长春花叶片愈伤组织诱导及培养过程中生物碱合成类型的变化和调节及有关酶的分析

在４种不同培养基上诱导长春花叶片愈伤组织的过过程中,叶片中含量较高的文多灵和长春质碱迅速降解有低水平,而叶片中含量较低的阿玛码和蛇根碱的合成却逐渐增加,同时酸性和碱性过氧化物酶活性呈上升趋势,尤其碱性过氧化物酶与蛇根碱和阿玛碱的相关性较密切。     

真菌诱导子对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响

目的 研究分别来源于镰刀菌Fusarium solani和黑曲霉Aspergillum niger的真菌诱导子(fungal elicitors)对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响。方法 用真菌诱导子对长春花愈伤组织进行诱导处理后提取吲哚总碱，并用RP—HPLC法测定其中阿玛碱和长春质碱含量。结果 两种真菌诱导子对吲哚总碱及其中阿玛碱和长春质碱的积累均有较明显的正向调节作用，并且确立了真菌诱导子最佳处理时间。结论 这两种真菌诱导子对长春花愈伤组织中吲哚生物碱的积累有显著影响。     

干旱胁迫及施加氮素对长春花生物碱的调控

目的:为了阐明不同的干旱条件及氮素水平对长春花叶片中4种生物碱(文多灵、长春质碱、长春碱、长春新碱)含量的影响,为提高长春花生物碱含量提供理论指导。方法:实验设置了CK(对照组即自然生长)、CN(对照+施氮素)、LK(轻度干旱)、LN(轻度干旱+施氮素)、HK(重度干旱)、HN(重度干旱+施氮素)6个处理组,探讨各处理组条件下长春花叶片全氮含量、碱性POD活性、TDC活性、4种生物碱含量的变化特性。结果:轻度干旱条件下POD,TDC的酶活性在处理的整个时期均提高,且胁迫的早期(0～21 d),有利于文多灵、长春质碱、长春碱、长春新碱的积累,后期(28～35 d)反而起抑制作用4种生物碱含量降低。施加外源氮素能有效提高各组长春花叶片中全氮含量、POD和TDC酶活性、文多灵和长春质碱的含量,干旱+施加氮素(LN,HN)处理下有利于长春碱和长春新碱的积累。结论:干旱胁迫及施加氮素对长春花叶片中POD,TDC的活性及4种生物碱的含量均能产生影响,轻度干旱条件下施加氮素(LN)对文多灵、长春质碱、长春碱、长春新碱含量的提高最为显著,是通过全氮含量及酶活性提高来调控的。     

土壤条件对长春花生物碱含量的影响

目的:研究不同土壤条件对长春花体内3种生物碱含量的影响。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定不同土壤下长春花中长春碱、长春质碱、文多灵含量。结果:沙质壤土中长春碱、长春质碱、文多灵含量最高,分别为0.0058、0.0317、0.0823mg/mL。结论:以沙质壤土种植长春花可提高其植株体内长春碱、长春质碱、文多灵的含量。     

盐胁迫对长春花愈伤组织生长及阿玛碱积累的影响

目的研究盐胁迫对长春花愈伤组织生长及阿玛碱积累的影响。方法用浓度为0、50、100、150 mmol/L的NaCl处理长春花愈伤组织,测定其鲜质量、干质量、丙二醛(MDA)量、光合速率、呼吸速率等生理指标和阿玛碱的量。结果盐胁迫显著地降低了长春花愈伤组织的鲜质量和干质量,提高了MDA量、光合速率和呼吸速率;在含有不同浓度NaCl的培养基上生长30 d后,愈伤组织的阿玛碱量随NaCl浓度的增加而逐渐降低;用不同浓度的NaCl溶液喷洒生长27 d的愈伤组织,发现3 d后50 mmol/L处理的愈伤组织中阿玛碱量比对照高出近1倍。结论长期盐胁迫能够抑制长春花愈伤组织的生长,同时引起阿玛碱积累的减少;低浓度NaCl喷洒处理则对长春花细胞中阿玛碱的积累有较大的促进作用。     

人工培植长春花中文多灵、长春质碱和长春碱的分布和积累动态

目的:研究田间栽培长春花不同发育阶段各器官文多灵、长春质碱和长春碱的含量动态以及不同器官的生物量动态,以确定人工种植长春花的最佳采收期。方法:以人工培植长春花为实验材料,采用高效液相色谱法对生长季内长春花根、茎、叶、花和果实中的文多灵、长春质碱和长春碱的含量进行动态检测。结果:这些生物碱含量受季节和组织部位的影响,叶片中文多灵和长春质碱含量最高,根中没有文多灵,花中长春碱含量最高;8-9月文多灵和长春质碱含量最高,9月以后长春碱含量最高;生物量9月初最高。结论:9月初为长春花最佳采收期。     

龙葵愈伤组织生长特性及次生代谢产物积累研究

目的 建立龙葵Solanumnigrum愈伤组织最优培养体系，研究愈伤组织在不同培养时间下各生理指标变化和澳洲茄碱、澳洲茄边碱的积累，为工业化制备澳洲茄碱和澳洲茄边碱奠定基础。方法 研究不同外植体及培养基对龙葵愈伤组织诱导的影响，采用响应面试验设计方法优化愈伤组织诱导的激素配比，运用考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白含量，TTC还原法测定细胞活力，邻苯二酚法测定多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）活性，氮蓝四唑光化还原法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性，愈创木酚比色法测定过氧化物酶（peroxidase,POD）活性，硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量，高效液相色谱法测定澳洲茄碱及澳洲茄边碱含量。结果 愈伤组织诱导最佳外植体为龙葵茎段，最适培养基为MS+1.43 mg/L NAA+2.15 mg/L 6-BA+2.48 mg/L KT，愈伤组织增殖最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。愈伤组织鲜质量增长量呈“S”型趋势，20 d时细胞活力达到最高峰...     

黄连生长状况及生物碱含量的个体差异

报道了黄连Ｃｏｐｔｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．不同单株生长状况（叶片数、花茎数、根茎重、须根重、叶片重、花茎重）,生物碱（药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱）含量及叶片性状（裂片质地、花斑、光泽、叶形）的个体差异,为选育黄连良种提供了一些依据。     

中坝鹅掌叶附子中的生物碱研究Ⅰ

从中坝（今名江油）３种栽培附于（ＡｃｏｎｉｔｕｍｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉＤｅｂｘ．）之一的鹅掌叶附子中，分得１０种生物碱化合物，经几种光谱分析鉴定，证明其中２种为已知生物碱次乌头碱（ｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ）和新乌头碱（ｍｅｓａｃｏｎｉｔｉｎｅ），还获得一种为新化合物，Ｎ－ＣＨＯＣ＿（１９）－二枯生物碱，命名为ａｌｄｏｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ，后者再由ｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ经氧化合成确证。     

中坝鹅掌叶附子中的生物碱研究Ⅰ

  从中坝（今名江油）３种栽培附于（ＡｃｏｎｉｔｕｍｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉＤｅｂｘ．）之一的鹅掌叶附子中，分得１０种生物碱化合物，经几种光谱分析鉴定，证明其中２种为已知生物碱次乌头碱（ｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ）和新乌头碱（ｍｅｓａｃｏｎｉｔｉｎｅ），还获得一种为新化合物，Ｎ－ＣＨＯＣ＿（１９）－二枯生物碱，命名为ａｌｄｏｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ，后者再由ｈｙｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ经氧化合成确证。更多还原     

纤维素酶在提取长春花碱中的应用

目的 研究纤维素酶在提取长春花生物碱中的应用.方法 采用酸水浸提法和酶浸提法提取长春花中的长春碱、长春质碱、文多林,高效液相色谱(HPLC)法测定其含量.结果 酸水浸提法和酶浸提法提取的长春碱、长春质碱、文多林含量分别为0.0158和0.0052 mg/ml;0.0456和0.0204 mg/ml;0.0898和0.0421 mg/ml.结论 在单位时间内酶提法可显著提高长春碱、长春质碱、文多林的收率,可考虑将酶解法用于工业上长春花生物碱的提取中.     

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??OBJECTIVE To study the chemical constituents of Catharanthus roseus. METHODS Various column chromatograghic METHODS on silica gel, Rp-18, and Sephadex LH-20 were applied for the isolation and purification of the 95% ethanol extract. The structures were elucidated by their physicochemical properties and spectral data. RESULTS Twenty-two compounds were obtained and identified as ursolic acid (1), daucesterol (2), tetrahydroalstonine (3), 7??-hydroxy-??-sitosterol (4), vindoline (5), ??-sitosterol (6), aurantiamide acetate (7), lochnericine (8), oleanolic acid (9), ajmalicine (10), (22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3??,5??,6??-triol (11), betulinic acid (12), stigmasterol (13), quercetin (14), keampferol (15), vindorosine (16), catharanthine (17), diaaurantiamide acetate (18), reserpine (19), panarine (20), serpentine (21), and 16R-E-isositsirikine (22). CONCLUSION Compounds 4, 7, 11, 13, 18, and 20 are isolated from C. roseus for the first time.     

长春花中长春质碱含量与农艺性状的分析

目的:对国内外长春花主栽品种的长春质碱含量和农艺性状进行了分析.方法:记录长春花盛花期的农艺性状,反相高效认相色谱仪测定长春质碱含量.结果:发现不同品种的长春质碱含量和农艺性状均存在很大差异,太平洋系列(Pacifica)品种Polka Dot(PPD)中长春质碱质量分数最高,达到叶片干重的3.79 mg·g~(-1);清凉系列(cooler)品种Pink(CP)中长春质碱质量分数最低,仅为叶片干重的0.9 mg·g~(-1).长春花中长春质碱含量与农艺性状之间存在一定程度的相关性.通径分析表明,长春花主要农艺性状中,节间距对长春质碱含量的正影响达到了显著水平(P<0.05),通径系数为1.473.结论:本研究对高含量长春质碱长春花引种和育种具有参考价值.     

短葶山麦冬愈伤组织诱导与多糖积累动态研究

目的:研究比较短葶山麦冬茎尖、叶片、块根和果实等不同外植体诱导发生愈伤组织的成功率及多糖积累动态状况。方法:比较2,4-D、蔗糖不同浓度及光照条件等对短葶山麦冬茎尖愈伤组织诱导及愈伤组织继代保持的影响,并对愈伤组织多糖含量动态变化及愈伤组织、试管苗和非试管苗块根中多糖进行了比较研究。结果与结论:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率高;2,4-D浓度为1.5～2.0 mg/L时有利于短葶山麦冬茎尖诱导愈伤组织,诱导率达87.5%。添加0.5～1.0 mg/L 2,4-D、20 g/L蔗糖时,茎尖愈伤组织的增殖系数最大,且愈伤组织形态和生长势良好。光照条件不影响愈伤组织的继代保持。茎尖愈伤组织中的多糖含量随培养时间的延长而增加,超过60d后,愈伤组织中多糖含量趋于稳定;培养40～60 d后多糖含量较高,此时愈伤组织生长达到最高速率。短葶山麦冬试管苗产生的块根中多糖含量高于非试管苗块根,愈伤组织多糖含量最低,但其生产多糖的速度较其他2种方式快。     

长春花毛状根再生植株的获得及抗癌生物碱的产生

目的建立长春花转基因毛状根再生植株快速繁育体系,获得生物碱量提高的长春花再生植株。方法研究外源植物生长调节剂对长春花毛状根愈伤组织诱导、不定芽分化、不定根分化和再生植株移栽的影响,采用HPLC法测定长春花再生植株生物碱量,并采用定量PCR技术分析目的基因的表达情况。结果转基因长春花毛状根愈伤组织诱导和不定芽诱导的最佳培养基均是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,不定根分化的最适培养基是1/2 MS+NAA 0.3 mg/L。采用炼苗的改进方法可使长春花再生植株的移栽成活率达90%。HPLC分析结果表明,长春花再生植株中长春碱、长春新碱和阿吗碱量分别比对照提高4.0、5.8、1.8倍,其中,优良单株OG30-3的长春新碱和长春碱量比对照提高7倍和10倍。定量PCR分析结果表明,转基因植株orca3基因和g10h基因的表达量比非转基因植株的高。结论转基因长春花毛状根再生植株可促进抗癌生物碱的产生。     

长春花突变细胞生理特征的研究

目的研究以秋水仙碱处理的长春花突变细胞在继代培养过程中的生长规律、吲哚生物碱积累的规律及营养成分的适宜浓度等方面的特征,期望得到适于工业化细胞培养的理想材料。方法将突变细胞培养于MS固体培养基上,定期称取其鲜质量,用有机溶剂萃取吲哚生物碱,应用RP-HPLC法检测药用成分阿玛碱和长春质碱。结果突变细胞培养至第30代时,生长速度和吲哚总碱积累得最快,培养至第45代时,两者均明显下降。而药用成分的量于第20代达到最高;在培养基中添加适量的色氨酸能提高药用成分的量;培养基中Ca2 和Zn2 的质量浓度分别为1760和12.6mg/L时,明显促进了药用成分的积累。结论长春花突变细胞可能是一种适于工业化细胞培养的理想材料。