肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的 制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体.方法 以重组GST-SIX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应.     

抗重组人白细胞介素12单克隆抗体的制备及其生物学特性

以纯化的重组人白细胞介素12（rhIL-12）蛋白为抗原,制备具有生物活性的rhIL-12单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行研究鉴定,为肿瘤及免疫相关性疾病的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。方法： 以纯化的rhIL-12p70免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术,用间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及多次克隆化,培养制备杂交瘤细胞系,用clutathione sepharose 4B进行纯化。采用间接ELISA及Western blotting等方法对McAb的Ig亚类（型）腹水效价及特异性进行鉴定。结果：建立了3株持续分泌rhIL-12p70　McAb的杂交瘤细胞株,3株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞,所分泌的抗体为2株IgG1亚类及1株IgG2a亚类,轻链属k型,小鼠腹水效价测定分别为1∶5.9×106、1∶2.9×10⁷、1∶3.6×10⁷,亲和力依次为EM5>EM6>EV9。结论：成功地制备了3株能稳定分泌抗rhIL-12p70的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高。     

抗马尔尼菲青霉单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备和鉴定抗马尔尼菲青霉单克隆抗体(mAb)。方法用基因重组马尔尼菲青霉甘露糖蛋白1(MP1)抗原免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出4株稳定分泌抗马尔尼菲青霉mAb杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定均为IgG1,抗体亲和常数分别为8.2×10-9、4.7×10-9、6.5×10-9和2.7×10-9,免疫印迹证实马尔尼菲青霉mAb特异性识别MP1。结论4个杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高,为马尔尼菲青霉病的快速诊断奠定了基础。     

抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的 制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力.结果 筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株.Western blotting显示在相对分子质量为6.3×104处出现特异性反应带.杂交瘤细胞培养上清效价为1:640,腹水效价为1:25600,Ig亚类为IgG2a,相对亲和力达4.84×106 L/mol.结论 成功制备能特异性识别人SOCS3的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS3在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础.     

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗早孕因子（EPF）单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10^-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。     

许旺细胞源运动神经营养因子单克隆抗体的研制及特性鉴定

目的 研制针对许旺细胞源神经营养因子(SDNF)的单克隆抗体并鉴定Ig亚类.方法 用SDNF免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞按1:5比例进行融合,间接ELISA法筛选阳性克隆,有限稀释法进行克隆化培养;制备单克隆抗体,鉴定MeAb的Ig亚类.结果 获得4株能稳定分泌抗体的细胞株6D3,B8,C9E9,A6C6.效价为1:5120,亚类为IgG1.结论 所获得的4株杂交瘤细胞株均又较强稳定分泌抗BDNF单克隆抗体的能力,这为进一步的研究打下了基础.     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的快速、高效制备的方法研究

目的探讨制备和鉴定SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体(mAb)快速免疫方法。方法用基因重组SARS冠状病毒N蛋白和足垫免疫2周的BALB/c小鼠制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出4株抗SARS冠状病毒N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法和免疫荧光证实这组单克隆抗体仅与SARS冠状病毒特异性反应,而与其他病原体无交叉反应,IgG亚类鉴定2株为IgG1,另2株分别IgG2a和IgG2b。2株抗体亲和常数分别为4.14×10-9 M和3.19×10-9 M。结论获得特异性针对SARS冠状病毒的单克隆抗体,为SARS的早期诊断、蛋白组学和发病机制的研究奠定了基础。     

氯胺酮单克隆抗体的制备及生物学特性的研究

目的制备抗氯胺酮(ketamine)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为氯胺酮的胶体金免疫试纸条研制奠定基础。方法氯胺酮-BSA免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗氯胺酮的mAb。采用间接ELISA、竞争抑制ELISA和Western blot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(FB12b和CH10),其Ig亚类分别为IgG2a和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶106;mAb FB12b和CH10的相对亲和力均在105以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功制备抗氯胺酮的2株mAb,为建立快速特异检测氯胺酮滥用的现场检测方法提供了有力的工具。     

抗人SOCS1单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的锏备高效价的抗人SOCS1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS1融合蛋白免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与Sp2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernb1ot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Westernb1ot显示在相对分子量为6．0×10^4处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1：1280,腹水效价为1;102400,Ig亚类为IgG1,相对亲和力达1．17×10^7L／mol。结论成功制备出能特异性识别人SOCS1的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS1在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。     

人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Western blot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2.间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×10~5.Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原.结论 成功制备ALT1单克隆抗体.     

抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

目的:制备分泌抗HBV S蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其特性,为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础.方法:以重组乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定,同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力.结果:获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2,其抗体亚类为IgG1型,腹水效价为1:10(6),相对亲和力在10(5)以上.结论:成功地制备出抗HBV S蛋白的单克隆抗体,为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具.     

抗AIB1-N单克隆抗体的制备及鉴定

目的获得有生物活性的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端（amplified in brest cancer 1-Nterminal,AIB1-N）单克隆抗体。方法以谷胱甘肽转硫酶耦联的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端蛋白（GST-AIB1-N）为免疫原,免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AIBl一N单克隆抗体,用间接ELISA和Western-blot鉴定其亚类和抗原结合特异性。结果成功筛选出一株稳定分泌抗AIB2—N单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类为IgG1,经Western-blot鉴定该McAb特异性高,亲和力强。结论成功制备了抗AIB1-N单克隆抗体,为深入研究AIB1的表达及临床应用提供了有力的工具。     

酵母菌烯醇化酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备并鉴定抗酵母菌烯醇化酶单克隆抗体杂交瘤细胞株.方法用面包酵母烯醇化酶做抗原,用细胞融合技术制备单克隆抗体,并采用ELISA法对单克隆抗体进行筛选和鉴定.结果建立了2株持续分泌抗面包酵母烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株.其中3G5-F3-F5小鼠腹水单克隆抗体的最高稀释度达1:12 800;单克隆抗体的重链属IgG1亚类,轻链属K型;Western Blotting证实单抗能与面包酵母的烯醇化酶抗原(4.8×104)特异性地结合.结论本研究建立了抗酵母菌烯醇化酶杂交瘤细胞株单克隆抗体,为快速诊断系统性念珠菌感染打下了实验基础并创造了条件.     

抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人β2微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）单克隆抗体并对其进行鉴定。方法：用高纯度的β2-MG免疫BALB／C小鼠，按常规技术制备针对β2-MG不同抗原表位的单克隆抗体，并对其进行纯化，测定抗体亚类、抗原表位分析等。结果：筛选出10株抗人β2-MG杂交瘤细胞株，ELISA间接法证实这组单克隆抗体仅与β2微球蛋白反应，而与其他蛋白无交叉反应，IgG亚类鉴定6株为IgGl，2株为IgG2a，1株为IgA，1株为IgM。结论：获得特异性的抗人β2微球蛋白单克隆抗体，为试剂盒的开发研究奠定基础。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗恶性疟原虫EBA—175的单克隆抗体（McAb），为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法以恶性疟原虫EBA-175（Ⅱ区F2段）重组抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株．测定其免疫球蛋白亚类及其效价，ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4Al、4C3、4H9，6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1，1株为IgG2a，6株McAb的培养上清ELISA效价为1：256～1：512，腹水效价为1：12800-1：25600，间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合，而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白。结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

晚期氧化蛋白产物抗体的制备和鉴定

目的 制备和鉴定抗人晚期氧化蛋白产物(AOPPs)单克隆抗体(McAb).方法 用次氯酸(HOCl)和纯化的人血白蛋白(HSA)孵育获得AOPPs-HSA,取凝胶层析纯化后的第1峰免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AOPPs-HSA的McAb,用间接ELISA、Western blot鉴定其特异性及亚类.结果 成功筛选出3株稳定分泌抗AOPPs,1株既抗HSA又抗AOPP的McAb杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类3株为IgGl,1株为IgG2b,间接ELISA和Western blot证明制备的抗体可以特异地和天然或体外制备的AOPPs结合.结论 获得抗人AOPPs-HSA的McAb细胞株4株,为进一步研究AOPPs生物学活性及其相关疾病的诊断和预后奠定基础.     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果　经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论　成功获得 1株可分泌特异性识别rhEPO的单克隆抗体的杂交瘤     

肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP1外壳蛋白单克隆抗体。方法:利用重组纯化的EV71-VP1蛋白为抗原免疫BALB/c鼠,按常规杂交瘤技术进行细胞融合,对阳性杂交瘤细胞进行筛选及亚克隆,获得1株能稳定分泌抗EV71-VP1抗体的杂交瘤细胞株6F2B9,细胞体外扩大培养后的上清用Protein G柱纯化,超滤后用BCA法测其浓度,用免疫球蛋白亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚型,间接ELISA方法检测其效价和特异性,间接免疫荧光法检测其与EV71病毒的特异性结合能力。结果:本研究得到的抗EV71-VP1抗体DSE-136,纯化后浓度为1.9 g/L,免疫球蛋白亚类为IgG2b,轻链属于κ链;间接ELISA检测效价为1∶3.2×105;间接免疫荧光结果显示其可与EV71病毒特异性结合。结论:成功制备出1个效价高、特异性好的抗EV71-VP1单克隆抗体DSE-136,为VP1抗原诊断、疫苗研发及其效果评价奠定了基础。