眼睑鳞状细胞癌p53蛋白过度表达与PCNA,AgNOR关系的研究

为探讨Ｐ５３基因突变与眼睑鳞状细胞癌（ＳＣＣ）发生的关系及其临床病理学意义,采用微波处理免疫组化ＬＳＡＢ法对３２例ＳＣＣ进行了Ｐ５３蛋白及增殖细胞核怕（ＰＣＮＡ）检测,同时应用银染法检测了核仁组成区相关嗜银蛋白计数。结果显示：在正常眼睑皮肤及轻度不典型增生上皮未见Ｐ５３蛋白表达,而中、重度不典型增生、原位癌、浸润癌Ｐ５３蛋白阳性表达率逐渐增高,其ＰＣＮＡ指数及ＡｇＮＯＲ计数也有增加趋势;随着癌细胞     

前列腺癌DNA倍体和AgNORS计数及PCNA表达的检测

目的探讨前列腺癌细胞核ＤＮＡ倍体、核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲＳ）计数及增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）阳性指数变化与癌分级及预后的关系。②方法应用计算机图像分析技术、银染色方法及免疫组化ＬＳＡＢ法，测定３０例前列腺癌病人ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数和ＰＣＮＡ阳性指数的变化。③结果前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数均明显高于前列腺增生症（ｔ＝７．２６７～７．５０２，Ｐ＜０．０１），并且随着前列腺癌细胞分化程度降低，逐渐增加（Ｈ＝４２．５３４，ｔ＝２．１５６～６．７５６，Ｐ＜０．０５，０．０１；Ｆ＝１９４．７７１，１０５．６０５，ｑ＝１３．２１４～１５．８１３，Ｐ＜０．０１）；２年内死亡者，其ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数明显高于存活２年以上者（ｔ＝５．２５６～７．６０８，Ｐ＜０．００１）；前列腺癌病人ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数间均存在正相关关系（ｒ＝０．９６０～０．９６６，Ｐ＜０．００１）。④结论前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数与癌细胞分化程度有关，可作为前列腺癌的预后指标     

人喉部肿瘤PCNA表达及AgNORs计数的研究

采用免疫组化染色及银染技术，对５５例喉部病变中ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲｓ计数进行了检测。结果显示：慢性喉炎、喉乳头状瘤及喉癌的ＰＣＮＡ指数分别为１５０１％、２６３８％和４８０６％，组间两两比较有显著差异（Ｐ＜０００１）。ＡｇＮＯＲｓ计数分别为２６２，３３４和４８８，组间两两比较有明显差异（Ｐ＜００１）。高、中、低分化鳞癌的ＰＣＮＡ指数组间两两比较有显著差异（Ｐ＜０００１）；ＰＣＮＡ指数与ＡｇＮＯＲｓ计数间未见相关性。结果提示：ＰＣＮＡ表达与ＡｇＮＯＲｓ计数在喉不同病变间存在明显差异，对此两项指标的检测有助于了解喉良、恶性肿瘤的细胞增殖状态，在喉良、恶性肿瘤鉴别及恶性分级上有一定价值     

p53蛋白及增殖细胞核抗原在大肠腺瘤的表达及其意义

目的：探讨ｐ５３基因蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在大肠腺瘤的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学方法,对４５例大肠腺瘤进行ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ的检测,并以大肠腺癌为对照。结果;ｐ５３蛋白在轻度不典型大肠腺瘤无一例阳性表达随着腺瘤不增生程度增高,其ｐ５３蛋白阳性表达率也增高,重度不典型增生腺瘤与腺癌的ｐ５３蛋白阳性率差异无显著（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＮＡ增殖指数也是随腺瘤不典型增生程度的增     

前列腺癌DNA倍体和AgNORS计数及PCNA表达的检测

目的 探讨前列腺癌细胞核ＤＮＡ倍体、核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲＳ）计数及增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）阳性指数变化与癌分级及预后的方法。方法 应用计算机图像分析技术、银染色方法及免疫组化ＩＳＡＢ法，测定３０例前列腺癌病人ＮＤＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数和ＰＣＮＡ阳性指数的变化。结果 前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数均明显高于前列腺增生症（ｔ＝７．２６７￣７．５０２，Ｐ〈０．０１），     

乳腺癌雌激素受体表达与增殖细胞核抗原表达和AgNOR计数关系的研究

目的研究乳腺癌雌激素受体（ＥＲ）表达与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达和ＡｇＮＯＲ计数关系。方法采用ＡｇＮＯＲ染色技术和免疫组化Ｓ－Ｐ法，用抗ＥＲ单克隆抗体及抗ＰＣＮＡ单克隆抗体（ＰＣ１０），研究５０例乳腺癌ＥＲ与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数。结果３３例乳腺癌ＥＲ阳性者与１７例ＥＲ阴性者相比，ＰＣＮＡ表达低（Ｐ＜０．０５），ＡｇＮＯＲ平均颗粒少（分别为４．９１±１．６９，６．５２±２．１３，Ｐ＜０．０１）。结论乳腺癌ＥＲ表达与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数有相关关系，ＰＣＮＡ表达率及ＡｇＮＯＲ计数对评估乳腺癌预后有一定意义     

喉癌,不典型增生的AgNORs形态计量分析和P53蛋白表达

目的：研究喉癌（ＣＡ）和不典型增生（ＤＳ）的核仁结构和功能改变及临床意义。方法：应用ＡｇＮＯＲｓ染色和Ｐ５３蛋白免疫组化染色观察１９例ＣＡ和３４例ＤＳ核仁的生物学改变。结果：随着恶性程度的增加其颗粒计数（ＧＣ）和颗粒面积（ＧＳ）及Ｐ５３蛋白表达率也增高。结论：ＡｇＮＯＲｓ对鉴别肿瘤的良恶性病变具有重要意义,ＡｇＮＯＲｓ染色和Ｐ５３蛋白免疫组化染色可以做为早期定性诊断的指标。     

增殖细胞核抗原表达与AgNORS计数在胆囊癌中的意义

研究增殖细胞核抗原表达与ＡｇＮＯＲＳ计数在胆囊癌中的意义。方法：应用抗增殖细胞核抗原单克隆抗体，采用ＡＢＣ免疫组化方法和ＡｇＮＯＲＳ染色计数，对４０例原发性胆囊癌进行了研究。结果：ＰＣＮＡ表达阳性率与ＡｇＮＯＲＳ计数间存在着明显的相关性。结论：认为ＰＣＮＡ的表达和ＡｇＮＯＲＳ计数有助于原发性胆囊癌的分化及其预后的判断。     

癌基因相关分子在胃粘膜良恶性病变中的检测

目的：探索胃粘膜癌变的病理学指标,为更有效地防治这类病变提供可靠依据。方法：对胃粘膜良恶性病变（共１２０例）,用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测生物素化的菜豆凝集素受体（ＰＨＡＲ）、ｐ５３ 蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果：（１）ＰＣＮＡ在正常胃粘膜组阳性率最低,与各组间均有差异（Ｐ＜ ０．０００５）,随病变加重而递增。同时,强阳性率在中～重度不典型增生组与腺癌组之间有差异（Ｐ＜ ０．０５）。（２） ｐ５３蛋白在正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎活动性（ＣＳＧ）、慢性萎缩性胃炎（ＣＡＧ）、中～重度肠化及轻度不典型增生４组阴性。中～重度不典型增生组及腺癌组阳性,二者间有差异（Ｐ＜ ０．０５）。（３）ＰＨＡＲ阳性率在正常胃粘膜组阴性,随病变程度加重逐步递增,且与各组间均有差异（Ｐ＜ ０．０５）。中～重度不典型增生组与腺癌组在ＰＨＡＲ强阳性率上有差异（Ｐ＜ ０．０５）。（４）腺癌组ＰＨＡＲ、ＰＣＮＡ、ｐ５３蛋白强阳性率三项指标之间有相关性（Ｐ＜ ０．０００５）。结论：ＰＨＡＲ的强阳性表达可作为区分中～重度不典型增生与腺癌的辅助指标。ｐ５３ 蛋白阳性,若同时伴有ＰＨＡＲ强阳性表达,是胃癌的明显标志。ＣＡＧ和中～重度肠化属早期癌     

48例非霍奇金淋巴瘤中的p53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究ｐ５３基因外显子５～８中发生突变的类型、频率与突变型ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型ｐ５３蛋白在ＮＨＬ中的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬ中ＰＣＲＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在非ＤＬＣＬ中ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均为阴性（Ｐ＜０．０５）。表明国人ＮＨＬ，尤其在恶性程度很高的ＤＬＣＬ中存在ｐ５３基因突变，各型ＮＨＬ都有不同程度的突变型ｐ５３蛋白表达     

重组IL-33融合表达载体的构建、蛋白表达及纯化

目的：构建人白介素-33（IL-33）硫氧还蛋白融合表达载体,高效表达IL-33蛋白。方法：采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞（PBMC）mRNA中扩增IL-33 cDNA;将扩增的IL-33目的基因与融合表达质粒pET102/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。结果：扩增的IL-33 cDNA大小为800bp左右。表达的IL-33融合蛋白大小为45kDa左右,Western blotting鉴定显示表达的蛋白正确,为IL-33目的蛋白。但表达的大部分蛋白为无生物学活性的包涵体,在后续对表达蛋白进行纯化的同时对蛋白进行了复性,得到了复性后具有生物学活性的IL-33蛋白。结论：成功制备了具有生物学活性的IL-33蛋白。     

人IL—12双亚基共表达载体的构建及其表达

构建人ＩＬ－１２的高效表达载体。方法采用ｐＣＤＮＡ３．１从已克隆ｐ４０ｃＤＮＡ基因与国外提供的ｐ３５ｃＤＮＡ基因上获得相应的编码荐因，分别构建表达载体进行转染。此后，又利用ｐＬＸＰＸＳＮ构建ＩＬ－１２双亚基共表达的逆转录病毒载体转导人肝癌细胞株，并经Ｇ４１８筛选。结果有功能活性的ＩＬ－１２的产生需要ｐ３５和ｐ４０基因的等量共转染，为此，人ＩＬ－１２双亚基共表达载体在转肝癌细胞株并经选择后，上清液中     

端粒酶活性在乳腺良恶性肿瘤中的表达以及与P_(16)、C-erbβ-2的相关性研究

目的 :探讨乳房恶性肿瘤组织中端粒酶的表达 ,端粒酶与肿瘤病理行为学的关系以及与其他癌基因和抑癌基因的关系。方法 :应用端粒重复扩增方法对 6 0例乳房良恶性肿瘤组织、配对癌旁组织及非癌组织进行端粒酶活性测定 ,并同时进行 P1 6缺失分析及 C-erbβ-2蛋白表达的检测 ,结合临床病理指标进行分析。结果 :乳腺癌中端粒酶活性表达阳性率达 80 %。在乳癌中 P1 6基因缺失、C-erbβ-2蛋白阳性表达同时 ,端粒酶活性检测分别达 92 .3 %和 91.3 %。结论 :说明端粒酶活性和肿瘤的关系密切 ,可作为乳腺癌诊断与预后判断的辅助指标     

Ki-P21ras蛋白原核表达质粒的构建、表达及纯化的研究

目的：构建Ki—ras—PET—28a（＋）原核表达质粒，并表达、纯化得到Ki—P21ras蛋白。方法：人工合成Ki—ras基因cDNA的蛋白编码CDs区序列，并在其正义链5′加上BamHⅠ酶切位点，3′加上HindⅢ酶切位点，经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到具有粘性末端的Ki—ras cDNA，将PET-28α（＋）同样经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到与Ki—ras cDNA有相同粘性末端的线形片段，通过T4DNA连接酶将具有粘性末端的Ki—ras cDNA与酶切后的PET-28α（＋）定向连接，构建重组质粒Ki—ras—PET—28a（＋），经酶切和测序鉴定。将鉴定正确的Ki—ras—PET—28α（＋）转入感受态细菌BL21（DE3）中诱导表达，利用组氨酸“标签”（His-Tag）对P21ras进行亲和层析纯化。结果：测序分析证实，克隆人PET-28α（＋）的Ki—ras序列与Genbank登录号为“M54968”的Ki-ras cDNA序列一致，将重组质粒Ki—ras—PET—28α（＋）转化BL21（DE3），IPTG诱导目的蛋白表达。SDS—PAGE和蛋白纯化结果表明，Ki—ras—PET—28α（＋）在大肠杆菌中获得可溶性高表达，经Ni^2＋-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的ki—P21ras蛋白，Western-Blot分析证实其免疫活性。结论：成功构建了原核表达载体Ki—ras—PET—28α（＋），并经表达、纯化得到具有生物活性的P21ras蛋白，为研究P21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及抗P21ras细胞内抗体的研究奠定了基础。     

构建人ICAM-1真核表达载体的实验研究

目的：构建人ICAM-1—1真核表达载体pcDNA3．1（-）-ICAM-1。方法：设计特异性引物,利用PCR技术扩增出ICAM-1全编码区基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3．1（-）中。结果：PCR扩增得到人成熟ICAM-1的cDNA片段大小为1800bp,重组子利用限制性内切酶进行酶切鉴定和DNA序列分析得到真核表达载体pCDA3．1（-）-ICAM-1。结论：成功构建了人ICAM-1真核表达载体,为进-步建立稳定转染ICAM-1的细胞株以及研究ICAM-1及其受体的生物学功能提供了条件。     

结肠癌组织P52的表达和临床意义

目的:探讨核转录因子-κ B2(P52)在结肠癌中的表达及临床意义.方法:应用SP免疫组化法检测70例结肠癌组织和35例癌旁组织P52的表达情况,并分析P52表达与结肠癌临床病理特征的关系.结果:结肠癌组织P52的阳性表达率为70.0％(49/70),明显高于癌旁正常组织(P＜0.05).结肠癌组织P52表达与年龄、性别、分化级别无关(P＞0.05);与侵及深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05):侵及浆膜明显高于未侵及浆膜,TNM分期Ⅲ+Ⅵ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期,有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移.结论:P52高表达可能与结肠癌的浸润、转移和预后有关.     

HSV—1包膜糖蛋白G原核表达克隆的构建和表达

①目的 构建人单纯疱疹病毒1型Stoker株包膜糖蛋白G编码基因（Us4）片段的原核表达克隆,并进行原核表达。②方法 通过PCR方法增扩HSV-1Us4基因的抗原决定簇编码区,目的基因与原核表达载体PGEX-4T-2分别比双酶切后连续,然后转化宿主菌Ecoli.BL21,IPTG诱导表达。③结果 获得了重组的原核表达质粒及重组蛋白。④结论 用限制性内切酶鉴定原核表达质粒构建成功,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达成功。     

恶性骨肿瘤患者血清铜、锌及一氧化氮水平及其临床意义

0　引言　有关人体内微量元素、一氧化氮变化与疾病之间关系曾有许多报道 ,但对恶性骨肿瘤疾病与微量元素及一氧化氮之间的关系尚未引起人们的重视 .作者对 2 9例恶性骨肿瘤病人血清铜、锌、NO与正常人相比较 ,现报告如下 .1　材料和方法1.1　材料　标本收集于 1998年 7月 - 1999年 12月西京医院的 2 9(男 16 ,女 13)例住院患者 ,年龄 16～ 72岁 ,平均年龄5 9.3岁 .其中 ,软骨肉瘤 3例 ,骨肉瘤 5例 ,骨巨细胞瘤 ( ～ 级 ) 6例 ,骨髓瘤 4例 ,骨淋巴肉瘤 3例 ,滑膜肉瘤 2例 ,转移性骨肿瘤 6例 .对照组 2 5 (男 11,女 14)例 ,系骨质增生患者 .…     

TNF-α在子宫腺肌病中的表达及其临床意义

检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)在子宫腺肌病中的免疫组化定位和表达,探讨TNF-α在子宫腺肌病发生中的临床意义。方法采用SABC免疫组化技术观察子宫腺肌病(33例)标本中TNF-α的组织定位和表达,并按照其染色强度进行统计学分析。结果子宫腺肌病中存在TNF-α的表达;TNF-α在原位子宫内膜中的表达强度,分泌期高于增生期,并且呈周期性变化;TNF-α在异位子宫内膜中的表达强度分别高于原位子宫内膜和正常子宫内膜,但是异位子宫内膜和子宫肌层中表达无周期性变化。结论TNF-α在异位子宫内膜中的高表达提示子宫腺肌病的发生发展受卵巢激素和多种细胞因子的调节。