急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的：研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）患的表达与临床疗效的关系。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测了31例ALL患bcr/abl融合基因的表达。结果：患bcr/abl融合基因阳性表达9例（29％），其中完全缓解3例（33．3％）；bcr/abl融合基因阴性表达22例（71％），其中完全缓解17例（77．3％），两组比较具有差异性（P＜0．05）。结论：bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患临床疗效较差。     

慢性髓性白血病bcr/abl融合基因的克隆与表达

目的：克隆bcr／abl融合基因融合位点基因片段。方法：以慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞株总RNA作为模板,采用RT—PCR方法扩增包含Bcr／abl（b3a2）融合位点基因片段。将RT—PCR物按正确的阅读框架,定向克隆到pEGFP—N3的下游,将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,并进行序列的测定。结果：扩增出470bp的Bcr／abl融合位点基因片段,构建重组质粒pEGFP—bcr／abl,酶切产物的大小分别与预期相符。结论：成功地扩增bcr／abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP—bcr／abl,为在体外表达重组bcr／abl蛋白奠定基础。     

地黄多糖对K562细胞增殖抑制作用及bcr/abl融合基因表达的影响

目的：研究地黄多糖（RPS）对K562细胞bcr/abl融合基因表达和细胞增殖的影响。方法：不同浓度RPS作用于K562细胞,MTS法检测其对细胞增殖的影响,Real-time PCR检测bcr/abl融合基因mRNA表达变化,Western blotting检测bcr/abl融合基因表达的P210蛋白变化。结果：RPS能够抑制K562细胞增殖,用400 μg·mL^-1 RPS作用12 h,细胞增殖抑制率为35.16%,随着RPS浓度增加抑制作用明显增强（P<0.05）;用200 μg·mL^-1 RPS作用24 h,K562细胞内bcr/abl融合基因mRNA相对表达量为0.26,P210蛋白相对含量为0.35。RPS使K562细胞内P210蛋白及bcr/abl融合基因mRNA表达量呈时间和剂量依赖性下降。结论：RPS可能通过下调bcr/abl融合基因mRNA及P210蛋白表达对K562细胞增殖产生抑制作用。     

P210bcr/abl融合蛋白的形成机制及作用的研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是以费城染色体(Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。Ph染色体是由9号染色体c-abl癌基因易位到22号染色体的bcr基因处,形成bcr／abl融合基因,该基因经转录后,编码8．5kb的嵌合体mRNA,翻译成分子量为210kD的蛋白质,即P210^bcr/abl融合蛋白(P210^bcr/abl),该蛋白具有异常活跃的酪氨酸激酶活性(PTK),并活化细胞内相关的信号转导通路从而调控细胞的分裂与增殖,抑制细胞的凋亡。P210^bcr/abl是CML的特征性标志。因此,研究P210^bcr/abl对研究与治疗CML具有重要的意义．有关P210^bcr/abl的形成机制及作用已部分阐明．现做综速如下．     

bcr／abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.     

慢性粒细胞白血病bcr/abl基因检测在造血干细胞移植过程中的临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）bcr/abl基因检测的临床意义,以及移植后治疗效果及预后监测等方面的价值。了解慢性粒细胞白血病融合基因表达、染色体改变及细胞学的改变与临床诊断和治疗的关系。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测15例CML患者移植前、后bcr/abl融合基因的表达;染色体制备采用骨髓短期培养法,G显带,分析核型。结果对照组bcr/abl基因表达、Ph染色体均为阴性;15例患者移植前：bcr/abl基因表达阳性率为100%（15/15）,表达量范围4.7×104～3.2×108copies/L;Ph染色体分析结果中,13例为Ph（＋）/bcr（＋）,2例为Ph（-）/bcr（＋）。细胞学分析结果 ：呈CML的细胞学改变。移植后1个月bcr/abl融合基因转阴率为80%,2个月转阴率达93%,3个月转阴率达100%。Ph染色体均为阴性。另外,0.5～3年内有13%（2/15）的患者bcr/abl基因表达呈阳性,6%（1/15）的患者Ph（＋）,有复发的阳性指标。结论 bcr/abl基因表达水平的定量检测及动态观察,对CML的临床诊断、移植后疗效判断及预后的监测具有重要意义.     

慢性粒细胞白血病bcr—abl基因反义核酸的初步研究

目的：探讨用逆转录病毒表达载体携带反义酸进入ＣＭＬ细胞并作用于ｂｃｌ－ａｂｌ基因的方法。方法：反义序列用ＲＴ－ＰＣＲ法,取自Ｋ５６２细胞系,使之成功地构建了正反义ＲＮＡ的逆转录病毒表达载体。结果：与正义链相比无反义ｂｃｒ－ａｂｌ序列显著抑帛其抑制程度与剂量呈正相关,其细胞形态学改变支持其进入凋亡进程。结论：此反义核酸是探索ＣＡＬ基因的重要材料。     

Bcr/abl融合基因阳性成人急性淋巴细胞白血病的治疗

目的:探讨B cr/ab l阳性成人急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗。方法:10例成人ALL经骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫学分型、融合基因检查确诊为B cr/ab l阳性B细胞ALL。化疗不缓解者改用格列卫(400 m g/d)治疗。5例缓解后行异基因造血干细胞移植,5例行巩固强化治疗。结果:常规化疗使6例患者达到完全缓解(60%);4例未缓解者,用格列卫治疗均达到CR。5例接受移植患者2例复发,移植患者与接受巩固强化治疗的患者中位缓解期分别为12个月与8个月(P<0.01);中位生存期为18个月与10个月(P<0.05)。结论:B cr/ab l融合基因阳性成人ALL化疗缓解率较低,格列卫治疗显著提高缓解率,与单纯化疗相比,异基因造血干细胞移植使患者生存期明显延长。     

骨髓涂片与活检切片同步分析对诊断骨髓增生异常或骨髓增殖性疾病的意义

世界卫生组织（WHO）于2001年正式公布了髓系肿瘤的分类，将慢性粒-单核细胞白血病（CMML）、幼年性粒-单核细胞白血病（JMML）以及不典型慢性粒细胞白血病（aCML）这类同时具有骨髓增生异常综合者（MDS）和骨髓增殖性疾病（MPO）特征的白血病归为MDS／NPO。其特征为髓系异常增殖，常常伴有不同程度的纤维组织增生，有向急性白血病（AL）转化的倾向，特别是急性髓细胞白血病（AML）；单纯的常规骨髓涂片形态学往往不能反映骨髓的实际情况，而与骨髓活检切片结合的方法，能提高诊断该类疾病的准确率。目前我们对我院5年来诊断为该类疾病的骨髓涂片及骨髓切片进行了同步分析。     

急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达与临床疗效的关系. 方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测了31例ALL患者bcr/abl融合基因的表达.结果患者bcr/abl融合基因阳性表达9例(29%),其中完全缓解3例(33.3%);bcr/abl融合基因阴性表达22例(71%),其中完全缓解17例(77.3%),两组比较具有差异性(P＜0.05).结论bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患者临床疗效较差.     

应用实时定量PCR技术检测慢性粒细胞白血病患者bcr/ablP190融合基因转录本

目的研究bcr/ablP190融合基因转录本在慢性粒细胞白血病(CML)中表达水平及其临床相关性.方法应用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测74例CML患者骨髓单个核细胞中的bcr/ablP190转录本.结果 bcr/ablP190转录本阳性54例(77.1%),中位含量2.60(1.08～8.58)×10-3,与性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板计数、bcr/ablP210转录本类型和表达水平均不相关,但bcr/ablP190阳性患者的白细胞总数和血小板计数较阴性者明显降低.bcr/ablP190转录本水平在急变期与慢性期患者以及不同类型急变患者中都无差异,而细胞遗传学完全缓解患者的bcr/ablP190水平较慢性期患者、干扰素无效患者和急变期患者则明显下降.结论不同阶段CML患者体内大都存在着不同的bcr/abl剪切型转录本,不同剪切型的存在具有一定的血液学相关性.     

用实时定量PCR检测93例CML bcr/abl融合基因

慢性粒细胞白血病(CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,约90%～95%CML患者共有费城染色体(Philadelphia PH)其分子基础是9染色体的c-abl基因易位到22染色体的bcr基因上形成新的基因嵌合体,bcr/abl融合基因,即t(9:22)(q34;q11)该基因表达融合蛋白具有高度酪氨酸激酶活性,在CML的发病中起重要作用.     

骨髓增生性疾病血小板聚集功能的变化

骨髓增生性疾病（ＭＰＤ）是一组克隆性疾病，许多病人存在血小板功能异常。本文共测定１２例ＭＰＤ病人血小板对五种不同诱聚剂诱导聚集的变化，同时选择１５例健康正常人作为对照。结果表明，每种诱聚剂与正常对照二组间的均数比较，仅胶原诱导的血小板聚集有统计学意义（ｘ±ｓ４５．１０±１９．６４；正常对照５７．９２±８．６２），Ｐ＝０．０５；而ＡＤＰ、ＰＡＦ、ＳＪＡＭＰ和Ａｄｒ诱导血小板聚集无统计学意义，Ｐ＞０．０５。但我们发现，ＭＰＤ组５／１２血小板ＰＡＦ聚集异常，３／１２胶原聚集异常，３／１２ＳＪＡＭＰ聚集异常。血浆纤维蛋白原浓度的变化二组间比较无明显统计学意义，Ｐ＞０．０５。总之，ＭＰＤ血小板聚集功能异常常见，可是并不是所有病人都会出现，其可能的原因与血小板膜糖蛋白异常及血小板代谢异常有关，或是巨核细胞的异常克隆所致。     

磷酰肌醇-3激酶途径与bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导

目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用。方法短期培养法直接法G显带检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的染色体核型,RQ-PCR检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因;用磷酰肌醇-3激酶特异抑制剂渥曼青霉素(WT)抑制磷酰肌醇-3激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数。观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化。统计学采用t检验。结果K562细胞G显带检出Ph染色体,RQ-PCR检测K562细胞存在bcr/abl基因;与标准Ph染色体表达的CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因完全吻合;K562、NB4和HL60细胞在24h、48h、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%。生长曲线显示WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P>0.05)。K562、NB4和HL60细胞加和不...     

姜黄素对K562细胞增殖的影响及其与P210~(bcr/abl)激活的Ras信号途径的关系

目的　研究姜黄素 (Cur)对慢性粒细胞白血病 (CML)细胞株K5 62增殖的影响 ,并且探讨这种影响与P2 10 bcr/abl及其激活的Ras信号途径的关系。方法　应用MTT法检测Cur对细胞增殖的影响 ,应用Westernblot的方法检测蛋白含量的变化。结果　Cur对P2 10 bcr/abl阳性的K5 62细胞抑制作用呈量效、时效关系 ,Cur 10mg·L-1作用 48h对K5 62细胞的抑制率高达 (81 9± 1 0 ) % ;相比之下 ,已知对P2 10 bcr/abl无影响的VP 16作为抗癌药对照 ,对K5 62细胞的抑制作用明显较弱。Cur和VP 16对K5 62细胞的不同作用提示Cur对K5 62细胞作用可能有特异性 ,而这个特异的作用靶点可能就是引起CML对多种化疗药物耐药的CML特征性的P2 10 bcr/abl蛋白。Westernblot的实验结果表明Cur使K5 62细胞P2 10 bcr/abl、MEK 1和c Jun蛋白含量明显减少 ,且呈量效关系 ,相比之下 ,VP 16对K5 62细胞P2 10 bcr/abl的蛋白含量无影响而仅轻微减少MEK 1和c Jun的蛋白含量 ,提示MEK 1和c Jun蛋白含量的减少是非特异性的 ,并且 ,在P2 10 bcr/abl阳性的K5 62细胞 ,Cur除了非特异性地抑制细胞中MEK 1及c Jun的表达外 ,Cur还可能通过特异性地抑制K5 62细胞的特异性靶点P2 10 bcr/abl的表达 ,从而下调其下游的Ras信号途径中的其它信号分子。结论　Cur可特     

RAEBT型骨髓增生异常综合征患者白血病相关融合基因分析(附病例报告)

<正>骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一组由于造血干细胞异质性克隆导致的疾病。MDS临床表现较为复杂,通常表现为外周血一系至三系降低,骨髓增生异常,并伴有造血细胞病态造血,其最终发展结局并不一致,其中约30%～60%的患者经过数月或数年后可以转变为     

38例不同病期慢性粒细胞白血病患者bcr-abl基因的表达

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)不同病期bcr-abl基因的表达。方法 应用RQ-PCR方法检测38例共45份不同临床分期CML病人外周血中bcr-abI的表达水平。结果 CML病人的bcr-abl基因和bcr-abl/abl比率在慢性期分别为(11542±5106)拷贝/μg总RNA和(10.58±5.12)％;加速期分别为(83350±7844)拷贝/μg总RNA和(84.20±3.78)％;急变期分别为(79112±7956)拷贝/μg总RNA和(80.15±4.16)％。bcr-abl基因表达水平与CML不同临床病期密切相关。结论 RQ-PCR检测bcr-abl基因表达可作为CML疾病进展、预后判断和骨髓移植后微小残留疾病监测的良好指标。     

外周血涂片 骨髓细胞形态 骨髓活检三者联合检查在骨髓增殖性疾病中的应用

<正>骨髓增殖性疾病(MPD)是以骨髓一系或多系髓系细胞持续增殖为特征的一组克隆性干细胞紊乱性疾病。广义的讲包括骨髓增生异常综合征(MDS),骨髓纤维化(MF)、真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、慢性