雷帕霉素对人淋巴瘤Raji细胞株增殖影响及其机制的探讨

目的:探讨雷帕霉素(宜欣可)对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外增殖及细胞周期的影响,并分析其分子作用机制.方法:采用MTT法检测不同浓度(0、1、5、10、20、40、50和100 nmol/L)雷帕霉素作用不同时间(24、48和72 h)对Raji细胞增殖的影响.用流式细胞仪测定雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响.应用蛋白质印迹法检测雷帕霉素对Raji细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A和p27及凋亡蛋白抑制因子Survivin蛋白表达的影响.结果:雷帕霉素浓度＞5 nmol/L对Raji细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).且呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系.雷帕霉素处理后,可明显抑制Raji细胞周期发展(P＜0.05),随着药物浓度的加大、作用时间的延长,处于G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞则逐渐减少.但Raji细胞没有发生明显的凋亡现象(P＞0.05).50 nmol/L雷帕霉素处理后,Raji细胞的Cyclin D1、Cyclin E、p27表达水平没有明显变化(P＞0.05),但Cyclin A和Survivin表达水平被明显抑制(P＜0.05).结论:雷帕霉素通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖,其作用机制可能与下调细胞Cyclin A和Survivin表达有关.     

雷帕霉素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测分别以不同浓度雷帕霉素处理的体外培养人宫颈癌HeLa细胞的抑制率,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测各组细胞HIF-1 α、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性;随雷帕霉素浓度增加细胞内HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均呈下调趋势.结论 雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有抑制作用并呈剂量依赖性,雷帕霉素具有明显下调HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达的作用.     

雷帕霉素下调基质金属蛋白酶表达抑制伯基特淋巴瘤细胞转移的作用和机制研究

目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对伯基特淋巴瘤细胞株Raji中基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)表达水平的影响,探讨雷帕霉素在伯基特淋巴瘤细胞株Raji转移方面的作用.方法:以伯基特淋巴瘤细胞株Raji为实验对象,应用Transwell迁移实验、Western blot、qPCR技术来检测雷帕霉素对Raji细胞迁移能力,MMP-2、MMP-9的蛋白和mRNA表达水平的抑制情况.结果:雷帕霉素可显著抑制Raji的迁移能力,且呈浓度依赖性,当雷帕霉素浓度为1 nmol/L时抑制作用最强(P<0.05);Raji细胞中MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平有明显的下降趋势,且呈浓度依赖性,mRNA的表达水平在作用48 h时最低.结论:雷帕霉素可以显著抑制伯基特淋巴瘤细胞株Raji的迁移能力,降低MMP-2、MMP-9的蛋白及mRNA的表达,抑制淋巴瘤细胞的转移.     

雷帕霉素对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 探讨不同浓度雷帕霉素作用不同时间对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其相关机制.方法采用0、10、50、100、250、500 nmol/L雷帕霉素分别作用Raji细胞24、48、72 h,采用CCK-8法测定Raji细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定Raji细胞凋亡及细胞周期;采用Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Raji细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性;采用蛋白印迹法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Raji细胞中bcl-2、p53蛋白及其mRNA表达情况.结果作用24 h后,随着雷帕霉素浓度由0 nmol/L逐渐增加至500 nmol/L,Raji细胞增殖抑制率由(23.7±4.2)％升高至(51.7±3.7)％(P<0.01);细胞凋亡率由(4.9±1.9)％升高至(20.5±1.5)％(P<0.01);G0/G1期细胞比例由(40.8±1.4)％增加至(63.6±1.7)％(P<0.01);Caspase-3酶活性由0.16±0.05增加至1.08±0.04(P<0.01);Caspase-9酶活性由0.19±0.04增加至1.34±0.06(P<0.01);bcl-2 mRNA表达量由0.90±0.03减少至0.46±0.03,p53 mRNA表达量由2.51±0.41增加至5.85±0.21,并且bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增高.Raji细胞48 h和72 h实验结果与24 h实验结果趋势一致.结论雷帕霉素可能通过Caspase-3、Caspase-9、bcl-2、p53途径抑制Raji细胞增殖,并诱导Raji细胞凋亡.     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.     

雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞生长和对HIF-1α与VEGF表达影响的观察

目的:探讨mTOR抑制剂雷帕霉素与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对HIF-1α和VEGF表达的影响。方法:分别以雷帕霉素、顺铂及雷帕霉素联合顺铂处理体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测人宫颈癌Hela细胞的抑制率,金氏公式评价两药联合用药的效果,采用RT-PCR法、蛋白质印迹法检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达。结果:雷帕霉素和顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,分别联合应用2种浓度雷帕霉素(10和20nmol/mL)与顺铂(0.25和0.5mg/mL)协同治疗指数q值均>1.15,两者有协同作用。雷帕霉素与顺铂联合用药HIF-1αmRNA的表达为0.242±0.048,单独用药雷帕霉素组为0.428±0.068,顺铂组为0.357±0.051;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF mRNA的表达为0.498±0.093,单独用药雷帕霉素组为0.651±0.112,顺铂组为0.623±0.125,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05;雷帕霉素与顺铂联合用药组HIF-1α蛋白的表达为0.514±0.092,单独用药雷帕霉素组为0.625±0.132,顺铂组为0.635±0.120;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF蛋白的表达为0.409±0.082,单独用药雷帕霉素组为0.650±0.114,顺铂组为0.623±0.102,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05。结论:单独及联合应用雷帕霉素与顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有抑制作用,两药联合应用有明显的协同作用,雷帕霉素联合顺铂具有明显下调HIF-1α、VEGF基因和蛋白表达的作用。     

国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞Raji增殖的影响

目的探讨国产雷帕霉素（宜欣可）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外生长及对mTOR/p 70S6K信号通路的影响。方法MTT法检测不同浓度（0、1、5、10、20、40、50、100 nmol/L）国产雷帕霉素作用不同时间（24、48、72 h）对Raji 细胞增殖的影响。光学显微镜观察Raji细胞形态学变化。流式细胞仪测定国产雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响。Western blot 方法检测国产雷帕霉素处理前后对Raji 细胞mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白的影响。结果国产雷帕霉素对Raji细胞增殖有明显的抑制作用（不同浓度P<0.01或P<0.05）,呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。国产雷帕霉素明显抑制Raji细胞周期发展（P<0.05）,但没有发生明显的凋亡（P>0.05）。0、10、50、100 nmol/L国产雷帕霉作用于Raji细胞的mTOR、p-p70S6K,其蛋白量随药物浓度增大而降低（P<0.05）,p70S6K随药物浓度增大而升高（P<0.05）。结论人淋巴瘤细胞株Raji中存在mTOR/p70S6K信号通路激活状态,宜欣可可抑制该通路激活并通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖。     

食管鳞癌EC-9706细胞中mTOR信号通路在TGF-β1介导的EMT中的作用

目的:探讨食管鳞癌EC-9706细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路活化在转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)介导的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法:TGF-β1(终质量浓度为7.5 ng/mL)或TGF-β1(终质量浓度为7.5 ng/mL)+雷帕霉素(终浓度为200 nmol/L)作用食管鳞癌EC-9706细胞后,在倒置显微镜下观察细胞形态的变化,RT-PCR及蛋白质印迹法检测EC-9706细胞中mTOR和E-cadherin mRNA及其蛋白的表达,通过Boyden小室实验检测EC-9706细胞侵袭能力的变化.构建裸鼠食管鳞癌EC-9706细胞移植瘤模型,RT-PCR及蛋白质免疫印迹法检测雷帕霉素作用后,移植瘤组织中mTOR和E-cadherin mRNA及其蛋白的表达.结果:TGF-β1作用后,EC-9706细胞梭形化明显,mTOR mRNA及p-mTOR蛋白的表达水平高于未进行任何处理的EC-9706细胞对照组(P＜0.05),E-cadherin mRNA及其蛋白的表达水平低于对照组(P＜0.05),细胞侵袭能力明显高于对照组(P＜0.05); TGF-β1+雷帕霉素组EC-9706细胞mTOR mRNA及p-mTOR蛋白的表达水平低于TGF-β1单药作用组(P＜0.05),E-cadherin mRNA及其蛋白的表达水平高于TGF-β1单药作用组(P＜0.05),细胞侵袭能力较TGF-β1单药作用组明显下降(P＜0.05).雷帕霉素作用后,裸鼠食管鳞癌EC-9706细胞移植瘤组织中mTOR mRNA及p-mTOR蛋白的表达水平低于对照组(P＜0.05),E-cadherin mRNA及其蛋白的表达水平高于对照组(P＜0.05).结论:食管鳞癌EC-9706细胞中mTOR可能参与TGF-β1介导的EMT的发生,mTOR可能作为食管鳞癌基因治疗中的有效靶点发挥作用.     

mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生物学行为的影响

目的观察mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响。方法选取45例喉鳞状细胞癌组织和45例正常喉黏膜组织,采用免疫组织化学法检测mTOR蛋白的表达;将喉鳞状细胞癌Hep-2细胞分为空白对照组、空载体组和mTOR siRNA组,及正常对照组、溶剂对照组和雷帕霉素组,分别利用mTOR siRNA和雷帕霉素进行治疗,采用Western bloting法检测不同浓度的mTOR siRNA和雷帕霉素分别处理细胞后对mTOR蛋白表达的影响,并采用CCK-8试剂盒分析mTOR蛋白表达下调对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响。结果 mTOR蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达的阳性率显著高于正常喉黏膜组织(P<0.05)。3种不同浓度mTOR siRNA分别转染Hep-2细胞24、48、72 h,各组与空白对照组、空载体组相比,mTOR蛋白表达均有所降低(P<0.05),且mTOR蛋白表达随mTOR siRNA浓度的增加、作用时间的延长而降低(P<0.05)。3种不同浓度雷帕霉素处理Hep-2细胞24、48、72 h,各组与溶剂对照组及正常对照组相比,mTOR蛋白表达量均有所降低(P<0.05);且mTOR蛋白表达随雷帕霉素浓度的增加、处理时间的延长而降低(P<0.05)。与空白对照组、空载体组相比,各mTOR siRNA组的Hep-2细胞增殖在转染后24、48、72 h均受到明显抑制(P<0.05)。结论 mTOR siRNA均能降低喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中mTOR蛋白的表达,有效抑制细胞的生长,为喉鳞状细胞癌的分子治疗提供了理论依据。     

mTOR通路对神经母细胞瘤SH-SY5 Y细胞自噬作用的影响

目的：研究雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin,mTOR）通路对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自体吞噬作用的影响。方法：应用不同浓度的雷帕霉素作用于神经母细胞瘤细胞,采用实时荧光定量PCR检测雷帕霉素作用前后神经母细胞瘤细胞株的mTOR、LC3及Beclin 1 mRNA表达情况。结果：雷帕霉素能抑制mTOR表达且呈现量效依赖关系,不同浓度的雷帕霉素分别对SH-SY5Y细胞作用72h后,mTOR mR-NA的表达随浓度增加逐渐下降。而LC3及Beclin 1 mRNA的表达随浓度增加逐渐上升,神经母细胞瘤中mTOR与LC3及Beclin 1的表达呈负相关。结论：雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路促进神经母细胞瘤的自体吞噬作用,动态观察mTOR可作为神经母细胞瘤治疗效果监测的指标之一。     

干扰mTOR表达增强食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性

目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞, RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01);雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05),并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。     

乏氧条件下雷帕霉素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨乏氧条件下雷帕霉素(RPM)对乳腺癌细胞的影响及其机制。方法 MTT法检测乏氧条件下RPM对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的抑制作用,采用定量RT-PCR和Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1α)、VEGF基因mRNA和蛋白表达。结果 缺氧条件下,RPM对MCF-7细胞生长有抑制作用;HIF-1α蛋白水平随着RPM浓度提高而降低(P＜0.01),而HIF-1α mRNA表达水平无明显变化;VEGF的转录和蛋白表达均随着RPM浓度升高抑制率增加(P＜0.01),呈剂量依赖性。结论 RPM能抑制乳腺癌的肿瘤缺氧反应,从而抑制肿瘤的生长和血管的生成。     

雷帕霉素对人前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制

背景与目的：哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法：培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1nmol／L作用24h、36h、48h、72h后PC-3细胞增殖的改变,流式细胞术检测作用不同时间细胞周期的改变,Western blot检测雷帕霉素作用PC-3细胞24h、36h、48h、72h后raptor、rietor、Akt、pS6k1-T389、pAkt-s473的表达情况。结果：MTT结果显示雷帕霉素在作用24h时,促进了PC-3细胞增殖,但在36h显著抑制PC-3细胞增殖（P〈0．01）,72h时抑制作用更明显。FCM结果显示雷帕霉素作用24h时S期细胞有所增加,但作用36、48、72h后PC-3细胞的G1期细胞逐渐增加,使PC-3细胞周期主要阻滞在G。期。Western blot检测结果显示雷帕霉素作用24h时显著抑制raptor和pS6k1-T389的表达（P〈0．01）;rictor、Akt表达并没有显著变化;pAkt-s473表达在雷帕霉素作用24h时反而显著增加（P〈0．01）,但在36h后即被显著抑制,72h几乎完全被抑制（P〈0．01）。结论：延长雷帕霉素作用时间可抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与雷帕霉素阻滞细胞周期、抑制Akt磷酸化有关。     

雷帕霉素联合多西紫杉醇诱导肺癌95D细胞凋亡的机制研究

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)联合多西紫杉醇( docetaxel,DTX)对肺癌95D细胞系凋亡的影响.方法:流式细胞仪检测雷帕霉素及联合多西紫杉醇对95D细胞凋亡的影响,RT-PCR方法和Western blot检测凋亡基因survivin mRNA和蛋白的表达.结果:mTOR抑制剂雷帕霉素和多西紫杉醇单独处理组均能促进肺癌细胞的凋亡,下调凋亡基因survivin mRNA和蛋白的表达;联合应用雷帕霉素和多西紫杉醇促凋亡作用更强,survivin mRNA和蛋白的表达下降更明显.结论:雷帕霉素联合多西紫杉可以降低survivin的表达,从而起到促进肿瘤细胞凋亡的作用,为临床寻找新型抗肿瘤药物及治疗肺癌的新化学治疗方案提供了理论和实践基础.     

雷帕霉素对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α和糖酵解途径的影响

目的:观察雷帕霉素(Rapamycin)对人食管癌细胞TE1、TE13中HIF-1 α的抑制作用及糖酵解途径相关基因表达的影响;分析mTOR信号通路与糖酵解途径的关系.方法:分别取TE1、TE13细胞株,常氧及缺氧条件下分别予以Rapamycin作用后,将两株细胞各分为四组:①正常对照组,即未处理组(N);②缺氧处理组(H);③常氧Rapamycin处理组(N+R);(④缺氧Rapamycin处理组(H+R)(即雷帕霉素预处理1小时后缺氧培养).采用实时定量PCR检测细胞中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)、葡萄糖载体蛋白1(GLUT-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)等糖酵解相关基因mRNA的表达,Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA等糖酵解相关基因蛋白的表达.结果:缺氧处理后与正常对照组相比,HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1蛋白表达及mRNA明显增强,而LDHA表达无明显变化;Rapamycin预处理后,正常对照组及缺氧处理组HIF-1 α、HK-Ⅱ、GLUT-1的表达均明显降低,LDHA无明显变化.结论:常氧及缺氧条件下,雷帕霉素可抑制食管癌细胞HIF-1 α及糖酵解相关基因的表达,提示阻断mTOR通路可抑制食管肿瘤细胞的糖酵解途径.     

雷帕霉素单独及联合化疗药物应用对胃癌细胞生长的影响

目的:研究mTOR抑制剂雷帕霉素对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响及其可能的机制,并探讨其与传统化疗药物的联合作用。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞,取对数生长期的细胞进行试验,用不同浓度的mTOR抑制剂雷帕霉素以及长春新碱分别作用于胃癌SGC-7901细胞24、48、72小时,用MTT法检测雷帕霉素单独以及联合化疗药物对其生长的影响。用流式细胞术检测mTOR抑制剂雷帕霉素、长春新碱单独以及联合应用对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。结果:MTT法结果显示:雷帕霉素单独能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,其作用随着药物浓度以及作用时间的增加而增加,呈现时间-剂量效应关系;与化疗药物长春新碱联合应用其抑制效应明显增强。流式细胞术检测结果显示:雷帕霉素、长春新碱单独作用胃癌细胞将细胞周期主要阻滞在G0/G1期,而联合给药时G0/G1期比例增加。结论:mTOR抑制剂雷帕霉素能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,其机制可能与通过阻滞细胞周期在G0/G1期相关;并且雷帕霉素可提高传统化疗药物长春新碱对胃癌细胞的敏感性。     

雷帕霉素抑制人骨肉瘤MG-63细胞周期的实验研究

目的观察雷帕霉素对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖、周期及Cyclin D1基因表达的影响,探讨雷帕霉素抑制骨肉瘤细胞周期的可能机制。方法体外培养骨肉瘤MG-63细胞,用不同浓度的雷帕霉素（1、10、25nmol／L）干预MG-63细胞。采用水溶性四唑盐WST-8比色法检测MC-63细胞增殖的变化;流式细胞仪检测MG-63细胞周期;RT—PCR及免疫细胞化学SABC法检测MG-63细胞Cyclin D1基因表达的变化。结果雷帕霉素能显著抑制MG-63细胞增殖,呈时间依赖性,差别有显著性意义（P〈0．05）;流式细胞分析显示雷帕霉素能显著抑制细胞周期,使GO／G1期细胞增多（P〈0．05）;RT—PCR检测显示雷帕霉素对MG-63细胞Cyclin D1 mRNA表达无明显影响（P〉0．05）;免疫细胞化学分析雷帕霉素能显著抑制Cyclin D1蛋白的表达,差别有显著性意义（P〈0．05）。结论雷帕霉素能下调MG-63细胞Cyclin D1蛋白的表达,抑制MG-63细胞增殖及细胞周期。     

水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞mTOR磷酸化及HIF-1α表达

目的:探讨水飞蓟宾对胃癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的分子机制.方法:低氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,分别采用Real-time PCR和Western blotting法检测HIF-1αmRNA、蛋白的表达以及mTOR和Akt的磷酸化水平,MTT法检测水飞蓟宾对MGC803细胞增殖的影响.结果:细胞低氧状态下生长4h后,与正常氧浓度组相比,细胞内HIF-1 α蛋白表达水平显著增高[(0.94 ±0.16)vs(0.015±0.03),P＜0.01)];经250 μmol/L水飞蓟宾处理后,与处理前相比,HIF-1α蛋白表达水平明显减少[(0.24±0.09)vs (0.94±0.16),P＜0.01].与正常氧浓度组相比,低氧并不能增加HIF-1α mRNA的表达[(0.074±0.011) vs (0.07±0.02),P＞0.05],即便加入250μmol/L水飞蓟宾处理对HIF-1αmRNA的表达也无明显影响[(0.081 ±0.011) vs (0.07±0.02),P＞0.05],但水飞蓟宾能显著增加泛素化HIF-1α蛋白的表达[(0.94 ±0.16)vs(0.24 ±0.09),P＜0.01];水飞蓟宾处理后能明显抑制mTOR磷酸化水平[(0.17±0.06) vs (0.53±0.14),P＜0.05)],并能明显抑制MGC803细胞的增殖[(52.94 ±6.15) vs (100±3.22),P＜0.05)].与处理前相比,50和100μmol/L水飞蓟宾处理对Akt磷酸化无明显影响[(0.16 ±0.09)、(0.17±0.06) vs(0.11±0.04),P＞0.05],但250 μmol/L水飞蓟宾处理后,细胞内Akt磷酸化水平明显增强[(0.33 ±0.06) vs(0.11±0.04),P＜0.05].结论:水飞蓟宾可能通过影响mTOR和HIF-1α的表达水平而发挥抗肿瘤活性.     

雷帕霉素对肺癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的作用

目的探讨mTOR信号通路的功能状态与肺癌对雷帕霉素敏感度的关系。方法Western blot检测mTOR信号通路中AKT、S6K1、eIF4E、4E-BP1、P-S6K1蛋白在4种人肺癌细胞株的表达;MTT法检测雷帕霉素对肺癌细胞增殖的抑制情况,将肺癌细胞分为雷帕霉素敏感组和不敏感组,找出与敏感度相关的差异蛋白,用En Vision法检测患者肺癌组织中差异蛋白的表达。结果AKT、S6K1、eIF4E、4E-BP1蛋白在4种肺癌细胞株中均有表达。而P-S6K1在不敏感株中未检测到, 在敏感株中呈高表达,为雷帕霉素差异蛋白。P-S6K1在正常肺组织中的阳性表达率为15％（3/20例),在肺癌组织中的阳性表达率为62%(62/100例),其中在小细胞肺癌组织中的阳性表达率(81.0%,17/21例)高于非小细胞肺癌组织（59%,45/79例)。结论在mTOR信号通路相关蛋白中,仅P-S6K1在一定程度上可预测肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感度,为一种mTOR靶向抑制剂——雷帕霉素治疗肺癌的差异蛋白。P-S6K1在小细胞肺癌中表达较非小细胞肺癌高,提示在P-S6K1表达率高的小细胞未分化肺癌中应用mTOR靶向抑制剂——雷帕霉素的疗效可能更佳。