特发性血小板减少性紫癜患者外周血T细胞Fas-FasL和caspase-3凋亡相关蛋白的表达及其意义

目的 探讨Fas、FasL及caspase-3凋亡相关蛋白在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T淋巴细胞的表达及其意义.方法 应用流式细胞术测定T细胞亚群表面Fas、FasL的表达率及细胞质中活化caspase-3的表达率,用Western blot法检测T细胞亚群caspase-3蛋白的表达.结果 与健康对照组[(29.4±8.2)%]相比,ITP患者组CD4+ T细胞表面Fas的表达率显著增加[(42.1±9.5)%](P＜0.05),CD8+ T细胞表面Fas的表达率略有增加但差异无统计学意义[(9.3±6.0)%与(13.4±5.8)%](P＞0.05).ITP患者组T细胞亚群表面FasL的表达率均较健康对照组显著增加(P＜0.05).ITP患者组T细胞亚群胞质中活化caspase-3的表达率,明显高于健康对照组(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与治疗前相比,ITP患者治疗后CD4+ T细胞表达pro-caspase-3和cleaved-caspase-3均明显减少(P＜0.05).结论ITP患者外周血T细胞Fas、FasL及caspase-3表达明显增加,激素治疗可干预Fas-FasL、caspase-3的表达水平,提示Fas、FasL及caspase-3信号通路在ITP发生机制中起一定作用.     

肝细胞损伤时血清sFas和sFasL的变化

细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫在病毒性肝炎的发病过程中起着重要作用，主要是通过FasL介导Fas阳性的肝细胞调亡。Fas抗原和FasL是细胞表面的两种跨膜糖蛋白Fas，主要分布于人B、T淋巴细胞、肝胆管细胞、肺组织细胞等，而FasL则主要分布于活化的T淋巴细胞和自然杀伤细胞。Fas和FasL可通过分泌或脱落至细胞外，分别成为可溶性Fas（sFas）和可溶性FasL（sFasL），在诱导肝细胞调亡中发挥重要作用。本拟通过检测肝细胞损伤时血清sFas和sFasL的水平，探讨其临床意义。     

FAS,FASL及Bcl-2在化疗药物诱导RMA细胞凋亡过程中的表达

本研究通过测定RMA细胞Fas,FasL和Bcl-2表达的变化，探讨其在细胞凋亡过程中的作用。在培养的小鼠T淋巴瘤RMA细胞系中加化疗药物地塞米松（DEX）、足叶乙甙（VP－16）、三氧化二砷（As2O3)及维甲酸（ATRA）以及培养细胞中先分别与细胞国子IL－2，IL－6或GM－CSF共同培养后再加入上述药物，观察对细胞凋亡的影响及细胞凋亡过程中Fas,FasL mRNA,Fas及Bcl-2抗原的表达。DEX和VP－16能上调Fas和FasL表达，促进细胞凋亡，Bcl-2表达无变化。ATRA可下调Bcl-2表达，但不影响Fas和FasL系统，也未观察到有细胞凋亡。As2O3可以诱导细胞凋亡,但Fas,FasL及Bcl-2表达均无变化。提示不同药物对一种细胞可能通过不同的信号途径诱导调亡，而Fas系统诱导的细胞凋亡需要Fas和FasL共同参与。单独用IL－2，IL－6或GM－CSF虽然使Fas蛋白增加，但不引起细胞凋亡；如同时并用IL－2和IL－6则Fas和FasL表达均上升，并诱导细胞凋亡。上述细胞因子与化疗药物并用时可减低药物量，促进药物的凋亡诱导作用。在无FasL表达情况下，抗Fas单克隆抗体能诱导RMA细胞凋亡。实验结果表明，细胞因子与化疗药物可协同作用诱导细胞凋亡，Fas-FasL系统参与DEX和VP－16诱导的RMA细胞凋亡过程，不同的药物可以通过不同的信号途径诱导细胞凋亡。     

Fas抗原-配体系统与肝脏疾病研究进展

Fas抗原和Fas配体（FasL）是细胞表面的两种跨膜蛋白。当一个细胞的Fas与另一细胞的FasL相结合时,可以导致表达Fas的细胞凋亡;T淋巴细胞表达FasL可以使表达Fas的肝细胞凋亡。Fas诱导的肝细胞凋亡在某些肝脏疾病的发生发展中起重要作用。     

雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡时Fas/FasL的表达

目的 检测Fas/FasL在雷公藤内酯醇诱导的T淋巴细胞凋亡中的表达。 方法 培养人T淋巴细胞，10、20、30μg/L的雷公藤内酯醇分别刺激细胞4、8、16 h，流式细胞仪DNA分析、FITC-Annexin Ⅴ binding/PI染色检测细胞凋亡，Western blot分析检测Fas/FasL蛋白的表达。 结果 雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导T细胞凋亡，雷公藤内酯醇诱导T细胞凋亡的同时伴随有Fas和FasL表达的上调，同样，雷公藤内酯醇诱导Fas和FasL表达呈现剂量和时间依赖性。结论 雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导人T细胞凋亡，雷公藤内酯醇诱导T细胞凋亡的信号通路可能是通过Fas/FasL途径激活的。     

乙型肝炎患者血清中sFas和sFasL水平的变化及临床意义

Fas和FasL是介导细胞凋亡的一对重要的细胞膜表面死亡分子及受体．表达FasL的细胞可介导表达Fas的靶细胞发生凋亡．在肝病发病中，肝细胞凋亡起重要作用，且Fas系统是介导凋亡的重要途径。被乙型肝炎病毒感染的患者肝细胞Fas表达比未被乙型肝炎病毒感染者肝细胞Fas表达要明显增多。Fas和FasL均可分泌或脱落至细     

激活诱导的T细胞死亡研究进展

T细胞激活诱导的细胞死亡(AICD)是T细胞被激活后再次受到TCR/CD3刺激而发生的细胞凋亡,这一机制对于调节机体免疫反应具有重要意义。研究表明,T细胞受到TCR/CD3刺激后通过一系列信号传导引发多种细胞因子的转录和合成,T细胞被激活。活化的T细胞表达Fas/FasL增加,通过自身FasL和可溶性FasL对Fas的作用启动凋亡信号传导,使激活的T细胞发生凋亡。但特殊的是,Th2细胞激活后却仍具抗AICD的能力,目前对这一机制已进行了初步探索。     

肝细胞损伤时血清sFas和sFasL的变化

Fas抗原和Fas配体(Fas ligand,FasL)是细胞表面两种跨膜糖蛋白,Fas主要分布于人B、T淋巴细胞、肝胆管细胞、肺组织细胞等;而FasL则主要分布于活化的T淋巴细胞和自然杀伤细胞。Fas和FasL通过分泌或脱落至细胞外,分别成为可溶性Fas(sFas)和可溶性FasL(sFasL),在诱导肝细胞凋亡中发挥重要作用[1,2]。本研究旨在通过检测肝细胞损伤时血清sFas和sFasL水平,探讨其临床意义。资料与方法一、一般资料采集我院2004年4月～2005年3月住院及门诊患者的血清标本:①肝细胞癌(HCC)30例,均经病理或CT证实,男18例,女12例,年龄28～60岁,平均47岁;…     

Fas抗原分子

Fas抗原，又称APO-1或CD95，是一种319个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子和神经生长因子受体超家庭成员。Fas抗原表达于各种细胞，如活化的T，B细胞，NK细胞，胸腺细胞，恶性的T、B细胞，成纤维细胞等。人与小鼠的Fas基因分别定位于第10号及第19号染色体。Fas抗原的天然配体是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子家族成员，其主要分布于活化的T细胞。Fas抗原及配体系统异常的两种小鼠Lpr与gld表现自身免疫病理变化。抗Fas抗体或表达Fas配体的细胞交联Fas抗原，可诱导细胞凋亡，提示Fas／Apo──1抗原是细胞凋亡过程中重要信号传递分子。Fas抗原诱导的细胞凋亡在调控免疫细胞的发育，增殖及免疫应答中起主导作用。已经证实Fas系统在T细胞的发育，细胞毒作用及细胞毒性T介导自身免疫病中发挥重要作用。而且抗Fas抗体或Fas配体可诱导肿瘤细胞凋亡。Fas抗原系统的研究将有助于阐明自身免疫病发病机制，开辟肿瘤治疗的新途径。     

Fas/FasL系统与Bcl-2在肿瘤中的作用及其相关性

最近的研究揭示Fas/FasL系统在多种肿瘤组织表达,并且表明Fas/FasL反击和Fas/FasL抵抗是肿瘤发生发展的重要机制.Bcl-2致癌基因是一种普遍的直接调节凋亡的细胞死亡抑制基因,Bcl-2基因及其产物亦高度表达于多种肿瘤组织.Bcl-2的表达水平能影响多种Fas敏感细胞的凋亡控制.Fas/FasL系统与Bcl-2呈现一定的协同性.     

Fas／FasL系统与Bcl—2在肿瘤中的作用及其相关性

最近的研究揭示Fas/FasL系统在多种肿瘤组织表达，并且表明Fas/FasL反击和Fas/FasL抵抗是肿瘤发生发展的重要机制。Bcl-2致癌基因是一种普遍的直接调节凋亡的细胞死亡抑制基因，Bcl-2基因及其产物亦高度表达于多种肿瘤组织，Bcl-2的表达水平能影响多种Fas敏感细胞的凋亡控制，Fasl/FasL系统与Bcl-2呈现一定的协同性。     

原发性胆汁性肝硬化患者肝组织和外周血单个核细胞Fas、FasL的检测

目的通过原发性胆汁性肝硬化患者肝组织和外周血单个核细胞Fas、FasL的表达，探讨Fas、FasL在原发性胆汁性肝硬化患者发病机制中的作用。方法应用免疫组织化学技术，以兔抗Fas及兔抗FasL多克隆抗体，对20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者肝组织和外周血单个核细胞中的Fas、FasL进行检测。结果18例PBC患者外周血单个核细胞检出Fas、FasL，检出率均为90％，Fas、FasL平均阳性细胞数分别为62％、59％。20例PBC患者16例Fas阳性颗粒表达于肝细胞胞浆，4例表达于肝细胞胞膜；20例FasL棕黄色阳性颗粒均表达于肝细胞胞浆，Fas、FasL在肝组织中浸润的淋巴细胞胞浆有表达，并多聚集于汇管区周围。结论PBC患者的Fas、FasL表达增加，它们在PBC的发病机制中发挥重要作用。     

三七对系膜增生型肾炎外周血T细胞亚群及Fas／FasL表达的调节及意义

[目的]研究系膜增生型肾炎患者外周血T细胞亚群及Fas／FasL表达特点，探讨三七对系膜增生型肾炎T细胞亚群及Fas／FasL表达调节的意义。[方法]将120例系膜增生型肾炎患者随机分成2组，一组以常规法治疗，一组以常规法加三七治疗。用流式细胞仪检测2组患者治疗前后外周血T细胞亚群CD2、CD4、CD8及Fas／FasL表达，同时设置正常对照组。[结果]系膜增生型肾炎患者T细胞亚群明显失衡，表现为CD4为减少，CD8增加，CD4／CD8比值显著降低，Fas／FasL显著低于正常对照组（P〈0.01）。Fas／FasL的降低与CD4细胞呈正相关，（r=0．57，r=0．46，P〈0．05），与CD8细胞呈负相关（r=-0．7，r=-0．6，P〈0．05），三七组治疗后T细胞失衡明显纠正，Fas／FasL表达上调。[结论]系膜增生型肾炎T细胞亚群失衡，Fas／FasL表达低下，可能为系膜增生型肾炎发生和病变进展的免疫因素之一。三七具有诱导外周血T细胞发生凋亡的作用，通过下调过度增生的免疫活性细胞减轻系膜增生型肾炎免疫炎症的损害。     

小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞表面免疫应答分子的表达与Fas配体功能研究

为了研究小鼠急性粒-单核白血病细胞株WEHI-3细胞表面免疫应答分子Fas、Fas配体(FasL)、CD80分子表达以及FasL的功能,应用流式细胞术检测WEHI-3细胞表面Fas、FasL和CD80分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测FasL功能。结果表明:WEHI-3细胞表面CD80和Fas表达率分别为(5.06±0.41)%、(6.75±2.31)%(n=5),但FasL表达率高达(63.73±5.23)%(n=5),当WEHI-3(效应细胞,E)和Fas+YAC-1细胞(靶细胞,T)以3∶1、10∶1和30∶1混合培养时,YAC-1细胞的凋亡率分别为(26±4.5)%,(35±3.2)%和(43±2.7)%(n=5)。结论:WEHI-3细胞高表达FasL,低表达Fas和CD80,并能诱导Fas+YAC-1细胞凋亡。     

干扰素α对慢性髓系白血病来源的树突状细胞表达Fas／FasL的影响

本研究探讨干扰素α对慢性髓系白血病（CML）来源的树突状细胞（DC）表达Fas／FasL的影响。在CML—DCs的培养液中除加入SCF，GM—CSF，TNF—α及IL-4外，还加入IFN—α。培养10-14天，除了鉴定细胞免疫表型和Ph^1染色体比例外，还应用流式细胞仪检测细胞表达Fas／FasL比例，用PI染色分析细胞凋亡，ELISA法检测上清液sFas含量。结果表明：加入IFN-α后，CML—DC共刺激分子的表达显著改善，Ph^1（＋）细胞比例随IFN—α浓度增加而减低；培养细胞Fas的表达上调，sFas含量却下降，FasL表达阴性，细胞凋亡比例增加。结论：IFN—α在改善CML-DC表型同时，可通过Fas途径促进Ph^1（＋）细胞凋亡，使Ph^1（-）细胞数量相对增加。     

FasL^＋组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植

目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL 软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL 的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL 的软骨细胞诱导Fas 的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL 的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL 的软骨细胞具有明显诱导Fas 细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL 的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。结论:成功构建FasL 软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。     

骨髓间充质干细胞对缺血/再灌注损伤肾小管上皮细胞Bcl-2 Fas/FasL表达的影响

目的 探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血/再灌注损伤(I/R)后肾小管上皮细胞凋亡以及Bcl-2、Fas和FasL表达的影响.方法 将雄性SD大鼠MSCs用DAPI标记后注入受体雌性SD大鼠体内.30只受体大鼠随机分为三组(n=10):假手术对照组(C组)、MSCs I/R组(M组)、DMEM-F12 I/R组(D组).7 d后观察肾功能、肾脏病理改变,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数,免疫组化法检测Bcl-2、Fas和FasL的表达,并观察DAPI标记的MSCs在受体大鼠肾脏的分布情况.结果 M组在肾功能、肾脏病理改变上,均明显好于D组;M组Bcl-2蛋白表达均高于D组,而Fas、FasL蛋白表达和凋亡指数均低于D组.I/R后7 d内未发现MSCs定位于肾组织中.结论 外源性MSCs可以减少I/R损伤后肾小管上皮细胞凋亡,促进Bcl-2和抑制Fas、FasL表达,从而有利于肾小管损伤的早期恢复.     

胃癌患者化疗前后血清sApo-1/Fas和血管内皮生长因子水平变化及其临床意义

sApo-1/Fas(CD95)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员,Apo-1/Fas配体(Apo-1/FasL)与TNFR家族有同源性.Apo-1/Fas受体、配体系统与多种免疫性疾病、血液系统疾病及肿瘤的发生有关.研究发现Apo-1/FasL与细胞表面的mApo-1/FasL结合后,可诱导表达mApo-1/FasL的细胞凋亡.     

慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴细胞亚群凋亡与Fas、FasL、Bcl-2表达的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T细胞凋亡状态及其细胞表面Fas、FasL、Bcl-2抗原的表达,以探讨T淋巴细胞亚群凋亡不足/过度与这些抗原表达的关系。方法选取急性加重期(AE-COPD)及稳定期COPD患者30例,另设正常对照组20例,采用流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群细胞凋亡率及其表面Fas、FasL、Bcl-2抗原表达水平。结果 (1)与正常对照组相比,COPD急性加重期及稳定期患者CD4+T凋亡率均增加,CD8+T凋亡率均降低,P<0.05;与COPD稳定期相比,COPD急性加重期患者CD4+凋亡率增加,CD8+凋亡率降低,P<0.05;(2)与正常对照组相比,COPD急性加重期及稳定期患者CD4+Fas、CD4+FasL的表达均增加,CD4+Bcl-2表达降低,P<0.01;与COPD稳定期相比,COPD急性加重期患者CD4+Fas、CD4+FasL的表达均增加,CD4+Bcl-2表达降低,P<0.05;且COPD稳定期、急性加重期CD4+凋亡率均与CD4+Fas、CD4+FasL正呈相关,与CD4+Bcl-2负相关;(3)与正常对照组相比,COPD急性加重期及稳定期患者CD8+Fas、CD8+FasL的表达均增加(P<0.05);与COPD稳定期相比,COPD急性加重期患者CD8+Fas、CD8+FasL的表达增加(P<0.05),三组之间CD8+Bcl-2表达无统计学意义(P>0.05);CD8+凋亡率与CD8+Fas、CD8+FasL、CD8+Bcl-2表达无相关性。结论 (1)COPD患者CD4+T凋亡增加,凋亡途径Fas/FasL及Bcl-2可能起重要作用;(2)COPD患者CD8+凋亡与其表达Fas、FasL、Bcl-2无相关性,凋亡途径Fas/FasL及Bcl-2可能不起主要作用,其具体机制有待进一步研究。     

银屑病角质形成细胞凋亡与Fas／FasL表达的关系

目的探讨银屑病皮损中角质形成细胞（KC）凋亡与Fas／FasL表达的关系。方法免疫组化ABC法对银屑病患者皮损中Fas、FasL表达进行检测，TUNEL法检测皮损中KC凋亡情况。结果银屑病皮损中既可表达Fas，又可表达FasL，而在正常皮肤不表达；患者皮损中KC发生凋亡的比例明显高于正常对照组（P〈0．01），但病程的不同阶段其细胞凋亡指数（AI）不同，进行期高于静止期。结论KC凋亡参与了银屑病的发病过程，Fas、FasL对角质形成细胞凋亡有调节作用。