汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组。采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3%、23.7%、33.4%、40.9%,IC₅₀为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0%、22.0%、36.1%、40.5%,IC₅₀为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4%、20.2%、35.0%、40.9%,IC₅₀为22.81 μmol/L。与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高（t=23.710,P=0.001;t=43.934,P<0.001）。20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升（P<0.05）,Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）。 结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用。     

咖啡因对喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡的影响

背景与目的:有报道认为咖啡因(caffeine)可以作用于细胞周期检测点,从而影响细胞周期的进程,而这种效应对于肿瘤细胞凋亡的影响尚存在争议。本研究探讨咖啡因对喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡的作用及其对细胞周期检测点的效应。方法:用喜树碱诱导细胞凋亡,以咖啡因作为干扰细胞周期检测点的因素。用API法(AnnexinⅤ-propidiumiodide,AnnexinⅤ/PI)及亚G1峰法对细胞凋亡率以及凋亡发生的周期特异性进行检测分析。结果:2.0～20.0mmol/L的咖啡因对处于对数生长期Molt-4细胞增殖没有影响。喜树碱能诱导Molt-4细胞产生以S期细胞为主的细胞周期特异性凋亡,0.15μmol/L喜树碱作用4、6h,细胞凋亡率分别为(23.69±2.26)%、(36.99±1.42)%;10.0mmol/L咖啡因能显著抑制这种细胞凋亡,与0.15μmol/L喜树碱联合作用4、6h后,细胞凋亡率分别下降至(4.79±0.64)%和(2.69±0.56)%。去除咖啡因后,凋亡细胞明显增多,去除4、6h后细胞凋亡率升至(46.23±0.21)%和(55.81±0.41)%,且仍以S期细胞为主。结论:咖啡因可以抑制喜树碱诱导细胞凋亡。作为影响细胞周期检测点的药物,咖啡因可以明显屏蔽检测点对损伤细胞的监督,抑制细胞凋亡,但其作用是一过性的、可以逆转的。     

阿帕替尼抑制白血病细胞株Nalm6增殖及诱导凋亡的实验研究

目的 阿帕替尼(Apatinib)为新一代小分子血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)酪氨酸激酶抑制剂,对多种实体肿瘤细胞有杀伤作用.本研究探讨Apatinib对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞株Nalm6增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法 CCK8法检测不同浓度Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度Apatinib诱导Nalm6细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法法检测Apatinib处理后Bcl-2、Bcl-xL和PARP蛋白的表达变化.结果 CCK-8细胞毒性实验结果显示,Apatinib对Nalm6细胞具有明显的增殖抑制作用,呈剂量及时间依赖性,作用48 h后,2.5、5、10、20和40 μmol/L的Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制率分别为(3.78±1.01)％、(13.36±1.42)％、(25.80±2.83)％、(44.40±7.74)％和(64.07±6.66)％,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析,各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组(3.61±0.91)％比较差异有统计学意义,x2[13.500,P=0.009;作用72 h后,2.5、5、10、20和40 μmol/L的Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制率分别为(4.57+2.38)％、(20.26+4.06)％、(39.27±1.57)％、(65.19±4.45)％和(85.54±3.37)％,经检验各浓度的Apatinib均能抑制Nalm6细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义,x2=13.500,P=0.009.48和72 h的IC50分别为(24.39±0.05)和(13.18±0.08) μmol/L.凋亡实验显示,Apatinib能增加Nalm6细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,作用48 h后,对照组和10、20、30、40 μmol/L Apatinib组对Nalm6细胞的凋亡率分别为(3.61±0.91)％、(5.28±1.29)％、(5.9±0.85)％、(10.18±1.48)％和(15.23±3.69)％,经检验各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义,x2=12.433,P=0.014;作用72 h后,对照组和10、20、30、40 μmol/L Apatinib组对Nalm6细胞的凋亡率分别为(3.8±1.10)％、(5.33±2.08)％、(10.10±2.86)％、(12.15±1.43)％和(25.61±3.63)％,经检验各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义,x2 =12.233,P=0.016.蛋白质印迹法结果显示,Apatinib作用Nalm6细胞24、48 h后均能下调Bcl-2和Bcl-xl的表达,切割PARP蛋白.结论 Apatinib能抑制Nalm6细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关.     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

ApoG2对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡影响的观察

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)对人胃癌细胞系SGC7901体外增殖和凋亡的作用。方法:采用MTT法检测浓度分别为3.125、6.250、12.500、25.000和50.000μmol/L的ApoG2作用于SGC7901细胞24、48和72h后对细胞生长的影响;MGG染色法观察10、20和30μmol/L ApoG2作用24h后细胞形态学的变化;流式细胞术检测10、20、30和40μmol/L ApoG2作用24h后细胞凋亡;RT-PCR方法检测10、20和30μmol/L ApoG2作用细胞24h后,SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和NF-κB mRNA表达量的变化。结果:随着药物浓度的增大,ApoG2抑制胃癌细胞增殖的作用逐渐增强,呈剂量依赖性(P<0.05),24、48和72h的半数抑制浓度分别为32.58、25.11和14.16μmol/L;MGG染色可见,随着药物浓度的增大,细胞的生长变慢,胞质变疏松,细胞核深染,核质比例增大,出现典型的细胞死亡形态。流式细胞术检测细胞凋亡可见,经不同浓度的ApoG2处理24h后,SGC7901细胞发生凋亡,0μmol/L早期凋亡率为(1.92±0.55)%,晚期凋亡率为(2.80±0.86)%,10μmol/L早期凋亡率为(3.36±0.55)%,晚期凋亡率为(13.09±0.93)%,20μmol/L早期凋亡率为(5.07±0.70)%,晚期凋亡率为(16.48±1.03)%,30μmol/L早期凋亡率为(7.44±1.47)%,晚期凋亡率为(18.32±1.44)%,40μmol/L早期凋亡率为(7.88±1.22)%,晚期凋亡率为(25.49±1.59)%,随药物浓度的增加凋亡率明显增高,P值均<0.01;RT-PCR检测结果显示,药物干预后,胃癌细胞中Bcl-2和NF-κB的mRNA表达降低,而Bax的表达量升高,差异有统计学意义,P<0.05。结论:ApoG2在体外具有抑制胃癌细胞SGC7901的增殖并杀伤肿瘤细胞的作用。     

HA14-1对白血病细胞的作用

目的探讨HA14-1对白血病细胞的作用及其与Bcl-2、Bcl-xL和Bax的关系。方法不同浓度HA14-1(25,50,75,100μmol/L)作用于U937、BALL-1和Jurkat clone E6-1细胞4 h,在流式细胞仪上检测作用前后Bcl-2、Bax、Bcl-xL的平均荧光指数(MFI)及作用后细胞凋亡情况。结果①随HA14-1剂量的增加,存活细胞逐渐减少,U937从(93.7±1.5)%降至(14.8±1.9)%;Jurkat clone E6-1从(94.7±1.5)%降至(12.4±1.3)%;BALL-1从(94.7±0.8)%降至(0.9±0.6)%。同一HA14-1剂量时,不同细胞的存活率与Bcl-2表达高低呈负相关,有非常显著性差异(P<0.01)。②随剂量的增加细胞凋亡率逐渐增加,如Jurkatclone E6-1凋亡率从(0.5±0.1)%上升至(60.1±2.6)%;在较高剂量时(100μmol/L),细胞大幅度坏死,坏死率从<(3.3±0.6)%增至(26.8±1.6)%。③HA14-1作用引起3种细胞中Bcl-2表达下降,而HA14-1作用前后Bcl-xL和Bax在3种细胞中均无显著改变。结论HA14-1可以诱导不同Bcl-2表达水平的白血病细胞凋亡,并且细胞对HA14-1的敏感与细胞中Bcl-2表达水平呈相反关系,这为临床逆转Bcl-2高表达造成的化疗耐药提供了理论基础。     

Apogossypolone抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导细胞凋亡

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)对人乳腺癌细胞系MCF-7体外的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法:采用MTT法和平板克隆形成实验检测ApoG2作用于MCF-7细胞后,对其体外增殖和细胞克隆形成能力的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察ApoG2(20μmol/L)作用48 h后,细胞凋亡的形态学变化;FCM检测ApoG2作用于MCF-7细胞后的细胞凋亡率以及细胞周期的变化.结果:ApoG2药物在浓度为5μmol/L、作用14 d后就能对MCF-7细胞增殖起到明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;平板克隆实验表明,经不同浓度(5、10和20 μmol/L)ApoG2作用14 d后,对MCF-7细胞克隆形成能力呈现明显的抑制作用,且同样呈剂量和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色结果显示,ApoG2与MCF-7细胞共培养72 h后,细胞呈现明显的核固缩和碎裂、染色质凝集和凋亡小体形成等细胞凋亡现象.FCM检测结果显示,20 μmol/LApoG2作用72 h后,细胞凋亡率较对照组升高,而且S期和G2/M期细胞比例较对照组升高(P＜0.05).结论:ApoG2能够抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和克隆形成,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡.     

去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨

背景与目的:去甲斑蝥素(norcanthridin,NCTD)是斑蝥素(canthridin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小.本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制.方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变.Western blot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、Cyclin B1、Bax和Bcl-2表达的影响.结果:2.5、5、10、20、30和40 μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48 h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.001).Nd3作用24 h、36 h和48 h的IC50分别为(25.1±2.3)μmol/L、(21.8±2.8)μmol/L和(20.4±3.3)μmol/L.细胞周期分析证实,10、20、30、40 μmol/L Nd3作用48 h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%:同时30 μmol/L的Nd3作用12、24、36、48 h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞.此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40 μmol/L的Nd3作用48 h后细胞凋亡率高于对照组30%以上.Western blot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、Cyclin B1和Bcl-2的表达则相应减少.结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、Cyclin B1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关.     

二苯乙烯苷抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的: 研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及对PI3K/Akt信号通路的影响.方法: MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡,Western印迹法检测PTEN、p-PKB、cyclin D1、Bcl-2、caspase3和NF-kB蛋白的表达,RT-PCR检测PI3K上游抑制物PTEN mRNA的表达.结果: 1、10和100μmol/L的THSG处理细胞24、48和72 h后,明显抑制MCF-7细胞增殖,100μmol/L作用48 h的增殖抑制率为41.8%(P<0.05),但低浓度(0.1、0.01 μmol/L)THSG出现弱的促增殖作用.1、10和100 μmol/L THSG作用48 h后,MCF-7细胞凋亡率分别为(6.25±0.65)%、(5.04±0.83)%和(7.98±0.67)%.1、10和100 μmol/L THSG上调PTEN的蛋白表达量,下调p-PKB和cyclin D1的蛋白表达,均呈剂量依赖性;而对NF-kB、Bcl-2和ctrspase-3表达却无明显影响.THSG能轻微上调PTEN mRNA水平.结论: THSG可抑制MCF-7细胞增殖,该作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路实现的.     

百里醌对犕犌犆-803细胞增殖和凋亡影响机制探讨

目的：百里醌（thymoquinone,TQ）是具多种生物活性的天然生物单体,参与多种肿瘤细胞增殖、凋亡及转移过程。MGC-803细胞株为常见的低分化胃黏液腺癌细胞。本研究探讨 TQ 对胃癌 MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及其可能的信号通路。方法以终浓度分别为0、10、25、50、75、100和125μmol／L TQ 处理 MGC-803细胞12、24和36 h, MTT 法检测其对增殖的影响,Hoechst 染色观察细胞凋亡,蛋白质印迹法分析 Bax、Bcl-2、survivin、Cyclin D1、caspase-3、caspase-9、PTEN、AKT、P-AKT、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP）、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9的表达,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果 MTT 结果显示,10～125μmol／L TQ 抑制胃癌MGC-803细胞,呈现明显的剂量-时间依赖性。流式结果显示,0、25、50和75μmol／L TQ 作用 MGC-803细胞24 h,凋亡率分别为（1．59±1．04）％、（4．26±0．35）％、（8．37±0．67）％和（21．73±1．71）％,F ＝209．76,P ＜0．001;G2／M 期细胞分别为（4．18±1．09）％、（6．81±0．28）％、（8．68±0．15）％和（12．26±1．46）％,F＝80．388,P ＜0．001。蛋白质印迹结果显示,PTEN 信号通路相关蛋白 PTEN 及凋亡相关蛋白 Bax、cleaved caspase-3及 cleaved caspase-9表达上调,抑凋亡相关蛋白 Bcl-2、caspase-3、caspase-9、survivin 和 PARP 表达下降。结论PTEN 信号通路参与 TQ 抑制胃癌 MGC-803细胞增殖、诱导其凋亡的过程。     

Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制

目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制.方法:MTr法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响.结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P＜0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin (1 μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)％升高至(17.2±3.8)％,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)％升高至(28.4±5.7)％(P＜0.05).Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响.结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡.     

土槿皮乙酸对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察土槿皮乙酸（pseudolaric acid B,PAB）对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养胰腺癌AsPC-1细胞,用不同浓度PAB作用不同时间后,MTT法检测PAB对AsPC-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:MTT结果表明PAB以时间和剂量依赖的方式抑制AsPC-1细胞生长,流式结果显示8.0μmol/L PAB处理AsPC-1 24小时后,凋亡率由对照组的8.19%升高至30.86%,差异有统计学意义（P<0.05）,表明PAB可诱导胰腺癌细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:土槿皮乙酸以时间和剂量依赖的方式抑制胰腺癌AsPC-1细胞增殖并诱导其凋亡。     

帕米膦酸二钠抑制人肝癌细胞增殖及诱导凋亡机制研究

目的 肝癌是常见的恶性肿瘤之一,寻找其低毒有效的化疗药物具有重要的临床价值.本研究旨在探讨一种临床常用的骨吸收抑制剂帕米膦酸二钠对人肝癌HepG2及Bel-7402细胞体外增殖和凋亡的影响及其机制.方法 采用MTS法检测不同浓度的帕米膦酸二钠对HepG2和Bel-7402细胞体外增殖的影响;以TUNEL末端标记法和Annexin-Ⅴ-FITC双标记流式法检测帕米膦酸二钠对细胞凋亡的影响采用蛋白质印迹法检测帕米膦酸二钠对凋亡相关蛋白:聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Caspase-9、Caspase-3、active-Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响.结果 MTS检测显示,帕米膦酸二钠对HepG2及Bel-7402细胞均具有明显抑制作用,并呈剂量依赖性,药物的半数抑制浓度(50％inhibitory concentration,IC50)分别为46.12和51.35 μmol/L.流式细胞术检测发现,帕米膦酸二钠可诱导肝癌细胞剂量依赖性凋亡,20、40和60 μmol/L作用HepG2细胞24 h凋亡率分别为(25.70±6.00)％、(43.53±4.06)％和(74.73±2.90)％,与对照组的(3.43土1.07)％相比差异有统计学意义,F=175.5,P＜0.001;20、40和60 μmol/L作用Bel-7402细胞24 h凋亡率分别为(25.50±3.00)％、(48.30±1.02)％和(68.97±4.90)％,与对照组(3.33±0.05)％相比差异有统计学意义,F=81.97,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,帕米磷酸二钠可诱导细胞内凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3及PARP的活化,促凋亡蛋白Bax的上调,抑凋亡蛋白Bcl-2的下调.结论 帕米膦酸二钠可以明显抑制人肝癌HepG2及Bel-7402细胞的体外增殖,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活而诱导癌细胞发生凋亡相关,帕米膦酸二钠可能成为潜在的肝癌治疗药物.     

白藜芦醇对肺腺癌A549细胞增殖、黏附与侵袭的影响

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肺腺癌A549细胞增殖,黏附及侵袭的影响。方法:用不同剂量的Res作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞的增殖水平(成纤维3T3细胞为对照),流式细胞仪检测A549细胞的细胞周期和凋亡,体外黏附实验测定A549细胞的黏附能力,Transwell实验测定A549细胞的侵袭能力,荧光免疫细胞化学方法测定A549细胞中MMP-2和TIMP-2蛋白的表达。结果:Res以剂量(20～80μmol/L)依赖和时间(0～72 h)依赖方式抑制A549细胞的增殖,同样条件对3T3细胞增殖无影响。10、20、40、80μmol/L Res作用后,A549细胞的凋亡率分别为(34.9±0.91)%、(41.33±0.13)%、(45.47±0.87)%和(59.46±0.59)%。经20μmol/L Res处理48 h后,S期A549细胞比例为(56.41±1.67)%,细胞周期阻滞在S期。20μmol/L以上的Res可引起A549细胞的黏附力下降、侵袭力降低(P<0.05);同时,A549细胞内MMP-2蛋白表达下调,而TIMP-2蛋白表达增加。结论:Res抑制肺腺癌A549细胞的增殖、黏附和侵袭,其机制可能涉及对MMP-2和TIMP-2表达的双向调控。     

CL联合苦参碱抑制胃癌细胞共培养内皮细胞增殖与凋亡

目的探讨刺梨提取物CL联合苦参碱（m atrine）抑制人胃癌细胞SGC-7901培养上清诱导的人脐静脉内皮细胞ECV-304的增殖和凋亡及其机制。方法人胃癌细胞SGC-7901培养上清诱导培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,多个质量浓度苦参碱、CL单药干预,或多个质量浓度苦参碱联合CL干预,M TT法检测内皮细胞增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析K i-67、B ax、B cl-2 mRNA/蛋白表达变化。结果10 m g/L、20 m g/L、40 m g/L、80 m g/L、160 m g/L质量浓度的CL干预48小时,其抑制率分别为（15.1±2.1）%、（23.1±2.3）%、（34.1±3.3）%、（46.9±3.8）%、（68.8±2.9）%;15 m g/L、30 m g/L、60 m g/L、120 m g/L、240 m g/L质量浓度的苦参碱干预48小时,ECV-304抑制率分别为（20.8±1.3）%、（25.1±2.2）%、（40.9±1.1）%、（62.9±2.2）%、（77.2±1.9）%;CL＋苦参碱联合干预48小时,其抑制率分别为（33.8±2.1）%、（46.8±2.4）%、（84.2±2.0）%、（88.1±2.2）%、（94.8±0.9）%,以上均呈剂量依赖（P〈0.05）。IC50浓度（75 m g/L）CL、IC50浓度（75 m g/L）苦参碱、1/2 IC50（CL＋苦参碱）分别干预ECV-304细胞,抑制率分别为（40.7±1.3）%、（46.2±1.2）%、（51.4±0.7）%,联合用药抑制率增高（P〈0.05）;中效原理得出一定浓度范围两药联合为协同效应;与单独用药组比较,联合用药组K i-67、B cl-2 mRNA/蛋白表达显著降低,而B ax mRNA/蛋白表达显著增高。结论刺梨提取物CL、苦参碱均可抑制人脐静脉内皮细胞ECV-304的增殖,两药联合应用存在协同作用。     

The Effect of Nimesulide on the Expression of NF-κB, Bcl-2 and Bax in the Human Gastric Cancer SGC-7901 Cell Line

OBJECTIVE To investigate whether nimesulide can suppress tumor growth and induce apoptosis in SGC-7901 gastric cancer cells and to explore the molecular mechanism involved.METHODS SGC-7901 cells were cultured in RPMI 1640 medium containing different concentrations of nimesulide (0,12.5, 50, 100, 200, 400 μmol/L). The MTT assay, morphological observation, electron microscopy (EM), immunohistochemical analysis and Western blot analysis were employed to investigate the effects of nimesulide on the SGC-7901 cells and to explore possible related molecular mechanisms.RESULTS Nimesulide inhibited the growth of SGC-7901 cells and elicited typical apoptotic morphologic changes. Nimesulide also decreased NF-κB and Bcl-2 expression, but increased the level of the Bax protein.The positive rate of Bcl-2 protein expression at 0, 50, 100 and 200 μmol/L of nimesulide was 58.3±14.0%, 50.2±9.9%, 32.8±5.0% and 22.7± 5.5% respectively based on immunohistochemical staining. The positive rate of Bax protein expression was 22.0±5.7%, 29.2±6.5%, 42.7±5.9% and 74.5±9.1% and the NF-κB expression was 74.2±10.9%, 61.8±7.6%,36.7±10.9% and 17.5±12.3%, Significant differences were found between 0 μmol/L and 100 μmol/L and 200 μmol/L. Western blot analysis also showed that the expression of NF-κB was decreased.CONCLUSION Nimesulide suppresses tumor growth and induces apoptosis by inhibiting NF-κB expression, which may be related to the overexpression of Bax relative to Bcl-2 expression.     

柴胡皂苷d通过AKT/mTOR信号通路调控胶质瘤C6细胞自噬

目的 探讨柴胡皂苷d在胶质瘤C6细胞自噬中的作用及其机制。方法 分别以终浓度为0 μmol/L（Control组）、2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L、10 μmol/L、12 μmol/L的柴胡皂苷d作用胶质瘤C6细胞后,用CCK⁃8检测细胞增殖能力,后续分别采用克隆形成实验、划痕实验检测柴胡皂苷d（8 μmol/L）对胶质瘤C6细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响,Western blot和qRT⁃PCR检测胶质瘤C6细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和AKT/mTOR信号通路相关蛋白及基因的表达情况。结果 与Control组比较,各浓度柴胡皂苷d均能抑制胶质瘤C6细胞增殖且增殖抑制率随着药物浓度的升高而升高（均P<0.01）。8 μmol/L柴胡皂苷d作用24 h后,与Control组比较,胶质瘤C6细胞的克隆形成数目显著减少［（479.33±30.66）个 vs （258.66±73.35）个,P<0.01］,细胞迁移率显著降低［（70.83±4.29）% vs （19.47±1.71）%,P<0.001］,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（均P<0.01）,而AKT和mTOR信号蛋白及mRNA表达水平均降低（均P<0.01）。结论 柴胡皂苷d可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导胶质瘤C6细胞发生自噬并抑制其增殖与迁移。     

125I粒子联合AZD1152对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究¹²⁵I粒子联合Aurora激酶抑制剂AZD1152对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。方法：试验设对照组(常规培养)、¹²⁵I粒子照射组(照射组)、1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h组(抑制组)、¹²⁵I粒子照射与1 μmol/L AZD1152联合作用MDA-MB-231细胞48 h组(联合组)。采用免疫荧光检测细胞多核形成;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术PI单染检测细胞周期;流式细胞术Annexin V/PI双染观察各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Cyclin B1、组蛋白H3的表达及其磷酸化水平的改变,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PARP表达的变化。结果：免疫荧光检测发现1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h时可见到多核细胞形成;MTT试验结果显示对照组、照射组、抑制组和联合组的细胞增殖抑制率分别为(0.61±0.32)%、(17.62±1.41)%、(29.67±0.41)%、(53.17±1.26)%;CCK-8检测显示细胞存活率分别为(94.88±0.22)%、(59.21±0.14)%、(42.05±0.17)%、(32.12±0.36)%;细胞周期检测发现G2/M期占比分别为(18.99±0.15)%、(38.05±0.23)%、(49.80±0.32)%、(75.52±0.45)%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。照射组、抑制组和联合组的细胞凋亡率分别为(17.48±0.24)%、(29.23±0.02)%、(63.11±0.27)%,均较对照组(0.31±0.03)%升高(P<0.05)。流式细胞术发现抑制组细胞出现多核及多倍体细胞,易形成非整倍体。Western blot检测结果显示联合组较其他3组,抗凋亡蛋白Bcl-2、组蛋白H3的磷酸化和Cyclin B1蛋白表达减少(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax和PARP蛋白剪切明显增加(P<0.05)。结论：¹²⁵I粒子对AZD1152有增敏作用,¹²⁵I联合AZD1152可显著抑制MDA-MB-231细胞组蛋白H3磷酸化及Cyclin B1水平,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。