血管内皮生长因子及其受体在大鼠碱烧伤后角膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1在大鼠角膜碱烧伤后新生血管中的表达。方法:应用1mol/LNaOH制作大鼠碱烧伤新生血管模型,随机分为3组,分别于1,4,7及14d处死大鼠取出角膜,免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测大鼠角膜中的VEGF及其受体Flk-1的表达。结果:正常大鼠角膜中VEGF及Flk-1受体弱表达或不表达。二者均在角膜上皮层,基质层、内皮层及新生血管内皮细胞表达;大鼠角膜碱烧伤后各时间点VEGFmRNA和Flk-1mRNA相对表达量具有相关性。结论:大鼠角膜碱烧伤后,VEGF及其受体Flk-1结合诱导内皮细胞分化及角膜新生血管形成。     

血管内皮生长因子与角膜碱烧伤后血管新生

目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管形成中的作用。方法　利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、2 1d处死大鼠,摘除角膜作病理切片,多形核白细胞(PMN)计数;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达。结果　光镜下显示正常组PMN记数为0 . 5 0 0±0 . 62 9,烧伤后1d角膜缘处的PMN开始增多,7d时增加最明显,此后逐渐减少;免疫组化显示:VEGF在CNV中阳性表达逐渐增加,于7d组表达最明显,2 1d后几乎无表达;图像分析与免疫组化结果一致。结论　碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,并与角膜的炎性反应程度平行,PMN浸润可能是CNV形成的关键因素。     

大鼠角膜碱烧伤后角膜淋巴管生成及VEGF-C和VEG-FR-3的表达

目的:研究大鼠角膜碱烧伤后角膜淋巴管生成及VEGF-C和VEGFR-3的表达。方法:制作角膜碱烧伤模型,应用免疫组化方法检测正常角膜及烧伤后1,3,5,7,14,21,28d角膜组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达,免疫组化LYVE-1(淋巴管内皮特异标记物)染色观察角膜中淋巴管生成情况,电镜观察烧伤后14d角膜新生淋巴管状况。结果:角膜碱烧伤后,VEGF-C和VEGFR-3的表达明显升高,烧伤后3d,角膜中出现淋巴管。结论:角膜碱烧伤后新生淋巴管生成伴VEGF-C和VEGFR-3高表达。     

角膜新生淋巴管与血管内皮生长因子C

角膜新生淋巴管（CL）存在于血管化角膜上，常引起并加重角膜混浊和角膜移植排斥反应，是重要的致盲原因之一。血管内皮生长因子C（VEGF—C）是血管内皮生长因子（VEGF）家族成员之一，是VEGFR-2和VEGFR-3受体的配体。VEGF-C通过与VEGFR-3结合促进淋巴管增生，是一个特异性的淋巴管生长因子，在CL形成中起着重要的作用。就近年来CL研究进展及与VEGF—C的关系进行综述。     

瘦素和血管内皮生长因子在碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型中的表达

目的 观察碱烧伤后不同时期角膜的组织病理学变化,以及瘦素和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VFGF)的表达,探讨它们与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的关系.方法 使用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型,采用浸润1 mol·L-1 NaOH溶液、直径为3 mm的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央30 s,制作CNV模型.25只SD大鼠右眼为实验眼,随机分成5组,每组5眼,左眼为正常对照眼.每天用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管,分别计算新生血管长度和面积.并行HE染色和免疫组织化学检测.结果 碱烧伤后4 d、7 d、14 d、21 d,实验组CNV面积分别为:(2.55±0.15)m2、(4.15±0.36)mm2、(10.21±0.45)mm2、(8.56±0.06)mm2.免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后1 d,实验组瘦素、VEGF的表达开始增高,碱烧伤后14 d达高峰,14 d后瘦素、VEGF的表达下降,21 d后显著下降;其表达部位主要分布在形成的新生血管区域和上皮层;正常对照组瘦素可微弱表达于角膜上皮层和基质层,VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达.实验组角膜瘦素、VEGF阳性表达率较对照组明显增加(χ2=29.07,P=0.001;χ2=35.51,P=0.001),瘦素与VEGF的表达具有正相关性(r=0.95,P=0.001).结论 瘦素和VEGF表达水平与角膜新生血管的生成具有相关性,瘦素可能成为治疗CNV的靶点.     

角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系

目的研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor，VEGF）的表达与角膜新生血管化的关系。方法30只Sprague-Dawleg（SD）大鼠碱烧伤，诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间形态学分析来评价角膜新生血管的情况，免疫组化及Westem blot评价角膜VEGF的表达。结果角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始增高，伤后4d达高峰，伤后7d VEGF的表达下降，14d后显著下降。碱烧伤后，角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论碱烧伤后大鼠角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性，并在其中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子靶向抗体对大鼠角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的研究

目的 通过对角膜碱烧伤大鼠模型结膜下注射VEGF靶向抗体MIL60,观察其对角膜新生血管(corneal neovascularization,CoNV)生长的影响,初步探讨MIL60抑制大鼠CoNV生长的基本作用机制.方法 建立碱烧伤诱导的SD大鼠CoNV模型(右眼造模),根据碱烧伤后第1天结膜下注射的药物不同将72只大鼠随机分为:25 mg·mL-1 MIL60组、地塞米松组、MIL60溶剂组和NaCl组.观察并记录CoNV生长情况及角膜的形态变化,通过软件分析CoNV的长度及累及面积.碱烧伤后第3天、第7天、第14天、第21天和第28天分别处死动物,取角膜组织行HE染色和免疫组织化学染色,同时检测角膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、VEGF受体-1(VEGF receptor-1,VEGFR-1)、VEGFR-2和基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)蛋白的表达.结果 在各个时间点,与MIL60溶剂组和NaC1组比较,地塞米松组、25 mg·mL-1 MIL60 组CoNV面积和长度显著减少,差异均具有统计学意义(均为P＜0.01);25 mg·mL-1MIL60组的CoNV长度和面积与地塞米松组相当(均为P＞0.05).同时,MIL60还能有效降低角膜组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2以及MMP-9蛋白的表达.结论 MIL60能显著抑制角膜碱烧伤后CoNV的生长,并且还能减轻碱烧伤引起的炎症反应.     

血管内皮生长因子在鼠角膜新生血管模型的表达

正常角膜透明无血管 ,而角膜局部和全身因素均可导致角膜新生血管 (ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ,ＣＮＶ)增生。角膜致盲的主要原因为角膜新生血管性病变。ＣＮＶ可促进组织的修复 ,但严重影响角膜的透明性 ,致使视力下降 ,增加了角膜移植术后排斥反应的发生率。目前的研究表明 ,血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是作用于血管内皮细胞的多肽类因子 ,可增加毛细血管通透性 ,促进新生血管的形成[1 3 ] 。我们观察大鼠正常角膜及损伤后角膜中ＶＥＧＦ的表…     

碱烧伤后抑制角膜新生血管的实验研究--血管内皮生长因子165反义RNA的作用

目的研究重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子165反义RNA(rAAN-aVEGF165)抑制碱烧伤后角膜新生血管的作用。方法30只SD大鼠随机分成2组，每组15只。实验组前房注射rAAV-aVEGF165，对照组前房注射rAAV-Lacz。30天后，碱烧伤诱导角膜新生血管，以形态学分析评价角膜新生血管的情况，Western blot评价角膜VEGF的表达。结果形态学分析显示实验组角膜新生血管得到抑制，Western blot结果显示，碱烧伤后各个时期角膜VEGF165的表达实验组明显低于对照组。结论下调VEGF能有效抑制角膜新生血管的形成．重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。     

人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管PEDF和VEGF表达及角膜新生血管的影响

目的:探讨人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管形成过程中色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达及角膜新生血管的影响.方法:选取2015-06/2016-06在佛山爱尔眼科医院治疗的角膜碱烧伤患者32例37眼,随机分为A、B两组.其中A组17例19眼,采用40mg/L人羊膜匀浆提取液治疗,B组15例18眼,采用3g/L泼尼松龙滴眼液治疗.在治疗不同的时间点(1、4、7、14、21、28d)观察角膜新生血管的生长,同时检测新生血管形成过程中PEDF及VEGF的表达水平.结果:A组患者在使用人羊膜匀浆提取液治疗后,PEDF表达水平显著高于B组,差异有统计学意义(P=0.001),在治疗28d后,PEDF表达水平达到了0.721依0.314,而B组患者PEDF表达水平仅有0.538依0.253,两组患者PEDF表达水平间的差异具有统计学意义( P<0.05 );A组VEGF表达水平在不同的时间点检测时均低于B组,在治疗28 d后,A组患者VEGF 表达水平为0.152依0.020,B 组患者VEGF表达水平为0.302依0.031,两组患者VEGF表达水平间的差异具有统计学意义(P<0.05);A组患者角膜新生血管数量显著低于B组患者,差异有统计学意义( P<0郾05 ).结论:人羊膜匀浆提取液可以促进患者角膜碱烧伤后新生血管形成过程中PEDF表达,抑制VEGF的表达和角膜新生血管的增殖.     

苏拉明对角膜碱烧伤新生血管抑制作用的研究

目的研究苏拉明对碱烧伤角膜新生血管（CNV）及血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素样生长因子-I（IGF—I）的影响。方法新西兰大白兔48只,分为空白组、对照组、苏拉明组3组,每组16只（32只眼）。对照组与治疗组制备角膜碱烧伤模型,术后分别给予氯霉素、8g／L苏拉明滴眼液点眼。分别于术后第1、4、7、14d观察新生血管情况,免疫组织化学法检测VEGF、IGF—I的表达。结果术后第1d各组无新生血管生长。第4、7、14d,空白组未出现新生血管,对照组与治疗组可见CNV,且治疗组比对照组新生血管面积小（P〈0．01）。第1、4、7d,对照组与治疗组VEGF、IGF—I的表达均比空白组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,治疗组与对照组相比,差异亦有统计学意义（P〈0．01）。第14d,3个组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论VEGF、IGF—I参与CNV形成,苏拉明通过降低角膜上皮中二者的表达,抑制角膜碱烧伤新生血管形成。     

VEGF在鼠角膜化学烧伤后新生血管生成中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼠角膜化学烧伤后新生血管生成中的作用。方法：制作角膜化学烧伤动物模型，伤后7天内每天用免疫组化及图象分析检测鼠角膜中VEGF的积分光密度，有放射自显影检测角膜血管内皮细胞标记指数（labeling index)，结果：化学烧伤后鼠角膜内VEGF积分光密度与血管内皮细胞标记指数呈明显的平行关系，均在伤后第1天即明显升高，第2天峰值，第3天开始回落，第7天接近基线水平。结论：化学烧伤后鼠角膜内VEGF蛋白水平与血管内皮细胞增生呈平行关系，VEGF与角膜新生血管生成有时间上的相关性，并在其中发挥重要作用。     

不同浓度KH902对兔碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用

目的　观察不同浓度ＫＨ９０２对兔碱烧伤后角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ,ＣＮＶ）的抑制作用。方法　取成年新西兰兔２４只,建立兔碱烧伤模型,将兔随机分为４组,使用ＫＨ９０２眼用注射剂（康柏西普）配置不同浓度的ＫＨ９０２,Ａ组２．５ｍｇ·ｍＬ－１,Ｂ组５ｍｇ·ｍＬ－１,Ｃ组１０ｍｇ·ｍＬ－１,Ｄ组为对照组（生理盐水）,均为每日滴眼３次。分别在制模后３ｄ、７ｄ、１４ｄ、３０ｄ拍摄眼前节照片,观察ＣＮＶ情况并行角膜激光共焦显微镜检查,并计算ＣＮＶ面积。观察各组处死兔常规病理和ＶＥＧＦ表达情况。结果　在制模后２８ｄ内,四组ＣＮＶ形成,其中Ｄ组ＣＮＶ较Ａ、Ｂ、Ｃ组生长明显;对各组切片进行观察发现,四组均出现了角膜上皮及基质细胞的损失和修复、炎性细胞的浸润和ＣＮＶ的生长,但Ｄ组的炎性细胞较密集,ＣＮＶ管径和密度较高。制模后１４ｄ、２８ｄ,Ａ、Ｂ、Ｃ组炎性细胞密度较Ｄ组均显著减少（均为Ｐ＜０．０１）;在制模后７ｄ、１４ｄ、２８ｄ,Ａ、Ｂ、Ｃ组较Ｄ组ＶＥＧＦ表达明显减少;Ａ、Ｂ、Ｃ三组进行组间比较,仅制模后２８ｄ时Ｂ、Ｃ组间差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,其余差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）;制模后７ｄ、１４ｄ、２８ｄ,Ａ、Ｂ、Ｃ三组均较Ｄ组ＣＮＶ面积减少,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,而三组组间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　不同浓度的ＫＨ９０２对兔碱烧伤后的ＣＮＶ均有抑制作用,低浓度的ＫＨ９０２即可产生明显的抑制作用。     

医用几丁糖对角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的观察医用几丁糖对角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法NaOH烧伤兔角膜制作角膜碱烧伤模型,随机分为碱烧伤组（碱烧伤）和几丁糖组（碱烧伤＋2％医用几丁糖滴眼）。分别于1、4．7、14d观察两组兔角膜新生血管生长情况,HE染色计算多形核粒细胞（PMN）数量,兔疫组化染色测定血管内皮生长因子（VEGF）的活性。结果几丁糖组新生血管较碱烧伤组生长缓慢,PMN计数及VEGF表达较碱烧伤组均明显减少。结论医用几丁糖可抑制碱烧伤后角膜新生血管的形成。     

HIF在兔角膜碱烧伤后CNV生成中的作用研究

目的研究缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)以及诱导性一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在角膜碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成中的作用及机制。方法 建立兔CNV动物模型,将其随机分为对照组和3个实验组,对照组结膜下注射生理盐水,实验组注射不同剂量的三氧化二砷。观察兔CNV的生长情况,并记录CNV的生长面积。用免疫组织化学方法检测兔角膜HIF、iNOS以及VEGF的表达。结果 对照组6 d、12 d、15 d、21 d、28 d CNV的面积分别为:(53.86±20.60)mm2、(87.21±25.80)mm2、(128.31±40.10)mm2、(114.42±29.40)mm2、(78.15±35.13)mm2。各实验组CNV面积均小于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。免疫组织化学方法检测角膜HIF-1α、iNOS及VEGF蛋白的表达:VEGF表达集中在角膜上皮下基质,存在于血管内皮细胞、炎性细胞胞浆内,呈深黄色。在7 d有较高表达,14 d达到高峰,28 d时明显降低,且对照组明显高于实验组,各实验组的表达随三氧化二砷剂量的增加而减少。蛋白的表达与CNV面积呈正相关。结论 角膜碱烧伤后CNV的形成可能与HIF-1α有关。三氧化二砷通过抑制HIF-1α和iNOS、VEGF表达而抑制兔CNV的形成。     

大鼠角膜碱烧伤行培养角膜上皮移植后VEGF的表达

目的 研究角膜上皮培养移植后角膜新生血管(CNV)形成和血管内皮生长因子(VEGF)的变化特点.方法 对角膜碱烧伤CNV大鼠行培养角膜上皮移植,观察术后CNV程度,RT-PCR和免疫组织化学法检测术后24、48、72、168 h角膜组织VEGF的表达.结果 实验组角膜上皮移植后14 d CNV接近瞳孔区,之后逐渐减退.移植后24 h角膜VEGF mRNA的相对含量为1 20±0.09;48 h为1 91±0.03;72 h为2.34±0.11;168 h为1.83 ±0.14.角膜上皮和基质均表达VEGF蛋白,以上皮层表达为主,并随时间推移表达量增加.结论 培养角膜上皮移植后24 h角膜可表达VEGF,72 h表达量最高.VEGF表达与培养角膜上皮移植后CNV的发生密切相关.     

碱烧伤后角膜新生淋巴管与炎症反应指数间的关联

目的 探讨角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管与炎症反应指数间的关联.方法 实验研究.制备大鼠角膜碱烧伤模型.采用5'核苷酸酶-碱性磷酸酶(5'-NA-ALP)双重酶组织化学染色及全角膜免疫荧光法分别检测碱烧伤后1、3 d,1、2、3、4、5、6、7及8周的角膜新生淋巴管和血管的动态变化,并进行淋巴管计数(LVC)和血管计数(BVC).同时,于裂隙灯显微镜下观察角膜炎症反应的变化,记录炎症反应指数(IF),并比较LVC和IF之间的关联.11例人角膜取自碱烧伤后行角膜移植的11例患者.淋巴管内皮细胞受体(LYVE-1)免疫组织化学染色法标记人角膜中的新生淋巴管,LVC和IF之间的关联运用Pearson's相关分析,采用配对t检验比较角膜中存在淋巴管和不存在淋巴管的患者之间IF、炎性细胞计数、碱烧伤病史、年龄的差异.结果 碱烧伤后,角膜基质层存在着新生淋巴管.碱烧伤后3 d时出现角膜新生淋巴管,2周末达到高峰,5周末消退.新生淋巴管的出现滞后于炎症反应,但先于炎症反应和新生血管而消退.LVC与IF之间呈正相关(r=0.572,P＜0.01).11例患者中3例存在着角膜新生淋巴管.与另8例角膜中无新生淋巴管的患者相比,前者IF显著性升高(t=3.28,P＜0.05)、炎性细胞计数显著性增加(t=2.42,P＜0.05),年龄显著性下降(t=2.62,P＜0.05),而碱烧伤病史无显著性差异(t=1.28,P＞0.05).结论 角膜碱烧伤后有淋巴管生成,角膜新生淋巴管和炎症反应指数之间存在着密切的关联.