MIIP对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾癌786-0细胞系MIIP基因表达.Western-blot、Real-time PCR检测转染效果;利用MTT实验检测MIIP对786-0细胞增殖能力的影响;Transwell实验、划痕实验检测MIIP对786-0细胞侵袭、迁移能力的影响.结果:Westem-blot、Real-time PCR检测发现实验组786-0/MIIP细胞MIIP蛋白及mRNA表达量有效上调.MTT实验显实验组786-0/MIIP细胞增殖能力明显减弱(P＜0.01).Transwell实验显实验组786-0/MIIP细胞侵袭能力减弱,穿透小室细胞数明显减少(P＜0.01).细胞划痕实验显实验组786-0/MIIP细胞迁移能力显著下降(P＜0.01).结论:通过质粒转染技术能够制备过表达MIIP的肾癌细胞系.转染成功的肾癌786-0/MIIP细胞系MIIP表达量增加,有效抑制了肾癌细胞的增殖、侵袭与迁移.     

下调Ets2表达对肾癌786-0细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨E26转录因子2（E-twenty six 2,Ets2）对肾癌细胞786-0迁移、侵袭的影响及其机制。方法:设计并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达;并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移及侵袭能力的变化;通过Western blot检测下调Ets2表达后基质金属蛋白酶2（MMP-2）及MMP-9表达水平变化。结果:siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达。细胞划痕实验结果显示下调Ets2表达后,细胞迁移能力减弱（P＜0.01）;Transwell实验中NC组穿膜细胞数为（43.80±3.99）个,而siRNA1组为（23.30±4.24）个(P＜0.01), siRNA2组为（24.20±3.29）个（P＜0.01）,细胞侵袭能力减弱。Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞中MMP-2及MMP-9的表达的同时上调了基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）和TIMP2的表达。结论:Ets2可通过调节MMPs及TIMPs的表达影响肾癌细胞的迁移及侵袭能力。     

体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）,分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组（P＜0.05）。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80％,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85α siRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞（P＜0.05）。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组（P＜0.05）。Transwell实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组（P＜0.05）。结论 通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。     

HMGB1在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:检测高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)在胶质瘤组织和细胞中的表达情况,了解HMGB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移以及细胞周期的影响。方法:将HMGB1 siRNA真核表达质粒在脂质体介导下转染胶质瘤细胞U373、U87（HMGB1 siRNA组）,以转染无关序列siRNA质粒的细胞（negative control,NC）和未转染的胶质瘤细胞（Control,Con）作为对照。采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,通过CCK-8实验、Transwell实验和细胞划痕实验分别检测胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力,用流式细胞仪检测胶质瘤细胞周期的变化。结果:HMGB1 mRNA在胶质瘤组织和细胞水平上都较非肿瘤性脑组织和正常胶质细胞明显高表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,CCK-8和划痕实验提示HMGB1 siRNA组细胞增殖和迁移能力受到明显抑制（P＜0.05）,Transwell实验显示HMGB1 siRNA组穿膜侵袭到基质胶的细胞数明显低于Con组和NC组,细胞侵袭能力减弱（P＜0.05）,流式细胞分析提示HMGB1 siRNA组位于S期细胞比例较Con和NC组明显减少（P＜0.05）,提示细胞周期发生S期阻滞。结论:应用RNAi能有效抑制HMGB1基因表达,HMGB1低表达后能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,并使得细胞周期中进入S期的细胞比例明显减少,细胞周期发生阻滞,这可能为胶质瘤的基因治疗提供了新思路。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

c-Met siRNA 对食管鳞癌细胞CE81T-4生物学特性的影响

[目的]探讨c-Met siRNA对食管鳞癌细胞CE81T-4生物学特性的影响.[方法]利用siRNA技术,采用带有荧光的慢病毒包装的c-Met siRNA稳定转染CE81T-4,并设立转染慢病毒包装的c-Met siRNA的CE81T-4为实验组,转染空慢病毒作为阴性对照,未转染CE81T-4细胞作为空白对照.于荧光倒置显微镜下观察转染效果.采用qRT-PCR检测三组细胞中c-Met mRNA的表达量,Western blot检测c-Met蛋白表达.利用MTT、划痕实验、Transwell及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、周期及凋亡.[结果]转染c-Met siRNA后,荧光倒置显微镜下可见广泛绿色荧光表达;实验组c-Met mRNA的表达量(0.1758±0.0150)显著低于阴性对照组(0.3384±0.0346)和空白对照组(0.3759±0.0252)(P＜0.05).实验组c-Met蛋白表达显影较空白对照组及阴性对照组低;实验组细胞的增殖能力显著降低,与阴性对照组和空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell体外侵袭实验提示实验组的侵袭迁移个数为135±11.79,显著低于空白对照组(186±14.98)及阴性对照组(178±12.53)(P＜0.05).实验组细胞凋亡率(17.87％±1.60％)高于阴性对照组(4.93％±2.49％)及空白对照组(4.37％±1.60％)(P＜0.05).实验组G0/G1期细胞比例(48.57％±4.91％)较阴性对照组(38.13％±3.23％)和空白对照组(37.07％±2.32％)显著增多(P＜0.05).[结论]c-MetsiRNA可增加食管鳞癌细胞的凋亡率,阻滞细胞周期在G0/G1期,降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

IGF-1R对乳腺癌细胞株MDA-MB231细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究IGF-1R基因对乳腺癌细胞株MDA-MB231细胞增殖及迁移能力的影响。方法:将本课题组前期构建的质粒pEGFP-N1-IGF-1R转染入MDA-MB231细胞系,采用Western blot法和Real-time PCR法检测IGF-1R 蛋白与mRNA的表达情况;通过MTT法和Transwell法检测pEGFP-N1-IGF-1R对MDA-MB231细胞增殖及迁移侵袭能力的影响。结果:pEGFP-N1-IGF-1R转染入MDA-MB231细胞后,其IGF-1R的表达水平明显上调;与空白对照组和空载体组相比,过表达组细胞增殖能力明显增强(P＜0.05),细胞迁移能力增强(P＜0.05)。结论:IGF-1R基因能够增强MDA-MB231细胞的增殖能力及迁移能力。     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响

目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.     

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的 研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 siRNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果 肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-siRNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应著（P＜0.05）。细胞周期分析显示：siEZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降（P＜0.05）;凋亡分析显示：siEZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著（P＜0.05）。结论 沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。     

KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌调控机制的研究

目的:检测KAI1/CD82和p-catenin在肾癌组织及细胞中的表达情况,探讨KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌的调控机制.方法:通过Western blotting检测我院近2年收集的30例肾癌及癌旁组织中CD82及β-catenin的表达;构建KAI1/CD82低表达质粒,转染肾透明细胞癌细胞系786-0和OSRC,划痕实验检测细胞迁移能力;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blotting检测β-catenin、Axin2、GSK-3β的表达.结果:肾癌组织中CD82表达低于癌旁组织,β-catenin的表达高于癌旁组织.PLTHR-SHKAI1质粒转染786-0和OSRC后,肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力增强,β-catenin表达增高,Axin2、GSK-3β表达降低.结论:KAI1/CD82和β-catenin在肾癌组织中表达负相关,KAI1抑制肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力;KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路相关上游蛋白调控肾癌的发生、发展和转移.     

二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响

目的:研究二甲双胍（Met）对体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移的影响并探讨其机制。方法:Ishikawa细胞经Met 作用后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;划痕法和Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测胰岛素生长因子-1（IGF-1）的表达水平。结果:经Met处理后,Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制,凋亡率显著增高;随着Met浓度地升高,IGF-1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论:Met可通过下调IGF-1蛋白的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低迁移及侵袭等作用。     

siRNA 干扰胰岛素样生长因子1 受体表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列,转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果,采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞,以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化,以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型,siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01）,同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为,IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。     

胰岛素样生长因子1受体在食管鳞癌组织中的表达及RNA干扰沉默其表达对EC9706细胞增殖能力的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)在食管鳞癌组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系,以及RNA干扰沉默其表达对人食管癌EC-9706细胞体外增殖能力的影响.方法 采用免疫组化法,检测80例食管鳞癌组织和18例正常食管上皮组织中IGF-1R的表达,通过RNA干扰技术沉默EC9706细胞中IGF-1R的表达,通过绘制生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和平板克隆形成试验,观察IGF-1R对细胞体外增殖能力的影响.结果 食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率为86.3%,强阳性率为51.3%;正常食管上皮组织中IGF-1R表达的总阳性率为61.1%,强阳性率为11.1%.食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于正常食管组织(P＜0.01).有淋巴结转移患者组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于无淋巴结转移患者(P＜0.01).IGF-1R的表达随肿瘤组织分化程度的增高而降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同年龄组间IGF-1R表达差异无统计学意义(均P＞0.05).Ⅲ～Ⅳ期患者组织中IGF-IR表达的总阳性率和强阳性率均高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01).稳定干扰后的EC9706细胞IGF-1R蛋白表达下降,生长缓慢,细胞倍增时间较实验对照组和空白对照组延长.培养48 h后,稳定转染细胞抑制率为17.3%,高于实验对照组(2.7%,P＜0.01).稳定转染细胞较实验对照组和空白对照组细胞克隆形成能力减弱(P＜0.05).结论 IGF-1R在食管鳞癌组织中呈高表达,与食管鳞癌的发生、转移、分化程度和临床分期相关;RNA干扰沉默IGF-IR的表达,可以使EC9706细胞的体外增殖能力降低.

Abstract：

Objective To explore the correlation of IGF-1R expression with clinical features of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and to investigate the effect of silencing IGF-1R by siRNA on the proliferation of esophageal cancer cell line EC9706 cells. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expresion of IGF-1R in 80 specimens of ESCC and 18 specimens of normal esophageal mucosa.IGF-I R siRNA was transfected into esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells, and the effect of RNAi was assessed by Western blot. The proliferation of EC9706 cells was determined by drawing growth curve, MTT assay and plate colony-forming assay. Results The total and strong positive rates of IGF-1R expression were 86.3% and 51.3% in ESCC, and 61.1% and 11.1% in normal esophageal epithelium,respectively. The total and strong positive rates of IGF-1 R expression in patients with lymph node metastasis were 94.4% and 74.1%, significantly higher than 69.2% and 3.9%, respectively, in those without lymph node metastasis (P ＜ 0. 01 ). A significantly higher IGF-1 R expression was associated with lower histological grade ( P ＜ 0.05 ). The total and strong rates of IGF-1 R expression in 39 patients of stages Ⅲ and Ⅳ were 97.4% and 71.8%, significantly higher than the 75.6% and 31.7%, respectively, in 41 cases of stages Ⅰ and Ⅱ (P ＜ 0. 01 ). IGF-1 R RNAi significantly inhibited IGF-1R expression and the growth of EC9706cells. The clone formation rate of RNAi-IGF-1R transfected cells was 19.1%, significantly lower than that of 52. 3% in non-transfected cells and 49.0% in empty vector-transfected EC9706 cells ( P ＜ 0.05 ).Conclusions The overexpression of IGF-1R is colerated with lymph node metastasis, differentiation and clinical stage. Down-regulation of IGF-1R can inhibit the proliferation of esophageal cancer EC9706 cells in vitro.     

红景天苷通过miR-99a-5p/IGF-1R信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的:探讨红景天苷调节微小RNA-99a-5p（microRNA-99a-5p,miR-99a-5p）/胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人鼻咽上皮细胞（NP69）、鼻咽癌细胞系（CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2）中miR-99a-5p、IGF-1R信使RNA（mRNA）表达水平;将对数期HNE2细胞分为对照组（常规培养HNE2细胞）、红景天苷低浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入0.5 μg/mL的红景天苷）、红景天苷中浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入1 μg/mL的红景天苷）、红景天苷高浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷）、模拟物（mimics）-NC组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics阴性对照）、miR-99a-5p mimics组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics）、红景天苷高浓度+抑制剂（inhibitor）NC组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor阴性对照）、红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor）。qRT-PCR法检测各组HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平;细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验、蛋白免疫印迹法分别检测HNE2细胞增殖能力、凋亡率、侵袭能力、迁移能力、IGF-1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p与IGF-1R的靶向关系。结果:与NP69细胞相比,CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2细胞系中miR-99a-5p表达水平降低,IGF-1R mRNA表达水平升高（P＜0.05）,其中HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平与NP69细胞差异更明显（P＜0.05）;与对照组相比,红景天苷低、中、高浓度组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率依次升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率依次降低（P＜0.05）;与对照组、mimics-NC组相比,miR-99a-5p mimics组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率降低（P＜0.05）;与红景天苷高浓度组、红景天苷高浓度+inhibitor NC组相比,红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率降低（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率升高（P＜0.05）;miR-99a-5p与IGF-1R存在靶向关系。结论:红景天苷可能通过促进miR-99a-5p表达,靶向抑制IGF-1R表达,参与抑制HNE2细胞增殖、侵袭、迁移,并促进HNE2细胞凋亡。     

靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法.本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:设计并合成特异性靶向IGFIR的siRNA片段,构建SMMC7721-IGFlR-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞.通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤.同时设立对照组.根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Western blot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721.IGF1R-mutation 组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P＜0.05).SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation 组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调.SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P＜0.05).结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长.     

miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-1180-5p（miR-1180-5p）对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法：合成dsControl （dsControl 组）和miR-1180-5p（miR-1180-5p 组）,分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR 和Western blotting 分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1 和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell 实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果：qPCR结果显示,相比dsControl,转染miR-1180-5p 后VCAP 和LNCaP 细胞中CDKN1A mRNA 表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1 和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01)。Western blotting 与qPCR 结果相符。转染miR-1180-5p 后VCAP和LNCaP 位于G0/G1 期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S 期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1 期。转染miR-1180-5p 后,两种前列腺癌细胞增殖活力较dsControl 组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p 组两种细胞的克隆数量明显较少（P<0.01）,同时miR-1180-5p 组两组细胞迁移和侵袭能力均下降（P<0.01）。结论：miR-1180-5p 能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。     

lncRNA NONHSAT113026在肾透明细胞癌中的表达及功能

目的:本研究旨在探讨lncRNA NONHSAT113026（lncRNA 026）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）组织中的表达及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分别在83例肾透明细胞癌和对应癌旁组织、肾癌细胞株786-O及ACHN中检测lncRNA 026的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理参数的相关性。通过慢病毒载体技术构建稳定过表达lncRNA 026的肾癌细胞786-O及ACHN,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白印迹法（Western blot）分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁组织相比,lncRNA 026在ccRCC组织中的表达水平显著下调（P＜0.000 1）;在肾癌细胞786-O和ACHN中过表达lncRNA 026能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）;Western blot结果显示,过表达lncRNA 026可下调PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt、GSK-3β的表达（P＜0.01）。结论:lncRNA 026在肾透明细胞癌组织中低表达,并且过表达lncRNA 026能显著降低肾癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。提示lncRNA 026在肾癌中发挥了重要作用,有望成为治疗肾癌的潜在药物作用靶点。     

PRC1通过激活Wnt/β-catenin途径促进胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成

目的:探讨胞质分裂原蛋白调节因子-1（protein regulator of cytokinesis-1,PRC1）对胶质母细胞瘤的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR和Western blot检测胶质母细胞瘤组织和正常脑组织中PRC1的表达;人胶质母细胞瘤细胞株U251转染siRNA-NC和siRNA-PRC1序列,RT-PCR检测细胞中PRC1 mRNA表达;Western blot检测细胞中PRC1、Wnt1、β-catenin和CyclinD1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;血管生成实验检测血管生成。结果:与正常组织相比,癌组织中PRC1 mRNA和蛋白表达升高（P＜0.001）;与siRNA-NC组相比,siRNA-PRC1组细胞在24 h、48 h及72 h的细胞增殖能力降低（P＜0.01）,G0/G1期细胞含量升高（P＜0.05）,S和G2/M期细胞含量降低（P＜0.05）,细胞迁移数和侵袭数降低（P＜0.01）,内皮细胞管道形成数降低（P＜0.001）,Wnt1、β-catenin和CyclinD1蛋白表达降低（P＜0.01）。结论:PRC1在胶质母细胞瘤组织中表达上调,PRC1可能通过促进Wnt/β-catenin途径活化,促进胶质母细胞瘤细胞增殖、细胞周期进程、迁移、侵袭和血管生成。