免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附法检测普洱茶中黄曲霉毒素B_1

目的 建立普洱茶中黄曲霉毒素B1（AFB1）的免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附检测方法。方法 粉碎后的普洱茶样品经三氯甲烷提取,水浴挥干后用甲醇-PBS溶解,样品液通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱净化洗脱,在450nm波长使用酶联免疫试剂盒（ELISA）定量检测黄曲霉毒素B1含量。结果 该方法在2.0~100.0μg/kg浓度范围内百分吸光率和浓度对数呈良好的线性关系,相关系数达0.999 8,样品最低检出限为1.0μg/kg,重复测定相对标准偏差为4.72%,3个水平（1.0、10.0、50.0μg/kg）的样品加标回收率为83.00%~104.90%。结论 本法具有简单、快速、高效等优点,适用于普洱茶复杂样品的AFB1定量检测。     

陕西省120份市售玉米及其制品中真菌毒素的污染状况调查

目的了解玉米及其制品中的真菌毒素的污染情况。方法 2016年在陕西省10个地市采集120份玉米及其制品,共检测15种真菌毒素,超高效液相色谱法检测其中的黄曲霉毒素(aflatoxins,AFs)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN),超高效液相色谱串联质谱法检测伏马菌毒素(fumonisins,FBs)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物(deosynivalenol,DON,3-A-DON,15-A-DON)、雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol,NIV)、T2、HT2毒素、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)。结果玉米及玉米制品中各种真菌毒素均有检出,样品总体检出率为98.3%。玉米及其制品中ZEN检出率为49.2%,4.2%的样品超过国家规定60μg/kg的限量值。DON、AFB1和OTA的检出率分别为74.2%、5%和1.7%,均没有超标样品检出,其余11种毒素并未规定限值。检测的所有真菌毒素中,检出率最高的毒素为FBs(FB1、FB2和FB3)、DON及其衍生物(DON、3-A-DON和15-A-DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)。其中FBs的检出率最高,3种伏马菌毒素的检出率均在70%以上,FB1的检出平均值为106μg/kg。DON及两种衍生物检出率仅次于FBs。AFT、T2、HT2检出水平相对较低。OTA是检出率最低的真菌毒素。93%的玉米样品受到两种以上真菌毒素的联合污染。结论陕西省玉米制品中真菌毒素的污染以FB、DON及其衍生物和ZEN为主,且单一样品受到多种真菌毒素的联合污染。     

河南省玉米真菌毒素污染调查

目的为了解2013年河南省产玉米质量和真菌毒素的状况,探究天气环境对玉米真菌毒素污染的影响。方法以2013年河南大田产玉米为研究对象,采用免疫亲和净化-高效液相色谱法重点检测了玉米中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素,DON)等3种真菌毒素,共检测玉米样本197份,抽查样品覆盖了全省18个省辖市的73个县、市、区。根据检测结果并结合当年玉米种植和收获季节天气环境变化等情况进行相关性研究和分析。结果 DON、ZEN等2种真菌毒素含量均未超标,符合国家规定的限量标准,但黄曲霉毒素B1超标严重,平均超标率达48.7%。结论干旱和高温胁迫天气变化、秸秆还田和高密度种植引起的微环境变化是导致玉米黄曲霉毒素污染最主要的环境因素。     

真菌毒素快速分析方法研究进展

真菌毒索（Mycotoxin）也称霉菌毒素，是某些真菌产生的代谢产物或二级代谢产物，目前已知有350多种不同的真菌毒素。但常见的真菌毒素只有10多种，如黄曲霉毒B1（aflatoxins B1，AFB1）；赭曲霉毒索A（ochratoxin A，OTA）；T-2毒素（T-2 toxin）；脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）；二乙酸蔗草镰刀菌烯醇（diacetoxyscirpenol，DAS）；玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN，F-2）；伏马菌素（fumonisin，FM）；展青霉素（patulin，PTL）；杂色曲霉毒素（terigmatocystin，TS）等。在农、畜、水产品中都发现了不同程度的真菌毒素污染。     

免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附法检测普洱茶中黄曲霉毒素B1

目的建立普洱茶中黄曲霉毒素B1(AFB1)的免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附检测方法。方法粉碎后的普洱茶样品经三氯甲烷提取,水浴挥干后用甲醇-PBS溶解,样品液通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱净化洗脱,在450nm波长使用酶联免疫试剂盒(ELISA)定量检测黄曲霉毒素B1含量。结果该方法在2.0~100.0μg/kg浓度范围内百分吸光率和浓度对数呈良好的线性关系,相关系数达0.999 8,样品最低检出限为1.0μg/kg,重复测定相对标准偏差为4.72%,3个水平(1.0、10.0、50.0μg/kg)的样品加标回收率为83.00%~104.90%。结论本法具有简单、快速、高效等优点,适用于普洱茶复杂样品的AFB1定量检测。     

玉米赤霉烯酮ELISA定量检测试剂盒研制

目的研制玉米赤霉烯酮ELISA快速定量检测试剂盒,用以检测食品中抗玉米赤霉烯酮(ZEN)。方法在ZEN单克隆抗体基础上,用间接竞争酶联免疫吸附法研究试剂盒的各项指标。结果试剂盒最低检出浓度为1ng/ml,标准曲线的线性范围为1~200ng/ml,回归方程为^Y=0·99-0·40X(R2=0·99);抗体对ZEN50%的抑制浓度为16·3ng/ml;对玉米和小麦的平均加标回收率分别是96·5%和95·5%,变异系数分别是13·2%和10·9%;试剂盒4℃保质期超过6个月;对参试真菌毒素的交叉反应率均小于1%;实验室内的变异系数小于15%,实验室间变异系数小于20%;用本法与HPLC法同时检测美国维康公司玉米赤霉烯酮盲样,结果均在允许范围之内,且两种检测方法无差别。结论该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、稳定、专一的特点。     

AFB1和DON对大鼠原代肝细胞DNA损伤的研究

目的：为了解AFB1（黄曲霉毒素B1）与DON（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）对DNA损伤作用，以便对其联合遗传毒性进行综合评价，并为采取相应的对策提供科学的依据。方法：应用SCGE试验体外检测了AFB1和DONA和SD鼠肝细胞造成的DNA的损伤。结果：1，0．1，0．01μg/ml的AFB1和DON可以引起肝细胞DNA单链断裂，并且AFB1和DON对于DNA损伤的单独作用无为在第一作用水平时最高，在第三作用水平时最低；AFB1与DON至DNA的损伤未发现有交互作用。结论：AFB1和DON可以引起离体肝细胞DNA损伤。     

总黄曲霉毒素ELISA定量检测试剂盒研制

目的研究并建立敏感、特异和快速的针对食品中总黄曲霉毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速定量检测试剂盒。方法在生产抗总黄曲霉毒素单克隆抗体基础上,利用间接竞争ELISA方法,研制出食品中总黄曲霉毒素快速检测试剂盒,并对试剂盒的各项技术参数进行测定。结果该试剂盒对黄曲霉毒素B G标准品的最低检出浓度为0.26 ng/ml,标准曲线的线性范围为0.26-20.00 ng/ml,线性方程y=-0.4463x 0.3532(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B G50%的抑制浓度为2.08 ng/ml;试剂盒的条内变异系数为4.18%,条间变异系数为5.21%,抗体亲和力常数为1.52×10-10mol/L;对玉米3个加标水平的平均回收率分别为98.63%,94.56%和1 12.05%;对花生的3个加标水平的平均回收率分别为88.66%,87.50%和85.60%。试剂盒37℃可放置96 h以上;试剂盒对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%,57.5%,104%和19%,与其他真菌毒素无交叉反应。结论研制出的ELIS试剂盒能定量检测食品中总黄曲霉毒素。     

上海地区小麦中霉菌毒素的污染调查

采集上海郊县1995年的小麦样品100份．应用薄层层析法检测黄曲霉毒素B1（AFB1），用气相色谱法检测镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯酸（DON）和雪腐镰刀菌烯酸（NIV）。样品中DON、NIV和AFB1的污染率分别为53．0％、35．0％和45．0％，平均含量分别为280．9μg/kg、103．4μg／kg和0．86μg/kg。有17份样品同时检出AFB1，DON和NIV，可见镰刀菌毒素和黄曲霉毒素可共同污染粮食。本次调查我们还发现小麦中DON和NIV的含量存在相关关系（r＝0．55．P＜0．01），而AFB1与这两种毒素之间不存在相关关系（r＜0.10，P＞0.05）。     

河豚毒素单抗ELISA检测试剂盒的研制

目的研制快速检测河豚鱼类中的河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）试剂盒.方法在生产的抗TTX单克隆抗体基础上,利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制TTX快速检测试剂盒.结果该试剂盒的最低检出浓度为5ng/ml,标准曲线的线性范围为5～500ng/ml,回归方程为Y＝-0.3546x＋1.1006,r=0.99（P〈0.05）;河豚鱼25和100ng/ml 2个水平的加标回收率为72.45%～111.24%;试剂盒常温下可保存225d;与牛血清白蛋白（BSA）无交叉反应;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均〈20%.结论该试剂盒快速、简单、灵敏,可满足实际工作需要.     

2018年四川省小麦中真菌毒素污染调查

目的 调查四川省小麦中真菌毒素的污染情况。 方法 采集157份四川省当年新收获的小麦样品,用同位素稀释-液质联用法检测15种真菌毒素。结果 样品中检出脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮2种真菌毒素,平均含量分别为172 μg/kg和39.6 μg/kg,超标率分别为4.4%和14.6%。结论 四川地区新收获的小麦样品中真菌毒素污染以脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮为主,川东北地区小麦污染水平较四川其他小麦产区高。     

中国谷物制品中重要镰刀菌毒素膳食暴露评估研究

目的了解我国居民膳食暴露脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、雪腐镰刀菌烯醇(NIV)和玉米赤霉烯酮(ZEN)水平。方法超高效液相色谱串联质谱法对2009年国产小麦粉和玉米制品中DON等10种镰刀菌毒素含量进行检测,结合小麦粉和玉米制品的膳食消费量,重点对我国居民膳食暴露DON、NIV和ZEN3种毒素进行点评估。结果 (1)在平均消费水平,仍有2.5%的成人和10%的儿童摄入DON的量超过每日耐受摄入量(TDI)。在P75消费水平,人群通过不同DON污染水平的小麦粉和玉米制品(成人:小麦粉P90,玉米制品P97.5;儿童:小麦粉P50,玉米制品P75)暴露DON的量分别为TDI的1.72和2.02倍(成人)、1.19和1.09倍(儿童);无论小麦粉还是玉米制品,在毒素平均水平,儿童高消费(P90、P97.5及P99)人群的DON暴露量均超过TDI,分别是TDI的1.81～3.17倍(小麦)及1.47～3.97倍(玉米);在一般消费模式和高毒素污染水平(P99)、消费量P75和毒素污染水平P97.5以及消费量和毒素污染水平均为P90及以上的情况下,成人通过玉米制品暴露ZEN的量超过TDI,在消费量P50、P75、P90、P97.5和P99模式下,分别有多于1%、2.5%、25%、25%和50%的儿童通过玉米制品暴露ZEN的量超过TDI。(2)由成人和儿童小麦粉高消费量(P90、P97.5及P99)计算的DON关注水平、由玉米制品高消费量(成人:P99,儿童:P97.5和P99)计算的DON和ZEN的关注水平均低于各自的平均污染水平。(3)无论成人还是儿童,对污染高水平DON(P97.5及P99,儿童还有P90)的小麦粉和玉米制品的最大安全摄入量均低于各自的平均膳食消费量。成人由玉米制品中ZEN高污染水平(P99)计算的最大安全摄入量、儿童由小麦粉和玉米制品中ZEN高污染水平(P97.5及P99)计算的最大安全摄入量均低于各自的平均膳食消费量。结论儿童对3种真菌毒素的膳食暴露量均高于成人,是膳食暴露DON、NIV和ZEN的高危人群。长期摄入DON、ZEN高污染水平的小麦粉和玉米制品对健康造成危害的风险也较高。根据评估结果,我国现行DON和ZEN限量标准应下调。     

荧光支气管镜在肺癌早期诊断中的临床分析

目的：探讨荧光支气管镜在肺癌早期诊断中临床意义。方法：选取符合人选标准的患者160例,随机分为白光电子支气管镜组（WLB组）和白发性荧光支气管镜组（AFB组）,检查获取病理和留取冲洗液,统计肺癌诊断数据,对两组确诊肺癌患者检出情况及两组中镜下异常表现进行分析。结果：AFB组中肺癌检出率60．42％,WLB组中肺癌检出率45．31％,AFB组肺癌检出率明显高于WLB组（P〈0．01）。AFB组镜下异常表现阳性率90．50％,WLB组阳性率64．30％,AFB组镜下异常表现阳性率明显高于WLB组（P〈0．01）。结论：AFB检查确诊肺癌明显优于WLB尤其对肺癌早期诊断。     

减肥茶中多种真菌毒素的在线免疫亲和净化液相色谱-串联质谱测定研究

目的建立在线免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱快速测定减肥茶中的多种真菌毒素的方法。方法采用PBS/甲醇溶液提取样品中的真菌毒素,再利用可重复使用多功能免疫亲和柱在线净化样品,净化液在线进行液相色谱-串联质谱的测定。结果方法可同时测定减肥茶中伏马毒素、T-2毒素、HT-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮等10种真菌毒素,其最小检出浓度(LOQ)为1～5μg/kg;三水平添加回收率(n=6)为65.3%～102.4%;相对标准偏差(RSD)为4.5%～13.2%。结论本方法在线免疫亲和净化技术与质谱定性定量同时完成,方法简便、快速,检测限满足了国内外减肥茶中真菌毒素限量要求,可用于减肥茶中真菌毒素的快速检测。     

2007-2008年中国谷物中隐蔽型脱氧雪腐镰刀菌烯醇及多组分真菌毒素污染状况

目的 了解我国部分地区谷物中隐蔽型脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON-3-G)及多组分真菌毒素污染状况.方法 2007-2008年在河南、河北、广西、安徽、四川、重庆和江苏7个省(市、自治区)采集玉米、小麦等样品共计446份,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法检测样品中DON-3-G及多组分真菌毒素[包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、雪腐镰刀菌烯醇(NIV)等]的污染状况.结果 小麦、玉米中污染的主要真菌毒素为DON及其衍生物和ZEN.88%(169/192)的小麦样品中检出DON(1.5～590.7μg/kg;中位数:30.8μg/kg);22.9%(44/192)的小麦样品中ZEN阳性(1.7～3425.0 μg/kg;中位数:8.0μg/kg),其中有6份样品中ZEN含量超过我国规定的限量标准(60μg/kg).50.5%(103/204)的玉米样品中DON阳性(1.6～4374.4 μg/kg;中位数:94.9μg/kg),7份样品中DON含量超过我国规定的限量标准(1000μg/kg);41.7%(85/204)的玉米样品中ZEN阳性(1.6～4808.7 μg/kg;中位数:48.5μg/kg),其中有37份超过我国规定的限量标准(60 μg/kg).首次在国产小麦和玉米中检出DON-3-G,小麦、玉米样品中DON-3-G中位数分别为21.4μg/kg和34.6 μg/kg,小麦中DON-3-G均高于3-乙酰化DON(3-A-DON,中位数:4.1μg/kg)和15-乙酰化DON(15-A-DON,中位数:3.1μg/kg)(t值分别为5.111和5.966,P值均<0.01);玉米中15-A-DON(中位数:48.6μg/kg)高于3-A-DON(中位数:6.8 μg/kg)(t=-3.579,P<0.01).玉米中DON、DON-3-G、3-A-DON、15-A-DON和ZEN的污染水平均高于小麦(Z值分别为-3.492、-1.960、-2.467、-8.711和-6.272,P值均<0.05),而NIV在小麦中水平(中位数:29.0μg/kg)高于玉米(中位数:18.2μg/kg)(Z=-2.086,P<0.05).结论 我国部分地区小麦、玉米被多组分真菌毒素污染,以DON检出率最高;玉米中受DON、DON-3-G、3-A-DON、15-A-DON和ZEN的污染比小麦重.

Abstract：

Objective To elucidate the natural occurrence of masked deoxynivalenol (DON-3-G)and other multi-mycotoxins in cereals from parts of China. Methods A total of 446 corn and wheat samples harvested in 2007 and 2008 collected from Henan, Hebei, Guangxi, Anhui, Sichuan, Chongqing and Jiangsu provinces were analyzed for DON-3-G and other multi-mycotoxins (including deoxynivalenol (DON),zearalenone(ZEN), nivalenol (NIV), et al) by UPLC-MS/MS. Results Corn and wheat samples were mainly contaminated by DON and its derivatives as well as ZEN. 88% (169/192) of wheat samples were positive for DON (range: 1.5-590. 7 μg/kg; median: 30. 8 μg/kg) ;22. 9% (44/192) of wheat samples were contaminated with ZEN (range: 1. 7-3425.0 μg/kg; median: 8.0 μg/kg) and six samples contained ZEN concentration higher than the ZEN tolerance limit of 60 μg/kg. DON was detected in 50. 5% (103/204) corn samples (range: 1.6-4374. 4 μg/kg; median: 94. 9 μg/kg); Seven samples contained DON exceeding the tolerance limit of 1000 μg/kg for DON. Additionally, ZEN was found in 41.7% (85/204) corn samples with the concentration between 1.6 μg/kg and 4808.7 μg/kg (median:48.5 μg/kg)and there were 37 corn samples with ZEN level in the excess of tolerance limit for ZEN (60 μg/kg). DON-3-G was detected in corn and wheat samples for the first time in China with the median level of 21.4 μg/kg and 34. 6 μg/kg for wheat and corn,respectively. Wheat was more heavily contaminated with DON-3-G than both 3-aeetly-DON (3-A-DON,median:4. 1μg/kg) and 15-acetly-DON (15-A-DON,median :3. 1 μg/kg)(t values were 5. 111 and 5. 966, respectively,both P values <0. 01). While,the level of 15-A-DON (median: 48. 6 μg/kg) in corn was higher than 3-A-DON (median: 6. 8 μg/kg) (t =-3. 579,P < 0. 01). The concentration of DON, DON-3-G, 3-A-DON, 15-A-DON and ZEN in corn were higher than that in wheat (Z values were-3. 492,-1. 960,-2. 467,-8. 711 and-6. 272, respectively,all P values < 0. 05). Wheat(median: 29. 0 μ.g/kg) contained higher NIV in comparison with corn(median:18.2 μg/kg,Z=-2.086,P<0.05). Conclusion Wheat and corn samples from parts of China were contaminated with multi-mycotoxins and DON was the predominant;in comparison of wheat,corn was more heavily contaminated with DON, DON-3-G,3-A-DON, 15-A-DON and ZEN.     

化学发光酶免疫分析法检测食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

[目的]建立检测食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)快速灵敏化学发光酶免疫方法。[方法]采用棋盘滴定法确定化学发光检测DON最佳工作条件(抗原包被浓度、包被量、一抗和二抗的工作浓度、线性范围和检出限等),建立化学发光检测DON的方法并对实际样品进行检测,同时将检测结果与LC-MS/MS结果进行对比。[结果]经多次实验,化学发光检测DON的工作条件为:DON-BSA最佳包被浓度为0.1μg/ml,包被量为100μl/孔,抗DON单克隆抗体的最佳工作浓度为1:10000,标准曲线线性范围5～200ng/ml,50%抑制浓度为1.02ng/ml,DON的最低检出浓度为0.05ng/ml,样品中DON的最低检出量为1μg/kg,在100～2000μg/kg添加水平的回收率范围为81%～125%。用所建方法对23个食品样品进行了分析,检测结果与LC-MS/MS结果高度相关(r2=0.98)。[结论]所建方法准确、灵敏,适用于食品中DON污染水平的批量筛选。     

水浴酸消化-电感耦合等离子质谱同时测定全血中多种元素的分析方法研究

目的建立电感耦合等离子体质谱（ICP—MS）同时测定全血中多种微量和痕量金属元素的分析方法,为开展重金属污染对人体健康的影响研究提供检测手段。方法样品经硝酸水浴消化后,以钪、锗、铑和铼作为在线内标,内标中加入异丙醇进行基体匹配,用ICP-MS测定铅、镉、砷、汞、铬、硒、锑、钴、钼、铊、锰、铜、铋、锌、铁、钙及镁等17种元素,采用全血标准物质-Seronorm^TM TraceElementsWholeBloodL-1及L-2实施质量控制。结果各金属元素线性相关系数均大于0．9995;重金属元素检出限铅、锑为2．0μg／L,铬、锰为1．0μg／L,铜为5．0Ixg／L,其他元素均在0．008～0．3μg／L之间;对标准物质7次测定结果均在标准值范围内,其相对标准偏差小于10％;在连续20h测定400份血样过程中,对同一样品间隔重复测定16次,其相对标准偏差小于10％。结论水浴酸消化一电感耦合等离子体质谱方法操作简便、灵敏度高、稳定、抗干扰性强,适用于大批量血样中多种重金属及营养元素的同时测定。