lncRNA NONHSAT113026在肾透明细胞癌中的表达及功能

目的:本研究旨在探讨lncRNA NONHSAT113026（lncRNA 026）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）组织中的表达及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分别在83例肾透明细胞癌和对应癌旁组织、肾癌细胞株786-O及ACHN中检测lncRNA 026的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理参数的相关性。通过慢病毒载体技术构建稳定过表达lncRNA 026的肾癌细胞786-O及ACHN,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白印迹法（Western blot）分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁组织相比,lncRNA 026在ccRCC组织中的表达水平显著下调（P＜0.000 1）;在肾癌细胞786-O和ACHN中过表达lncRNA 026能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）;Western blot结果显示,过表达lncRNA 026可下调PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt、GSK-3β的表达（P＜0.01）。结论:lncRNA 026在肾透明细胞癌组织中低表达,并且过表达lncRNA 026能显著降低肾癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。提示lncRNA 026在肾癌中发挥了重要作用,有望成为治疗肾癌的潜在药物作用靶点。     

mir-27a、mir-200c及mir-145对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:探讨microRNA的表达在两种人肾癌细胞侵袭能力中的差异,为研究肾癌转移机制提供线索。方法:Transwell小室法检测两种人肾透明细胞癌细胞786-0、Caki-1侵袭能力差异。Real-time quantitativePCR方法检测两种细胞中mir-27a、mir-200c、mir-145表达水平。建立786-0及Caki-1细胞的裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠786-0及Caki-1细胞移植瘤中mir-27a、mir-200c、mir-145可能调控的相应下游细胞黏附分子CD44、E-cadherin、β-catenin表达水平。结果:786-0细胞穿过Transwell小室的微孔膜的细胞数(196.8±4.9)明显高于Caki-1细胞(166.8±7.1)。786-0细胞中mir-27a、mir-200c、mir-145表达较Caki-1细胞明显升高。观察8周,786-0及Caki-1细胞在5×106/只的细胞数量下成瘤率为100%。CD44在裸鼠786-0细胞移植瘤中表达明显高于裸鼠Caki-1细胞移植瘤,β-catenin、E-cadherin在两种细胞裸鼠移植瘤中表达无明显差异。结论:mir-27a可能通过影响下游细胞黏附分子CD44的表达,影响肾癌细胞的侵袭能力,而mir-200c和mir-145影响肾癌侵袭能力的途径尚有待研究。     

mir-27a、mir-200c及mir-145对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨microRNA的表达在两种人肾癌细胞侵袭能力中的差异,为研究肾癌转移机制提供线索。方法：Transwell小室法检测两种人肾透明细胞癌细胞786-0、Caki-1侵袭能力差异。Real-time quantitativePCR方法检测两种细胞中mir-27a、mir-200c、mir-145表达水平。建立786-0及Caki-1细胞的裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠786-0及Caki-1细胞移植瘤中mir-27a、mir-200c、mir-145可能调控的相应下游细胞黏附分子CD44、E-cadherin、β-catenin表达水平。结果：786-0细胞穿过Transwell小室的微孔膜的细胞数（196.8±4.9）明显高于Caki-1细胞（166.8±7.1）。786-0细胞中mir-27a、mir-200c、mir-145表达较Caki-1细胞明显升高。观察8周,786-0及Caki-1细胞在5×106/只的细胞数量下成瘤率为100%。CD44在裸鼠786-0细胞移植瘤中表达明显高于裸鼠Caki-1细胞移植瘤,β-catenin、E-cadherin在两种细胞裸鼠移植瘤中表达无明显差异。结论：mir-27a可能通过影响下游细胞黏附分子CD44的表达,影响肾癌细胞的侵袭能力,而mir-200c和mir-145影响肾癌侵袭能力的途径尚有待研究。     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

Axin抑制A549细胞迁移能力及其机制的研究

目的:Wnt信号传导通路的异常激活在肿瘤发生和发展中起着重要的作用,而Axin可以通过参与形成降解复合体下调β-catenin负向调控Wnt通路,抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为。本次实验的目的是研究Axin对肺癌细胞迁移能力的影响及可能的途径。方法:在已有野生型Axin质粒的基础上构建了突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变,用AxinΔβ-ca表示),并向A549细胞中转染野生型Axin和突变型Axin。Western blot法检测转染后Axin和β-catenin的表达。用各转染组细胞进行划痕实验和Tr-answell细胞迁移实验。结果:转染野生型Axin可以明显的下调A549中β-catenin的表达(P<0.01),抑制A549细胞的迁移能力(P<0.01),而转染突变型Axin和空质粒后A549细胞中β-catenin没有明显的变化,细胞的迁移能力未受到明显的影响。结论:体轴抑制因子Axin可以明显的抑制肺癌细胞的迁移能力。而这种作用可能与其负向调控Wnt通路有关。Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。     

鞘磷脂合成酶2通过Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌TOV-21G细胞的恶性生物学行为

目的：探讨鞘磷脂合成酶2(SMS2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌（OC）TOV-21G细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及其机制。方法：收集武汉市第三医院2022年7月至2023年5月间确诊的21例OC患者的癌及癌旁组织标本,免疫组化法检测OC组织SMS2表达水平。体外培养TOV-21G细胞,将细胞分为对照组、shRNA慢病毒阴性对照组（sh-NC组）、SMS2 shRNA慢病毒组（sh-SMS2组）、Wnt/β-catenin通路激活剂组LiCl(LiCl组)和sh-SMS2+LiCl组。Edu染色法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力及凋亡水平,WB法检测细胞中SMS2、Ki67、cyclin D1、BAX、c-caspase3、Bcl-2及Wnt/β-catenin通路蛋白（β-catenin、c-Myc、MMP-9）的表达。构建TOV-21G细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低SMS2对移植瘤生长和SMS2、β-catenin表达的影响。结果：与癌旁组织比较,OC组织中SMS2呈高表达（P<0.01）。转染sh-SMS2后,TO...     

HER-2对胃癌细胞生物学行为及EMT、Wnt通路的影响

目的 探讨人表皮生长因子受体-2(HER-2)的表达对胃癌细胞粘附、迁移等生物学行为的影响，并探讨其表达与上皮间质转化(EMT)及Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用小干扰RNA技术，在SGC-7901胃癌细胞中沉默HER-2表达；采用实时荧光定量PCR (qPCR)及Western blotting法验证HER-2的沉默效果，并将实验分为空白组、空载体组和HER-2沉默组；采用MTT比色法检测细胞粘附能力，Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力；qPCR和Western blotting法检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail及Wnt/β-catenin信号通路GSK-3β、β-catenin、c-Myc的mRNA和蛋白表达情况。结果 HER-2沉默组中HER-2 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空载体组(P<0.001),而空白组和空载体组的差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组和空载体组比较，HER-2沉默组胃癌细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降(P<0.001)。HER-2沉默组胃癌细胞Vi...     

Axin通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞系增殖

目的:前期研究发现转染Axin能抑制A549细胞的增殖能力,本研究目的是探讨Axin抑制A549细胞增殖能力的机制。方法:我们构建了野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变)转染A549细胞,并应用GSK-3βsiRNA处理细胞,Western bolt检测各处理组β-catenin和cyclin D1的变化,MTT检测各处理组细胞增殖能力的变化。结果:转染野生型Axin能够明显地下调β-catenin和cyclin D1(P<0.01),抑制Wnt通路活性和A549细胞的增殖(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能;转染突变型Axin不能有效的下调Wnt通路或A549细胞的增殖能力。结论:Axin主要是通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞的增殖。Axin可能成为未来治疗肺癌的新靶点。     

KAI1 / CD82 和 MMP - 7 在多原发结直肠癌中的表达及临床意义简

目的：探讨KAI1／CD82和MMP-7的表达与多原发结直肠癌浸润、转移的关系。方法：应用免疫组织化学法检测KAI1／CD82和MMP-7在27例多原发结直肠癌及36例单发结直肠癌组织中的表达。结果：多原发结直肠癌组KAI1／CD82阳性表达率为76．7％,单发结直肠癌组KAI1／CD82阳性表达率为50．0％,两组有显著性差异（P〈0．05）。多原发结直肠癌组MMP-7阳性表达率为60．5％,单发结直肠癌组MMP-7阳性表达率为83．3％,两组有显著性差异（P〈0．05）。多原发结直肠癌组和单发结直肠癌组KAI1／CD82、MMP-7的阳性表达率在TNM分期、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移方面差异均有显著性意义。结论：KAI1／CD82、MMP-7的表达与结直肠癌的分期、分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关。多原发结直肠癌的浸润、转移与KAI1／CD82和MMP-7的异常表达有关,它们可能协同作用,抑制肿瘤的侵袭和转移能力而促进多原发结直肠癌的发生。     

钙结合蛋白S100A6对Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的研究钙结合蛋白S100A6对Wnt／β-catenin信号途径的影响及其机制。方法异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达、谷胱甘肽-琼脂糖球珠分离纯化融合蛋白GST-hS100A6；Westernblot和荧光素酶活性分析法检测S100A6对细胞内B—catenin水平和B—catenin／T细胞因子4（TCF4）活性的影响；GST-pulldown和Westernblot技术研究S100A6与该信号途径主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、Dvl和Axin之间的相互作用。结果S100A6可致MG63和HCT1 16细胞β—catenin水平升高，并可使HEK293细胞β—catenin／TCF4活性增强；S100A6与β—catenin、GSK-36和Dvl之间存在着直接的相互作用，而与Axin之间无相互作用。结论S100A6能够增强Wnt／β-catenin信号途径的活性，其机制可能涉及S100A6与该途径重要成员β—catenin、GSK-3β和Dvl之间存在着直接的相互作用有关。     

KAI1／CD82 mRNA和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的 探讨KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化SP法检测70例鼻咽癌和30例正常鼻咽部组织中KAI1／CD82蛋白的表达情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测28例鼻咽癌和15例正常鼻咽部新鲜组织中KAI1／CD82 mRNA的表达情况。分析KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白的表达与临床病理特征之间的关系。结果 KAI1／CD82 mRNA在鼻咽癌组织中的阳性表达率为42.9％（12／28）,低于正常鼻咽部组织中的73.3％（11／15）,差异无统计学意义（P＞0.05）;KAI1／CD82蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率为44.3％（31／70）,低于正常鼻咽部组织中的700％（21／30）,差异有统计学意义（P＜0.05）。KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白在鼻咽癌组织中的表达与患者的性别、年龄、病理类型、T分期均无关（P＞0.05）,而与淋巴结转移有关。KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白在无淋巴结转移组中的阳性表达率分别为85.7％和68.4％,明显高于淋巴结转移组的28.6％和35.3％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白在N1、N2、N3亚组间表达率的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 KAI1／CD82 mRNA和CD82蛋白在鼻咽癌组织中表达下调,该基因可以抑制鼻咽癌发生、发展及淋巴结转移,有望作为鼻咽癌诊断和预后判定的一种有效分子标记物。     

IGF-1R表达下调抑制肾癌786-0细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期G1/S期转变

目的:观察小干扰RNA (siRNA)介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对肾癌细胞786-0增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响.方法:采用实时定量PCR(real-time PCR)和蛋白印迹法(West-ern blot)测定转染后肾癌细胞IGF-lR及下游相关产物的表达;采用Cell counting kit-8(CCK-8)检测细胞增殖能力;Transwell实验及划痕实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变.结果:IGF-1R基因的siRNA可有效抑制IGF-1R mRNA及蛋白的表达(P＜0.01);细胞增殖实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组增殖能力显著减弱(P＜0.01);Transwell实验及划痕实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组侵袭及迁移能力明显降低(P＜0.01);流式细胞术检测到转染后细胞G1期细胞数明显升高,发生G1/S期阻滞(P＜0.05);IGF-1R下游蛋白p-IRS1、p-IRS2、p-SHC水平显著降低.结论:IGF-1R表达下调可以抑制肾癌786-0细胞的生长、增殖、迁移和侵袭的能力,并可以使肾癌786-0细胞G1/S期细胞周期停滞.