非小细胞肺癌组织中miR-371-5p、miR-452、miR-5100、LZTS1表达水平及临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-371-5p(miR-371-5p)、微小RNA-452(miR-452)、微小RNA-5100(miR-5100)、亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)表达水平及临床意义.方法 选择非小细胞肺癌患者100例为研究对象,并收集患者的癌旁正常组织及肺癌组织.检测肺癌组织与癌旁正常...     

miR-367-3p在非小细胞肺癌组织中的表达及对细胞功能的影响

目的:研究miR-367-3p在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中促进肿瘤生长的作用机制。方法:收集非小细胞肺癌患者的临床标本,检测miR-367-3p在非小细胞肺癌组织中的表达。利用qRT-PCR、MTT和流式细胞术分别评估miR-367-3p的表达改变对肿瘤细胞增殖和周期的影响。Western blot检测miR-367-3p表达改变对FBXW7的影响。双荧光素酶实验验证miR-367-3p与FBXW7之间的直接关系。结果:miR-367-3p在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于对应癌旁组织。miR-367-3p作为促癌的miRNA,在非小细胞肺癌细胞中促进肿瘤细胞增殖和细胞周期进程。miR-367-3p对NSCLC细胞生物学功能的影响部分依赖靶向抑制FBXW7。结论:miR-367-3p通过靶向抑制FBXW7的表达促进NSCLC细胞增殖和周期。     

miR-138-5p在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 探讨微小RNA-138-5p（miR-138-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测102例NSCLC组织和98例癌旁组织中miRNA-138-5p表达， 分析miRNA-138-5p表达与NSCLC临床病理特征（性别、年龄、TNM分期、肿瘤直径和淋巴结转移）的关系；Kaplan-Miere法绘制生存曲线，差异行Log-rank检验；Cox回归模型分析影响总生存（OS）的因素。结果 QPCR检测结果显示，NSCLC组织中miR-138-5p表达水平为0.42±0.11，显著低于癌旁组织的1.03±0.28，差异具有统计学意义 （P＜0.05）。miR-138-5p表达与TNM分期、肿瘤直径及淋巴结转移均有关（P＜0.05）。miR-138-5p高表达者的中位OS＞36个月，显著高于低表达者的26个月，差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox单因素分析显示除miR-138-5p表达外，淋巴结转移、肿瘤直径和TNM分期也与OS有关（P＜0.05）。结论 miR-138-5p在NSCLC中表达下调，其表达与NSCLC发生发展、预后有关， miR-138-5p可作为NSCLC诊断和预后预测新的靶点。     

非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p水平及其临床意义

目的: 探讨非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p 的表达水平是否可作为分子标志物。方法: 收集昆明医科大学第三附属医院2011 年6 月至2012 年6 月非小细胞肺癌首诊患者60 例,其中无远处转移患者30 例,有远处转移患者30例。另外收集健康志愿者30 例作为对照组。qPCR技术检测人支气管上皮细胞BEAS-2B、云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05 以及人外周血有核细胞的表达水平。分析外周血有核细胞miR-205-5p 的表达水平与非小细胞肺癌患者血清标志物水平、TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理参数的相关性。结果：miR-205-5p 在BEAS-2B细胞中表达水平低（0.820 8±0.255 3）,而在YTMLC-90（17.507 2±1.906 3）和XWLC-05（5.725 2±1.012 0）细胞中表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-205-p 在健康人外周血中的表达水平显著低于无转移的以及转移的非小细胞肺癌患者（1.073 0 vs 3.658 8、19.6324,均P<0.01）。外周血有核细胞miR-205-5p 的阳性表达率与非小细胞肺癌患者性别、年龄、淋巴结转移、病理类型和血清肿瘤标志物水平（CEA、CA125、CA242）无关(P>0.05),而与患者远处转移、TNM分期、血清肿瘤标志物CA153 水平明显相关(P<0.01)。结论：miR-205-5p表达水平异常升高可能作为非小细胞肺癌患者转移相关的分子标志物。     

miR-21和PDCD4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨微小核糖核酸21（miR-21）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:应用Real-time PCR法检测61例NSCLC组织及61例对应癌旁肺组织中miR-21、PDCD4的表达,分析二者表达的相关性及其与临床病理特征和预后的关系。结果:同癌旁正常组织相比,NSCLC组织中miR-21 mRNA表达明显上调（88.52%,P=0.000）,PDCD4 mRNA表达明显下调（83.61%,P=0.000）。两者表达呈负相关（r＝0．044,P＜0.05）。中晚期（Ⅲ-Ⅳ期）肺癌组织中miR-21 mRNA表达高于早期（Ⅰ-Ⅱ期）（P＜0.05）。PDCD4 mRNA 表达与NSCLC的分化程度、临床分期及淋巴转移相关（P＜0.05）。Kaplan-Meier 生存分析显示miR-21高表达患者较低表达患者总生存期明显缩短（P=0.007）,相反,PDCD4高表达的患者较低表达患者具有较长的总生存期(P=0.003)。     

MiR-34b和miR-155在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:检测肺癌组织及癌旁正常组织中miR-34b和miR-155的表达水平及其与肺癌临床病理特征之间的关系。方法:收集50例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常肺组织标本,运用 Real-time PCR检测 miR-34b和miR-155在肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达情况,分析其表达与肺癌临床病理特征之间的关系。结果:Real-time PCR 检测显示在50例非小细胞肺癌组织中 miR-34b的表达显著低于癌旁正常肺组织(P=0.019),而miR-155的表达显著高于癌旁正常肺组织(P=0.000)。MiR-34b和miR-155的表达与淋巴结转移情况显著相关（P均＜0.05,miR-34b呈负相关,miR-155呈正相关）;与性别、年龄、病理类型及肿瘤分化程度无明显相关;miR-34b的表达与临床病理分期无显著相关,而miR-155表达与临床病理分期显著相关。结论:MiR-34b和miR-155的异常表达与非小细胞肺癌的发生发展相关,其可能成为肺癌的筛查、诊断及治疗的肿瘤标志物。     

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果：miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系（r=-0.666,P < 0.05）;与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低（P < 0.05）,ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）;沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论：miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

Linc00052基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00052(long intergenic non-coding RNA 00052,Linc00052)的表达水平,以及Linc00052在肺癌中的临床意义、作用机制及与患者预后的相关性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间Linc00052表达水平的差异,肺癌组织与癌旁组织之间Linc00052表达水平的差异,并分析Linc00052与肺癌临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析Linc00052与肺癌预后之间的相关性。在A549细胞系中过表达Linc00052,采用MTT实验检测过表达Linc00052前后细胞增殖变化,并采用qRT-PCR检测miR-330-3p表达变化。结果:肺癌细胞系较正常肺细胞系中Linc00052明显低表达,同时肺癌组织比癌旁组织中Linc00052明显低表达(P＜0.01);Linc00052的表达与肿瘤的分化程度（P=0.02）、淋巴结转移（P=0.002）、远处转移（P=0.005）和临床分期（P=0.001）有关。肺癌的Linc00052表达水平减低与肺癌患者的预后不良有关（P＜0.05）。过表达Linc00052后可显著抑制细胞增殖（P＜0.05）,qRT-PCR结果证实,过表达Linc00052可显著下调miR-330-3p mRNA的表达水平（P＜0.05）。结论:Linc00052在肺癌组织中表达下调,并与肺癌的发生发展及预后密切相关,Linc00052有可能通过负调控miR-330-3p在肺癌中发挥抑癌作用。     

miR-345在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 探讨microRNA-345(miR-345)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并进一步分析其与肿瘤的临床病理特征和预后关系。方法 利用Real-time PCR检测98例NSCLC患者组织及三种细胞系中miR-345的表达,分析miR-345的表达与临床预后的关系。结果 和对照组相比,miR-345的表达在NSCLC组织及细胞系中显著下调(P＜0.05);组织中miR-345的表达水平和临床病理指标包括淋巴结转移(P＜0.001)、远端转移(P=0.028)、TNM分级(P=0.004)以及病理分期(P=0.011)有关;低表达miR-345的NSCLC患者组和高表达miR-345的患者组相比,其总生存率较低(P=0.021)。多因素分析表明miR-345的表达是NSCLC预后的独立危险因素(HR=3.897,95% CI:2.263~10.440;P=0.012)。结论 miR-345在NSCLC组织及细胞系中的表达降低,低表达的miR-345和NSCLC的进展及预后有关,表明miR-345可能作为NSCLC的一个潜在临床诊断标记。     

miR-218-1-3p对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移影响

目的 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)因其侵袭性而导致预后不良,miR-218可对多种肿瘤的进展起到抑制作用.本研究探讨miR-218-1-3p对NSCLC A549细胞侵袭和迁移影响.方法 使用LipofectamineTM 2000 Reagent将miR-218-1-3p mimic转染入NSCLC A549细胞中,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR,RT-qPCR)检测各组细胞中miR-218-1-3p的表达,Transwell小室法测定其侵袭及迁移能力,荧光定量PCR检测细胞迁移侵袭相关指标基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-7、MMP-9、Rho A、Rho B和Rho C的变化.结果 同对照组相比,上调mir-218-1-3p明显抑制了A549细胞的侵袭(t=4.028,P=0.016)和迁移(t=8.911,P=0.001),其侵袭和迁移的抑制率分别为37.8%和53.6%.MMP-7降低至对照组的(0.68±0.19)倍,t=2.931,P=0.043;MMP-9降低至对照组的(0.58±0.15)倍,t=4.875,P=0.080.结论 miR-218-1-3p能够抑制NSCLC A549细胞的侵袭和迁移.     

circ_0072088通过调控miR-545-3p/STAT3轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的生物学功能及其作用机制.方法:在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101684数据集,通过GEO2R...     

miR-486在非小细胞肺癌血液中表达及意义

目的:对比分析非小细胞肺癌患者肿瘤组织、瘤旁组织和外周血清中miR-486的表达情况,探讨miR-486是否有可能成为新的非小细胞肺癌标记物。方法:选取20例临床上确诊并进行外科治疗的非小细胞肺癌病例,每个病例取3块肿瘤组织,3块正常肺组织以及3×10ml外周血液样本。另选取20例健康志愿者抽取3×10ml外周血液作为对照。提取总RNA进行qRT-PCR实验。分析外周血清和肿瘤组织中miR-486的表达情况。结果:miR-486在非小细胞肺癌肿瘤组织中呈低表达状态（P＜0.05）,其在瘤组织内的表达与外周血清中的表达呈正相关性（P＜0.05）。结论:miR-486在人体外周血清中的表达与非小细胞肺癌存在正相关性,提示外周血清中miR-486可以成为非小细胞肺癌的预警因子。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的：探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A（PDE7A）调节人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞糖酵解过程的机制。方法：常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5p mimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒（PDE7A-oe）和PDE7A对照质粒（PDE7ANC）转染A549细胞,记为miR-218-5p mimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7A mRNA在肺癌组织中的表达水平。结果：在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p（P<0.01）。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达（均P<0.01）、葡萄糖摄取量和乳酸生成量（均P<0.01）。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达（均P<0.01）,以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量（均P<0.01）。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7A mRNA的3′-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7A mRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达（P<0.01）。结论： miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。     

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性。利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证。利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化。使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3 的 3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因。Western blot 结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01）。Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力（P<0.05）;与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.001）;与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.05）,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异（P>0.05）。结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点。     

血清miR-141和miR-145联合检测非小细胞肺癌

目的:探讨miR-141、miR-145作为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生物标志物的诊断价值.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测80例正常人和80例非小细胞肺癌患者血清中miR-141、miR-145的表达量,分析miR-141、miR-145的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断非小细胞肺癌的价值.结果:非小细胞肺癌患者miR-141、miR-145表达与对照组比较有统计学差异(P＜0.05),二者联合的诊断效能分别为:灵敏度92％ (95％ CI:0.86 ～0.96),特异度83％,(95％CI:0.73～0.88),阳性预测值(PPV) 86％,阴性预测值(NPV) 92％.结论:血清中miR-141、miR-145测定的诊断性能较高,可以作为非小细胞肺癌的潜在的诊断标志物.