PGE2通过上调CXCR4表达促进SKOV3细胞侵袭的机制研究

目的:探讨前列腺素E2(PGE2)上调人卵巢癌SKOV3细胞CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的表达从而促进细胞侵袭能力的机制?方法:用PGE2?EP1受体激动剂或抑制剂?CXCR4抑制剂?蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理SKOV3细胞,通过real-time PCR?Western blot?Transwell实验检测CXCR4 mRNA水平?蛋白水平以及细胞的侵袭能力?结果:5 μmol/L PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了60.33%?122.88%(P均 < 0.01),细胞的侵袭能力较对照组增强了112.24%(P < 0.01);而经10 μmol/L CXCR4抑制剂AMD3465处理后,细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了54.00%(P < 0.05);5 μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了47.90%(P < 0.01)?85.56%(P < 0.05),细胞的侵袭能力较对照组增强了108.79%(P < 0.01);而10 μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,CXCR4蛋白表达水平较PGE2处理组下降了54.86%(P < 0.05),细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了65.37%(P < 0.05);5 μmol/L PKC抑制剂BIS-1?10 μmol/L钙离子螯合剂BAPTA-AM处理后,CXCR4 蛋白表达水平较17-PT-PGE2处理组分别下降了57.38%?56.14% (P均 < 0.05),细胞的侵袭水平较17-PT-PGE2处理组下降了52.63%?55.26%(P <均0.05)?结论:PGE2可通过激活EP1受体经Gαq/Ca2+/PKC信号转导通路上调卵巢癌SKOV3细胞CXCR4的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭能力?     

食管癌侵袭与转移过程中相关蛋白研究进展

<正>食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,多数食管癌患者确诊时已进展至中晚期,5年生存率仅为15%~25%~([1]),特别是伴淋巴结转移的患者的5年生存率更低~([2]),阻止食管癌对邻近组织侵袭和远处转移是有效治疗食管癌、提高食管癌生存率的关键。食管癌的侵袭和转移是一个涉及肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基     

lnc RNA-AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖和转移

目的 研究AK093407对结直肠癌HCT-15细胞的影响及相关机制。方法 Lv5慢病毒感染过表达AK093047,转染siRNA沉默AK093407;qRT-PCR鉴定AK093407的表达;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕修复实验和Transwell检测细胞侵袭和迁移;qRT-PCR和蛋白印记检测EMT相关因子。结果 Lv5慢病毒感染后,AK093407表达升高。过表达AK093407结直肠癌细胞增殖活性升高,促进细胞周期演进,凋亡降低,迁移和侵袭能力增强。q RT-PCR和蛋白印记结果显示,occludin和E-cadherin的转录和翻译水平降低（P<0.05）;β-catenin、vimentin和fibronectin的转录和翻译水平升高（P<0.05）。AK093407沉默后,与上述结果相反。结论 AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖、细胞周期、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。     

趋化性细胞因子受体CXCR4与肺癌侵袭和转移的关系

目的 探讨趋化性细胞因子受体CXCR4在肺癌中的表达及其意义.方法 收集72例非小细胞肺癌患者手术标本,用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CXCR4的表达和微血管密度,分析CXCR4的表达水平与临床病理特征和预后的关系,12例正常肺组织作为对照.结果 72例非小细胞肺癌组织中,46例CXCR4蛋白表达阳性,阳性率为63.9%;12例正常肺组织中,仅2例CXCR4弱阳性表达,阳性率为16.7%,两者比较,差异有显著性意义(P＜0.05).肺癌组织CXCR4阳性表达与N分期、微血管密度、复发/转移和生存时间密切相关(均P＜0.05).结论 CXCR4可能促进肺癌的侵袭、转移以及血管生成并影响其预后.     

MiRNA调控EMT影响肝癌侵袭转移的研究进展

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在原发性肝癌中占比超过90%,由于其较高的复发和转移,HCC患者的总生存率较低。在过去几十年中,众多研究发现,许多微小RNA(miRNA)与肝癌密切相关。此外,miRNA通过抑制或促进HCC中的各种下游靶基因而发挥其功能性作用。上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)已被认为是人类肿瘤侵袭转移的关键因素。miRNA可通过调节不同信号通路和转录因子影响HCC中的EMT。本综述总结了近年来miRNA通过EMT在HCC中的最新研究进展     

波形蛋白诱导EMT在肿瘤侵袭转移中的研究进展

波形蛋白是中间纤维蛋白最主要的组成部分,它与微丝、微管共同组成细胞骨架,是上皮-间充质转化(EMT)的重要标志物。波形蛋白在许多上皮性来源的肿瘤中均出现异常表达,并与肿瘤的侵袭和转移密切相关。随着相关研究的不断深入,波形蛋白在肿瘤转移中的重要性开始凸显,其在恶性肿瘤中的高表达也越来越受到学者们的关注,这可能给肿瘤转移的治疗带来新思路。本文将对波形蛋白的结构、生物学功能,在各种肿瘤中的表达和功能及相关抗肿瘤药物研究进行综述。     

HIF诱导EMT在肿瘤侵袭转移中的作用

缺氧是肿瘤微环境的主要特点,通过缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)激活众多靶基因,从而影响肿瘤的代谢、增殖、凋亡、侵袭转移、耐药等多个方面。上皮细胞间质化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是肿瘤发生侵袭转移的重要起始过程,缺氧亦是EMT的诱发因素之一并可通过多条信号转导通路包括TGF-β,Notch,Wnt/β-catenin等调节EMT。研究缺氧诱导EMT的机制并阻断其进程,可成为治疗肿瘤的新靶点。     

CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究

目的 探讨CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响及可能机制。方法 设计合成CXCR4特异性短发夹状RNA(shRNA)插入pSilencer载体,转染人高转移性黑色素瘤细胞株MV3、RT-PCR和Western blot法检测shRNA对靶基因CXCR4表达的影响。利用Transwell小室模型检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞体外增殖能力。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射,将转染后的细胞接种至裸鼠皮下,构建黑色素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况。结果 CXCR4-shRNA能有效下调CXCR4基因的表达,降低黑色素瘤细胞增殖、体外侵袭及转移能力。RT-PCR及细胞免疫荧光显示,转染CXCR4-shRNA的黑色素瘤瘤MV3细胞系MMP-2表达下调;免疫组化结果显示,实验组裸鼠黑色素瘤瘤体及转移灶组织MMP-2的表达低于对照组。结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默在体外实验能够显著抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖活性,减弱体外侵袭能力,且体外产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力。其机制可能与SDF-1/CXCR4信号途径阻断,进而抑制MMP-2的表达有关。     

CXCL12/CXCR4轴与肿瘤侵袭转移关系的研究进展

目前研究发现趋化因子CXCL12/趋化因子受体CXCR4轴在肿瘤的侵袭转移过程中起着非常重要的作用。CXCL12/CXCR4轴可通过促进肿瘤细胞增殖、诱导血管新生和增强肿瘤细胞侵袭转移能力等机制影响肿瘤的发生、发展。深入研究这个特殊的生物学轴,有助于为临床诊断恶性肿瘤的转移提供新的分子生物学依据,并可能成为预防肿瘤转移的一个分子靶点,最终达到降低肿瘤转移,改善患者远期预后的目的。     

BCORL1通过下调E-cadherin促进甲状腺癌细胞侵袭转移

目的:探讨甲状腺癌细胞中BCORL1对E-cadherin的调控及其对侵袭转移能力的影响。方法:采用Western Blot技术检测人甲状腺癌细胞TA-K、TPC-1和FTC-133中BCORL1及E-cadherin的表达;应用siRNA特异性干扰TA-K细胞中BCORL1的表达,Western Blot和qRT-PCR技术检测BCROL1和E-cadherin表达变化;Transwall侵袭和迁移小室检测BCORL1对TA-K细胞侵袭转移能力的影响。结果:BCORL1在TA-K细胞中的表达水平明显高于TPC-1和FTC-133,而E-cadherin表达水平则明显低于TPC-1和FTC-133;特异siRNA能显著下调BCORL1mRNA(t=14.025,P<0.000 1)和蛋白表达,导致E-cadherin mRNA(t=8.004,P<0.000 1)和蛋白表达升高;下调TA-K细胞中BCORL1表达能显著减弱细胞侵袭和迁移能力(t=5.942,P=0.000 3;t=7.115,P=0.000 1)。结论:人甲状腺癌细胞中BCORL1可能通过转录抑制调控E-cadherin表达,从而促进肿瘤侵袭转移。     

双歧杆菌通过IL-6介导EMT对HCT116结肠癌细胞侵袭转移影响

目的 探讨双歧杆菌通过白细胞介素-6(IL-6)介导上皮间质转化（EMT）对HCT116结肠癌细胞侵袭转移的影响。方法 体外培养HCT116结肠癌细胞,将其分为对照组和双歧杆菌组,对照组常规培养,双歧杆菌组加入80μg/ml的双歧杆菌培养。48 h后采用Western blot检测两组IL-6、上皮钙黏素和神经钙黏素蛋白表达水平,免疫荧光技术检测IL-6、上皮钙黏素和神经钙黏素的表达及定位。采用细胞划痕试验、Transwell小室实验检测两组细胞转移和侵袭能力。结果 Western blot检测结果显示,双歧杆菌组上皮钙黏素蛋白表达水平高于对照组,IL-6、神经钙黏素蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫荧光检测结果显示,IL-6、上皮钙黏素和神经钙黏素蛋白定位于细胞膜上,与对照组比较,双歧杆菌组上皮钙黏素荧光明显,IL-6、神经钙黏素荧光微弱。双歧杆菌组细胞划痕愈合率低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。Transwell小室实验结晶紫染色及定量分析结果显示,双歧杆菌组侵袭细胞数少于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论...     

FABP4通过上调GLUT1表达和有氧糖酵解促进肠癌细胞侵袭转移

目的：探讨脂肪酸转运蛋白4（fatty acid binding protein 4,FABP4）在肠癌细胞侵袭转移中的作用和机制。方法：通过ELISA和Western blot检测不同侵袭转移能力肠癌细胞中FABP4表达水平;采用Transwell实验检测肠癌细胞侵袭转移能力;使用siRNA技术干扰HT29细胞中葡萄糖转运蛋白1（glucose transporter 1,GLUT1）表达,检测肠癌细胞葡萄糖摄取、乳酸脱氢酶含量、乳酸生成水平。结果：在高转移性肠癌细胞系HTCC116、SW620、Lovo的培养基上清和细胞中,FABP4表达显著高于低转移性肠癌细胞系HT29、Colo?2、SW116。用hrFABP4处理的HT29,其侵袭能力增强;而用FABP4抑制剂BMS处理的HTC116,其侵袭能力被明显抑制。过表达hrFABP4促进肠癌细胞中GLUT1的表达和有氧糖酵解。下调GLUT1或抑制有氧糖酵解能够削弱hrFABP4引起的肠癌细胞侵袭和转移。结论：FABP4可促进肠癌细胞侵袭转移,其机制可能通过促进GLUT1表达,进而诱导有氧糖酵解。     

VEGF通过影响CXCR4的表达调节卵巢癌细胞侵袭性的研究

目的 初步探讨卵巢癌细胞中血管内皮生长因子（VEGF）是否通过影响趋化因子受体CXCR4的表达,从而调节癌细胞的侵袭性.方法 以卵巢癌Caov-3细胞系为研究对象,运用RT-PCR和流式细胞术检测VEGF因子对卵巢癌Caov-3细胞系中CXCR4 mRNA及其蛋白质表达水平的影响,同时采用Boyden侵袭小室检测VEGF因子刺激后Caov-3细胞侵袭性的变化;并应用免疫组化技术检测VEGF与CXCR4在卵巢癌组织中的表达情况.结果 PCR产物凝胶电泳结果 显示,VEGF因子可显著增加Caov-3细胞中CXCR4 mRNA的表达：流式细胞仪检测发现,VEGF因子刺激细胞24h后,细胞平均荧光强度为26.20±1.45,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;VEGF刺激细胞后癌细胞的侵袭性显著增强,加入中和抗体后,癌细胞的侵袭性呈剂量依赖式下降.免疫组化检测结果 提示：卵巢癌中VEGF表达水平在不同转移状况和腹水量间的差异均有统计学意义（均P〈0.01）;CXCR4的表达水平在不同临床分期和转移状况间的差异均有统计学意义（均P〈0.05或0.01）;卵巢癌组织中VEGF蛋白与CXCR4蛋白的表达呈正相关（Spearman相关系数为0.575,P〈0.01）.结论 VEGF因子可通过影响卵巢癌细胞中CXCR4分子的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭性,CXCR4中和抗体则可抑制这一效应;卵巢癌组织中,VEGF与CXCR4的表达均与转移有关,且两者的表达呈正相关.     

TRIM35通过介导EMT促进骨肉瘤细胞侵袭和迁移的作用机制研究

目的 研究含三元基序家族蛋白35(tripartite motif-containing protein 35,TRIM35)在骨肉瘤组织中的表达、对人骨肉瘤细胞系143B、Saos-2侵袭和迁移的作用及机制。方法 收集30例正常人骨组织与64例骨肉瘤患者的肿瘤组织,应用免疫组化技术检测TRIM35的表达情况;通过转染TRIM35的siRNA与过表达质粒载体,结合qRT-PCR与Western blot技术检测转染效率;在划痕与Transwell实验中观察TRIM35对骨肉瘤细胞侵袭与迁移能力的影响;在骨肉瘤细胞中沉默或过表达TRIM35后,利用Western blot技术检测上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transtion,EMT)进程标志蛋白。结果 免疫组化实验中,TRIM35在骨肉瘤组织中高表达,正常组织低表达。划痕实验结果表明,沉默TRIM35能够抑制143B的迁移能力,过表达后可加快Saos-2细胞的迁移;Transwell实验显示过表达TRIM35能够促进Saos-2细胞的侵袭,沉默TRIM35能够抑制143B细胞的侵袭;Western blot结果显示沉默或过表达TRIM35能够引起EMT进程的标志性蛋白的变化。结论 TRIM35在骨肉瘤组织中高表达,通过介导EMT促进骨肉瘤细胞的侵袭及迁移。     

TM4 SF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移及EMT的影响

目的:探讨四次跨膜蛋白1(TM4SF1)在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用和可能机制.方法:合成靶向TM4SF1的siRNA并转染MDA-MB-231细胞(TM4SF1 siRNA组),以转染阴性对照siRNA细胞和未转染细胞为对照.用CCK-8实验、Transwell实验检测3组细胞增殖和侵袭转移能力;采用Western ...     

脑心通胶囊提取物通过增强CXCR4表达促进心脏干细胞迁移

[目的]探讨脑心通(NXT)对小鼠心脏干细胞(CSCs)CXCR4表达的影响。[方法]应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)芯片技术研究脑心通对心脏干细胞功能基因表达的影响。采用流式细胞术检测脑心通对心脏干细胞CXCR4表达的影响。应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脑心通对心脏干细胞CXCR4蛋白表达的影响。应用Transwell法测定脑心通对SDF-1诱导的心脏干细胞迁移能力的影响。[结果]芯片结果发现脑心通促进心脏干细胞CXCR4基因的表达;流式细胞技术结果显示,脑心通促进心脏干细胞APC-CXCR4阳性细胞率;Western Blot结果表明,脑心通促进心脏干细胞CXCR4蛋白表达;Transwell迁移实验结果显示,脑心通促进SDF-1诱导的心脏干细胞的迁移作用。[结论]脑心通可以促进心脏干细胞CXCR4的表达。     

ET-1通过上调CXCR4表达促进鼻咽癌低转移 细胞株6-10B的迁徙

 【目的】 探讨内皮素-1(ET-1)上调CXCR4表达促进鼻咽癌低转移细胞株6-10B迁徙的机制。【方法】 加入不同浓度的ET-1以及同时加入SDF-1α处理6-10B细胞,趋化实验检测ET-1对6-10B细胞迁徙能力的影响。分别采用Real-time PCR以及Western Blot方法检测ET-1上调后CXCR4在基因以及蛋白水平的变化。Western Blot方法检测用特异性的ETAR抑制剂或者PI3K/AKT/mTOR或MARK1/ERK1/2抑制剂预处理6-10细胞后,ET-1对CXCR4表达水平的变化;并探讨ET-1处理后,PI3K/AKT/mTOR以及MARK1/ERK1/2信号通路中蛋白磷酸化水平的改变。【结果】 趋化实验显示6-10B细胞丧失对SDF-1α的趋化能力,但不同浓度的ET-1刺激后6-10B细胞对SDF-1α的迁徙能力明显增强(P < 0.05),10 nmol/L ET-1的作用最明显。Real-time PCR以及Western Blot结果显示,不同浓度的ET-1处理6-10B细胞后,ET-1在基因以及蛋白的水平可以呈剂量依赖性及时间依赖性地上调CXCR4的表达。用特异性的内皮素受体A(ETAR)抑制剂或者PI3K/AKT/mTOR或MARK1/ERK1/2通路的抑制剂,能够明显抑制ET-1对CXCR4表达的上调。Western blot检测显示ET-1能激活PI3K/AKT/mTOR及MAPK1/ERK1/2信号通路。【结论】 ET-1能上调6-10B细胞功能性CXCR4的mRNA和蛋白表达,并能明显增强6-10B细胞对SDF-1α的迁徙能力。CXCR4的上调主要是通过ETAR介导,激活PI3K/AKT/mTOR和MAPK1/ERK1/2信号通路。     

KLF4通过Wnt信号通路抑制甲状腺癌细胞EMT及侵袭迁移的实验研究

目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)对甲状腺癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移的影响及机制.方法 免疫组织化学(IHC)检测45份甲状腺癌标本中KLF4的表达情况.常规体外人甲状腺乳头状癌细胞株KTC1培养,将其分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染LipofectammeTM2000)、KLF4过表达组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4)、siRNA-NC组(转染LipofectamineTM 2000+ NC-siRNA)和KLF4-siRNA组(转染LipofectamineTM 2000+ KLF4-siRNA).免疫荧光检测细胞中KLF4与β-catenin的分布和共表达;Transwell检测癌细胞侵袭和迁移的能力,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测EMT和Wnt信号通路相关的基因和蛋白质表达水平.蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)检测KLF4和β-catenin间的互作情况.结果 免疫荧光标记显示,KLF4和β-catenin在KTC1细胞质中共定位.qRT-PCR结果显示,KLF4过表达组上皮型钙黏蛋白(E-cad)mRNA表达明显高于其他组(P＜0.05),神经型钙黏蛋白(N-cad)和基质金属蛋白酶7(MMP7) mRNA表达水平明显低于其他组(P＜0.05);沉默干扰KLF4后,与其他组相比,KLF4-siRNA组中的E-cad mRNA明显降低(P＜0.05),N-cad和MMP7 mRNA明显升高(P＜0.05).Western blot结果显示,KLF4过表达组中E-cad表达较其他组明显升高(P＜0.05),而N-cad、MMP7表达则明显低于其他组(P＜0.05);当沉默干扰KLF4时,上皮标志物减少(P＜0.05),间质标志物增加(P＜0.05).Transwell结果显示,过表达KLF4可以抑制KTC1细胞的迁移和侵袭,干扰沉默KLF4可增强KTC1细胞的迁移和侵袭.Co-IP结果显示,KLF4与β-catenin之间存在相互作用.KLF4在甲状腺癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为24.44％ (11/45)和71.11％ (32/45),二者比较差异有统计学意义(x2=19.639,P＜0.001).45份甲状腺癌标本中,伴淋巴结转移18份标本中KLF4表达4份阳性,而不伴淋巴结转移27份标本中,KLF4表达15份阳性,二者比较差异有统计学意义(22.22％ vs.55.56％,x2=4.919,P=0.027).结论 KLF4通过Wnt信号通路调节相关下游靶基因的表达,从而影响了甲状腺癌的侵袭和迁移能力.     

食管癌舌转移4例

食管癌舌转移之文献报道极少。我院于 1999年 3月至2 0 0 0年 9月收治 4例 ,报道如下。1　临床资料病例 1,男性 ,6 0岁 ,因“发现舌部溃疡 1+ 月”于 1999年 3月入院。术前检查时因诉进固体食物时吞咽梗噎感行食管内镜检查 ,发现食管距门齿约 19～ 2 1ｃｍ处右方外侧壁有一不规则溃疡 ,上覆污秽白苔 ,周围凹凸不平 ,糜烂充血 ,活检提示为食管低分化鳞癌。即行舌部溃疡活检 ,提示转移性鳞癌 ,转肿瘤科放疗化疗。随访 9个月后失访。病例 2 ,男性 ,6 1岁 ,因“进行性吞咽困难 2 + 月”于 1999年 7月入院 ,诊断为食管中段癌 ,术前检查无远处转移…