龙胆草在人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的：探讨龙胆草对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法：培养人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果：0．1mg／mL、0．2mg／mL和0．5mg／mL龙胆草对于共培养细胞酪氨酸酶活性有较强的剂量相关性激活作用（P〈0．01）,0．2mg／mL及0．5mg／mL龙胆草与对于共培养细胞黑素生成有较强的剂量相关性激活作用（P〈0．01）。结论：龙胆草对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

甘草黄酮对黑素细胞生物学作用的比较

目的 研究甘草黄酮对体外培养的鼠黑素瘤B16细胞及人表皮黑素细胞的生物学作用。方法 建立正常人表皮黑素细胞培养体系和培养黑素瘤B16细胞,添加甘草黄酮后,测定黑素细胞活力、酪氨酸酶活性以及黑素含量的变化,并与氢醌的作用结果进行比较。结果 两种黑素细胞对药物的反应有所不同。与氢醌比较,甘草黄酮具有较强的浓度依赖性黑素合成抑制作用,且对黑素细胞的细胞毒性较小。结论 用体外培养的人黑素细胞作为研究对象与鼠黑素瘤B16细胞比较具有一定的差异;甘草黄酮可作为一种安全有效的皮肤美白物质。     

三氧化二砷对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的 探讨三氧化二砷(As₂O₃)对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,465nm比色法测定黑素含量。结果 As₂O₃浓度<0.01μmol/L时,随As₂O₃浓度的增加,促进黑素瘤细胞的增殖、黑素的合成及上调酪氨酸酶的活性;As₂O₃浓度等于0.01μmol/L时作用最强。0.1～1μmol/L则表现为抑制作用;>1μmol/L则出现细胞毒性作用。结论 经As₂O₃处理后A375人恶性黑素瘤细胞株的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的生成与As₂O₃浓度呈双相性变化。     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

芒柄花素对人表皮共培养体黑素合成的影响

目的观察芒柄花素对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系模型(人表皮共培养体)中酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法建立人表皮共培养体,建成后分别加入30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L芒柄花素,熊果苷为阳性对照组,测定芒柄花素和熊果苷对人表皮共培养体中酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响。结果芒柄花素3种浓度对人表皮共培养体中酪氨酸酶活性及黑素合成与对照组比较均有明显抑制作用(P0.05),且浓度越高抑制作用越明显(P0.05)。高、中浓度芒柄花素黑素抑制率高于熊果苷(P0.05)。结论芒柄花素对黑素合成有明显抑制作用,机理与其对酪氨酸酶活性有抑制作用相关。     

姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

吡美莫司对人黑素细胞黑素合成的影响

目的:评价吡美莫司在体外对人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响.方法:培养人原代表皮黑素细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠法测定黑素含量.结果:随着剂量的增高,1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司对黑素细胞的酪氨酸酶活性(分别为112.87%,117.29%,120.49%和123.97%)和黑素生成(分别为118.92%,122.55%,128.25%和134.48%)的促进作用逐渐增强,10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:吡美莫司对人表皮黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的促进作用.     

两味中药单体对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的: 探讨蛇床子素、黄芩苷对体外培养人黑素细胞及其与角质形成细胞共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法: 培养人表皮黑素细胞及黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用MTT法、多巴氧化法及NaOH法测定蛇床子素、黄芩苷对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.以补骨脂素作为对照.结果: 蛇床子素、黄芩苷均可促进酪氨酸酶活性及增加黑素合成,但对共培养体系中黑素细胞的作用强于体外纯黑素细胞的作用(P<0.05);在对酪氨酸酶活性的影响中,黄芩苷的作用强于蛇床子素,其差异具有显著性(P<0.05);在对黑素合成的作用上,蛇床子素强于黄芩苷(P<0.05).结论:蛇床子素、黄芩苷对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的促进作用,且对共培养体系的作用强于对纯黑素细胞的作用.     

胎盘中提取的黑素生成素有效成分分析及动物实验

目的 分析黑素生成素中的活性成分及其对豚鼠表皮中黑素细胞的影响。方法 利用放免法及比色法分别测定黑素生成素中内皮素和唾液酸的含量;用黑素生成素外搽豚鼠背部皮肤加红外线照射,5周后,对搽药的皮肤和对照皮肤进行活检,分别制备透射电镜超薄切片及不同的特殊染色的病理切片。统计搽药表皮病理切片中黑素细胞数目及黑素含量的变化并进行超微结构观察。结果 测定黑素生成素中内皮素含量为210.5±30.1pg/mL,唾液酸含量为147.9±12.1μg/mL。用黑素生成素外搽动物表皮后黑素细胞数目明显增加;含有黑素颗粒的角质形成细胞数、黑素含量指数(MCI-1、2)均有明显提高。结论 黑素生成素中含有能促进黑素细胞增殖的内皮素及增强细胞间识别与粘附的糖和糖脂类物质,作用于动物表皮具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。     

迷迭香酸对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素生成的影响。方法取对数生长期的人表皮黑素细胞,分别加入不同浓度的迷迭香酸进行实验。MTT法测定体外培养的人黑素细胞活力,NaOH裂解法测定黑素含量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞活力无明显影响,而100μmol/L迷迭香酸抑制黑素细胞活力(P0.01);10～80μmol/L迷迭香酸呈浓度依赖性促进黑素细胞黑素合成;10～80μmol/L迷迭香酸对蘑菇酪氨酸酶活性无明显影响(P0.05);20～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用(P0.01)。结论迷迭香酸具有促进人表皮黑素细胞黑素生成的作用。     

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

Development of melanocye-keratinocyte co-culture model for controls and vitiligo to assess regulators of pigmentation and melanocytes

Background: There is a need to develop an in vitro skin models which can be used as alternative system for research and testing pharmacological products in place of laboratory animals. Therefore to study the biology and pathophysiology of pigmentation and vitiligo, reliable in vitro skin pigmentation models are required. Aim: In this study, we used primary cultured melanocytes and keratinocytes to prepare the skin co-culture model in control and vitiligo patients. Methods: The skin grafts were taken from control and patients of vitiligo. In vitro co-culture was prepared after culturing primary melanocytes and keratinocytes. Co- cultures were treated with melanogenic stimulators and inhibitors and after that tyrosinase assay, MTT assay and melanin content assay were performed. Results: Melanocytes and keratinocytes were successfully cultured from control and vitiligo patients and after that co-culture models were prepared. After treatment of co-culture model with melanogenic stimulator we found that tyrosinase activity, cell proliferation and melanin content increased whereas after treatment with melanogenic inhibitor, tyrosinase activity, cell proliferation and melanin content decreased. We also found some differences in the control co-culture model and vitiligo co-culture model. Conclusion: We successfully constructed in vitro co-culture pigmentation model for control and vitiligo patients using primary cultured melanocytes and keratinocytes. The use of primary melanocytes and keratinocytes is more appropriate over the use of transformed cells. The only limitation of these models is that these can be used for screening small numbers of compounds.     

α-硫辛酸对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的　建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系 ,研究α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞的影响。方法　采用MTT法测定α 硫辛酸对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,NaOH裂解法测定黑素合成 ,并与茶多酚的结果进行比较。结果　α 硫辛酸对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低 ,酪氨酸酶活性减弱 ,黑素合成减少。结论　α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用 ,这为临床应用α 硫辛酸治疗色素性疾病提供了实验依据。     

槲皮素对鼠黑素细胞株B10BR细胞的抗氧化保护效应及对其生物学活性的影响

目的 探讨槲皮素保护鼠永生化黑素细胞（B10BR）对抗氧化应激的有效性及其对B10BR细胞生物学活性影响。方法 MTT法测定B10BR细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置显微镜下观察细胞形态改变,并检测槲皮素对酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果 经33.33 μmol/L槲皮素预处理24 h后细胞活性增高至（94.22 ± 3.36）%,此外黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量可分别增高至（107.15 ± 10.96）%和（111.85 ± 9.49）%,与过氧化氢处理组相比,差异均有统计学意义（P < 0.01）。流式细胞仪检测结果表明,槲皮素可抑制过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡。结论 槲皮素抑制过氧化氢诱导黑素细胞凋亡的保护效应为其治疗白癜风提供一定的依据。     

谷氨酸信号通路对黑素细胞黑素转运的作用

目的 探讨谷氨酸信号通路在黑素转运中的作用。 方法 原代培养并纯化黑素细胞及角质形成细胞,免疫荧光显微镜观察离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）和N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（NMDAR2A）在黑素细胞内的分布,共聚焦显微镜观察100 μmol/L NMDAR激动剂NMDA和100 μmol/L拮抗剂地卓西平马来酸盐（dizocilpine maleate,MK801）作用5 min和1 h后黑素细胞内钙离子浓度的变化以及100 μmol/L MK801对黑素细胞内微管蛋白的影响。结果 100 μmol/L NMDA可使黑素细胞内瞬时钙离子浓度升高,但100 μmol/L MK801可使其降低;MK801先作用于黑素细胞5 min或1 h阻断NMDA受体后,NMDA均不能再次诱导瞬时钙离子浓度升高。共聚焦显微镜观察发现MK801作用24 h后,胞内微管蛋白重新分布聚集于核周。扫描电镜观察发现100 μmol/L MK801作用于黑素细胞-角质形成细胞共培养体系48 h后,黑素细胞和角质形成细胞之间以及两种细胞表面的丝状伪足数量明显减少。共培养体系下,100 μmol/L MK801作用后,角质形成细胞中的黑素含量明显降低,即从黑素细胞向角质形成细胞转移的黑素数量明显减少。 结论 谷氨酸信号通路对黑素细胞胞内钙离子浓度、微管蛋白分布、黑素细胞伪足形成以及黑素细胞及角质形成细胞间的黑素转运具有一定调节作用。