血小板衍生生长因子BB在川崎病血小板增多中的作用及机制研究

目的通过体内外实验探究血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对川崎病(Kawasaki disease,KD)小鼠和人巨核细胞株Dami细胞生成血小板的作用及机制。方法ELISA检测KD及健康儿童各40例血清PDGF表达水平。C57BL/6小鼠构建KD模型,随机分为正常组、KD组、伊马替尼组,每组30只。检测各组血常规及PDGF-BB、巨核细胞集落形成单位(megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK)、巨核细胞标记物CD41表达。采用CCK-8、流式细胞术、实时定量PCR、Western blot检测PDGF-BB对Dami细胞生成血小板的作用和机制。结果PDGF-BB在KD患儿血清中高表达(P<0.001)。KD组小鼠血清PDGF-BB高表达(P<0.05)、CFU-MK及巨核细胞标记物CD41表达增加(P<0.001);伊马替尼组CFU-MK及CD41表达减少(P<0.001)。体外实验结果显示,PDGF-BB促进Dami细胞增殖、血小板生成、PDGFR-βmRNA及p-Akt蛋白表达(P<0.05);联合组(PDGF-BB 25 ng/mL+伊马替尼20μmol/L)血小板生成、PDGFR-βmRNA和p-Akt蛋白表达少于PDGF-BB组(P<0.05)。结论PDGF-BB可能通过与PDGFR-β结合,激活PI3K/Akt通路,促进巨核细胞增殖、分化及血小板生成;PDGFR-β抑制剂伊马替尼可减少血小板生成,为KD血小板增多的诊疗提供了新的策略。     

神经母细胞瘤的血管形成和内皮细胞生长因子及其受体的表达

目的：观察神经母细胞瘤的血管形成及影响因素，探讨化疗对神经母细胞瘤瘤血管形成的作用。方法：35例小儿实体肿瘤年龄7月－12岁，分神经母细胞瘤组、其他恶性肿瘤组和良性肿瘤组，分别用免疫组化法观察第Ⅷ因子相关抗原（VWF）、内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体FLT－1的表达情况，并行图象分析。结果：神经母细胞瘤血管密度较良性肿瘤组明显增高（P＜0．05）；VEGF和FLT－1在神经母细胞瘤中有高表达，二者均与临床分期和分类有关；并可受化疗的抑制（P＜0．05）。结论：神经母细胞瘤生长具有血管依赖性，化疗可抑制血管形成，控制肿瘤血管形成对抑制肿瘤的生长和转移有积极意义。     

系膜增生性肾炎患儿肾组织血小板源性生长因子及其受体表达的临床研究

目的研究系膜增生性肾炎患儿肾组织血小板源性生长因子(PDGF)及其受体(PDGFR-α、β)的表达及意义.方法采用免疫组化染色法检测弥漫性系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)肾活检组织中PDGF、PDGFR的表达.结果PDGF在MsPGN中的表达明显高于正常肾和FSGS,PDGFR-α、β的表达高于正常肾(P＜0.01);PDGF在FSGS中的表达与正常肾相比无差异,但PDGFR-α、β表达升高(P＜0.01);MsPGN与FSGS的PDGFR-α、β表达无明显差异(P＞0.05).结论肾组织PDGF及其受体的过度表达可能在MsPGN的发病中起重要作用.     

米贝地尔对血小板衍生生长因子诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨新型钙通道拮抗剂米贝地尔(mibefradil,Mib)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖的影响。方法体外培养HPASMCs,随机分为对照组、PDGF刺激组、Mib干预组、PDGF+Mib组,PDGF刺激组细胞用25 ng/ml PDGF刺激,Mib干预组细胞加入10μmol/L的Mib干预,PDGF+Mib组细胞予PDGF和Mib联合干预。通过MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色法观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率的差异均具有统计学意义(P0.05),并以72 h时的差异更明显;其中PDGF组均为最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测各组G0/G1期及S期细胞比例差异均有统计学意义(P0.05);其中PDGF刺激组G0/G1期细胞比例最低、S期细胞比例最高,与其余3组比较差异均有统计学意义(P0.05);PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化染色结果表明各组间PCNA表达差异有统计学意义(P0.05);其中PDGF组的PCNA表达最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。结论 Mib组能显著抑制PDGF诱导的HPASMC增殖,抑制PDGF促进的细胞周期进程,对PCNA的表达具有明显的抑制作用。     

维甲酸、血小板衍生生长因子对早产新生大鼠高浓度氧肺损伤的影响

目的观察维甲酸（RA）和血小板衍生生长因子（PDGF）对高浓度氧（简称高氧）抑制早产新生大鼠肺发育的影响，探讨其作用机制。方法1日龄早产SD大鼠随机分为：空气＋生理盐水组（Ⅰ组）、高氧＋生理盐水组（Ⅱ组）、空气＋RA组（Ⅲ组）、高氧＋RA组（Ⅳ组）。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85％氧气中。Ⅲ、Ⅳ组每目腹腔注射RA500μg／kg，Ⅰ、Ⅱ组注射相同剂量的生理盐水。应用RT—PCR和免疫组织化学法检测各时间点（生后4、7、10、14及21d）各组大鼠肺组织PDGFmRNA和蛋白表达水平。结果随日龄的增加，PDGF—A、-B mRNA及蛋白表达发生不同的变化。与Ⅰ组比较，高氧暴露下PDGF-B mRNA和蛋白表达显著增高（P〈0．05），但PDGF-A mRNA及蛋白表达却显著降低（P〈0．05）。RA上调PDGF—A mRNA及蛋白表达（P〈0．05），但对PDGF—B mRNA及蛋白表达作用不显著（P〉0．05）。结论高氧暴露下，PDGF—AmRNA及蛋白表达受抑，PDGF—BmRNA及蛋白表达增强。PDGF-A、-B共同参与了高氧暴露下肺组织损伤过程。RA上调PDGF—AmRNA及蛋白表达，能部分逆转高氧引起的肺损伤。     

血小板源性生长因子受体α阳性细胞在先天性肾盂输尿管连接部梗阻发病中的表达及意义

目的探讨血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha-positive,PDGFRα)阳性细胞在儿童先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)发病中的表达与意义。方法应用免疫组织荧光双染方法对首都医科大学附属北京儿童医院30例UPJO患儿肾盂输尿管连接部(ureteropelvic junction,UPJ)组织(为UPJO组)及10例因肾脏肿瘤行肾输尿管切除术患儿的UPJ组织(排除肾盂输尿管连接部狭窄以及其他泌尿系统畸形,病理结果证实肿瘤未侵犯肾盂输尿管交界处,为对照组)进行染色观察,同时分析所有患儿PDGFRα阳性细胞表达的小电导钙离子激活钾离子通道3型(small conductance calcium-activated potassium channel 3,SK3)表达水平。结果PDGFRα阳性细胞表型区别于Cajal间质细胞,与平滑肌细胞、神经纤维关系密切。PDGFRα细胞在UPJO组中的分布与对照组相似,而该细胞表达的SK3通道在UPJO组中显著低于对照组。结论UPJO患儿肾盂输尿管连接部PDGFRα细胞上SK3通道表达降低,推测SK3通道可能通过干扰UPJ蠕动参与UPJO发病过程。     

先天性巨结肠神经肌肉连接免疫组织化学研究

目的采用免疫组织化学方法，对先天性巨结肠神经肌肉连接进行研究，并探讨其与先天性巨结肠发病机制之间的关系。方法应用免疫组化技术对20例先天性巨结肠病变肠段及10例正常结肠组织标本行突触素和神经丝神经肌肉连接标记，光镜下观察其免疫反应表达。结果对照组的结肠突触素和神经细丝的免疫反应呈强阳性表达，先天性巨结肠组扩张肠段突触素和神经细丝的免疫反应呈阳性或弱阳性表达，狭窄段肠壁突触素和神经细丝的免疫反应呈阴性表达。结论先天性巨结肠病变肠段同时缺乏内源性神经支配和外源性神经支配，处于完全失神经支配状态，Cannon定律是先天性巨结肠的病理生理最简单的解释。     

肾母细胞瘤血小板衍化内皮细胞生长因子mRNA的表达及其临床意义

目的探讨小儿肾母细胞瘤中血小板衍化内皮细胞生长因子（PD-ECGF）mRNA的表达及其临床意义。方法用逆转录多聚酶链反应（RTPCR）方法检测30例肾母细胞瘤组织、8例瘤旁、4例无瘤肾组织的PD-ECGF mRNA的表达情况，并分析PD-ECGF mRNA的表达与肾母细胞瘤的病理分型、临床分期、转移及预后之间的关系。结果所有标本均有不同程度的PD-ECGF mRNA的表达，表达程度呈肿瘤组织、瘤旁组织、无瘤组织依次降低。肿瘤组织是瘤旁组织的1．22倍（t=0．855，P〉0．05）；瘤旁组织是无瘤对照组的2．07倍（t=2．65，P〈0．05）；肿瘤组织是无瘤对照组的2．53倍（t=2．05，P〈0．05）。在肾母细胞瘤组织中PD-ECGF mRNA的表达与病理分型无关（F=0．691，P〉0．05），与临床分期也无关（F=0．05，P〉0．05），但有转移者的PD-ECGFmRNA的表达高于无转移者。全部病例获得随访，平均随访50,2个月（17～75个月），术中已发现转移和术后转移复发共18例，死亡7例。所有转移、复发患儿的PD-ECGF mRNA水平是无转移、复发患儿的1．72倍（t=2．2766，P〈0．05）；是无瘤对照组的2．9倍（t=2．608，P〈0．05）。用PD-ECGF mRNA的表达预测肾母细胞瘤转移、复发及死亡的敏感性为83．3％，特异性80．0％。结论PD-ECGF mRNA在肾母细胞瘤组织中呈高表达，与其预后密切相关。提示PD-ECGF mRNA的表达对判断肾母细胞瘤预后有一定的意义。     

生长抑素受体在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的探讨生长抑素受体(SSTR)亚型SSTR1、SSTR2和SSTR5在神经母细胞瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测SSTR1、SSTR2和SSTR5在60例神经母细胞瘤组织中的表达情况。结果在60例中,SSTR1表达阳性14例(23%);SSTR2表达阳性23例(38%);SSTR5表达阳性40例(67%)。SSTR1、SSTR2和SSTR5的表达在不同性别、临床分期及有无淋巴结转移患儿之间差异均无显著性(P>0.05)。SSTR5在低分化和高分化神经母细胞瘤中的表达差异有显著性(P<0.05)。结论 SSTR5在低分化神经母细胞瘤中的表达显著高于高分化者,提示SSTR5可作为低分化神经母细胞瘤潜在的治疗靶点。     

谷氨酰胺影响脓毒症大鼠脑内PDGF及其受体表达的研究

目的：该研究旨在探讨脓毒症幼年大鼠大脑血小板衍生生长因子-B（PDGFB）及其受体(PDGFR-β)表达的变化及谷氨酰胺（Gln）干预的影响,探讨PDGF-B在幼年期脓毒症时脑损伤发病机制中的作用及Gln对脑损伤的可能保护机制。方法：120只10日龄Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素组（LPS）和谷氨酰胺组（Gln）。腹腔注射内毒素（LPS,5 mg/kg)制备幼年大鼠脓毒症动物模型。Gln组为腹腔注射LPS前1 h腹腔注射Gln (1.346 g/kg)。各组大鼠又分为5个亚组（n=8）,分别于注射后2、6、12、24及72 h处死,采用免疫组织化学方法及免疫印迹法检测大脑皮层PDGF-B及PDGFR-β的表达。结果：（1）免疫组织化学方法结果显示注射LPS后 72 h Gln组大脑皮层神经元PDGF-B和 PDGFR-β表达明显高于对照组和LPS组。（2）免疫印迹方法结果显示,LPS组和Gln组于注射LPS后第2 h、6 h和12 h 的PDGF-B表达均低于对照组（P＜0.05）。而Gln组12 h和72 h 的PDGF-B表达明显高于LPS组（P＜0.05）。与对照组比较,LPS组大脑组织PDGFR-β表达在2 h和6 h增加,而在72 h表达下降（P＜0.05）。Gln组则与对照组于各时间点比较,差异均无统计学意义。结论：Gln在注射LPS后能上调大脑PDGF-B和PDGFR-β的表达,提示Gln对幼年期脓毒症脑损伤的保护机制可能与其促进大脑PDGF-B和PDGFR-β的表达有关。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：967-971］     

血小板源性生长因子与系膜细胞增殖研究进展

血小板源性生长因子(PDGF)作为重要的促细胞生长因子,具有促进系膜细胞增殖、细胞外基质积聚等作用.系膜细胞的增殖与细胞周期调控密切相关.PDGF各配体作用于系膜细胞产生不同的效应.该文就近年来有关PDGF诱导系膜细胞增殖的相关机制以及临床应用研究进展作一综述.     

当归多糖与血小板源性生长因子、血小板生成素对巨核细胞造血影响的比较研究

目的 研究当归多糖(APS)、血小板源性生长因子(PDGF)和血小板生成素(TPO)对巨核细胞株M-07e生长和凋亡的影响作用,为进一步探讨细胞因子对巨核细胞/血小板造血的作用及其机制提供基础.方法 采用细胞计数和锥虫蓝拒染法进行细胞存活率检测,Annexin V、Caspase-3和JC-1 3种流式方法检测APS、PDGF和TPO对无血清培养诱导的M-07e凋亡的影响.结果 M-07e培养24、48、72 h后,APS组、PDGF组和TPO组细胞增殖及细胞存活率都显著高于对照组(P＜0.05).Annexin V法检测72 h各组死亡细胞,APS组、PDGF组和TPO组中全部死亡细胞分别占(19.41±7.59)%、(21.38±7.25)%和(18.77±8.00)%,与对照组(34.33±5.46)%比较差异有统计学意义;Caspase-3检测结果显示,APS组、PDGF组和TPO组中Caspase-3活性增高的细胞分别占(12.27±5.18)%、(12.39±6.26)%和(13.75±8.25)%,其中APS组、PDGF组与对照组(18.92±6.09)%比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);JC-1检测结果显示,APS组、PDGF组、TPO组和对照组中死亡细胞分别占(23.64±6.69)%、(28.00±10.05)%、(27.99±8.99)%和(39.48±11.86)%,APS组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),APS组与PDGF组、TPO组比较,差异无统计学意义.结论 APS与PDGF、TPO都具有促进M-07e增殖和抵抗无血清培养诱导的M-07e细胞凋亡的作用,且APS与PDGF、TPO的作用相当.     

一氧化氮对缺氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉血小板源生长因子表达的影响

目的 探讨一氧化氮对缺氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉中血小板源生长因子 （ＰＤＧＦ）表达的影响。方法 将大鼠随机分为４组：常氧组（６只）、低氧组（６只）、低氧＋Ｌ－精氨酸组（低氧＋Ｌ－Ａｒｇ组）（７只）及低氧＋Ｎ＾ω－硝基－Ｌ－精氨酸甲酯组（低氧＋Ｌ－ＮＡＭＥ组）（６只）。以光学显微镜观测４组大鼠肺中、小肌型动脉的相对中膜厚度（ＲＭＴ）。应用ＰＤＧＦ的单克隆抗体经免疫组织化学技术对４组大鼠肺动脉ＰＤ     

血管内皮生长因子及其受体在急性白血病儿童骨髓和血浆中的表达

目的　血管内皮生长因子(VEGF)与实体瘤的发生、发展和预后相关,但其与儿童急性白血病的 关系尚不明确。本实验通过检测VEGF及其受体fms样酪氨酸激酶受体(Flt 1)及含激酶插入区受体(KDR)在儿 童急性白血病的表达情况,分析它们与儿童急性白血病的发生与预后的关系,为进一步研究抗白血病治疗新靶点 提供思路。方法　采用RT PCR法检测21例初发和复发、20例缓解后白血病患儿和5例健康儿童骨髓单个核细 胞VEGF、Flt 1、KDRmRNA的表达。使用酶联免疫吸附法检测上述患儿及20例正常儿童外周血VEGF蛋白浓度。 结果　健康儿童骨髓单个核细胞均未检测到VEGF及其受体Flt 1,KDR的表达。90%(19/21)初发/复发白血病 患儿骨髓单个核细胞表达VEGF,86%(18/21)表达Flt 1,30%(6/20)缓解后白血病患儿骨髓单个核细胞表达 VEGF,15%(3/20)表达Flt 1,两组差异有显著性(均P<0.001)。初发/复发组VEGF和Flt 1阳性率与正常组 [0%(0/5);0%(0/5)]比较差异有显著性(均P<0.001),而缓解组与正常组比较差异无显著性。两组白血病患 儿未检测到KDR表达。初发/复发组血浆VEGF浓度为405±270pg/mL,高于缓解组(136±98pg/mL,P<0.01) 和正常组(91±41pg/mL,P<0.01)。缓解组与正常组比较差异无显著性。结论　白血病患儿表达VEG     

血小板源生长因子A(PDGF-A)在发育性髋关节发育不良关节囊的分布和表达

目的 探求发育性髋关节发育不良患儿(development dysplasia of hip,DDH)和对照组儿童血小板源生长因子A(PDGF-A)在关节囊中的免疫组化分布规律与水平差异,并比较PDGF-A 在mRNA水平的表达差异,以探索髋关节松弛的原因.方法 共收集了髋脱位患儿64例和对照组儿童14例,二组之间成功配对8组,进行配对研究,每组配对条件为性别相同、年龄相近,采用S-P法免疫组化技术和半定量RT-PCR技术检测关节囊中PDGF-A的分布规律与水平差异,以及在mRNA水平的差异.运用图像分析软件进行量化分析,并采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 可见分泌PDGF-A的成纤维细胞于关节囊内贴近关节侧的滑膜层呈强阳性表达,内部纤维层阳性表达细胞稀疏,强度明显减弱.8例患儿与对照组配对比较,纤维层中有阳性表现的成纤维细胞数占成纤维细胞总数的百分比(配对T检验P＜0.001)和局部染色的灰度值(配对T检验P＜0.05)在二组间差异存在统计学意义,DDH组关节囊PDGF-A mRNA的表达较对照组减少(配对T检验P＜0.01).结论 PDGF-A的分布减少和表达异常很可能与DDH患儿的髋关节松弛有关.

Abstract：

Objective To study the expression of platelet-derived growth factor-A (PDGF-A) in the hip capsule of children with developmental dysplasia of the hip (DDH).Methods The clinical data of 64 patients with DDH and 14 control children were retrospectively analyzed.Among them,8 pairs of DDH patients and their controls were chosen for this study.The tissues were collected during surgery.The PDGF-A in the hip capsule was detected using immunohistochemistry (SP method) staining.RT-PCR was used to study the mRNA expression of PDGF-A.Results High expression of PDGF-A was observed in the synovial layer with fibroblast regularly arranged parallel to the joint surface.PDGF-A expression was decreased in the fibrous layer of the hip capsule.The percentage of positive fibroblast and gray-scale density was significantly different in the fibrous layer of the DDH patients compared to controls (P＜0.05).The mRNA expression of PDGF-A was also decreased in the DDH patients compared to the controls (P＜0.01).Conclusions The decreased expression of PDGFA in the hip capsule may involve in the development of DDH.