树突状细胞在乳腺癌治疗中的研究进展

近年来,以树突状细胞(DC)为基础构建的乳腺癌肿瘤疫苗成为乳腺癌生物治疗的研究热点,肿瘤疫苗的制备方法多种多样,作用效果也不尽相同.     

乳腺癌中树突状细胞的浸润及其与临床病理特点的关系

目的通过检测乳腺癌中树突状细胞(dendritic ce lls,DC)和T细胞的分布状况和浸润密度,分析其与临床病理资料的关系,探讨DC在乳腺癌局部免疫中的作用。方法应用免疫组化方法检测67例乳腺癌中S100 DC、HLA-DR DC、CD 1a DC(DC三参数)、CD 45RO T细胞的浸润密度和c-erbB-2表达情况。结果S100 DC和HLA-DR DC浸润密度在癌巢内均显著低于癌巢周围(P值均<0.001),而CD 1a DC浸润密度在癌巢内显著高于癌巢周围(P=0.001);S100 DC、CD 1a DC和CD 45RO T细胞浸润密度在低分化病例均显著高于高、中分化病例(P值均<0.05);S100 DC浸润密度与组织学分级呈明显正相关(rs=0.286,P=0.042);CD 1a DC阳性表达率在肿瘤≤2 cm的病例显著高于肿瘤>2 cm的病例(P<0.05);DC三参数及CD 45RO T细胞阳性表达率和浸润密度与有无腋淋巴结转移、临床分期及c-erbB-2表达情况均无关。结论DC三参数在乳腺癌中分布部位不同,可标记不同成熟状态的DC,综合检测DC三参数可更全面地反映乳腺癌局部免疫状态。     

自体来源树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞混合培养对原代乳腺癌细胞的杀伤作用

 目的　探讨原代乳腺癌细胞冻融抗原负荷自体来源树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）细胞混合培养后对原代乳腺癌细胞杀伤活性的影响作用。方法　取对数生长期的原代乳腺癌细胞制备肿瘤抗原（Ag）,用自体外周血单个核细胞分别制备DC 和CIK细胞;用负荷Ag的DC 和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞。采用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测分离的单个核细胞（CBMC）、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对原代乳腺癌细胞的杀伤活性。结果　外周血CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对乳腺癌原代肿瘤细胞杀伤活性分别是（34.35±3.28）%、（45.91±2.78）%、（50.88±3.22）%、（62.10±5.94）%,实验组细胞（Ag-DC-CIK）对原代乳腺癌细胞的杀伤能力（62.10±5.94）%明显高于对照组（P＜0.01）。结论　肿瘤抗原负荷的DC 能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DC 的免疫治疗提供了新的思路。     

树突状细胞与肿瘤免疫治疗

 树突状细胞（DC）是体内功能最强大的抗原提呈细胞（APC）,以DC为基础的肿瘤免疫治疗成为近来的研究重点。DC不仅可以作为细胞疫苗单独介导抗肿瘤免疫,而且还可以与细胞因子、免疫细胞以及其他的方法联合用于肿瘤的免疫治疗。动物模型和临床试验中,以DC为基础的免疫治疗以及其他的肿瘤免疫治疗策略都取得了较为显著的进展。     

树突状细胞功能缺陷与肿瘤免疫逃逸

树突状细胞（DC）是功能强大的专职抗原提呈细胞，是机体免疫的始动者。近年来发现肿瘤及其微环境通过多种途径减少肿瘤患者体内DC的数量并可抑制DC的成熟，从而下调或抑制其抗原提呈及免疫起始功能，且可以诱导调节性DC的产生，介导免疫耐受，最终实现逃避机体免疫监视及免疫清除的目的。     

树突状细胞对免疫活性细胞抑癌效应的非限制性增强作用

目的：研究抗原负载的树突状细胞(dendritic cell，DC)对免疫活性细胞抑癌的增强作用。方法：在建立PC体外扩增的基础上，将抗原负载的DC作用于单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞，观察其对人肺癌GLC-82和A549细胞的体外和裸鼠体内抑癌效应。结果：抗原负载的DC能显著增强单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞对GLC-82和A549细胞的抑制作用。当效靶化为10：1时，抗原负载的DC-单个核细胞对GIC-82及A549细胞抑制率分别为100％和94．2％；而对照组分别为16％和8％。该作用不受主要组织相容性复合物基因(major histocompatibility complex，MHC)限制。结论：抗原负载的DC对免疫活性细胞的抑癌作用有MHC非限制性增强效果。     

递呈乳腺癌细胞MCF-7肿瘤抗原的树突状细胞对T细胞的激活

目的：在体外利用细胞因子的诱导获取树突状细胞（DC）,并观察递呈肿瘤抗原后的成熟DC对T细胞的激活作用。方法：健康人外周血单个核细胞（PBMC）在体外用细胞因子诱导获取DC,并经乳腺癌细胞MCF-7肿瘤细胞裂解物体外冲击,再以1：5的比例将致敏DC与T细胞共同孵育5d并共同作为效应细胞,通过FACS分析T细胞激活前后的表型变化以及MTT试验观察体外特异性肿瘤杀伤效果。结果：DC在细胞因子的诱导下7d后,形态学表现为伸出许多伪足样突起,在摄取抗原后可见内吞样小泡。FACS检测呈现成熟DC的标志,CD40、CD83、CD80、CD86和HL-DR等高表达。另外,未经成熟DC激活的T淋巴细胞以辅助性T细胞（Th）为主,CD4^＋ 52．1％,CD8^＋ 仅22．1％;而经成熟DC激活的T淋巴细胞以杀伤性T细胞（Tc）为主,CD4^＋ 32．6％,CD8^＋ 64．2％。同时,MTT试验证实经递呈MCF-7肿瘤抗原的DC激活了细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,并对MCF-7具有特异性肿瘤杀伤作用。结论：体外递呈肿瘤抗原MCF-7的成熟DC对T细胞具有激活作用,并产生肿瘤特异性CTL。     

树突状细胞在肿瘤中的研究进展

树突状细胞（DC）作为机体免疫应答的始动者，在肿瘤免疫中具有重要的作用。近几年来，以DC为基础的抗肿瘤免疫方面的研究已成为DC研究领域的热点之一。现综述DC在肿瘤、肿瘤转移以及肿瘤免疫治疗等方面的研究状况。     

树突状细胞疫苗与食管癌免疫治疗

随着树突状细胞(DC)体外扩增技术和肿瘤抗原制备、负载体系等DC疫苗制备技术的发展,与食管癌治疗相关的多种DC疫苗相继出现,包括多肽负载DC疫苗、食管癌细胞-DC融合疫苗、核酸负载DC疫苗、自体肿瘤抗原负载DC疫苗等,其中多肽负载DC疫苗及凋亡的自体肿瘤细胞负载DC疫苗等在临床应用中已取得较好疗效.     

共培养树突状细胞与CIK细胞的抗肿瘤研究

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是高效肿瘤杀伤细胞，树突状细胞(DC)是人体内最有效的专职抗原提呈细胞。研究表明当二者共培养时可更好地杀伤肿瘤细胞，使其有望成为肿瘤免疫治疗的新突破。现就两者共培养条件下的生物学特性、活性影响因素、杀瘤机制等作一综述。     

负载小鼠端粒酶逆转录酶基因的树突状细胞体内诱导抗肝癌免疫应答

目的 探讨小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)基因修饰的树突状细胞(Ad-mTERT-DC)在体内诱导抗肝癌活性的情况.方法 选用Bal B/c小鼠肝癌种植模型,用携带mTERT基因的重组腺病毒载体(Ad-mTERT)转染小鼠体外培养的DC,对同系小鼠进行免疫.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脾细胞体外抗原再刺激后白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌IFN-γ细胞的数量,51Cr释放法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性.接种H22细胞后,观察肿瘤大小及荷瘤小鼠存活情况.并进一步观察,在H22移植瘤存在的情况下,Ad-mTERT-DC是否能够有效抑制肿瘤生长.结果 小鼠脾细胞体外接受抗原再刺激后,Ad-mTERT组IL-2和IFN-γ水平以及IFN-γ分泌细胞的数量分别为871.25 pg/ml、169.15 ng/ml和378/106个脾细胞,显著高于Ad-GFP组(131.6 pg/ml、15.4 ng/ml和36/106个脾细胞,均P<0.05)、DC组(71.3 pg/ml、10.5ng/ml和21/106个脾细胞)和PBS组(65.8 pg/ml、7.4 ng/ml和18/106个脾细胞,均P<0.05).Ad-mTERT-DC能诱导特异性CTL的产生,在效靶比为90:1时,Ad-mTERT组的特异性杀伤率为58.7%,明显高于Ad-GFP组(10.3%)、DC组(2.9%)和PBS组(1.7%).接种后第27天,Ad-mTERT组中成瘤小鼠的肿瘤平均直径明显低于各对照组(P<0.05),小鼠存活时间明显延长(P<0.05).Ad-mTERT组抑瘤率为43.6%,明显高于PBS组、DC组和Ad-GFP组(均P<0.01).结论 Ad-mTERT-DC在小鼠体内可诱导出mTERT抗原特异性的抗肿瘤活性,对肝癌有预防和治疗作用.     

Pattern response of dendritic cells in the tumor microenvironment and breast cancer

Breast cancer (BC) is the most common malignant neoplasm and the cause of death by cancer among women worldwide. Its development, including malignancy grade and patient prognosis, is influenced by various mutations that occur in the tumor cell and by the immune system’s status, which has a direct influence on the tumor microenvironment and, consequently, on interactions with non-tumor cells involved in the immunological response. Among the immune response cells, dendritic cells (DCs) play a key role in the induction and maintenance of anti-tumor responses owing to their unique abilities for antigen cross-presentation and promotion of the activation of specific lymphocytes that target neoplasic cells. However, the tumor microenvironment can polarize DCs, transforming them into immunosuppressive regulatory DCs, a tolerogenic phenotype which limits the activity of effector T cells and supports tumor growth and progression. Various factors and signaling pathways have been implicated in the immunosuppressive functioning of DCs in cancer, and researchers are working on resolving processes that can circumvent tumor escape and developing viable therapeutic interventions to prevent or reverse the expression of immunosuppressive DCs in the tumor microenvironment. A better understanding of the pattern of DC response in patients with BC is fundamental to the development of specific therapeutic approaches to enable DCs to function properly. Various studies examining DCs immunotherapy have demonstrated its great potential for inducing immune responses to specific antigens and thereby reversing immunosuppression and related to clinical response in patients with BC. DC-based immunotherapy research has led to immense scientific advances, both in our understanding of the anti-tumor immune response and for the treatment of these patients.     

人表皮生长因子受体2多肽负载自体树突状细胞治疗乳腺癌的疗效分析

目的探讨人表皮生长因子受体2(HER-2)多肽负载自体树突状细胞对乳腺癌患者免疫耐受性、免疫应答水平的影响和临床疗效。方法选取HLA-A201阳性和HER-2阳性乳腺癌患者246例,其中观察组164例,对照组82例,两组患者均给予化疗或内分泌治疗。其中观察组患者给予树突状细胞(DC)免疫治疗每周1次,4次为1个疗程,连续3个疗程,疗程间隔时间为1个月;对照组未给予DC免疫治疗。于免疫治疗前后监测患者外周血中IL-2、IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平,肿瘤特异性CD+8、IFNγ+和T淋巴细胞比例和迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)试验。末次免疫后每3个月随访1次,随访2年后统计患者疾病进展时间(TTP)和无进展生存率(PFS)。结果观察组患者对DC疫苗均耐受良好,未发现II级以上不良反应发生。I^III期患者DC免疫治疗1个疗程后IL-2和IFN-γ总体水平均较治疗前(基线)显著升高(P<0.05),并维持较长时间的高水平状态;而IV期患者3个疗程完成后细胞因子水平仍无明显提高。3个疗程后外周血中特异性CD+8、IFN-γ+和T细胞得到明显扩增。DTH阳性率与免疫次数亦呈正相关关系(r=0.997),并且ⅠIII期患者DC免疫治疗1个疗程后IL-2和IFN-γ总体水平均较治疗前(基线)显著升高(P<0.05),并维持较长时间的高水平状态;而IV期患者3个疗程完成后细胞因子水平仍无明显提高。3个疗程后外周血中特异性CD+8、IFN-γ+和T细胞得到明显扩增。DTH阳性率与免疫次数亦呈正相关关系(r=0.997),并且Ⅰ^Ⅱ期患者DTH平均阳性率明显高于ⅢⅡ期患者DTH平均阳性率明显高于Ⅲ^Ⅳ期患者(P<0.05)。ⅠⅣ期患者(P<0.05)。Ⅰ^Ⅱ期患者2年随访期内病情均较稳定,生存率为100%;ⅢⅡ期患者2年随访期内病情均较稳定,生存率为100%;Ⅲ^IV期患者平均TTP为689d和667d,而对照组分别为614d和573d,分别延长了75d和94d,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组IIIIV期患者平均TTP为689d和667d,而对照组分别为614d和573d,分别延长了75d和94d,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组III^IV期患者平均PFS为75.9%,而同期对照组仅为54.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。DTH阳性患者(70例)平均PFS为78.6%,而DTH阴性患者(94例)平均PFSR为67.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载HER-2多肽的自体DC可有效诱导早、中期HER-2阳性乳腺癌患者产生TH1型免疫应答反应,分泌可持续高水平的Th1型抗瘤因子,多疗程后可激发明显的肿瘤抗原特异性CTL反应,并可抑制晚期患者疾病进展,提高无进展生存率与生存质量,可作为HER-2阳性患者安全、有效的辅助治疗手段。     

肺癌患者外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

目的 探索体外扩增成熟树突状细胞(dendritic cell，DC)的方法，并进一步鉴定Dc的形态及表型，为开展肿瘤临床生物治疗奠定基础。方法 取肺癌患者外周血，经淋巴细胞分离液分离得到DC前体细胞，加入生长因子DCGF诱导DC生成，并加入自体肿瘤相关抗原刺激。收集细胞用透射电镜观察，并用流式细胞仪测定细胞表型。结果 应用该法扩增细胞可以得到大量成熟DC。电镜观察DC具有典型的形态。流式细胞仪细胞表型测定CD80为81．8％，HLA—DR为98．3％，CD86为69．8%，CDla为19．7％，CD14为66．9．1％，CD80和HLA-DR较未成熟DC的表达明显增加。结论 肺癌患者外周血体外培养可成功地获得成熟的DC，进一步为肿瘤临床生物治疗奠定了基础。     

CD1a与CD83标记肿瘤浸润性树突状细胞在乳腺癌中的表达及相关性研究

目的 探讨CD1a和CD83标记的肿瘤浸润性树突状细胞（TIDC）在乳腺组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 采用免疫组织化学法检测85例乳腺癌组织中CD1a、CD83的表达情况,探讨其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果 在85例乳腺癌组织中,77例CD1a阳性,大多数表达CD1a的TIDC分布在肿瘤组织中,肿瘤间质及周边组织中表达较少;44例CD83阳性,表达CD83的TIDC多分布在肿瘤周边及间质组织,呈散点状分布。CD1a、CD83均为阳性表达（双阳性）35例。CD1a、CD83双阳性表达与淋巴结转移、孕激素受体（PR）、中性粒细胞-淋巴细胞比值（NLR）无关（P＞0.05）,而与雌激素受体（ER）、表皮生长因子受体（HER-2）、TNM分期有关（P＜0.05）。CD1a、CD83双阳性表达和非双阳性表达患者的中位无病生存期（DFS）均未达。Cox多因素回归分析显示, CD1a、CD83非双阳性表达是影响DFS的独立因素（HR=2.216,95％CI：1.682～3.431;P＜0.05）。结论 乳腺癌组织中TIDC的特征性标记物CD83、CD1a表达是影响DFS的独立因素,这可能与肿瘤免疫逃逸机制有关,可以作为乳腺癌预后的参考指标。     

树突状细胞诱导的LAK细胞对肺癌的生长抑制作用

目的　研究肺癌细胞裂解物负载的树突状细胞 (DC)诱导的淋巴因子激活杀伤细胞 (LAK )对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法　肺腺癌患者手术切除标本接种裸鼠皮下建立肺腺癌移植瘤模型 ,同时将手术切除标本用反复冻融的方法制备肿瘤细胞裂解物 ;同一患者外周血分离得到的单个核细胞中 ,贴壁的细胞加入DC生长因子 (DCGF)培养得DC ,未贴壁的细胞加入rhIL 2培养得LAK细胞。用肿瘤细胞裂解物负载自体DC ,诱导LAK细胞生成DC LAK细胞 ,注射荷瘤裸鼠腋下以观察DC LAK细胞对肺癌移植瘤的生长抑制作用。结果　用肺癌手术标本能成功建立裸鼠移植瘤模型。DC LAK组、LAK组、DC组和生理盐水对照组肿瘤瘤重平均值分别为 0 .47、1.0 5、1.3 0和 1.5 8g ,DC LAK组、LAK组和DC组肿瘤生长抑制率分别为 70 .3 %、3 3 .5 %和 17.9% ,DC LAK细胞具有抑制裸鼠肺癌移植瘤生长的作用而且强于LAK细胞 (P <0 .0 5 )。结论　通过荷瘤裸鼠体内抗瘤实验证实了DC LAK细胞的抗肺癌作用明显高于LAK细胞 ,提示DC LAK细胞治疗是更为有效的抗肺癌生物治疗方法 ,为DC疫苗用于肺癌的临床治疗提供依据     

自体树突状细胞疫苗治疗雌、孕激素受体双阴性乳腺癌的疗效观察

目的 评价自体肿瘤冻融抗原致敏的自体树突状细胞（ADC）疫苗免疫治疗,对处于Ⅱ、ⅢA期雌、孕激素受体双阴性表达乳腺癌患者的疾病进展及生存情况的影响。方法利用自体肿瘤冻融抗原致敏的CD14+前体细胞产生树突状细胞,在细胞因子的作用下开始成熟,制备ADC疫苗。选取符合入组标准的63例患者,根据治疗方案分为实验组和对照组,实验组共接受4次皮下ADC回输。测定实验组疫苗接种前后IFN-γ+／CD8+T细胞含量及两组针对抗肿瘤裂解物发生的Ⅳ型变态反应情况,随访两组的疾病进展情况。结果 疫苗接种后提高了IFN-γ+／CD8+T细胞数量,与疫苗接种前比较差异有统计学意义[（23.4±4.1）％ vs.（14.3±2.0）％, P＜0.05];实验组18例（58.1％）为Ⅳ型变态反应阳性,而对照组均为阴性,差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组的3年无进展生存率高于对照组,差异有统计学意义（76.9％ vs. 31.0％, P＜0.05）。实验组未发生严重不良反应。结论ADC疫苗可能通过触发乳腺癌患者的免疫应答机制来治疗乳腺癌,具有较好的效果,并延长无进展生存期。     

Presence of mature DC-Lamp dendritic cells in sentinel and non-sentinel lymph nodes of breast cancer patients

Aim

Our study examined differences in the presence of mature, DC-Lamp⁺ DC in the SLN and non-SLN according to the extent of metastatic involvement.

Patients and methods

Paraffin blocks of the SLN and non-SLN from patients with primary breast cancer who had undergone SLN biopsy and axillary dissection were separated into three groups: (Group A) no tumor cell involvement in the SLN and non-SLN; (Group B) isolated tumor cells or micrometastases in the SLN, and tumor cell-free non-SLN; and (Group C) macrometastases in the SLN. One section of all the SLN and non-SLN was examined with immunohistochemistry using an anti-DC-Lamp-antibody. The densest area occupied by the DC-Lamp⁺ cells on each slide was quantified and recorded by an electronic imaging system. In this regard, the SLN and non-SLN were compared within the patients of each group using the Wilcoxon signed rank-test (p < 0.05).

Results

One hundred and fourteen SLN and 1258 non-SLN from 79 patients were examined. A significantly larger area was occupied by the DC-Lamp⁺ cells in the SLN compared to the non-SLN in Groups A (p = 0.024) and B (p = 0.009), whereas no significant difference was found within Group C (p = 0.107).

Conclusions

This study suggests that the DC-dependent immune response is altered during the process of metastasis formation and is primarily activated before and during formation of micrometastasis.