Sox2对膀胱癌细胞化疗耐药的影响及其分子机制的探讨

摘 要：［目的］ 探讨Sox2对膀胱癌细胞化疗耐药的影响及其分子机制。［方法］ 选用T24人膀胱癌细胞系,采用浓度递增方式建立顺铂耐药细胞系T24/DDP,慢病毒载体转染对应细胞,进行Sox2基因过表达或敲除,得到T24-Sox2细胞和T24/DDP-shSox2细胞系。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中Sox2与多药耐药相关蛋白（MRP）表达水平。MTT实验检测各组细胞在不同浓度顺铂作用下的吸光度值并计算IC50,绘制耐药曲线。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,并使用qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。［结果］ qRT-PCR和Western blot结果证实Sox2和MRP在膀胱癌顺铂耐药细胞系中高表达,耐药曲线提示Sox2与膀胱癌的顺铂耐药存在一定关联,耐药细胞系的IC50为(15.24±1.12)μg/ml,而非耐药细胞系的IC50为(4.88±0.72) μg/ml,P<0.05。Sox2表达上调能够抑制膀胱癌细胞凋亡,凋亡率从74.62%下降到25.84%,P<0.05。Bax和Caspase-3在Sox2高表达的细胞中呈低表达,而Bcl-2则呈高表达。［结论］ Sox2基因在顺铂耐药膀胱癌细胞系中表达水平显著高于正常非耐药膀胱癌细胞,且Sox2可能是通过抑制细胞凋亡来实现对化疗敏感性的调控。     

NDRG2 siRNA对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗敏感性影响的研究

目的：探讨人源N-myc下游调节基因2（N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2）小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对宫颈癌Hela细胞的化疗增敏作用。方法：利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA借助脂质体转染宫颈癌Hela细胞。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NDRG2mRNA和蛋白在宫颈癌Hela细胞的表达情况。通过MTT法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果：化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低,增强了顺铂对Hela细胞体外生存的抑制能力。转染Negative-control oligomer的Hela细胞与转染NDRG2siRNA oligomer HSS126269的Hela细胞相比,其存活情况出现明显差异,IC50值分别为（6.69±0.33）和（1.69±0.25）μg/L,差异有统计学意义,t=17.311,P=0.003。结论：抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,具有一定的临床应用前景。     

节拍器化疗对鼻咽癌CNE-1细胞周期和凋亡的影响

目的探讨顺铂节拍器化疗对人鼻咽癌细胞CNE-1细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法,检测顺铂对鼻咽癌细胞株CNE-1的半抑制浓度（IC50）,相当于临床中采用6 mg/m^2顺铂小剂量连续化疗的血浆浓度。以低于此浓度的0.10μg/ml作为顺铂节拍器体外化疗参考剂量,采用流式细胞术检测0.10μg/ml顺铂连续作用12 h和96 h细胞周期和细胞凋亡的变化情况。结果MTT法检测顺铂半抑制浓度IC50为0.19μg/ml,0.10μg/ml顺铂作用12 h后检测细胞周期变化,与对照组比较无显著变化;而作用96 h后与对照组相比进入G2/M期细胞比例显著增多,两者差异有统计学意义（P〈0.05）,但作用12 h和96 h后均未检测到明显细胞凋亡现象。结论采用小剂量顺铂作用足够长时间,可以诱导鼻咽癌CNE-1细胞周期发生变化,但是并不能诱导细胞凋亡。细胞周期同步化于G2/M期,为节拍器化疗与放疗的联用提供了可能。     

顺铂联合土贝母皂苷甲对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合应用对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,以期对临床上药物治疗宫颈癌提供新的思路和理论依据.方法:采用MTT法检测单用土贝母皂苷甲、DDP及两药联合时对HeLa细胞的生长抑制率.用流式细胞仪测定细胞周期变化.结果:土贝母皂苷甲组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)、顺铂组(10μmol/L)及联合组(40μg/ml土贝母皂苷甲+10μmol/L顺铂)宫颈癌Hela细胞株均有不同程度的生长抑制作用;土贝母皂苷甲组随着药物浓度增加,作用时间延长,对Hela细胞的生长抑制率逐渐升高;土贝母皂苷甲与顺铂联合用药较单一用药对Hela细胞的生长抑制率增高,具有浓度―时间依赖性.流式细胞仪分析结果显示:土贝母皂苷甲组、顺铂组及联合组作用于宫颈癌Hela细胞株24小时,可阻滞细胞周期于G2/M期.结论:土贝母皂苷甲对宫颈癌HeLa细胞株具有生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,其与顺铂联合应用具有协同作用,联合应用可减少顺铂用药剂量;土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合作用于宫颈癌Hela细胞株24h可阻滞细胞周期于G2/M期.     

顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究顺铂在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法测定顺铂对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪和Hochest33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测HPVE6的mRNA水平表达;WesternBlot测定HPVE6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表达。结果:顺铂抑制Hela细胞生长呈时效和量效关系;经10μg/ml顺铂分别在12、24、36、48小时作用Hela细胞,亚G1峰与对照组有显著性差异;RT-PCR提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的mRNA水平表达逐渐降低;WesternBlot提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低,p53、p21和Bax蛋白水平表达逐步升高,Bcl-2的表达无变化。结论:顺铂通过抑制HPVE6的表达,恢复p53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）,测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用。塞来昔布（5μmol/L）能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡。塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系。结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。     

顺铂水针剂与粉针剂体外细胞毒作用的差异性研究

目的:比较两种不同剂型顺铂针剂的细胞毒效应.方法:用含不同终浓度顺铂水针剂与粉针剂的培养液培养Hela细胞系,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率并计算顺铂的50%抑制浓度(IC50),分析比较两种不同顺铂剂型针剂在体外的细胞毒效应.结果:相对于顺铂粉针剂,相同终浓度顺铂水针剂作用的Hela细胞存活率较低,其IC50值分别为(14.0±0.07)μg·ml-1及(15.03±0.26)μg·ml-1(P=0.003).其中在(0.1、1、10)μg·ml-1组中细胞存活率存在差异.结论:顺铂水针剂较粉针剂体外细胞毒效应强.     

人骨肉瘤细胞MG-63侧群细胞的分离及耐药性研究

 目的 分选人骨肉瘤细胞MG-63中的侧群（side population,SP）细胞,并探讨SP细胞对化疗药物耐药的机制。方法 以流式细胞术仪检测、分选经DNA染料Hoechst 33342染色后MG-63中的SP细胞,采用CCK-8法检测顺铂对SP细胞与非侧群（non-SP）细胞的抑制率,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）。荧光定量 PCＲ法检测SP细胞和non-SP细胞中 MRP、XRCC1、MGMT、ABCG2 mＲNA 的表达水平。结果 MG-63 细胞在细胞密度为9×10⁵个/ml、 Hoechst 33342 终质量浓度为5 μg/ml 时,MG-63 SP 细胞的比例最稳定,为（1.45±0.23）%,且细胞保持良好的活性。顺铂对SP细胞的IC₅₀为11.608 μg/ml,对non-SP细胞的IC50为6.876 μg/ml,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。MRP、XRCC1 、MGMT 和ABCG2 mＲNA 在 SP细胞中的表达分别是non-SP 细胞的 1.58 倍、1.61倍、2.36倍和3.14倍（P<0.05）。 结论 人骨肉瘤MG-63细胞中存在SP细胞亚群,与non-SP细胞相比,SP细胞对顺铂的耐药性更为明显,可能与其耐药基因MRP、XRCC1 、MGMT、ABCG2 mRNA的高水平表达有关。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。     

柚皮苷逆转人卵巢癌耐药SKOV3／DDP细胞耐药性及逆转机制的研究

目的 研究柚皮苷对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞SKOV3／DDP体外增殖的影响及耐药逆转作用,并初步探讨相关耐药机制。方法采用MTT法测定DDP对SKOV3和SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）,柚皮苷对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制作用及柚皮苷联合DDP对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制作用。筛选出非细胞毒性的柚皮苷浓度,将实验细胞分为空白对照组、2.5 μg／ml DDP组、10 μmol/L柚皮苷组、10 μmol/L柚皮苷联合2.5 μg／ml DDP组,分别采用RT-PCR和Western blotting测定各组作用48 h后耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA的表达及其相应的表达产物P-gp、MRP2蛋白的表达水平。结果1～32 μg／ml DDP处理SKOV3及SKOV3／DDP细胞48 h后,SKOV3细胞的IC₅₀为5.48 μg／ml,SKOV3／DDP细胞为14.93 μg／ml,耐药指数为2.72。柚皮苷对SKOV3／DDP细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。选取10 μmol／L柚皮苷作为逆转耐药实验浓度,10 μmol／L柚皮苷联合DDP作用48 h后,SKOV3／DDP细胞对DDP的耐药指数为1.62,逆转倍数为1.68。RT-PCR及Western blotting检测显示,柚皮苷联合DDP组与DDP单药组比较,MDR1 mRNA、MRP2 mRNA表达及P-gp、MRP2蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论柚皮苷对卵巢癌SKOV3／DDP细胞的体外增殖具有明显抑制作用,并能逆转SKOV3／DDP细胞的耐药性,其逆转耐药的机制可能与下调耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA及相应的P-pg、MRP2蛋白的表达有关。     

Sensitization of ABCG2-overexpressing cells to conventional chemotherapeutic agent by sunitinib was associated with inhibiting the function of ABCG2

Sunitinib is an ATP-competitive multi-targeted tyrosine kinase inhibitor. In this study, we evaluated the possible interaction of sunitinib with P-glycoprotein (P-gp, ABCB1), multidrug resistance protein 1 (MRP1, ABCC1), breast cancer resistance protein (BCRP, ABCG2) and lung-resistance protein (LRP) in vitro. Our results showed that sunitinib completely reverse drug resistance mediated by ABCG2 at a non-toxic concentration of 2.5 μM and has no significant reversal effect on ABCB1-, ABCC1- and LRP-mediated drug resistance, although a small synergetic effect was observed in combining sunitinib and conventional chemotherapeutic agents in ABCB1 overexpressing MCF-7/adr and parental sensitive MCF-7 cells, ABCC1 overexpressing C-A120 and parental sensitive KB-3-1 cells. Sunitinib significantly increased intracellular accumulation of rhodamine 123 and doxorubicin and remarkably inhibited the efflux of rhodamine 123 and methotrexate by ABCG2 in ABCG2-overexpressing cells, and also profoundly inhibited the transport of [³H]-methotrexate by ABCG2. However, sunitinib did not affect the expression of ABCG2 at mRNA or protein levels. In addition, sunitinib did not block the phosphorylation of Akt and Erk1/2 in ABCG2-overexpressing or parental sensitive cells. Overall, we conclude that sunitinib reverses ABCG2-mediated MDR through inhibiting the drug efflux function of ABCG2. These findings may be useful for cancer combinational therapy with sunitinib in the clinic.     

β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞生长的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞,分别将 β-榄香烯（浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml）,顺铂（浓度梯度为1.5、3、6、9、12μg/ml） ,单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h后用CCK-8法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测β-榄香烯组细胞24h凋亡率。选取合适的药物浓度（β-榄香烯125μg/ml,顺铂3μg/ml） ,进行联合用药,加药24h、48h用CCK-8法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果：CCK-8法检测显示β-榄香烯和顺铂单独用药24h、48h后,除顺铂1.5μg/ml外,其它实验组对宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组（P〈0.05）,在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药（P〈0.01）。结论：β-榄香烯、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药,β-榄香烯和顺铂可协同（CDI〈1）促进SiHa细胞凋亡。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对宫颈癌细胞的作用

目的探讨选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对宫颈癌细胞的作用。方法以宫颈鳞癌Siha细胞,腺癌Hela细胞为研究对象,利用MTT法检测ZD1839单药使用以及与顺铂联用分别对Siha和Hela细胞的增殖抑制作用。采用Burgi法分析联合用药的效果,并用流式细胞仪检测Siha和Hela细胞的细胞周期分布及凋亡率改变。结果单独使用ZD1839能够抑制Siha、Hela细胞的增殖,其IC50值分别是1.48μmol/L、2.67μmol/L,而且抑制作用呈剂量依赖性。ZD1839能增强顺铂对Siha、Hela细胞的抑制作用,Burgi修正公式所得Q值分别为1.06±0.03(Siha)、1.13±0.01(Hela)。ZD1839使G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加。结论ZD1839能够抑制宫颈癌细胞的增殖,并且能够增强顺铂对宫颈癌细胞的抑制作用,该抑制作用可能与其使肿瘤细胞停滞于G1期和诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

WHI‐P154 enhances the chemotherapeutic effect of anticancer agents in ABCG2‐overexpressing cells

ATP‐binding cassette (ABC) transmembrane proteins evidently decrease the intracellular accumulation of substrate chemotherapeutic drugs by extruding them against a concentration gradient, thereby inducing drug resistance. Here we reported the effect of WHI‐P154, an irreversible inhibitor of Janus kinase 3 and epidermal growth factor receptor tyrosine kinases, on reversing ABC transporters‐mediated drug resistance. We found that WHI‐P154 significantly enhanced the sensitivity of ABCG2‐overexpressing cells to its substrates. WHI‐P154 moderately sensitized ABCB1‐overexpressing KB‐C2 cells to its substrates whereas showed no sensitizing effect on ABCC1‐, ABCC2 or ABCC10‐mediated drug resistance. Moreover, WHI‐P154 produced a significant increase in the intracellular accumulation of [³H]‐mitoxantrone in ABCG2‐overexpressing cells. The expression levels nor the localization of the ABCG2 protein was altered after treatment of ABCG2‐overexpressing cells with WHI‐P154. Further studies indicated that WHI‐P154 enhanced the ATPase activity of ABCG2 at low concentrations (<10 μM). Additionally, a docking model predicted the binding conformation of WHI‐P154 within the transmembrane region of homology‐modeled human ABCG2 transporter. Collectively, these findings highlighted WHI‐P154 could significantly reverse ABCG2‐mediated multidrug drug resistance by directly blocking the efflux function.     

莪术油对鼻咽癌CNE22 细胞的凋亡及放疗 增敏机制的影响

 目的　探讨莪术油、莪术油联合γ2射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE22 的增殖抑制和诱 导凋亡作用;分析莪术油是否具有放疗增敏的作用,并研究其机制。方法　体外培养CNE22 细胞,莪术 油以体外直接加药的方式作用于CNE22 细胞,采用MTT、流式细胞术、电镜等分子生物学手段,检测莪 术油单用或联合γ2射线对CNE22 的诱导凋亡作用、放疗增敏作用。结果　莪术油单独使用,对CNE22 细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用,并与常规化疗药物52Fu 有相近的抑制作用( P > 0. 05) 。莪术 油的药物抑制作用呈现浓度依赖性,最低起效浓度为10μg/ ml ,最佳作用时间为48 小时; 5μg/ ml 、100 μg/ ml 、300μg/ ml 的莪术油联合100 cGy 的γ2射线作用2 天后凋亡率由0. 5 %、2. 15 %、10. 2 %显著提高 到8. 6 %、14 %和26 % ,细胞的死亡率均在5 %以下有明显的协同增效作用( P < 0. 01) ;联合作用96h 后 试验组的细胞主要以死亡为主,凋亡较少;500μg/ ml 的莪术油主要导致细胞死亡,有明显的细胞毒性。 流式细胞仪结果显示较高浓度时,莪术油使CNE22 细胞阻滞在G1 期。电子显微镜观察细胞凋亡的超微 结构可以看到凋亡小体。结论　莪术 油可以抑制鼻咽癌细胞CNE22 的增 殖并诱导其凋亡;莪术油和100 cGy 的 γ2射线联合作用有明显的增敏作用; 其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡 及影响细胞生长周期有关。     

分子靶向药物诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨不同分子靶向药物对高表达与低表达ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ATPbinding cassette superfamily G member 2,ABCG2）的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（分别简写为ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP）表面NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs）表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的影响。方法：免疫磁珠法分选ABCG2 highCNE2/DDP、ABCG2lowCNE2/DDP细胞及NK细胞。流式细胞术检测分选细胞的纯度和不同分子靶向药物（硼替佐米、索拉非尼、舒尼替尼）处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达率。LDH释放法检测不同药物处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性。结果：ABCG2 highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面ABCG2的表达率分别为（91.40±2.32）%和（1.70±0.24）%。分选后NK细胞中CD3-CD16+CD56+细胞的比例达90%以上。药物处理前,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3呈弱表达;经不同分子靶向药物处理后,5种NKG2DLs的表达率均明显上升(P<001),以舒尼替尼处理后NKG2DLs的表达率升高最明显。随着NKG2DLs表达的上调,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性也随之升高。结论：不同分子靶向药物可诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,以舒尼替尼的诱导作用最强,且肿瘤细胞NKG2DLs的表达与其对NK细胞杀伤敏感性之间存在线性关系。     

Expression and promoter methylation analysis of ATP-binding cassette genes in pancreatic cancer

We investigated the relationship of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP expression and promoter methylation with pancreatic cancer tumorigenesis and drug resistance. Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cells, SW1990/GZ (33.3-fold increased resistance), were obtained by treating SW1990 cells with gemcitabine. The expression of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP was determined by quantitative real-time RT-PCR in the cell lines, 3 normal pancreatic tissues, 15 human pancreatic cancer samples and 15 adjacent tissues. Promoter methylation was determined in cell lines by bisulfite genomic sequencing. ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP were upregulated in SW1990 and SW1990/GZ compared with normal pancreatic tissue, and expression in SW1990/GZ was significantly higher than in SW1990 cells. ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP were upregulated in pancreatic cancer tissues, compared to adjacent tissues. The ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP promoter were hypomethylated in all the cell lines. ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP1 and ABCG2/BCRP expression correlated with pancreatic cancer tumorigenesis and drug resistance in a mechanism that is independent of promoter methylation.     

蟾毒灵对人骨肉瘤细胞化疗增敏作用的实验研究

目的 探讨蟾毒灵对人骨肉瘤细胞Saos 2和U2OS的化疗增敏作用。方法 采用无毒剂量的蟾毒灵联合不同浓度的阿霉素（0.01、0.1、1.0μg／ml ADM）和顺铂（0.5、1.0、2.0μg／ml DDP）分别作用于Saos-2和U2OS细胞24h,用CCK-8法观察药物对细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CCK-8法检测显示,蟾毒灵对Saos 2和U2OS细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性;无细胞毒剂量（0.005μmol／L）的蟾毒灵可以显著增强不同浓度ADM和DDP 对Saos-2和U2OS细胞增殖的抑制作用（q＞1.15）。Hoechst 33258染色法显示,蟾毒灵联合DDP或ADM后Saos-2和U2OS细胞的凋亡形态学变化较DDP或ADM单药更显著。流式细胞术检测显示,0.005μmol／L蟾毒灵联合1.0μg／ml DDP或2.0μg／ml ADM组Saos-2和U2OS细胞的凋亡率显著高于DDP或ADM单药组（q＞1.15,P＜0.05）。结论 无毒剂量的蟾毒灵可以增强化疗药物诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的能力,具有化疗增敏作用。