血小板反应蛋白1反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导大鼠心肌纤维化

目的 观察血小板反应蛋白1（TSP-1）反义寡核苷酸在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法 差速贴壁法分离新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。反义、正义、TSP-1寡核苷酸与TGF-β1(20?g/L)共培养24h ,采用MTT法测CFs生长数目,羟脯氨酸法测胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1和VEGF的mRNA表达。结果TGF-β1可以明显促进CFsTSP-1mRNA的表达且呈浓度-时间依赖性(P<0.01)。VEGFmRNA的表达呈浓度-时间依赖性降低(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的MTT A 值、胶原蛋白含量减少，VEGF的表达明显增高(P<0.01)。结论TSP-1反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成和升高VEGF的表达。TSP-1反义寡核苷酸可能具有抗心肌纤维化的作用。     

血小板反应蛋白1在转化生长因子β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞中的作用

目的:观察血小板反应蛋白1(TSP-1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用.方法:差速贴壁法分离新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纤维细胞(CFs).MTT法测CFs生长,羟脯氨酸法测CFs胶原含量,RT-PCR法测TSP-1mRNA表达.结果:TGF-β1诱导CFs TSP-l的表达呈浓度一时间依赖性增加(P<0.01).TGF-β1(20ug/L)作用下24 h可诱导CFs增殖和胶原合成(P<0.01).TSP-l反义寡核苷酸作用后的CFs的MTTA值、胶原含量减少(P<0.01).结论:TGF-β1可诱导新生大鼠CFs TSP-1表达,TSP-1反义寡核苷酸对TGF-β1诱导大鼠CFs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用,TSP-1在TGF-β1诱导大鼠心肌纤维化中可能具有重要的作用.     

血小板反应蛋白1在转化生长因子β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞中的作用

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP-1）在转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法: 差速贴壁法分离新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。MTT法测CFs生长,羟脯氨酸法测CFs胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1mRNA表达。结果: TGF-β₁诱导CFs TSP-1的表达呈浓度-时间依赖性增加(P<0.01)。TGF-β₁（20 μg/L）作用下24 h可诱导CFs增殖和胶原合成(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的CFs的MTT A值、胶原含量减少(P<0.01)。结论: TGF-β₁可诱导新生大鼠CFs TSP-1表达,TSP-1反义寡核苷酸对TGF-β1诱导大鼠CFs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用,TSP-1在TGF-β₁诱导大鼠心肌纤维化中可能具有重要的作用。     

PPAR-γ激活抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞Ets-1表达

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)激活对心肌纤维化的影响是否与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)-Ets-1通路有关。方法体外培养大鼠心脏成纤维细胞(CFs),分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+不同浓度rosiglitazone处理组、AngⅡ+不同PPAR-γ激动剂组、AngⅡ+不同PPAR-γ拮抗剂组,采用实时定量RT-q PCR、Western blot等检测Ets-1、CTGF mRNA及蛋白表达,并测定TGF-β1和Smad2/3的表达及磷酸化水平。结果在CFs中,AngⅡ诱导Ets-1 mRNA及蛋白表达(P0.05),上调Ets-1下游靶基因CTGF的蛋白的表达(P0.05),增加TGF-β1和Smad2/3的表达及磷酸化(P0.05)。PPAR-γ激动剂rosiglitazone,15d-PGJ2抑制AngⅡ诱导的Ets-1 mRNA及蛋白的表达(P0.05),下调AngⅡ诱导的CTGF蛋白表达(P0.05),部分阻断AngⅡ诱导的TGF-β1的表达、Smad2/3的表达及磷酸化(P0.05)。PPAR-γ拮抗剂GW9662及BADGE均可阻断rosiglitazone对Ets-1及CTGF表达的抑制作用(P0.05)。结论 PPAR-γ激活主要通过TGF-β1/Smad2/3通路介导抑制AngⅡ诱导的大鼠CFs转录因子Ets-1的过表达。     

PLGF参与Ang II诱导的心脏成纤维细胞激活

 目的：探讨胎盘生长因子（PLGF）在血管紧张素II（Ang II）激活心脏成纤维细胞(CFs)中的表达及其作用。方法：原代分离培养并鉴定新生SD大鼠CFs。蛋白免疫印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、PLGF和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),免疫荧光观察α-SMA的表达,WST-1法检测细胞增殖,RT-PCR检测PLGF、I型和III型胶原蛋白的mRNA表达水平。结果：(1)Ang II组PLGF mRNA 表达明显高于对照组（P<0．01),联用替米沙坦后,PLGF mRNA表达水平下降;Ang  II组PLGF蛋白表达水平高于对照组（P<0.05); (2)PLGF诱导CFs增殖及α-SMA蛋白表达增加（P<0.05）;PLGF干预CFs 60 min后,p-ERK1/2蛋白水平表达明显高于对照组（P<0.01);(3)Ang II+anti-PLGF组与Ang II组比较,细胞增殖和α-SMA蛋白表达水平下降（P<0.05）,I型和III型胶原蛋白mRNA表达水平亦下调（P<0.05）。结论：PLGF可能参与Ang II诱导的CFs增殖和纤维化过程。     

Intermedin_(1-53)抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞合成胶原

目的探讨IMD1-53对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原代谢的调节作用。方法培养新生SD大鼠心肌成纤维细胞,将其分成对照组、AngⅡ+不同浓度IMD1-53组。Westem blot法检测心肌成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达。SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测IMD1-53受体样受体(CRLR)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达。结果 IMD1-53呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白(P0.01,P0.05)。IMD1-53呈剂量依赖抑制成纤维细胞TGF-β表达(P0.05)。结论 IMD1-53抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞胶原的合成,下调TGF-β表达,可能与IMD1-53抗心肌纤维化作用有关。     

大蒜素对心肌纤维化的影响及对TLR4/NF-κB信号通路的作用

目的:研究大蒜素对AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原蛋白分泌的作用,并探讨其对TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用体外AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖模型,用MTT法检测细胞增殖能力,采用ELISA法观察细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的分泌,采用RT-PCR技术测定TLR4和NF-κB mRNA的表达,采用Western blot法检测TLR4和NF-κB蛋白的表达。结果:(1)大蒜素可以抑制AngⅡ诱导CF增殖,并且具有剂量依赖性(P0.01);(2)大蒜素可以抑制AngⅡ诱导CF分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白,并且具有剂量依赖性(P0.01);(3)大蒜素可以抑制AngⅡ诱导CF表达TLR4和NF-κB mRNA;(4)大蒜素可以抑制AngⅡ诱导CF表达TLR4和NF-κB蛋白。结论:大蒜素可通过抑制心肌成纤维细胞增殖和减少胶原蛋白分泌而具有潜在的抗心肌纤维化作用,其作用可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

circRNA001131通过结合miR-25-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circRNA表达谱的变化。RT-qPCR检测AAC大鼠心肌及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠CFs中circRNA001131的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA001131的稳定性。利用重组circRNA001131腺病毒(rAd-circRNA001131)感染大鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验验证circRNA001131与miR-25-3p的结合作用。结果:RT-qPCR结果证实,circRNA001131在AAC手术诱导的大鼠心肌和Ang-Ⅱ处理的大鼠CFs中表达增强。放线菌素D和RNase R实验结果显示,circRNA001131与其宿主基因--第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)mRNA相比,降解水平明显降低。过表达circRNA001131可显著抑制大鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1和Col3a1的表达。双萤光素酶报告基因实验证实circRNA001131与miR-25-3p间存在结合作用,miR-25-3p可以减弱circRNA001131对大鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:circRNA001131在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-25-3p发挥抑制心肌纤维化的作用。     

TXNIP通过诱导氧化应激促进心肌纤维化的发生（英文）

目的:探讨硫氧还蛋白-互作蛋白(TXNIP)在心肌纤维化发生过程中的表达变化及其潜在调节机制。方法:通过皮下泵入血管紧张素(Ang)II建立心肌纤维化小鼠模型,Western blot检测TXNIP在心肌纤维化小鼠和假手术组小鼠心肌组织中的表达差异。分离和培养新生大鼠的心肌成纤维细胞(CFs),外源性使用人重组Ang II和(或)losartan处理CFs,用Westernblot和细胞免疫荧光检测TXNIP表达的变化。构建TXNIP的小干扰RNA(si RNA),利用细胞划痕实验、结晶紫染色、Western blot以及细胞活性氧簇探针等多种方法检测TXNIP对Ang II刺激状态下CFs迁移、纤维激活相关蛋白[Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)、波形蛋白(vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]表达、氧化应激及MAPK信号通路的影响。结果:TXNIP在心肌纤维化小鼠的心肌组织中表达上调。Ang II可浓度和时间依赖性地促进CFs中TXNIP表达上调,这种效应可以被losartan完全抵消。敲减TXNIP可以显著抑制Ang II诱导的CFs迁移及Col Ⅰ、Col Ⅲ、vimentin和α-SMA表达升高。此外,敲减TXNIP可以抑制Ang II诱导的细胞氧化应激和MAPK信号通路激活。结论:TXNIP可能通过MAPK信号通路诱导CFs发生氧化应激,进而促进心肌纤维化的发生;TXNIP可能成为治疗心肌纤维化的新靶点。     

肝细胞生长因子激活胶原降解途径逆转心肌纤维化

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导下新生大鼠心肌成纤维细胞胶原合成降解平衡的影响.方法 差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CF),并用细胞免疫组织化学进行鉴定.实验分为正常对照组(C组)、Ang II 10-6mol/L组(A组)、HGF 10μg,L+AngⅡ10-6 mol/L组(H1组)、HGF 100μg/L+AngⅡ 10-6 mol/L组(H2组).作用48 h后采用羟脯氨酸法测胶原蛋白含量,RT-PCR法测Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋ca酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的表达;Westernblotting 4col Ⅰ蛋白水平的表达.用Ⅰ型胶原酶活性检测试剂盒测MMP-1的活性.结果 作用48 h后,A组、H1组胶原蛋白含量较C组增加[(39.08±2.71)mg/L比(37.45±4.22)mg/L比(23.73±1.62)ms/L,均P＜0.05],H2组胶原蛋白含量(26.03±3.04)mg/L则低于A组、Hl组(P＜0.05),与C组差异无统计学意义.在mRNA水平上ColⅠ、col Ⅲ、TIMP-1的表达A组＞H1组＞H2组＞C组(均P＜0.05),而MMP-1 mRNA表达A组＜H1组＜H2组＜C组(均P＜0.05).Col Ⅰ蛋白水平A组＞H1组＞H2组＞C组(89.90±14.29比68.21±11.43比36.08±8.8比30.14±7.36,均P＜0.05).A组、H1组MMP-1 mRNA表达量及活性水平较C组明显降低(均P＜0.05),H2组则基本恢复到C组水平.结论 HGF主要通过激活胶原降解途径,重调MMP-1.TIMP-1平衡,逆转心肌纤维化.     

Rho激酶在血管紧张素Ⅱ刺激大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的： 探讨Rho激酶在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（CFBs）增殖和胶原合成中的作用。方法： 采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生Sprague-Dawley (SD) 大鼠CFBs，并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量, RT-PCR检测Rho激酶mRNA表达，Western blotting检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。结果：（1）AngⅡ（10-７ mol/L）刺激48h可诱导CFBs增殖和胶原合成(均P<0.01)；（2) AngⅡ（10-7 mol/L）可显著上调新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA表达并诱导Rho激酶快速活化；（3）在一定浓度范围内，Rho激酶特异性抑制剂hydroxyfasudil (H4413)对AngⅡ（10-7 mol/L）刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论： AngⅡ可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA转录并活化Rho激酶，抑制Rho激酶活化对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用，提示Rho激酶在调控AngⅡ刺激大鼠CFBs增殖与胶原合成中可能具有重要作用。     

PAX6抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞转分化

目的:探讨配对盒因子6(PAX6)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)转分化中的作用及其机制。方法:培养原代成年小鼠CFs,用Ang Ⅱ(10-6mol/L)建立CFs转分化模型,利用小鼠PAX6腺病毒载体感染小鼠CFs;实验分为Ad-GFP+Ctrl组(感染对照腺病毒)、Ad-GFP+Ang Ⅱ组(感染对照腺病毒再给予Ang Ⅱ处理)、Ad-PAX6+Ctrl组(感染过表达PAX6腺病毒)和Ad-PAX6+Ang Ⅱ组(感染过表达PAX6腺病毒再给予Ang Ⅱ处理)。倒置荧光显微镜下观察CFs感染后荧光表达情况;采用Western blot检测CFs中PAX6、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达;固定细胞免疫荧光技术检测α-SMA、Col I和FN的表达与分布;qPCR检测PAX6和TGFβ1的mRNA表达。结果:(1)倒置荧光显微镜下观察腺病毒载体感染CFs成功,qPCR和Western blot证明CFs中PAX6过表达成功(P<0.01);(2)在Ang Ⅱ作用下,CFs中肌成纤维细胞标志物α-SMA显著升高,而过表达PAX6显著抑制Ang Ⅱ诱导的α-SMA表达(P<0.01);(3)过表达PAX6显著抑制CFs中Ang Ⅱ诱导的细胞外基质蛋白Col I和FN的表达与分泌(P<0.05);(4)在Ang Ⅱ处理后,TGFβ1的mRNA和蛋白表达显著升高,而过表达PAX6显著抑制Ang Ⅱ诱导的CFs中TGFβ1的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:PAX6通过抑制TGFβ1的表达从而抑制Ang Ⅱ诱导的CFs转分化及细胞外基质蛋白的表达与分泌。     

CaMKⅡ抑制剂抑制AngⅡ或电场刺激诱导的心肌成纤维细胞TNF-α、TGF-β_1及collagenⅠ、Ⅲ的表达

目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或电场刺激(EFS)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌细胞因子及胶原酶表达中的作用及其机制。方法:培养新生1-3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(control)、0.1μmol/L AngⅡ组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN92组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN93组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂AIP组;10 V1.0 Hz EFS组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN92组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN93组、10 V1.0 Hz EFS+0.5μmol/L AIP组、10 V1.0 Hz EFS+0.1μmol/L AngⅡ组。MTT法测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子(TGF-β1,TNF-α)分泌;RT-PCR检测TGF-β1、TNF-α、collagenⅠ、ⅢmRNA水平。结果:CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)能预防AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖;CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)可预防AngⅡ或EFS引起的细胞培养上清液TGF-β1、TNF-α含量及相应mRNA表达增加。CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L AIP,1.0μmol/L AIP)预防0.1μmol/L AngⅡ引起的collagenⅠ、Ⅲ表达增加。结论:抑制CaMKⅡ对AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖具有预防作用,其机制可能与CaMKⅡ抑制剂抑制TGF-β1、TNF-α以及胶原的表达有关。     

Zacopride对血管紧张素Ⅱ诱发的心肌纤维化的影响

目的:研究内向整流钾通道(IK1)激动剂扎考必利(zacopride,Zac)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)细胞活力和凋亡的影响,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法:以组织块消化和差速贴壁法原代分离培养SD乳鼠心室成纤维细胞,用AngⅡ诱导细胞建立细胞活化模型。将分离培养的CFb随机分为空白对照组、AngⅡ模型组、Zac干预组、Zac+Ba Cl2干预组、Zac+氯喹干预组和AngⅡ+卡托普利阳性对照组。CCK-8法检测Zac对CFb活力的影响;ELISA法测定CFb上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测心肌内向整流钾通道蛋白Kir2.1表达的变化。结果:与空白对照组比较,AngⅡ模型组CFb活力及胶原合成显著增加,Kir2.1的表达降低(P0.05);与AngⅡ模型组比较,Zac干预组CFb活力及胶原合成显著降低,凋亡率显著升高,Kir2.1的表达明显上调(P0.05);IK1阻断剂Ba Cl2和氯喹可阻断Zac对IK1通道的激动效应,明显逆转Zac的抗心肌纤维化作用。结论:Zac可明显抑制AngⅡ诱发的心肌纤维化,其机制可能与激动心肌内向整流钾通道,进而抑制成纤维细胞活力并诱导其凋亡有关。     

miR-219与TGFBR2的调控关系在肾脏纤维化中的作用

目的:研究微小RNA-219(miR-219)通过靶向调控转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)在肾脏纤维化中发挥的作用。方法:收集2017年9月～2018年3月于我院就诊的70例肾脏纤维化患者,选取同期来本院体检的20例健康人设为对照组,RT-qPCR检测肾脏纤维化患者及对照组血清中miR-219的表达水平,并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肾成纤维细胞NRK49F后miR-219的表达水平。Western blot检测转染miR-219模拟物(miR-219 mimics)的NRK49F细胞在AngⅡ刺激后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达情况。筛选出miR-219的潜在靶基因TGFBR2,并通过萤光素酶报告基因法进行验证。RT-qPCR和Western blot检测miR-219 mimics对TGFBR2的mRNA及蛋白表达的影响。RT-qPCR检测miR-219 mimics对α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和COL3A1的mRNA表达水平的影响。构建单侧输尿管闭塞(UUO)小鼠模型并检测其肾脏组织中miR-219的表达水平,对UUO小鼠注射miR-219后观察肾脏纤维化的变化情况,并检测COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平。结果:肾脏纤维化患者血清中miR-219的表达水平明显低于对照组,UUO小鼠肾脏组织中miR-219的表达显著下降(P0.01);AngⅡ刺激NRK49F细胞后miR-219的表达水平明显降低,且miR-219 mimics可抑制α-SMA蛋白的表达(P0.01);miR-219 mimics对TGFBR2具有靶向调控作用,可抑制TGFBR2的mRNA及蛋白表达;miR-219 mimics可抑制α-SMA、CTGF、COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平;miR-219可下调UUO小鼠中COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平并抑制其肾脏纤维化进程。结论:miR-219可通过抑制TGFBR2的表达从而抑制肾脏纤维化的发展,可能成为肾脏纤维化诊断及治疗的新靶点。     

Angiotensin II induces connective tissue growth factor gene expression via calcineurin-dependent pathways

Connective tissue growth factor (CTGF) is a polypeptide implicated in the extracellular matrix synthesis. Previous studies have provided evidence that angiotensin II (Ang II) promotes collagen synthesis and regulates collagen degradation. We investigated whether or not CTGF mediates the profibrotic effects of Ang II in the heart and kidneys and the role of calcineurin-dependent pathways in CTGF gene regulation. In transgenic rats harboring human renin and angiotensinogen genes, Ang II induced an age-dependent increase in myocardial CTGF expression, which was 3.5-fold greater compared to normotensive Sprague Dawley (SD) rats. CTGF overexpression correlated closely with the Ang II-induced rise in blood pressure. CTGF mRNA and protein were located predominantly in areas with leukocyte infiltration, myocardial, and vascular lesions and co-localized with TGFbeta(1), collagen I, and collagen III mRNA expressions. Ang II induced CTGF mRNA and protein to a lesser extent in the kidneys, predominantly in glomeruli, arterioles, and in the interstitium with ample inflammation. However, no expression was found in the right ventricle or pulmonary arteries. Blockade of calcineurin activity by cyclosporine A completely normalized Ang II-induced CTGF overexpression in heart and kidney, suppressed the inflammatory response, and mitigated Ang II-induced cell proliferation and apoptosis. In contrast, blockade of mTOR (target of rapamycin) pathway by everolimus, further increased the expression of CTGF even though everolimus ameliorated cell proliferation and T-cell-mediated inflammation. Our findings provide evidence that CTGF mediates Ang II-induced fibrosis in the heart and kidneys via blood pressure and calcineurin-dependent pathways.     

血管紧张素(1-7)通过抑制中电导钙激活钾离子通道蛋白表达参与肾脏纤维化

目的 探讨血管紧张素（Ang）（1-7）在肾纤维化过程中的保护作用与中电导钙激活钾离子通道（KCa3.1）的关系。 方法 60只雄性小鼠随机分为5组：对照组 (WT)；血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）组：皮下注射 Ang Ⅱ ［1.4 mg/(kg.d)］；注射Ang Ⅱ 的同时给予以下药物干预： Ang Ⅱ阻断剂 洛沙坦（Losartan）组：皮下注射 Losartan［40 mg/(kg.d)］； Ang（1-7）组：皮下注射 Ang（1-7）［0.14 mg/(kg.d)］；血管紧张素转化酶2（ACE2）激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐（DIZE）组：皮下注射DIZE［10 mg/(kg.d)］。连续给药4周后对相关指标进行检测。Masson染色法检测肾组织胶原沉积变化；Western blotting法检测肾组织 Ⅰ 型胶原、Ⅲ 型胶原和 KCa3.1通道蛋白表达的变化。 结果 与对照组相比，Ang Ⅱ组小鼠肾组织内胶原沉积量明显增加（n=12，P<0.01），表明肾纤维化模型复制成功。Ang Ⅱ使肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成显著增多（n=6，P<0.01），同时促进了肾组织KCa3.1通道蛋白的表达（P<0.01），而Ang （1-7）及ACE2激活剂 DIZE 的应用抑制了肾组织内胶原沉积量、Ⅰ/Ⅲ型胶原合成及KCa3.1通道蛋白的表达（n=12或6，P<0.01）。结论 Ang （1-7）在肾纤维化过程中发挥保护作用，这一作用可能与其下调肾组织中KCa3.1通道蛋白表达有关。     

JNK信号通路介导高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖

 目的 明确c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在高糖诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 提取大鼠原代心肌成纤维细胞,观察不同糖浓度（12、18和25 mmol/L葡萄糖）和不同刺激时间（0、12、24和48 h）对JNK通路的影响。实验分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、JNK抑制剂SP600125组（25 mmol/L葡萄糖+SP600125 10、20 μmol/L）和高渗组（5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇）培养48 h,应用MTT测定细胞增殖、Weastern blot测定JNK磷酸化水平和增殖细胞核抗原（PCNA）的蛋白表达、RT-PCR检测c-jun基因表达。结果 高糖呈时间和剂量依赖性增加JNK磷酸化水平。与对照组比较,高糖显著地促进了心肌成纤维细胞的增殖（0.44±0.02 vs 0.31±0.02, P<0.01）,并上调了c-jun的基因表达和PCNA蛋白水平。 SP600125能够浓度依赖性地抑制高糖诱导的细胞增殖和JNK通路的激活。结论 JNK信号通路部分地介导了高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖。