siRNA沉默YAP1对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响

目的:用小干扰RNA(siRNA)沉默宫颈癌Hela细胞中YAP1基因的表达,观察YAP1表达降低对细胞增殖和侵袭能力的影响,初步探讨YAP1在宫颈癌中的作用。方法:qRT-PCR和Western blot方法检测宫颈癌Hela细胞及正常宫颈上皮细胞H8中YAP1的表达,siRNA YAP1转染Hela细胞沉默YAP1表达,并以转染control siRNA的细胞作为对照,转染48h后,分别用qRT-PCR和Western blot方法检测沉默效果。用MTT法检测沉默后细胞增殖情况。Transwell 检测细胞侵袭能力。结果:YAP1在宫颈癌细胞中高表达。siRNA能够有效沉默Hela细胞中YAP1的mRNA 及蛋白的表达。沉默YAP1表达能够明显抑制Hela细胞的增殖及侵袭能力。结论:YAP1蛋白在宫颈癌细胞中高表达并具有促进细胞增殖及侵袭的能力。     

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

目的 研究细胞周期分裂蛋白 Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法 Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达.设计并合成靶向CAc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine~(TM)2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48 h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达.Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化.结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,CAc42-siRNA能显著下调CAc42 mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNAl;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低.结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点.     

Cdc42 小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

 目的 研究细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响. 方法 Western blot 检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine^TM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western blot分别检测48h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。 结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42 mRNA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。 结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。     

靶向干扰Glypican-3基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭迁移的影响

目的:探讨Glypican-3(GPC3)基因在鼻咽癌细胞系CNE中的表达情况,并研究靶向抑制GPC3基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭迁移的影响.方法:应用Western blotting和QRT-PCR检测人正常永生化鼻咽上皮细胞株NP69、鼻咽癌细胞株CNE中GPC3的表达,采用siRNA干扰技术沉默CNE细胞中GPC3基因的表达,分别采用Western blotting和QRT-PCR检测siRNA的靶向沉默效果.MTT增殖实验与Transwell实验观察GPC3抑制对CNE细胞增殖及侵袭迁移的影响.结果:GPC3在CNE细胞中高表达,用siRNA干扰技术沉默鼻咽癌细胞CNE的GPC3后可以抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移(P＜0.05).结论:下调GPC3的表达可以抑制鼻咽癌细胞的增值、侵袭及迁移.     

敲低PRPF19对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨敲低PRPF19之后对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法利用GEPIA等数据库分析PRPF19在胰腺癌及其正常组织中的表达差异;通过Western blot和qRT-PCR检测胰腺癌细胞中PRPF19蛋白和mRNA的表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默胰腺癌细胞中PRPF19的表达,并通过Western blot和qRT-PCR验证其敲低效率;CCK-8、克隆形成以及Transwell实验检测敲低PRPF19对胰腺癌细胞增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力的影响。结果GEPIA分析显示,与正常胰腺组织相比,PRPF19在胰腺癌组织中高表达;与正常胰腺细胞相比,PRPF19在MIA PaCa-2、PANC-1等多种胰腺癌细胞系中高表达(P<0.05);与对照组相比,敲低PRPF19后,胰腺癌细胞的增殖速率明显下降,克隆形成数量、细胞迁移和侵袭数量均减少(P<0.05)。结论敲低PRPF19可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,PRPF19可能作为胰腺癌的一个癌基因发挥重要作用。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

沉默ANLN基因对胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响

目的 探讨肌动蛋白结合蛋白ANLN在体外对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株、胃黏膜细胞株中ANLN的表达情况和验证siRNA对ANLN基因的敲减情况。划痕实验和Transwell检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CCK-8实验、细胞荧光染色和流式细胞术检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果 胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803中的ANLN的mRNA和蛋白表达显著高于正常胃黏膜细胞株GES-1（P<0.001）。siRNA干扰后RT-PCR和Western blot结果证明转染成功,转染组的mRNA和蛋白表达量与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。下调ANLN能够显著降低胃癌细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力。结论 下调ANLN的表达可以显著降低胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力。     

MicroRNA-192对结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制研究

目的:探讨microRNA-192（miR-192）对于高侵袭性结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:将miR-192 mimics（miR-192）通过脂质体转染至RKO细胞,应用qRT-PCR检测细胞中miR-192表达情况,采用CCK-8实验和集落形成实验研究miR-192对结肠癌RKO细胞增殖的影响,采用细胞划痕实验和Transwell小室模型检测miR-192对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响,应用Western blot检测miR-192对结肠癌RKO细胞内上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin,E-cad）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达的影响。结果:CCK-8实验和集落形成实验结果显示:转染了miR-192的结肠癌RKO细胞,癌细胞增殖显著受到抑制。细胞划痕实验、迁移实验和细胞侵袭实验结果显示:RKO细胞转染miR-192后,迁移和侵袭的细胞数量显著减少,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示:结肠癌细胞转染miR-192后可升高E-cad蛋白的表达,并且降低VEGF蛋白的表达。结论:转染miR-192可抑制结肠癌RKO细胞增殖,降低其迁移和侵袭能力,其可能的机制是升高结肠癌RKO细胞E-cad的表达,并且降低VEGF的表达。miR-192可能作为肿瘤诊断及治疗的新靶点。     

癌蛋白LRP6调节FGF8信号对肺癌细胞增殖的影响研究

目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)对肺癌细胞株酸性成纤维细胞生长因子8(FGF8)信号以及细胞增殖、克隆形成能力的影响.方法 采用Western blot检测肺癌细胞中LRP6、FGF8和Cyclin D1蛋白的表达水平;应用siRNA沉默LRP6表达,qRT-PCR法检测其mRNA的表达;噻唑蓝(MTT)法检测肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力.结果 LRP6在肺癌细胞株中普遍呈高表达,沉默LRP6表达可抑制A549细胞的增殖和克隆形成能力,并可下调肺癌细胞中FGF8的表达.结论 沉默癌蛋白LRP6可以通过阻断FGF8信号转导通路抑制肺癌细胞的增殖,因此,LRP6可能是临床诊断和治疗肺癌的潜在分子靶标.     

miR－647在结肠癌细胞中的表达及临床意义

目的：分析miR－647在结肠癌组织及细胞系中的表达情况,探讨其对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的作用机理。方法：利用Real－time quantitative Polymerase Chain Reaction（qPCR）技术检测17例结肠癌患者癌及癌旁组织中miR－647的表达;利用qPCR技术检测正常人肠上皮细胞HIEC及结肠癌细胞HT－29中miR－647的表达;将miR－647 antagomir及对照分别转染至结肠癌细胞中,应用MTT实验检测细胞增殖,体外划痕实验检测细胞迁移能力,评价转染miR－647抑制剂对结肠癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。结果：qPCR结果显示,与癌旁组织相比,miR－647在结肠癌肿瘤组织中表达明显升高;与正常人肠上皮细胞相比,人结肠癌细胞系HT－29中miR－647表达明显升高;MTT结果显示miR－647抑制剂可以显著抑制SW480和SW620细胞的增殖能力和细胞迁移能力。结论：miR－647通过促进结肠癌细胞的增殖和迁移能力,参与结肠癌的发生发展进程。     

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。     

MicroRNA-99a促进结肠癌细胞的增殖和迁移及其可能机制

目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响.方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞HCoePic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞中microRNA-99a表达水平;结肠癌细胞株HT-29转染microRNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测microRNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察microRNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blotting检测了HT-29中FGFR-3的表达水平.结果:microRNA-99a表达在结肠癌组织中明显高于癌旁组织(6.27±0.48 vs 1.34±0.54,P＜0.05)、在肿瘤细胞中明显高于正常结肠上皮细胞(5.48±0.34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,P＜0.05).转染microRNA-99a抑制剂后,HT-29细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P＜0.05);同时,HT-29中FGFR-3显著降低(P＜0.05).结论:microRNA-99a在结肠癌组织中高表达,低表达microRNA-99a可减弱结肠癌细胞的增殖和迁移能力,且可能通过FGFR-3信号通路发挥作用.     

大肠癌组织和细胞中KDM3A的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,KDM3A)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中KDM3A在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验KDM3A在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出KDM3A表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测KDM3A过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:KDM3A在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且KDM3A高表达患者生存率更低。过表达KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Linc00355在结肠癌中表达上调并促进肿瘤细胞增殖和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) Linc00355在结肠癌组织中的表达水平,以及沉默Linc00355表达对结肠癌HCT116细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响.方法:通过对肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gen...     

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的：LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法：利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果：LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论：LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。     

敲低远端上游元件结合蛋白1的表达对胰腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:研究敲低远端上游元件结合蛋白1(FUBP1)的表达对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.方法:细胞转染干扰序列siFUBP1降低胰腺癌细胞PaTu8988中FUBP1的表达,FUBP1-nc作为阴性对照.CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力.结果:敲低胰腺癌细胞...     

Rab27在膀胱癌细胞中过表达并促进细胞的增殖和侵袭

目的:检测Rab27在人膀胱癌细胞系中的表达情况,并探讨Rab27表达与膀胱癌增殖侵袭的关系.方法:采用Western blot和RT-PCR检测Rab27在BIU-87、5637、RT4、J82 和T24细胞系中的表达.应用Rab27转染人膀胱癌细胞系BIU-87,应用Rab27 siRNA干扰人膀胱癌细胞系5637后,应用CCK-8、集落形成实验和基质胶侵袭实验来检测Rab27对膀胱癌增殖和侵袭的影响.结果:CCK-8、集落形成实验结果表明膀胱癌细胞系中Rab27转染能够提高细胞的增殖率,而Rab27敲除后则抑制细胞的增殖.基质胶侵袭实验表明Rab27敲除后下调了穿过基底膜的细胞数,而转染Rab27后穿过基底膜的细胞数显著增多.结论:Rab27促进着膀胱癌细胞的增殖与侵袭能力.     

miR-182靶向NUMB调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究miR-182对结直肠癌细胞HT-29增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、结直肠癌细胞HT-29中miR-182、NUMB的表达;将anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、anti-miR-182组（转染anti-miR-182）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NUMB组（转染pcDNA-NUMB）、anti-miR-182+si-con组（anti-miR-182和si-con共转染）、anti-miR-182+si-NUMB组（anti-miR-182和si-NUMB共转染）均用脂质体法转染HT-29细胞;Western blot检测各组细胞中NUMB的蛋白表达;Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭;MTT法检测各组细胞的增殖;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与人正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比,结直肠癌细胞HT-29中miR-182表达显著升高,NUMB表达显著降低（P<0.05）;抑制miR-182、过表达NUMB均可下调HT-29细胞的增殖、迁移、侵袭;NUMB是miR-182的靶标。敲减NUMB可逆转抑制miR-182对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的下调作用。结论:miR-182可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向NUMB有关,将可为miR-182靶向治疗结直肠癌提供依据。