Smad蛋白在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达及意义

目的：检测TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ及其下游Smad调节因子等基因在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达,探讨TGFβ在乳腺癌发展过程中发挥作用的分子机制。方法：分离纯化人正常乳腺上皮细胞,应用RT-PCR检测乳腺癌细胞系MCF7及正常乳腺上皮细胞中TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad6、Smad7的表达。结果：TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ、Smad6、Smad7与内参照GAPDH比值在正常乳腺上皮细胞中（0.721±0.214、1.001±0.312、0.689±0.12和0.221±0.124）与MCF7细胞（0.698±0.324、0.998±0.217、0.718±0.257;0.246±0.138）比较表达水平差异无显著性,Smad4在乳腺癌细胞中的表达水平（0.498±0.221）低于正常乳腺上皮细胞（1.132±0.314）（P<0.05）。结论：Smad4在乳腺癌细胞中的低表达可能与TGFβ对乳腺癌的促癌作用有关联。     

糖基化终产物诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达的规律

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响。 方法：在体外培养的大鼠肾系膜细胞培养基中,分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）及牛血清白蛋白（BSA）,RT-PCR法检测细胞转化生长因子β₁ (TGF-β₁)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA表达。 结果：与加入BSA组比较,AGE-BSA组TGF-β₁和CTGF mRNA表达明显增强（P<0.01）,TGF-β₁ mRNA表达增强发生时间早于CTGF。 结论：AGEs能明显诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达上调,并且具有时间和剂量依赖性。     

钙离子抑制系膜细胞中转化生长因子β1诱导的自噬和胞外基质蛋白表达

目的：探讨Ca²⁺对转化生长因子β₁诱导的系膜细胞自噬和细胞外基质蛋白表达的影响。方法：通过Western blot方法研究Ca²⁺对转化生长因子β₁诱导的系膜细胞胞外基质蛋白FN及自噬相关蛋白mTOR、P70S6K、Beclin-1和P62的表达变化。结果：TGF-β₁和Ca²⁺共处理系膜细胞24 h后,通过Western blot检测发现TGF-β₁刺激系膜细胞可抑制mTOR/p70S6K的磷酸化和P62的表达,上调Beclin-1和胞外基质蛋白FN的表达,Ca²⁺和TGF-β₁共同处理可以上调mTOR/p70S6K的磷酸化和P62的表达,同时下调Beclin-1的表达,并且抑制TGF-β₁诱导的FN表达。结论：在系膜细胞中钙离子能抑制TGF-β₁诱导的自噬和胞外基质蛋白表达。     

人β2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响

目的：探讨重组人β₂糖蛋白1(hrβ₂-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。 方法：应用pQE30表达载体表达hrβ₂-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应 用hrβ₂-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和 RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。 结果：成功构建pQE30-hβ₂-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β₂-GP1的抗原性;rhβ₂-GP1处理后的APS患者血清与处理前比 较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ₂-GP1的浓度增加而逐渐增强。 结论：抗β₂糖蛋白1抗体(anti-β₂GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1, hrβ₂-GP1可中和此作用。     

肺纤维化小鼠肺泡灌洗液及肺组织中IL-10和TGF-β1的动态表达

目的：探讨博莱霉素致肺纤维化小鼠各时期支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织中IL-10和转化生长因子-β（TGF-β₁）的mRNA表达规律。 方法：40只雄性小鼠,随机分为2组：对照组10只,实验组30只。分别用生理盐水和博莱霉素（5 mg·kg^-1）气管内灌注,于第3、7、14、28和56天肺泡灌洗并处死,取肺泡灌洗液和肺组织,应用RT-PCR测定IL-10　mRNA和TGF-β₁　mRNA相对转录水平。 结果：①实验组BALF中IL-10 mRNA和TGF-β₁ mRNA表达增高,与对照组比较差异有显著性（P<0.05）;反应高峰分别在第14和7天。②实验组肺组织中IL-10 mRNA和TGF-β₁ mRNA表达高于对照组（P<0.01）;反应高峰分别在第14和7天。此后无明显下降,保持高水平表达。 结论：IL-10 mRNA和TGF-β₁ mRNA表达时相略有不同,但在致肺纤维化中发挥重要作用,并依此可判断病变程度和活动性。     

低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响

应用细胞培养、核酸分子原位杂交、免疫细胞化学、图像分析技术研究低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF－β1mRNA及蛋白表达的影响,探讨低氧条件下肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制。结果发现低氧（H）组周细胞内TGF－β1mRNA及蛋白表达量分别是常氧（N）组的1．35倍和1．23倍,差异均有显著意义（均为P＜0．01）。研究表明,低氧可促进脉血管周细胞TGF－β1mRNA及蛋白表达增高。TGF－β1表达增高可能是低氧诱导肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制之一。     

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法 体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β₁分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β₁和TGF-β₁+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β₁组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β₁组和TGF-β₁+SKF96365组中的变化。结果 与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β₁组中表达升高(P＜0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β₁+SKF96365组表达明显降低(P＜0.01)。结论 抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。     

转化生长因子-β1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:研究转化生长因子;GAAB2;β1;(TGF;GAAB2;β1)对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达结缔组织生长因子(CTGF) 的影响.方法:体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为对照组:无血清培养基(FSM) 培养; 实验组:分别用含1 μg /L,2 μg /L,4 μg /L TGF-β1的FSM培养,24 h后,分别用RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果:对照组CTGF mRNA和蛋白表达均为阴性;实验组CTGF mRNA和蛋白表达皆呈阳性,且随着TGF-β1质量浓度的增加,2者的表达量有增高的趋势(F=80.889和200.300,P均＜0.01).结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞中CTGF的表达.     

TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化

目的:探讨TGFβ1-Smad信号通路在IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法:体外培养人肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为对照组、TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组、IL-33组、IL-33+TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组。给予相应处理,24h后收集各处理组细胞。RT-PCR和Western blot检测转化生长因子β1(TGFβ1)、上皮细胞标志物E钙黏素(E-cad)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。Western-blot检测Smad信号通路Smad3、p-Smad3的表达水平。结果:与对照组比较,TGFβ受体抑制剂组Smad3蛋白,p-Smad3蛋白,TGFβ1、E-cad、α-SMA的mRNA及蛋白表达表达水平均未见明显变化(P>0.05);与对照组比较,IL-33组Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),TGFβ1mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),E-cad mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);IL-33+TGFβ受体抑制剂组与IL-33组比较,Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),TGFβ1的mRNA及蛋白表达未见明显改变(P>0.05),E-cad的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),α-SMA的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化。     

哮喘儿童血清白细胞介素4、转化生长因子β1及IgE水平的变化及临床意义

目的：探讨哮喘儿童血清白细胞介素4（IL-4）、转化生长因子β₁（TGFβ₁）及IgE水平变化及临床意义。 方法：对98例哮喘患儿应用双抗体夹心ELISA法,检测血清IL-4、TGFβ₁、IgE水平,其中发作期42例、缓解期56例;设正常对照52例。 结果：在哮喘组,血清IL-4、IgE水平明显高于对照组［（12.09±6.00） ng·L^-1,(58.16±15.47) ng·L^-1］（P<0.05）,TGFβ₁水平显著低于对照组［（181.59±96.05）ng·L^-1］（P<0.05）;在发作期血清IL-4、IgE水平［（105.86±34.33）ng·L^-1,(270.21±74.84) ng·L^{-1］均高于缓解期［（61.58±11.04）ng·L-1,(152.80±45.15) ng·L-1］ （P<0.05）,在发作期血清TGFβ₁水平［（41.97±12.77） ng·L-1］均低于缓解期［(63.40±23.40) ng·L-1］（P<0.05）。IL-4与IgE呈正相关（r=0.581,P<0.001）,TGFβ₁分别与IL-4、IgE呈负相关（r₁=-0.614,P<0.001;r₂=-0.609,P<0.001）。 结论：IL-4可促进哮喘患儿IgE分泌,并抑制嗜酸性粒细胞产生TGFβ₁,这一机理在哮喘 发病中起重要作用。}     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞α1［Ⅰ］及α1［Ⅲ］型胶原mRNA表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸（Hcy）对血管平滑肌细胞（VSMCs）胶原合成的影响。方法：采用体外培养的大鼠VSMCs,加入不同浓度的Hcy(0、0.10、0.25、0.50和1.00 mmol•L^-1)作用后,通过测定培养基中羟脯氨酸含量和半定量RT-PCR法检测Hcy对VSMCs胶原合成及对α₁［Ⅰ］、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达的影响。结果：Hcy促进VSMCs胶原合成及α₁［Ⅰ］型、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达,并呈剂量依赖效应。结论：Hcy促进VSMCs胶原合成,可能是通过上调α₁［Ⅰ］、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达实现的。     

雌激素受体介导的柚皮苷抗Aβ25-35损伤PC12细胞凋亡作用研究

目的 探讨雌激素受体介导的柚皮苷(NG)抗β淀粉样蛋白25-35(Aβ_25-35)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的凋亡作用及其与雌激素受体(ER)信号通路的关系。方法 实验分为空白组、Aβ_25-35组、E2+Aβ_25-35组、NG+Aβ_25-35组、ICI182780+E2+Aβ_25-35组、ICI182780+NG+Aβ_25-35组。实验采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;RT-qPCR法检测细胞凋亡因子mRNA的表达。结果 Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术结果显示,与空白组相比,Aβ_25-35组细胞凋亡率升高(P<0.01);与Aβ_25-35组相比,NG+Aβ_25-35组细胞凋亡率降低(P<0.01);与NG+Aβ_25-35组相...     

脑皮质星形细胞在1,25-(OH)2D3限定培养中表达NGF

目的：研究原代中枢神经胶质细胞在1,25-二羟维生素D₃［1,25-(OH)₂D₃］化学限定培养中神经生长因子（NGF）基因转录及表达。方法：用新生乳鼠脑皮质制备星形胶质细胞,采用浓度0、10_-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11及10^-12 mol•L^-1 1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清培养液培养后,RT-PCR法检测NGF mRNA转录,双向夹心-ELISA检测NGF。 结果：1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清原代培养的神经胶质细胞在1,25-(OH)₂D₃作用下可分泌NGF,实验中1,25-(OH)₂D₃有效浓度范围10^-11~10_-7mol•L^-1;1,25-(OH)₂D₃培养6 h后开始检测到mRNA的表达,12 h时表达最高,36 h后检测不到NGF mRNA的表达;而NGF蛋白的ELISA反应持续时间大于48 h。结论：星形神经胶质细胞的NGF基因可被甾体激素1,25-(OH)₂D₃激活并转录表达。     

IL-1β预处理脂肪间充质干细胞促进VEGF蛋白分泌和巨噬细胞M2型极化的研究

目的探讨白细胞介素（IL）-1β预处理脂肪间充质干细胞（ADMSCs）对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和巨噬细胞M₂型极化的影响及作用机制。方法IL-1β预处理ADMSCs 24 h,Western blot法检测ADMSCs中环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达,ELISA法测定ADMSCs培养基中前列腺素E₂(PGE₂)和VEGF蛋白质量浓度; IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基培养丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）-U937巨噬细胞（M0巨噬细胞）72 h后,实时荧光定量PCR法检测PMA-U937细胞CD163（巨噬细胞M₂型极化标志物）和IL-10 mRNA表达。慢病毒干扰ADMSCs细胞中COX-2表达后,观察ADMSCs培养基中VEGF蛋白质量浓度（ELISA法）和PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA的表达（实时荧光定量PCR法）。结果IL-1β预处理ADMSCs细胞后上调其COX-2蛋白表达,增加PGE₂和VEGF蛋白分泌（P<0.05）;IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基可上调PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达水平（P<0.01）。干扰ADMSCs细胞中COX-2蛋白表达后,可抑制IL-1β预处理的ADMSCs细胞中VEGF蛋白分泌（P<0.05）,亦可抑制其对PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达的影响（P<0.05）。结论IL-1β预处理ADMSCs细胞可通过COX-2-PGE₂信号轴,增加VEGF蛋白分泌,以及诱导PMA-U937巨噬细胞M₂型极化,提示IL-1β预处理能够增强ADMSCs细胞抗炎活性。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化.方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGF mRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体.结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8 ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8 ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMA mRNA表达(P＜0.001).(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1 ng/mlTGFβ1刺激后VEGF mRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P＜0.001);而3、5和8 ng/ml TGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P＜0.001).8 ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGF mRNA和蛋白表达强度高于对照组(P＜0.001);而刺激较长时间(36、48和72 h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P＜0.001).(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P＜0.001).结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调.     

重组人β-淀粉样蛋白1-42在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的：探索在毕赤酵母中表达人β-淀粉样蛋白1-42 (hAβ_1-42)的可行性。方法：以含有hAβ_1-42基因的质粒为模板，采用PCR方法扩增所需DNA片段，与毕赤酵母表达载体pPICZα连接，构建重组质粒pPICZα-hAβ_1-42 并进行DNA测序分析。将其电击转化毕赤酵母菌株X-33，经SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果：经测序证实，获得的hAβ_1-42序列与基因合成的完全一致。SDS-PAGE显示，在约4 000处有一蛋白带，Western blotting证明表达产物与抗hAβ_1-42抗体有特异性免疫反应。结论：本研究在毕赤酵母中成功地重组表达hAβ_1-42。     

大鼠肺纤维化形成过程中IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达

目的：研究大鼠肺纤维化形成过程中肺组织表达胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）和转化生长因子β₁（TGF-β₁）的变化。方法： 60只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组20只及模型组40只,分别用生理盐水和博莱霉素（5 mg•kg^-1）气管内灌注,于第7、14、21和28天处死,取肺组织,采用免疫组织化学方法检测肺组织中IGF-Ⅰ和TGF-β₁的表达情况。结果：实验组经博莱霉素诱导4周后,取肺组织行HE染色,病理符合肺纤维化改变;苦味酸-酸性品红染色可见肺间质胶原纤维生成,证实肺纤维化模型形成。免疫组化显示,模型组肺组织中表达IGF-Ⅰ、TGF-β₁阳性细胞分布于肺间质,阳性细胞百分率和表达强度与对照组比较差异有显著性（P<0.05）;在第1、2和3周IGF-Ⅰ的表达逐渐增强,第4周出现下降,但第1周分别与第3周和第4周比较,差异仍有显著性（P<0.05）;TGF-β₁的表达高峰出现在第2周,第3周开始出现下降,但至第4周时,TGF-β₁的表达水平仍高于第1周,第1周分别与第2、3周比较差异有显著性（P<0.05）。结论：IGF-Ⅰ和TGF-β₁的高水平表达,促进了肺纤维化的形成;IGF-Ⅰ和TGF-β₁共同参与了肺纤维化的形成,并可能存在协同作用。     

原发性及转移性胰腺癌细胞中TGFβ1和TGFβR1的表达

目的 分别对具有原发癌特性的BxPC-3及转移癌特性的AsPC-1胰腺癌细胞株中TGFβ1及其Ⅰ型受体TGFβR1 mRNA及蛋白的表达情况进行研究。方法 采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot方法检测AsPC-1和BxPC-3胰腺癌细胞中TGFβ1和TGFβR1 mRNA及蛋白的表达。结果 BxPC-3中TGFβ1和TGFβR1的mRNA和蛋白均呈低表达,AsPC-1中TGFβ1和TGFβR1的mRNA和蛋白呈高表达,两者相比较有显著统计学差异（P<0.05）。结论 TGFβ1和TGFβR1的高表达可能与胰腺癌的远处转移密切相关。     

Aβ1-42对大鼠基底前脑神经元KATP通道各亚基蛋白表达的影响

目的研究β淀粉样蛋白（Aβ_1-42）对原代培养基底前脑胆碱能神经元ATP敏感性钾通道（KATP）各亚基蛋白表达的影响,探讨阿尔茨海默病发病的细胞毒性分子机制。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定, 用2μmmol/L的Aβ_1-42对原代培养细胞进行干预, 免疫荧光双染及免疫印记观察干预后不同时间(分别为0, 24, 72h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,Aβ_1-42作用胆碱能神经元24h后, KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达显著增多(P<0.05),而亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达无明显变化。但Aβ_1-42作用时间达72h后, KATP通道各个亚基蛋白表达均显著升高(P<0.05)。 结论 Aβ_1-422作用胆碱能神经元不同的时间段（24h和72h）,细胞KATP通道各亚基蛋白表达有不同程度的增加,且增加速度不一致。可能由此改变KATP通道的结构和功能,从而影响Aβ_1-42的神经细胞毒性作用。