何首乌水溶性成分2,3,5,4''-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L-1)或LPC与ST I共孵24 h,收集各组条件培养基,用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量;用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGFmRNA的表达及ST I的影响.结果ECV304细胞暴露于LPC后,VEGF蛋白分泌明显增加;加入STI后VEGF蛋白含量明显降低;LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高,并使VEGF165 mRNA的表达升高;ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达.结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGFmRNA,1×10-5mol·L-1ST I可抑制LPC的作用,降低VEGF的高表达.     

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(STI)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的　研究何首乌水溶性成分 2 ,3,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D葡糖苷 (STI)对溶血磷脂酰胆碱 (LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　在ECV30 4细胞培养基中加入LPC(2 5mg·L- 1 )或LPC与STI共孵 2 4h ,收集各组条件培养基 ,用基础酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量 ;用原位杂交法、RT PCR及RealtimeRT PCR法检测LPC对内皮细胞VEGFmRNA的表达及STI的影响。结果　ECV30 4细胞暴露于LPC后 ,VEGF蛋白分泌明显增加 ;加入STI后VEGF蛋白含量明显降低 ;LPC可以使ECV30 4中VEGFmRNA的表达明显升高 ,并使VEGF1 6 5mRNA的表达升高 ;STI可剂量依赖性地抑制VEGF1 6 5mRNA的高表达。结论　LPC能诱导ECV30 4细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGFmRNA ,1× 1 0 - 5mol·L- 1STI可抑制LPC的作用 ,降低VEGF的高表达。     

HPLC测定安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

目的 建立安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C₂₀H₂₂0₉）的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法,以Dionex Acclaim 120^® C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）为分离柱,以乙腈-1%甲酸溶液（23：77）为流动相,体积流量1.0 mL/min,检测波长320 nm,柱温25 ℃。结果 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.010～0.200 μg呈现良好的线性关系（r=0.999 6）,平均回收率为97.35%,RSD为2.07%。结论 该方法<准确可靠,适用于安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。     

HPLC法测定通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

目的 建立测定通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex C₁₈柱,检测波长为320 nm,流动相为乙腈-水（20∶80）,体积流量为1.0 mL/min。结果 2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在10～100 μg/mL与峰面积呈良好线性关系（r＝0.999 7）,平均回收率为99.74%。结论 本方法准确、简便、重复性好,可用于通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1通路汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷体外抗氧化应激作用研究

目的 探讨汉黄芩素 7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷（WODE）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）的抗氧化应激作用及机制。方法 MTS法检测WODE（2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μmol·L^-1）对RAW264.7细胞活力的影响；体外培养RAW264.7细胞，WODE（10、20、40 μmol·L^-1）或地塞米松（1 μmol·L^-1，阳性药）预处理1 h，再给予LPS刺激24 h（造模过程不再加药），对照组不加 LPS 和受试物，模型组只给予 LPS 刺激；荧光探针检测胞内活性氧（ROS）水平；Griess反应测定细胞上清液中 NO 生成量；ELISA 检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的分泌；实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检测细胞内诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、醌氧化还原酶1（NQO-1）、超氧化物歧化酶-1（SOD-1）的mRNA表达水平；Western blotting法检测细胞核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-（1 HO-1）蛋白表达水平；免疫荧光染色法检测细胞内Kelch ECH相关蛋白（1 Keap1）表达水平。结果 与对照组比较，WODE浓度小于40 μmol·L^-1时，细胞存活率没有明显变化；浓度大于80 μmol·L^-1时，细胞存活率下降，但未见统计学差异。与模型组比较，WODE 10、20、40 μmol·L^-1组 ROS水平显著降低（P＜0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 NO 释放显著降低（P＜0.05、0.01）；40 μmol·L^-1 组 iNOS mRNA 表 达 水 平 显 著 降 低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1 组 COX-2 和20、40 μmol·L^-1组IL-1β mRNA表达水平显著降低（P＜0.05、0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组TNF-α和IL-6的释放受到显著抑制（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组NQO-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01），40 μmol·L^-1组SOD-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组Keap1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组HO-1蛋白和mRNA表达水平显著提高（P＜0.05、0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 Nrf2 蛋白和 40 μmol·L^-1 组 Nrf2 mRNA 表达水平显著增加（P＜0.01）。结论 WODE 对 LPS 诱导的RAW264.7细胞的氧化应激具有抑制作用，其作用机制可能与调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关。     

制首乌中1个新的四羟基二苯乙烯苷的结构鉴定及其心血管活性研究

目的　从制首乌(Radix Polygoni multiflori Preparata)水溶性部分寻找心血管活性成分。方法　采用体外抑制血管平滑肌细胞(SMC)增殖活性跟踪筛选,利用Sephadex,反相硅胶柱色谱、HPLC对制首乌水溶性成分进行分离纯化,应用理化常数测定和光谱(UV,IR,MS,¹HNMR,¹³CNMR,2D-NMR)分析技术鉴定结构。结果　分离并鉴定了1个单体化合物2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(6″-O-α-D-吡喃葡糖)-β-D-吡喃葡糖苷(I)。结论　I为新化合物,具有较强的抑制SMC增殖活性。     

槲寄生中黄酮类成分指纹图谱的建立及高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素的定量检测

目的 建立槲寄生黄酮类成分的特征指纹图谱，同时测定槲寄生中高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素的含量，结合化学计量法分析，为其质量控制提供参考。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，体积流量1.0 mL·min^-1，检测波长为285 nm，柱温30℃。建立14批槲寄生药材的黄酮类成分指纹图谱，结合化学计量学软件进行聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）。在同一色谱条件下，经方法学验证，HPLC法同时测定14批槲寄生药材中高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素。结果 建立了槲寄生药材黄酮类成分的指纹图谱，标定了7个共有特征峰，指认了其中2个峰：峰4 （高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷）、峰6（高圣草素）；其中12批槲寄生药材相似度达到0.9以上，聚类分析将14批样品分为2类；PCA分析共得到2个主成分，主成分1主要反映了特征峰2～7的信息，主成分2主要反映特征峰1的信息，峰4与峰6的峰面积较大，且对第1主成分的贡献也较大；PLS-DA结果表明，3个共有特征峰的变量重要性投影（VIP）值＞1，依次为峰7、峰6、峰4。高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素2个指标成分在一定质量浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为103.17%、101.47%，RSD分别为2.0%、0.7%，方法学考察结果均符合相关要求，14批样品中2种成分总质量分数为2.32～5.17 mg·g^-1。结论 建立的方法准确、简便、重现性好，可为槲寄生药材的质量控制提供参考。     

猪苓多糖通过JAK2-STAT3通路抑制N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基诱导的GES-1细胞上皮间充质转化

目的 研究猪苓多糖抑制胃黏膜上皮细胞（GES-1）间充质转化的作用和机制。方法 应用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基（MNNG，40 μmol·L^-1）诱导GES-1细胞间充质转化模型，造模同时给予猪苓多糖（1.25、2.50、5.00、10.00 mg·mL^-1）处理24、48 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力；造模同时给予猪苓多糖（5.00 mg·mL^-1）处理48 h后，实时定量PCR（qRT-PCR）法检测猪苓多糖对N-cadherin、Snail、Twist、Fibronection及Vmention mRNA表达的影响；Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetin、Vimentin、STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2蛋白表达。裸鼠分别sc经MNNG 40 μmol·L^-1处理48 h后的GES-1细胞（5×10⁷·mL^-1 ，0.2 mL）、胃癌细胞SGC7901（5×10⁷·mL^-1 ，0.2 mL ，阳性对照），1个月后观察各组成瘤及体质量情况，注射局部进行HE染色后行组织病理学观察，验证GES-1细胞经MNNG处理后是否达到肿瘤阶段。结果 与模型组比较，随猪苓多糖浓度的增加，GES-1细胞增殖能力逐渐上升，到达5 mg·mL^-1时增殖能力最高，差异显著（P<0.01、0.001）；猪苓多糖组N-cadherin、Snail、Twist、Fironetion及Vimentin的mRNA表达均显著下降（P<0.05、0.01、0.001）；猪苓多糖组E-cadherin蛋白表达显著上升（P<0.05），N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetion、Vimentin及通路蛋白STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2表达显著下降（P<0.05、0.01、0.001）。对照组和MNNG处理的GES-1组未见瘤体形成，阳性对照SGC7901组注射后1周左右局部出现瘤体，1个月瘤体长至6 cm左右；MNNG处理的GES-1组裸鼠精神较差，体质量明显减轻，SGC7901组裸鼠状态差，体质量大幅减轻；对照组和MNNG组病理染色显示为正常的皮肤组织，阳性对照组显示为肿瘤组织。结论 猪苓多糖可能通过抑制JAK2-STAT3通路干预MNNG诱导的GES-1细胞上皮间充质化。     

西替利嗪对皮肤细胞炎症中单核趋化蛋白-1表达的干预作用

目的考察西替利嗪(CET)对皮肤细胞炎症模型中单核趋化蛋白-1(MCP-1)表达的干预作用。方法组胺(HIS)和IFN-γ刺激真皮成纤维细胞(DF)和人角质形成细胞株HaCaT细胞，采用RT-PCR和ELISA法考察两种细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较，HIS(10 μmol·L^-1)和IFN-γ(20 ng·mL^-1)组显著上调两种细胞(DF和HaCaT) MCP-1 mRNA表达，同时分别使DF的MCP-1蛋白分泌量增加3.5倍和8.4倍，对HaCaT细胞也有相似的影响趋势； CET (1和10 μmol·L^-1) 显著地抑制了它们对细胞MCP-1蛋白产生的增强作用。结论CET可能通过抑制MCP-1的表达而发挥抗皮肤炎症作用。     

HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷

目的 建立HPLC法测定软脉灵口服液中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷。方法 采用Venusil XBP C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;以乙腈–0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为330 nm（0～17 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1）、280 nm（17～50 min检测迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷）;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL。结果 毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和虎杖苷分别在1.23～30.75、0.59～14.75、0.71～17.75、1.47～36.75、9.78～244.50、6.57～164.25、1.19～29.75 μg/mL线性关系良好（r≥0.999 1）;平均回收率分别为99.14%、97.62%、96.84%、98.96%、100.11%、99.46%、98.92%,RSD值分别为1.15%、1.27%、1.02%、0.96%、0.65%、1.41%、0.87%。结论 该方法操作简便、重复性好,为软脉灵口服液中多指标质量评价和临床应用提供参考依据。     

溶血磷脂酰胆碱对ECV304细胞中血管内皮生长因子表达的影响(英文)

目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对内皮细胞(EC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:在人脐静脉内皮细胞株ECV04培养基中加入不同浓度的LPC,培养不同时间,用基础酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组EC条件培养基中VEGF蛋白含量;用免疫组织化学法检测EC中VEGF蛋白及其受体的表达;用原位杂交检测VEGF信使核糖核酸(VEGF mRNA)的表达。结果:培养的ECV304能表达VEGF受体,在胞浆内呈棕色颗粒,当LPC刺激后,阳性增强。原位杂交结果显示,培养的ECV304中未见VEGF mRNA的表达,当LPC刺激后可见VEGF mRNA的高表达,在胞浆内呈棕色颗粒。ELISA结果显示LPC可使ECV304条件培养基中VEGF蛋白含量明显增加,且具有时间和剂量依赖性。结论:LPC能诱导ECV304表达高水平的VEGF。 (责任编辑 吕静)     

欧芹素乙对人脐静脉内皮细胞的保护作用及对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究欧芹素乙对内皮细胞的保护作用;溶血磷脂酰胆碱(LPC)对人脐静脉内皮细胞株HUVEC细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响以及欧芹素乙的影响.方法:应用四唑盐(MTT)法检测溶血磷脂酰胆碱对HUVEC细胞的毒性作用及欧芹素乙的保护作用;应用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量;采用RT-PCR法及Reahime PCR方法检测溶血磷脂酰胆碱对VEGF mRNA的表达及欧芹素乙的影响.结果:MTT检测结果显示,溶血磷脂酰胆碱对HUVEC细胞具有较强的生长抑制作用,而欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱所致的细胞增殖抑制具有较好的保护作用.ELISA结果显示,HUVEC细胞暴露于溶血磷脂酰胆碱后,VEGF蛋白含量明显升高;加入欧芹素乙后剂量依赖性地降低VEGF蛋白的表达.RT-PCR结果显示,溶血磷脂酰胆碱可以增加3种VEGF异构体的转录水平,其中VEGF165的表达显著增加,欧芹素乙可剂量依赖性地抑制溶血磷脂酰胆碱引起的VEGF mRNA的高表达.结论:欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱引起的细胞损伤有明显的保护作用;欧芹素乙可抑制溶血磷脂酰胆碱所诱导的HUVEC细胞中VEGF蛋白及VEGF mRNA的高表达,对内皮细胞起到保护作用.     

银杏叶提取物对大鼠主动脉内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响以及银杏叶提取物(Ginkgo bilobaextract,GbE)对RAEC的保护作用.方法:MTT法和LDH的释放检测RAEC的损伤;用基础酶联免疫吸附实验(ELISA)检测VEGF蛋白含量;用RNA点杂交(Dot blot)法和原位杂交法检测细胞中 VEGF mRNA的表达.结果:LPC 5 mg/L明显抑制RAEC的生长,加入 GbE 0.01-1 μg/L后,LPC对RAEC生长抑制率明显降低。LPC可使RAEC条件培养基中VEGF蛋白表达明显增加,GbE可剂量依赖性地降低VEGF的蛋白含量.原位杂交及点杂交结果显示正常培养的RAEC未见明显的 VEGF mRNA表达,LPC刺激后可见其高表达,同时加入GbE后,VEGF mRNA的表达明显降低.结论:LPC能诱导RAEC表达高水平的VEGF,GbE可明显降低其含量.     

商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠的影响及其作用机制

目的:考察商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠的影响及其可能的机制.方法:自身免疫性小鼠模型通过甲醛化空弯菌CJ-S_(131)辅以佐剂免疫小鼠获得.检测正常小鼠、模型小鼠及商陆皂苷甲处理的模型小鼠血清中的抗ds DNA抗体水平、细胞增殖及骨关节病理切片.通过形态学和流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡.通过逆转录PCR的方法检测ECV304细胞中ICAM-1的mRNA表达.结果:商陆皂苷甲能有效地降低模型小鼠的抗ds DNA抗体水平、抑制淋巴细胞增殖并能缓解其骨关节炎症.而且,商陆皂苷甲能显著促进ConA活化的胸腺细胞的凋亡并能降低ECV304 细胞中ICAM-1的mRNA表达.结论:商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠有治疗作用;促进胸腺细胞凋亡和降低ECV304细胞中ICAM-1的mRNA表达可能是其作用的重要机制.     

Effects of 15-deoxy-Δ^12,14-prostaglandin J2 on cell proliferation and apoptosis in ECV304 endothelial cells

AIM: To investigate the effects of 15-deoxy-Δ^12,14-prostaglandin J2 (15d-PGJ2) on cell proliferation and apoptosis in ECV304 endothelial cells and related molecular mechanism. METHODS: MTT, Hoechst33258, TUNEL, Flow cytometry, DNA ladder, RT-PCR, Western blot, and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) analysis were employed. RESULTS: The 15d-PGJ2 induced apoptosis in ECV304 endothelial cells in a dose-dependent manner(the percentage of apoptosis was enhanced from 10.0 % 1.3 % to 32.8 % 1.6 %), which was accompanied by inhibition of NF-κB and AP-1 DNA binding activity, down-regulation of c-myc, upregulation of Gadd45 and p53,and activation of p38 kinase. However, the expression of p21 was found no significant change. CONCLUSION:peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligand, 15d-PGJ2, can inhibit proliferation and induce apoptosisin ECV304 endothelial cells through different mechanisms.     

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

金雀异黄素对低密度脂蛋白诱导的内皮细胞c-myc mRNA表达的影响(英文)

目的 :研究金雀异黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管内皮细胞c mycmRNA表达的影响。方法 :低密度脂蛋白采用密度梯度超速离心法从健康人血浆中提取 ,经铜离子氧化制备成氧化型低密度脂蛋白。培养的人血管内皮细胞给予氧化型低密度脂蛋白 2 0 0mg·L- 1或同时给予金雀异黄素 10 0 μmol·L- 1诱导不同时间 (1,2 ,4h) ,提取细胞总RNA进行Northernblot杂交。结果 :2 0 0mg·L- 1氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞c mycmR NA在 1h增加为对照水平的 3倍 ,2h增加为对照水平的 3.3倍 ,4h降到对照水平以下 ;给予氧化型低密度脂蛋白诱导的同时给予金雀异黄素 10 0 μmol·L- 1其c mycmRNA表达量在 1h为单独给予氧化型低密度脂蛋白诱导的 80 % ,2h为 6 0 %。结论 :金雀异黄素能有效抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管内皮细胞c mycmRNA表达增高     

丹酚酸B镁盐抑制低氧诱导内皮细胞钙内流和一氧化氮释放

AIM: To investigate the inhibitory effect of magnesium lithospermate B (MLB) on hypoxia-induced elevation of intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and nitric oxide (NO) release in endothelial cells. METHODS: The cultured human umbilical vein endothelial cells (ECV304) were cultured for 30 min under 95 % N(2) and 5 % CO2. Cell injury was evaluated by dye exclusion test and lactate dehydrogenase (LDH) assay. [Ca2+]i was determined by Fura 2-AM. NO content was examined by the NO assay kit. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA expressions were measured by semi-quantitative RT-PCR. RESULTS: Cell viability was decreased from (93.0 +/- 2.6) % in normoxia to (85.5 +/- 2.1) % in hypoxia (P < 0.01), and LDH release was increased from (41 +/- 28) U/L in normoxia to (141+/-68) U/L in hypoxia (P < 0.01) in ECV304 cultured under calcium conditions. MLB 5 and 10 mg/L improved cell viability and inhibited LDH leakage in ECV304. In addition, hypoxia increased [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 (P < 0.01). These increases could be inhibited by MLB 5 and 10 mg/L (P < 0.01), but they were unaffected by hypoxia under calcium-free conditions. CONCLUSION: MLB attenuates hypoxia-induced cell injury and inhibits hypoxia-induced increases of [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 in Krebs'solution containing calcium. The decreases of NO production and eNOS mRNA expression are possibly associated with inhibition of extracellular calcium influx in MLB-treated ECV304     

Effect of heparin affin regulatory peptide on the expression of vascular endothelial growth factor receptors in endothelial cells

BACKGROUND: Heparin affin regulatory peptide (HARP) is an 18-kDa secreted protein that has been implicated in tumor growth and angiogenesis, although the mechanisms involved remain largely unknown. In the present work, the effect of human recombinant HARP on the expression of the vascular endothelial growth factor (VEGF) receptors KDR, Flt-1 and neuropilin-1 was studied in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). MATERIALS AND METHODS: The mRNA and protein levels of VEGF receptors were estimated by semi-quantitative RT-PCR and Western blot, respectively. Cell proliferation and migration were measured by MTT, direct counting of the cells and modified Boyden chamber assays. RESULTS: HARP decreased the expression of KDR but increased the expression of Flt-1 and neuropilin-1 at both the mRNA and protein level. The effect reached a maximum 4 h after the addition of HARP into the cell culture medium and was reversed at later time-points. When HARP was added to the culture medium 4 h before the addition of VEGF165, it inhibited VEGF165-induced proliferation and migration of HUVEC. CONCLUSION: These data suggest that HARP affects the expression of VEGF receptors and inhibits VEGF165-induced activation of HUVEC.