药物敏感试验指导小鼠多次传代胃癌化疗的疗效及耐药基因观察

目的 通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗,了解其疗效及耐药基因的表达.方法 用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性,对荷瘤鼠进行化疗,观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率,检测多药耐药基因1(MDR1)的表达.结果 用MTT法筛选最敏感的化疗药5-FU对第一代荷瘤小鼠进行化疗,其抑瘤率显著高于对照组,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;筛选的最不敏感的阿霉素化疗组抑瘤率低,MDR1的表达与对照组比较无显著性差异.再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为顺铂,最不敏感药物为丝裂霉素.对第2代荷瘤小鼠进行化疗,发现顺铂组抑瘤率高,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;丝裂霉素组抑瘤率低,MDR1表达高,与对照组比较有显著性差异.继而用5-FU和阿霉素对第2代荷瘤小鼠进行化疗,抑瘤率低,MDR1表达与对照组比较无显著性差异.结论 应根据药敏试验和耐药基因来实施科学的、药物适配的个体化化疗方案.     

RASSF1A基因表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的:研究RASSF1A提高肝癌细胞化疗药物敏感性的作用。方法:通过脂质体介导的基因转染法将RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染肝癌细胞株QGY-7703,G418筛选稳定表达株,并以RT-PCR和Western Blot进行鉴定目的基因的表达。化疗药物阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)分别作用各细胞株后,检测各细胞株的生长抑制率。结果:经800μg/ml的G418最佳筛选浓度筛选QGY-7703细胞株,成功建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。以QGY-7703细胞为对照,MMC对表达RASSF1A基因的肝癌细胞的生长抑制率最大为21%。结论:RASSF1A基因的表达可明显提高肝癌细胞对MMC的敏感性。RASSF1A的表达不影响肝癌细胞QGY-7703对ADM、VP-16、5-FU和DDP敏感性。     

胃癌的肿瘤药敏结果分析及临床意义

目的通过测定胃癌患者对5-氟脲嘧啶（5-Fu）、顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、丝裂霉素（MMC）、奥沙利伯（OXA）及联用化疗药物的体外敏感性试验,探讨肿瘤药敏试验对胃癌个体化疗的应用价值。方法采用组织块培养-终点染色-计算机图像分析法（TECIA）。结果32例胃癌细胞对试验化疗药物的敏感性由高到低依次为OXA、F＋M（5-FU＋MMC）、F＋D（5-FU＋DDP）及DDP（两者敏感率相同）、5-Fu、O＋F（5-Fu＋OXA）、MMC、ADM。结论TECIA法的体外肿瘤药敏试验在胃癌的,临床化疗用药及个体化化疗方面具有重要的指导意义。     

抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达的影响及相互关系

目的研究抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达的影响及相互关系。方法取病理诊断为乳腺癌的手术切除标本,体外分离细胞作培养,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析多柔比星(ADM)、丝裂霉素(MMC)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)5种化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率,通过免疫细胞化学染色法和图像定量法分析乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67的表达改变。结果乳腺癌细胞在0.1XPPC药物浓度体外处理24h后出现形态改变,化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率依次为VCR＞5-FU＞ADM＞MMC＞DDP,各用药组乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达均有不同程度改变,与未用药组比较P＜0.001,等级相关分析P＜0.01和P＜0．05。结论化疗药物主要通过诱导乳腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖等作用,而选择性地抑制和调控过度激活表达的癌基因。     

胃癌细胞P53、P16蛋白表达与化疗药物敏感性的关系

目的探讨胃癌对化疗药物的耐药性及其与P53和P16蛋白表达的关系。方法收集75例新鲜胃癌标本,制备单细胞悬液,分别加入HCPT、CDDP、ADM、5-FU和MMC培养48h,用MTT比色法检测胃癌细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化技术检测P53和P16 蛋白在胃癌组织中的表达。结果胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同：5-FU（43.4±9.2）、CDDP（41.9±8.7）和HCPT（40.6±8.3）对胃癌细胞的抑制率与ADM（31.6±7.8）和MMC（28.7±7.3）比较有统计学意义（P〈0.05）。胃癌组织中P53和P16 蛋白的阳性率分别为81.33%（61/75）和38.67%（32/75）。P53阳性者显示对5-FU、ADM、HCPT有明显的体外耐药性（P〈0.05）,P16在5-FU和CDDP耐药组阳性率低于敏感组（P〈0.05）。结论P53和P16蛋白参与了胃癌对化疗药物原发性耐药的产生。MTT药敏检测有助于筛选有效化疗药物。     

胃癌细胞转铁蛋白受体的表达与化疗药物敏感性的关系

目的　研究胃癌细胞转铁蛋白受体 (CD71)的表达与化疗药物敏感性的关系。方法　利用流式细胞仪 (FCM)检测 5 8例胃癌组织CD71+ 细胞表达率 ,同时用MTT比色法检测化疗药物敏感性。结果　胃癌组织CD71+细胞表达率与 5 -氟脲嘧淀 (5 -FU)及氨甲喋呤 (MTX)相对抑制率存在正相关 (均P <0 0 5 ) ,而与顺铂 (DDP)及丝裂霉素 (MMC)相对抑制率无相关 (均P >0 0 5 ) ;5 -FU、MTX药物敏感与不敏感两组间的胃癌组织CD71+ 细胞表达率有明显差异 (均P <0 0 1) ,而DDP、MMC药物敏感与不敏感两组间胃癌组织CD71+ 细胞表达率无差异 (均P >0 0 5 )。结论　胃癌组织CD71+ 细胞表达增高时 ,细胞处于增殖状态 ,对周期特异性化疗药物的敏感性增高 ;而对周期非特异性化疗药物不敏感。     

大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性研究

目的研究大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性.方法用MTT比色法检测20位大肠癌患者的癌细胞对化疗药物的敏感性,并用PCR-SSCP技术分析其癌细胞的p53基因突变.结果大肠癌细胞对5-Fu[IR=(54.7±14.1)%]比对MMC[IR=(43.9±10.8)%]及ADM[IR=(43.9±9.4)%]更敏感(P＜0.05),但对DDP有耐药性[IR=(25.9±12.8)%,P＜0.01].p53基因的突变率为45%(9/20).癌细胞对MMC和ADM的敏感性与p53基因突变呈正相关(rmmc=0.589,rabm=0.624,P＜0.005).结论化疗药物MMC和ADM对大肠癌的作用依赖于p53基因的状态,而大肠癌对5-Fu和DDP的敏感性却与p53基因突变无关.     

Livin基因表达与食管鳞癌化疗药物敏感性的相关性研究

目的研究原代培养食管癌细胞对化疗药物的敏感性,并进一步探讨其敏感性与食管癌组织中Livin基因表达的关系,为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验资料和依据。方法：取手术切除的新鲜食管癌组织标本,用MTT法检测经化疗药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性的变化;同时取相同食管癌组织制成石蜡切片,用免疫组化检测Livin蛋白的表达。结果：1.Livin阳性表达与5-FU及ADM耐药有关（P〈0.05）;2.TAX、MMC及5-FU与ADM及DDP之间敏感性差异具有统计学意义（P〈0.05）,前者明显高于后者;ADM敏感性明显高于DDP,组间差异具有统计学意义（P〈0.01）;结论：食管癌组织中Livin阳性表达者与5-FU及ADM耐药有关,提示Livin可作为食管癌原发性耐药标志之一。     

人胃癌原代细胞培养化疗药物敏感性评价

目的:评价人胃癌原代细胞对7种化疗药物的敏感性。方法:取59例手术切除的新鲜胃癌组织标本,应用人胃癌原代细胞短期培养(混杂非肿瘤细胞)与纯化培养MTT法体外药敏试验,测定每种化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果:药敏试验测定7种化疗药物抑制率除氨甲蝶呤(MTX)外纯化法均高于短期法,表明纯化法较敏感;两种方法测定药物敏感性顺序一致,由高至低依次为顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、依托泊甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基喜树碱(HCPT)、MTX。结论:7种化疗药物以DDP、MMC、ADM较敏感,VP-16、5-FU次之,HCPT、MTX最差。     

胃肠道肿瘤细胞周期素A的表达及其与化疗药物敏感性的关系

目的探讨胃肠道肿瘤细胞细胞周期素A（Cyclin A）的表达及其与肿瘤化疗敏感性之间的相关性。方法用流式细胞术双参数标记法对45例临床胃肠道肿瘤标本Cyclin A的表达进行检测，同时用四甲基偶氮唑盐显色法（MTT法）检测该肿瘤标本对几种常用化疗药物单药和联合用药方案的敏感程度。结果Cyclin A阳性表达的肿瘤细胞中对5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）、5-FU＋丝裂霉素（MMC）敏感的标本比例分别为76.9%、73.1%和84.6%；Cyclin A阴性表达的肿瘤细胞中相应的比例分别为15.8%、15.8%和10.5%，Cyclin A的表达与5-FU、DDP、5-FU＋MMC的药物敏感性之间具有相关性（均P〈0.01）。Cyclin A的表达与泰素（Taxol）、替尼泊苷（VM-26）、MMC、5-FU＋Taxol、5-FU＋DDP药物敏感性未发现有相关性（均P〉0.05）。结论Cyclin A的表达与某些肿瘤术后化疗方案的敏感程度显著相关，检测该指标对术后化疗药物和联合化疗方案选择可起到一定指导作用。     

SphK1及其抑制剂对人胃癌裸鼠移植瘤的作用

目的研究鞘氨醇激酶-1（sphingosinekinase-1,SphKl）及其抑制剂在人胃癌裸鼠移植瘤生长中的作用,并探讨其作用机制。方法对数生长期SGC7901细胞注射于裸鼠皮下建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,建模成功后将裸鼠随机分为4组（每组8只）,分别用生理盐水、SKI-Ⅱ、顺铂（DDP）、SKI-Ⅱ联合DDP进行治疗,每周注射1次,共3次。定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤时间-体积生长曲线。在治疗结束后的第7天脱颈处死裸鼠,取瘤体组织,免疫组化法检测瘤体内SphKl、Bax、Bcl-2蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果成功构建了人胃癌裸鼠移植瘤模型。SKI-Ⅱ联合DDP较SKI-Ⅱ、DDP更显著地减少肿瘤组织SphK1、Bcl-2蛋白的表达（P〈0．05）,并增加Bax蛋白的表达（P〈0．05）,且更明显地增加了肿瘤细胞的凋亡率并抑制了肿瘤的生长（P〈0．05）。结论SphK1通过引起胃癌细胞内Bax／Bcl-2比值的降低,在胃癌的生长过程中发挥了抑制胃癌细胞凋亡、促进肿瘤生长的作用,SphK1抑制剂SKI—Ⅱ与DDP有协同抗肿瘤作用。     

survivin反义寡核苷酸对人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤P53蛋白表达的影响

目的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）能否抑制人胃癌细胞皮下移植瘤生长,及与P53蛋白的关系。方法将对数生长期SGC-7901胃痛细胞种植到2只裸鼠皮下,形成母瘤,再分别种植于其他裸鼠背部皮下。成瘤后随机分为4组（survivin-ASODN＋脂质体绢、survivin—ASODN组、脂质体组、对照组,每组n=8）。瘤体内隔日给药,停药后48h处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。Westernblot法检测survivin的表达,免疫组化法检测各组P53蛋白的表达。结果survivin—ASODN＋脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为33．19％。survivin—ASODN＋脂质体组的survivin蛋白、P53蛋白表达量明显低于对照组（P〈0．05）。结论survivin—ASODN对胃癌移植瘤生长有抑制作用,能够抑制survivin蛋白的表达,亦能抑制P53蛋白的表达,P53在survivin抑制凋亡的信号通路中亦起到一定作用。     

黄芪多糖联合顺铂治疗H22肝癌的实验研究

目的：观察黄芪多糖（APS）联合顺铂（DDP）对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法：复制H22肝癌小鼠移植瘤模型,将40只接种H22肝癌细胞昆明小鼠随机分成4组,其腹腔分别注射生理盐水（对照组）、ASP组、DDP组以及APS＋DDP组,观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19d后,处死全部小鼠,剥离皮下肿瘤,称小鼠肿瘤重量,计算出抑瘤率。结果：APS单用组的H22肝癌平均瘤重为（1.29±0.29）g,明显低于对照组的（1.86±0.73）g（t=3.9746,P〈0.001）。APS＋DDP组的H22肝癌平均瘤重为（0.52±0.31）g,均明显低于APS单用组（t=9.9351,P〈0.001）和DDP单用组（t=4.1970,P〈0.001）;其抑瘤率达72.0%,明显高于APS单用组（χ2=17.3756,P〈0.001）和DDP单用组（χ2=5.0794,P〈0.05）。APS＋DDP组小鼠毒副反应明显低于DDP组,生存质量优于DDP组。结论：黄芪多糖和顺铂合用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用,并能降低顺铂毒副反应,提高生存质量。     

苦参碱联合5-FU抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长作用及机制

【目的】研究苦参碱(matrine,Ma)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人胃腺癌SGC-7901裸鼠移植瘤的抑制作用及可能机制。【方法】将人胃腺癌SGC-7901细胞株接种于BALB／cA裸鼠皮下,形成移植瘤后传3代;取生长旺盛期的瘤组织约1．5 mm3,无菌接种于裸鼠右侧腋窝皮下,待肿瘤生长至100-300mm3后将动物随机分为6组,即模型组、5-FU组(50 mg/kg)、Ma低剂量组(50 mg/kg)、Ma高剂量组(100 mg/kg)、Ma低剂量 5-FU组、Ma高剂量 5-FU组;各组分别按设计剂量腹腔给药,35 d后测量各组裸鼠瘤径和肿瘤体积,计算相对肿瘤体积(VR)和相对肿瘤抑制率(pinhibitory);采用免疫组化法检测荷瘤组织中凋亡相关蛋白bcl-2、bax活性和caspase-3的表达情况。【结果】Ma高剂量 5-FU组抑瘤作用与模型组、 Ma高剂量组、5-FU组比较均显著增强(P<0．05或P<0．01),Ma低剂量 5-FU组抑瘤作用也见增强,但与其他组比较无显著性差异;各给药组均可不同程度下调bcl-2表达,上调bax表达,提高活性caspase-3表达,与模型组比较具有显著性差异(P<0．05或P<0．01);Ma高、低剂量分别与5-FU合用后,该调节作用较单独使用显著增强(P<0．05或P<0．01), 并呈现剂量依赖关系。【结论】苦参碱与5-FU联合应用具有一定的协同增效作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白的表达, 诱导胃癌细胞凋亡有关。     

白鹤冲剂对人胃癌BGC-823裸鼠原位移植瘤瘤组织血管内皮生长因子和p53蛋白表达的影响

目的：观察白鹤冲剂对人胃癌BGC-823裸鼠原位移植瘤生长和转移的抑制作用及对瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与p53蛋白表达的影响。 方法：45只裸鼠原位移植人胃癌细胞BGC-823建立原位移植瘤模型,随机分为白鹤冲剂组、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）组和模型组。白鹤冲剂组予含生药0.2g/mL的白鹤冲剂0.5mL灌胃,1次/d;5-FU组予5-FU稀释液0.2mL腹腔注射化疗;模型组予生理盐水0.5mL/d灌胃,1次/d。用药6周后,脱颈椎处死裸鼠,观察各组荷瘤裸鼠原位移植瘤转移情况,计算抑瘤率;免疫组织化学法检测各组裸鼠移植瘤组织VEGF与p53蛋白的表达情况。 结果：白鹤冲剂组和5-FU组抑瘤率分别为52.86%和42.87%。白鹤冲剂组与5-FU组裸鼠胃周、肝门淋巴结和肝脏、腹膜转移率较模型组明显减少,3组转移率分别是33.33%、35.71%和80.00%（P〈0.05）。白鹤冲剂组移植瘤组织VEGF与p53蛋白表达较模型组和5-FU组降低（P〈0.01,P〈0.05）。 结论：白鹤冲剂可以抑制裸鼠人胃癌BGC-823原位移植瘤的生长和转移,降低移植瘤组织VEGF与p53蛋白表达,这可能是其抗胃癌生长和转移的机制之一。     

β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的：探讨以β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的可行性.方法：常规体外培养SKOV3细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型.32只荷瘤鼠随机分为ASODN组（A组）、ASODN联合顺铂（DDP）组（A＋D组）、DDP组和0.9％氯化钠注射液对照组（NS组）,每组8只,分组给药.以脂质体包裹的β1整合素ASODN直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算抑瘤率.采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法分别检测β1整合素mRNA的表达.结果：A组肿瘤体积和抑瘤率分别为（316.10 ±21.77） mm3和48.15％,与NS组比较抑瘤率较高,肿瘤生长缓慢（P＜0.01）.而A＋D组肿瘤体积和抑瘤率分别为（178.70±40.67） mm3和70.37％,与DDP组、A组及NS组差异均有统计学意义（P ＜0.05 ～P＜0.01）.RT-PCR和免疫组织化学检测,A组和A＋D组肿瘤组织中β1整合素mRNA的表达均明显下调（P＜0.01）.结论：单用β1整合素ASDON或联用DDP均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织的生长,可能与其特异性下调β1整合素基因表达有关.特异性靶向β1整合素ASODN可用于卵巢癌的辅助治疗.     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞A549/DDP裸鼠体内的多药耐药逆转作用

目的研究三氧化二砷（As_2O_3）对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/顺铂（DDP）裸鼠移植瘤的耐药逆转作用。方法建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型,观察As_2O_3、DDP及联合用药对体内移植瘤生长状况的影响;采用流式细胞术（FCM）测定不同用药对肿瘤细胞凋亡率变化和耐药细胞A549/DDP P-糖蛋白（P-gp）表达;采用RT-PCR检测不同用药对A549/DDP移植瘤组织MRP1-mRNA和LRP-mRNA表达的变化。结果体内裸鼠抑瘤实验显示As_2O_3有一定抑瘤作用,联合应用DDP可显著抑制肿瘤生长。FCM结果显示应用As_2O_3后肿瘤细胞平均凋亡率,明显高于对照组（P〈0.05）[（17.204±3.091）%vs（3.436±0.537）%],低浓度As_2O_3联合DDP后肿瘤细胞的凋亡率,明显高于DDP组（P〈0.05）[（14.472±3.891）%vs（5.612±1.167）%]。FCM对P-gp表达检测提示As_2O_3对移植瘤Pgp水平无影响。RT-PCR检测结果示含As_2O_3组MRP1表达明显低于不含As_2O_3组（P〈0.05）,肺癌耐药相关蛋白（LRP）在转录水平呈现相对低表达,含As_2O_3组同不含As_2O_3组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 As_2O_3能在体内逆转A549/DDP细胞的耐药性,其机制可能是As_2O_3可通过下调MRP1基因表达,提高A549/DDP细胞对DDP敏感性逆转其耐药,并可能通过诱导肿瘤细胞凋亡来起作用。