TTNPB对体外培养的脐血T淋巴细胞分化的影响

[目的]研究视黄酸受体特异性激动剂TTNPB对体外培养的脐血T淋巴细胞表型分化的影响.[方法]采用体外人脐血淋巴细胞培养体系,以视黄酸受体(RARs)特异性激动剂TYNPB刺激细胞,TTNPB设立阴性对照组及10-4 mol/L、10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L 5个剂量组,培养72 h后收集淋巴细胞,采用流式细胞术分析T淋巴细胞表型分化情况.[结果]体外人脐血淋巴细胞培养体系能支持脐血T淋巴细胞的分化成熟.TTNPB剂量在10-4mol/L时,CDS+细胞比例为21.10%±0.10%(P=0.024),CD4+/CD8+比值为2.01±0.01(P=0.004).[结论]在体外TTNPB能抑制脐血CD4+CD8+胸腺细胞向CD8+细胞转化,TTNPB能升高CD4+/CD8+比值.视黄酸受体途径可能是维生素A调节免疫功能的机制之一.     

视黄酸受体和类视黄醇X受体激动剂对脐血单个核细胞IL-4和IFN-γ表达的影响

目的观察视黄酸受体(RARs)激动剂四氢四甲基萘丙烯苯甲酸乙酯(TTNPB)和类视黄醇X受体(RXRs)激动剂甲氧普烯酸(MA)对脐血单个核细胞表达IL-4和IFN-γ的影响。方法采用ELISA和RT-PCR,分别从蛋白质和基因水平上观察TTNPB和MA对脐血单个核细胞表达IL-4和IFN-γ的影响。结果 ELISA显示10-8、10-6、10-5、10-4mol/L的TTNPB和10-8、10-5、10-4mol/L的MA显著降低IFN-γ/IL-4蛋白含量比值(P0.05);RT-PCR显示10-4mol/L的MA显著降低IFN-γ/IL-4mRNA比值(P0.05),而10-5mol/L的TTNPB和10-7、10-6mol/L的MA显著升高IFN-γ/IL-4mRNA比值(P0.05)。结论适当浓度的TTNPB和MA可以在蛋白质水平上下调IFN-γ/IL-4的比值;不同浓度的TTNPB和MA在基因水平上对IFN-γ/IL-4的比值有不同影响。     

TTNPB对人体外周血单核细胞和T淋巴细胞的影响

[目的]评价TTNPB对人体PBMC和T淋巴细胞的增殖的影响,确定剂量水平,建立一套通过受体途径研究维生素A功能的实验方法。[方法]用密度梯度分离法和磁性细胞分选法从健康人的外周血分离PBMC和T淋巴细胞,体外培养,采用MTT法,绘制人PBMC和T淋巴细胞的体外生长曲线,并测定在10-2mol/L,10-3mol/L,10-4mol/L,10-5mol/L,10-6mol/L,10-7mol/L6个不同浓度时的OD值,用方差检验分析各剂量对细胞的影响。[结果]TTNPB在10-2mol/L,PBMC的OD值为0.0600±0.0328(P﹤0.05),T淋巴细胞的OD值为0.0907±0.0110(P﹤0.05)。[结论]TTNPB在高浓度10-2mol/L对PBMC和T淋巴细胞增殖有显著的抑制作用;中等浓度有促进作用,但这还需要进一步的实验得出;低浓度时没有抑制或促进作用。     

肠道病毒71型感染手足口病患儿Th1/Th2细胞因子变化

目的探讨肠道病毒71型(EV71型)感染手足口病患儿的常规生化检查及辅助性T细胞(help T cell,Th)1/Th2细胞因子变化。方法选择儋州市人民医院2017年1月-2018年12月住院的EV71型感染手足口病患儿120例作为研究对象,其中普通型67例,重症型53例。另选择医院2017年1月-2018年12月健康体检小儿60名作为对照组。对两组患儿白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10和干扰素-γ(IFN-γ)水平进行比较。结果感染组WBC计数、CRP、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ含量分别为(12.01±1.24)×10^9/L、(10.83±2.45)mg/L、(10.83±1.24)pg/ml、(11.43±1.46)pg/ml、(34.39±5.46)pg/ml、(10.32±2.41)pg/ml、(4.83±0.97)pg/ml,均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。重症组WBC计数、CRP、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ含量高于普通组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论EV71型感染手足口病患儿WBC计数和CRP水平升高,且Th1/Th2细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ明显升高,且与病情进展密切相关。     

煤工尘肺患者血清白细胞介素-12和γ-干扰素含量的变化

目的探讨煤工尘肺患者(CWP)血清白细胞介素-12(IL-12)和γ-干扰素(IFN-γ)水平变化及意义。方法用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测49名CWP患者(煤工尘肺组)、36名具有相同接尘史但未患CWP的煤矿工人(井下接尘组)及32名非接尘井上健康工人(井上对照组)的血清IL-12和IFN-γ含量。结果煤工尘肺组IL-12水平[(74.0±16.5)pg/ml]明显高于井下接尘组[(25.1±3.6)pg/ml]和井上对照组[(19.8±2.8)pg/ml],组间差异均具有非常显著性(P<0.01);与井上对照组比较,井下接尘组IL-12虽升高,但差异无显著性(P>0.05)。煤工尘肺组、井下接尘组和井上对照组IFN-γ水平无明显改变。Ⅰ期CWP并发肺气肿和Ⅱ期CWP并发肺气肿患者IL-12水平[(58.3±15.6)pg/ml和(62.8±30.9)pg/ml]均高于单纯Ⅰ期和Ⅱ期[(22.9±2.9)pg/ml和(30.2±4.3)pg/ml],两组差异有显著性(P<0.05);Ⅱ期患者血清IL-12水平高于Ⅰ期,但差异无显著性(P>0.05);单纯Ⅱ期和Ⅰ期并发肺气肿患者IFN-γ水平[(13.3±2.3)pg/ml和(21.5±2.8)pg/ml]均低于Ⅰ期[(49.7±7.5)pg/ml],差异具有非常显著性(P<0.01)。煤工尘肺组IL-12和IFN-γ无明显相关性(r=-0.083,P=0.579)。结论IL-12和IFN-γ参与CWP发展过程,与CWP发生和发展均有密切关系。检测IL-12和IFN-γ可能对CWP早期预防及病情监测有一定参考价值。     

血清IFN-γ和IL-10及免疫球蛋白与艾滋病患者机会性感染的关系研究

目的研究分析血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)及免疫球蛋白与人类免疫缺陷病毒(HIV)/艾滋病(AIDS)患者机会性感染的关系。方法选取2015年6月-2016年6月收治的AIDS患者50例,采用酶联免疫吸附法测定血清中IFN-γ、IL-10及免疫球蛋白水平。结果 50例HIV/AIDS患者中,机会性感染40例占80.00%,单一机会性感染11例占27.50%,2种及以上机会性感染29例占72.50%;机会性感染组患者IL-10、免疫球蛋白G(IgG)分别为(95.55±158.41)、(28.83±3.24)pg/ml,均显著高于未感染患者(10.22±19.10)、(11.24±2.22)pg/ml(P<0.05),而IFN-γ(5.81±1.32)pg/ml则低于未感染患者(8.62±1.01)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05),肺孢子菌感染患者IL-10为(19.71±27.82)pg/ml,均显著低于未感染患者(71.89±161.02)pg/ml(P<0.05);肺孢子菌感染患者、结核分歧杆菌、马尔尼菲青霉菌、其他真菌感染患者IgG水平均高于未感染患者(P<0.05);机会性感染组患者IgA与IgM水平与无感染患者,差异无统计学意义;50例患者中,好转39例,恶化或无变化7例,死亡4例。结论血清IL-10、IFN-γ与HIV/AIDS患者机会性感染的发生密切相关,低水平IL-10可降低机体对肺孢子菌的清除能力,IL-10与IFN-γ对疾病预后无明显关系。     

卡介苗感染人树突状细胞对miRNA-99b表达和Th17/Treg分化的影响

目的 探讨牛型分枝杆菌减毒活菌—卡介苗(BCG)感染对人树突状细胞(DCs)microRNA-99b(miRNA-99b)表达的影响及对新生儿脐血CD_4~+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg的作用。方法 BCG感染体外培养的人树突状细胞,然后与新生儿脐血CD_4~+初始T淋巴细胞混合培养,qRT-PCR观察人树突状细胞miRNA-99b的表达变化,qRT-PCR检测CD_4~+T淋巴细胞Foxp3、ROR-γt、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)基因转录水平,观察CD_4~+T淋巴细胞分化亚型的改变;ELISA法检测培养上清INF-γ、IL-17和IL-23表达水平。结果 BCG感染后,人树突状细胞miRNA-99b基因表达增加(P<0.001);CD_4~+T淋巴细胞IFN-γ、IL-10基因表达增加(P<0.05),ROR-γt基因表达降低(P<0.05),Foxp3基因转录增加,但差异无统计学意义;感染组培养上清中INF-γ表达水平增加(P<0.001),IL-17和IL-23表达水平均有一定的增加,但差异无统计学意义。结论 结核感染可能通过影响树突状细胞miRNA-99b的表达进而诱导初始CD_4~+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡参与结核病的发病过程。     

外周血中细胞因子表达水平与孕妇胎膜早破及新生儿围产期感染的相关性研究

目的分析外周血细胞因子在胎膜早破(PROM)、新生儿围产期感染中表达特点以及临床意义。方法选取2014年6月-2015年7月在医院确诊为足月胎膜早破并成功分娩的132例孕妇作为胎膜早破组,选取同期足月正常分娩的130名孕妇作为正常对照组,孕妇在分娩前、分娩后24h内空腹抽取外周静脉血,新生儿在出生后24h内抽取外周静脉血,应用免疫学方法检测血清可溶性白细胞分化抗原14(SCD14)、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、干扰素-γ(IFN-γ)以及白细胞介素-10(IL-10)水平,同时统计新生儿围产期感染情况,对比分析正常孕妇与胎膜早破孕妇、围产期感染新生儿与健康新生儿之间外周血细胞因子表达水平的差异性。结果胎膜早破组分娩后SCD14(46.34±8.35)ng/ml、PCT(52.36±8.23)pg/ml、CRP(4.78±1.24)mg/ml、IFN-γ(75.24±9.23)pg/ml、IL-10(6.59±1.25)pg/ml显著下降,两组孕妇外周血清SCD14、PCT、CRP、IFN-γ、IL-10差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组新生儿外周SCD14(56.35±8.25)ng/ml、PCT(55.32±10.24)pg/ml、CRP(6.01±1.69)mg/ml、IFN-γ(62.21±9.25)pg/ml、新生儿感染率15.15%显著高于正常对照组(P<0.05),IL-10(5.26±1.02)pg/ml显著低于对照组(P<0.05);PROM组感染新生儿外周血SCD14(63.52±9.25)ng/ml、PCT(61.32±1.24)pg/ml、CRP(7.26±1.75)mg/ml、IFN-γ(96.73±11.26)pg/ml显著高于未感染新生儿,而IL-10(4.03±2.01)pg/ml显著低于未感染新生儿(P<0.05)。结论胎膜早破孕妇和新生儿围产期感染患儿的外周血炎性细胞因子表达水平显著升高,积极进行外周血炎性因子表达检测有利于早期预测胎膜早破和新生儿围产期感染。     

IL-12单克隆抗体对克罗恩病模型小鼠Th1/Th2免疫平衡的调节作用

目的研究白细胞介素-12(IL-12)单克隆抗体对克罗恩病模型小鼠辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)免疫平衡的调节作用。方法选择BALB/c健康小鼠30只,将30只小鼠分为正常对照组(10只)和实验小鼠(20只),实验组小鼠做克罗恩病模型,建模成功后将实验组小鼠分为克罗恩病组和IL-12单克隆抗体组各10只,IL-12单抗组小鼠腹腔注射IL-12单抗(25 mg/kg),正常对照组和克罗恩病组小鼠腹腔注射0.2 ml的生理盐水。处理4周后,对三组小鼠疾病活动程度、结肠重量、结肠长度进行评价,使用酶联免疫吸附试验法检测三组小鼠结肠组织中Th1型细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-8和Th2型细胞因子IL-4、IL-10及IL-12、IL-23表达水平。结果克罗恩病组小鼠疾病活动程度评分、结肠组织中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12、IL-23分别为(4.12±0.23)分、(563.49±21.36)ng/ml、(120.69±6.69)ng/L、(43.73±3.58)ng/ml、(179.68±4.26)ng/ml、(148.69±6.58)ng/L、(762.58±26.58)pg/ml高于IL-12单克隆抗体组(1.62±0.17)分、(472.59±15.64)ng/ml、(106.25±3.27)ng/L、(37.62±2.16)ng/ml、(163.57±3.12)ng/ml、(98.67±5.12)ng/L、(412.68±16.98)pg/ml)和对照组,而结肠重量/长度为(42.36±3.16)mg/cm大于IL-12单克隆抗体组(33.59±2.07)mg/cm)和对照组小鼠;结肠组织中Th2型细胞因子IL-4、IL-10为(55.27±1.62)pg/ml、(90.27±3.68)pg/ml低于IL-12单克隆抗体组(61.27±2.21)pg/ml、(98.67±1.68)pg/ml)和对照组(P<0.05)。结论IL-12单克隆抗体通过改善Th1型细胞因子、Th2型细胞因子的异常表达,对Th1/Th2免疫平衡进行调节,进而抑制克罗恩病的炎症反应,起到治疗的效果。     

多发性骨髓瘤患者化疗后感染病原菌及Th17/Treg与细胞因子

目的探讨多发性骨髓瘤患者化疗后感染病原菌及辅助型T淋巴细胞/调节性T淋巴细胞(Th17/Treg)与细胞因子。方法选择核工业四一六医院血液风湿科2016年3月-2019年9月收治的多发性骨髓瘤化疗后感染患者60例作为感染组,选择同期收治的多发性骨髓瘤化疗后未感染患者40例纳入未感染组。对感染组患者感染部位及病原菌进行分析,检测两组患者外周血Th17/Treg、白细胞介素-17(IL-17)、IL-23、干扰素-γ(IFN-γ),对感染组不同分期患者Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IFN-γ水平进行比较。结果多发性骨髓瘤患者化疗后以呼吸道感染为主(71.67%);共培养分离病原菌10株,其中革兰阴性菌4株,革兰阳性菌2株,真菌(白假丝酵母)4株;感染组Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-23分别为(2.09±0.61)%、1.77±0.29、(83.81±24.25)pg/ml、(43.51±16.34)pg/ml高于未感染组,Treg、IFN-γ分别为(1.18±0.35)%、(20.81±8.94)pg/ml低于未感染组(P<0.05);三组患者Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IFN-γ总体差异具有统计学意义(P<0.05),其中III期患者Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-23分别为(2.41±0.31)%、(2.56±0.23)、(89.86±17.28)pg/ml、(47.61±12.19)pg/ml高于I期及II期患者,Treg、IFN-γ分别为(0.94±0.18)%、(14.29±4.97)pg/ml低于I期及II期患者(P<0.05);II期患者Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-23高于I期患者,Treg、IFN-γ则低于I期患者(P<0.05)。结论多发性骨髓瘤患者化疗后以呼吸道感染居多,病原菌总体分布松散,且随临床分期增加Th17/Treg的失衡也逐渐严重,临床应加强病原培养及针对性用药。