74.1%(40/54),明显高于无淋巴结转移组的58.8%(20/34)和50.0%(17/34)(P〈0.01)。[结论]MMP-2和MMP-9的表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关,可作为判断乳腺癌转移和预后的指标。 相似文献