NG-硝基精氨酸甲酯对慢性脑缺血大鼠记忆及诱导型一氧化氮合酶的影响

目的研究一氧化氮合酶抑制剂——NG-硝基-L-精氨酸甲酯（L—NAME）对慢性脑缺血大鼠学习空间记忆能力及海马区诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法3—4个月龄健康雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组、模型组及L—NAME组,每组18只。采用双侧颈总动脉永久结扎法制备慢性脑缺血大鼠模型。L—NAME组在造模后第3周开始每日给予L—NAME（20mg·k-1·d-1配入每日饮用水中）。造模后2、4、6个月,利用Morris水迷宫方法检测各组大鼠学习空间记忆能力;观察海马区的组织病理学改变和iNOS的表达。结果①造模后2、4、6个月,模型组、L—NAME组的逃避潜伏期、搜索路径长度均比假手术组明显增多,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）,L—NAME组比模型组明显缩短（P〈0．01,P〈0．05）。②HE染色显示,模型组和L．NAME组随着缺血时间的延长,海马区的锥体细胞损伤程度逐渐加重;L—NAME组各相应时间点损伤程度较模型组明显减轻。③模型组和L—NAME组海马CA1区iNOS阳性细胞数目随着缺血时间的延长而逐渐增多,均高于假手术组（P〈0．01,P〈0．05）;与模型组比较,L—NAME组的iNOS阳性细胞数目相对减少（P〈0．01,P〈0．05）。结论L—NAME可减轻慢性脑缺血所致的脑组织损伤,改善脑缺血所致的进行性学习空间记忆能力的下降;其可能的机制为通过抑制iNOS的表达而发挥神经保护作用。     

益脑颗粒对衰老慢性脑缺血大鼠脑组织中VEGF表达的影响

目的 研究益脑颗粒对衰老慢性脑缺血大鼠脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨益脑颗粒治疗慢性脑缺血的作用机制.方法 采用D-半乳糖(D-gal)注射诱导和永久性双侧大鼠颈总动脉结扎术(2VO)制备亚急性衰老大鼠慢性脑缺血模型.给予高、低剂量益脑颗粒灌胃,并以尼莫地平为对照,免疫组化法观察大鼠脑组织VEGF的表达.结果 与正常组比较,模型组脑组织中VEGF表达无明显改变(P＞0.05),益脑颗粒高、低剂量组表达升高(P＜0.01),尼莫地平组无明显改变(P＞0.05).结论 益脑颗粒能增加缺血脑组织中VEGF表达,而增强脑组织血管侧支循环的建立,改善脑缺血.     

慢性脑缺血导致脑损害的实验研究进展

慢性脑缺血被认为是多种疾病如血管性痴呆（vascular dementia,VD）、Alzheimer病（AD）和Binswanger病等发展过程中的一个共同的病理学过程。高血脂引起的脑内动脉粥样硬化、高血压引起的脑小动脉硬化、高血糖引起的脑微循环障碍等都可造成慢性脑供血不足。慢性脑缺血的发生、发展使脑组织产生不同程度的病理损伤,引起认知功能下降从而导致痴呆的产生。     

慢性脑缺血对老龄大鼠学习记忆能力和髓鞘碱性蛋白的影响

目的 研究慢性脑缺血对老龄大鼠学习记忆能力和髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响.方法 Wistar健康老龄大鼠50只,随机分为2组,假手术组和模型组;采用Morris智能水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力的改变情况;采用免疫组化法结合彩色病理图像分析仪测量平均灰度值观察各组MBP在内囊和胼胝体的表达.结果 和假手术组比较,模型组学习记忆能力明显下降,MBP灰度值明显升高,差异具有统计学意义.结论 慢性脑缺血的病理改变可能涉及髓鞘脱失,髓鞘脱失可能为慢性脑缺血引起的认知功能障碍原因之一.     

针刺对反复短暂脑缺血再灌注大鼠脑损伤的影响

目的探讨针刺对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法选用Wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭法制作脑缺血再灌注动物模型。将60只大鼠随机分为模型组、假手术组、针刺干预组、尼莫地平组、针刺加药组和正常对照组,每组10只。除假手术组及正常对照组外,其他组大鼠夹闭双侧颈总动脉10 min,再恢复灌流10 min,反复3次,制备大鼠反复短暂脑缺血再灌注模型。假手术组分离血管,但不进行缺血再灌注;针刺干预组术后1~3 d针刺百会、中脘、足三里;尼莫地平组造模前7 d至术后3 d给予1 mg/ml尼莫地平悬液5 mg.kg-1.d-1灌胃,针刺加药组治疗方法同尼莫地平组及针刺干预组。采用硫代巴比妥钠法测定脑组织丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法检测谷胱甘肽(GSH)、采用非平衡法放射免疫分析血清降钙素基因相关肽(CGRP)含量,采用水迷宫法进行学习记忆的测定。观察反复短暂脑缺血大鼠脑损伤MDA、GSH、CGRP水平的变化。结果大鼠反复脑缺血再灌注3 d后与模型组比较,针刺干预组和针刺加药组在学习和记忆方面,其时间缩短和错误次数减少,MDA降低,GSH升高,CGRP含量上升,均有极显著性差异(P<0.05~0.01)。结论针刺可以发挥对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。针刺与药物的结合作用较好,临床上对缺血性脑血管病应进行综合治疗。     

高龄老人不同类型及程度脑白质损害的血管危险因素及与动脉硬化的关系

目的分析高龄老人不同程度脑室旁白质损害及皮质下白质损害的血管危险因素及与动脉硬化的关系。方法根据头颅磁共振成像将151例高龄老人脑室旁白质损害和皮质下白质损害严重程度分级,对比分析不同级别患者认知评分、血管危险因素、腔隙性梗塞数目、颈动脉斑块指数及颅内血管脑血流动力学的差异。结果中重度脑室旁白质损害和皮质下白质损害均表现认知功能障碍(P<0.05),中重度脑室旁白质损害患者高血压、糖尿病患病率有显著性差异(P<0.05),中重度皮质下白质损害血脂和腔隙性梗塞数目有显著性差异(P<0.05),中重度脑室旁白质损害表现大小动脉硬化(P<0.05),而中重度皮质下白质损害仅表现大动脉硬化(P<0.05)。结论血管危险因素和动脉硬化参与脑室旁白质损害和皮质下白质损害形成既有相似点,又有区别点,脑室旁白质损害和皮质下白质损害均导致认知功能损害,小血管硬化及低灌注状态可能参与脑室旁白质损害的形成,血脂因素和腔隙性梗塞可能涉及皮质下白质损害。     

法舒地尔对慢性脑缺血大鼠认知功能及皮层自由基代谢的影响

目的 观察法舒地尔对慢性脑缺血大鼠学习记忆及皮层线粒体自由基代谢的影响.方法大鼠分为假手术组、模型组和法舒地尔组,取3、6、9 w 3个时间点,采用双侧颈总动脉永久性阻断法(2VO)建立慢性脑缺血模型,应用Morris水迷宫检测学习记忆能力,同时检测皮层线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 模型组和法舒地尔组大鼠与假手术组相比逃避潜伏期和游泳路径均明显延长,法舒地尔组学习记忆成绩均明显优于模型组(均P＜0.05),缺血3 w起,模型组大鼠皮层SOD活性显著降低,MDA含量明显升高,法舒地尔组与模型组SOD活性和MDA含量差异显著(均P＜0.05).结论 法舒地尔能明显减轻大鼠慢性脑缺血所致认知功能障碍,其机制可能通过清除自由基减轻神经功能损伤而改善学习记忆功能.     

健心颗粒对慢性心力衰竭大鼠一氧化氮合酶的影响

目的 探讨健心颗粒对大鼠慢性心衰(CHF)一氧化氮合酶(NOS)的影响.方法 以32周老龄自发性高血压大鼠(SHR)的CHF模型作为研究对象,观察应用健心颗粒4周后SHR左室心肌NOS1、NOS2、NOS3蛋白表达,检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)水平.结果 健心颗粒可以提高SHR的NOS1、NOS3表达,降低SHR的NOS2表达;降低血浆的AngⅡ、ANP、BNP水平.结论 健心颗粒可以通过NOS系统,调节NOS1、NOS2、NOS3三者之间的动态平衡,达到改善心功能.     

电针对高血压大鼠脑缺血后神经黏蛋白表达和行为学的影响

目的 观察电针对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血-复流不同时间神经黏蛋白表达、行为学评分的影响.方法 采用环形银夹使SD大鼠的双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.用免疫组化、Zea Longa评分等方法观察电针对脑缺血2 h后复流1 d、7 d、14 d、30 d不同时间点大鼠脑组织神经黏蛋白表达、行为学评分的干预作用,并与模型组对照.结果 缺血2 h再灌注1 d,对照组脑缺血区周围出现神经黏蛋白阳性表达细胞[(21.17±2.44)个/cm2],7 d明显增多[(33.62±4.39)个/cm2],14 d达到高峰[(55.17±6.84)个/cm2],30 d下降[(17.83±3.42)个/cm2].电针组神经黏蛋白阳性表达细胞在7d[(24.19±3.82)个/cm2]、14 d[(39.78±5.26)个/cm2]、30 d[10.96±2.17)个/cm2]时较对照组明显减少(P＜0.05),脑缺血复流1、7、30 d,电针组大鼠行为学评分[(1.39±0.50)、(0.50±0.51)、(0.19±0.13)分]明显低于对照组[(1.83±0.38),(0.94±0.42)、(0.27±0.24)分],P＜0.05.结论 电针促进RHRSP脑缺血损伤区神经功能的修复作用,可能与其下调神经抑制因子神经黏蛋白的表达等机制密切相关.     

石杉碱甲与尼莫地平联用对慢性脑缺血大鼠认知障碍的影响

目的探讨石杉碱甲、尼莫地平对缺血性脑损伤的治疗作用。方法应用大鼠持久性双侧颈总动脉结扎制作慢性脑缺血模型,并采用免疫组化方法检测缺血模型组(A组)、石杉碱甲 尼莫地平组(B组)、石杉碱甲组(C组)、尼莫地平组(D组)四组大鼠慢性脑缺血后不同治疗时间的VEGF、BDNF、caspase-3抗体表达水平。结果药物治疗B,C,D组细胞阳性表达率显著低于A组(P<0.01),而B组又显著低于C、D两组(P<0.05)。在不同组的时程分析中,发现各组VEGF、BDNF、caspase-3的阳性表达率随着时间的推移而逐渐降低,其中B组降低较明显(P<0.01)。学习、记忆测试各个时程中B组成绩最好。结论石杉碱甲和尼莫地平联合应用有提高慢性脑缺血预后和改善学习、记忆能力的作用。     

脑缺血大鼠脑组织及血浆中mieroRNA-124a表达的变化

目的探讨microRNA-124a在脑缺血大鼠血浆和脑组织中表达的变化,以及其在正常大鼠不同组织和不同类型细胞中的分布。方法健康雄性SD大鼠35只,采用完全随机分组方法,3只用于检测microRNA-124a在正常大鼠各组织中的表达;假手术组、模型组各16只,其中每组8只用于检测造模前0h和造模后2、4、8、12、24及48h血浆microRNA-124a表达,8只用于检测造模后24h缺血区脑组织microRNA-124a表达。采用线栓法制作大脑中动脉永久性闭塞模型,实时荧光定量PCR法（Real—timePCR）和逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）检测microRNA-124a的表达。结果①microRNA-124a在大鼠脑、主动脉、肺、肝、心、脾、肌肉及肾脏中表达量依次降低,脑中的表达量是肾的1116。68（451．94～2740．08）倍,而主动脉是肾脏的12．81（6．72～24．42）倍;在大鼠海马神经元、小胶质细胞中的表达量分别是小鼠脑微血管内皮细胞的1031．12（501．50～2120．20）和19．43（13．20～28．60）倍。②与造模前比较,模型组大鼠血浆中microRNA-124a表达量在造模后8h开始升高（P=0．02）;24h达高峰（P=0．008）,约为造模前的18倍,随后逐渐下降,但48h表达量仍然高于造模前（P=0．03）。假手术组大鼠血浆中microRNA-124的表达在造模前、后不同时间点差异均无统计学意义。③造模后24h,模型组缺血区脑组织中microRNA-124a表达量明显降低,约为假手术组的12％～28％。结论microRNA-124a特异性表达于大鼠脑神经元中。脑缺血24h后,血浆中microRNA-124a表达量显著增高,而脑组织中表达量显著减少,机制可能与脑损伤造成microRNA-124a大量释放入血有关。     

Melatonin attenuates gray and white matter damage in a mouse model of transient focal cerebral ischemia

We have previously shown that melatonin reduces infarct volumes and enhances neurobehavioral and electrophysiological recoveries following transient middle cerebral artery (MCA) occlusion in rats. In the study, we examined whether melatonin would display neuroprotection against neuronal, axonal and oligodendrocyte pathology after 24 hr of reperfusion following 1 hr of MCA occlusion in mice. Melatonin (5 mg/kg) or vehicle was given intraperitoneally at the commencement of reperfusion. Neurological deficits were assessed 24 hr after ischemia. Gray matter damage was evaluated by quantitative histopathology. Axonal damage was determined with amyloid precursor protein and microtubule-associated protein tau-1 immunohistochemistry to identify postischemic disrupted axonal flow and oligodendrocyte pathology, respectively. Oxidative damage was assessed by 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG) and 4-hydroxynonenal (4-HNE) immunohistochemistry. Relative to controls, melatonin-treated animals not only had a significantly reduced volume of gray matter infarction by 42% (P<0.001), but also exhibited a decreased score of axonal damage by 42% (P<0.001) and a reduction in the volume of oligodendrocyte pathology by 58% (P<0.005). Melatonin-treated animals also had significantly reduced immunopositive reactions for 8-OHdG and 4-HNE by 53% (P<0.001) and 49% (P<0.001), respectively. In addition, melatonin improved sensory and motor neurobehavioral outcomes by 47 and 30%, respectively (P<0.01). Thus, delayed (1 hr) treatment with melatonin reduced both gray and white matter damage and improved neurobehavioral outcomes following transient focal cerebral ischemia in mice. The finding of reduced oxidative damage observed with melatonin suggests that its major mechanisms of action are mediated through its antioxidant and radical scavenging activity.     

慢性脑缺血大鼠 1H和 31P活体核磁共振波谱分析

目的采用 1H和 31P活体核磁共振波谱(in-vivo MRS)检测大鼠在慢性脑缺血状态下脑组织的生化改变.方法采用双侧颈总动脉结扎(two-vessels occlusion, 2-VO)制备大鼠慢性脑缺血大鼠模型.运用in-vivo MRS分析技术进行海马CA1区 1H谱和全脑 31P谱检测.结果 2-VO术后2个月大鼠海马CA1区活体定域 1H谱中未出现乳酸(Lac)信号;N-乙酰天冬氨酸(NAA)含量无明显改变;而全脑 31P 谱示磷酸单酯(PME)含量升高,PME/[PME+磷酸二酯(PDE)]在假手术组中为0.54±0.03,2-VO组中为0.69±0.02,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);β-三磷酸腺苷(β-ATP)和磷酸肌酸(PCr)含量无明显改变.结论慢性脑缺血时大鼠脑部的神经元损伤不明显,能量代谢处于代偿状态,而细胞膜性结构增加.     

慢性脑低灌注大鼠海马胰岛素样生长因子-1信号通路的动态变化

目的 观察慢性脑低灌注模型大鼠海马组织胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)/IGF-1受体(IGF-1 receptor,IGF-1 R)信号通路与学习记忆功能的动态变化,探讨血管性痴呆(vascular dementia,VaD)的可能机制.方法 采用永久性双侧颈总动脉结扎法制作大鼠慢性脑低灌注模型;在模型制作后3d、1周、2周、1个月、2个月和4个月时,采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能的变化;HE染色观察海马神经元形态学改变;酶联免疫吸附法检测海马组织IGF-1、IGF -1R、Akt和p-Akt的动态变化.结果 模型组大鼠在造模后1个月开始出现明显的学习记忆功能障碍,穿越平台次数显著性低于假手术组[(1.91±0.45)次对(3.95±1.64)次;t=17.251,P=0.000].随着缺血时间的延长,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞损伤程度逐渐加重.模型组海马组织IGF-1和p-Akt含量在模型制作后早期增高,之后逐渐降低至正常水平,1个月时IGF-1[ (0.09±0.05) ng/mg对(0.20±0.03) ng/mg;t=-5.263,P=0.003]和p-Akt[(12.50±1.40)ng/mg对(17.13±0.87) ng/mg;t=-5.651,P=0.000]含量均显著低于假手术组,并持续至4个月时;IGF-1R和Akt含量无显著改变.结论 海马IGF-1/IGF-1R信号通路下调可能是VaD的发病机制之一.     

Creatine and nucleoside triphosphates in rat cerebral gray and white matter

In vivo localized nuclear magnetic resonance spectroscopy has shown three-fold higher phosphocreatine/nucleoside triphosphate (PCr/NTP) ratios in cerebral white compared to gray matter. To interpret these results, total creatine (Cr) and ATP concentrations were measured enzymatically in samples taken from rapidly frozen rat cerebral cortex and corpus callosum. Total Cr (PCr plus Cr) and ATP concentrations were the same in the two regions. High performance liquid chromatography showed similar concentrations of total NTP in the two regions. These results suggest that higherin vivo PCr/NTP ratios in white compared to gray matter may be due to a higher PCr/Cr ratio in white matter and/or higher percentages of non-adenine mono- or diphosphate nucleotides in gray matter.     

汉黄芩素对慢性脑缺血大鼠空间记忆的影响及其可能机制

目的 探讨汉黄芩素对慢性脑缺血大鼠行为学的影响和可能机制.方法 大鼠随机分为假手术组、汉黄芩素干预组和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)对照组.采用二血管闭塞法制作慢性脑缺血大鼠模型.模型制作后6周,汉黄芩素干预组和PBS对照组分别给予汉黄芩素(50 μmol/L,10 ml/kg,1次/d)和等体积PBS灌胃,共14 d.采用Morris水迷宫实验评价空间学习和记忆功能,激光共聚焦三维血管成像检测缺血脑组织血管增殖,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)免疫组化染色检测脑缺血区细胞增殖情况,透射电镜检测缺血区神经细胞形态学变化.结果 Morris水迷宫实验(n=8)显示,汉黄芩素干预组训练第2至第5天的逃避潜伏期分别为(43.45 ±8.64)s、(37.12±1.31)s、(34.75±5.36)s和(24.36±5.43)s,显著性短于PBS对照组的(51.69±5.32)s、(43.65±9.21)s、(50.19±10.31)s和(53.65±7.15)s(P均＜0.05);汉黄芩素干预组第一象限游泳时间较PBS对照组显著延长[(26.16±3.29)s对(14.38±2.16)s;P＜0.01].激光共聚焦三维血管成像检测(n=4)显示,与PBS对照组比较,汉黄芩素干预组脑缺血区毛细血管内径显著缩小[(3.02±0.21)μm对(3.35±0.18)μm;P ＜0.05],血管密度显著增高[(205.80±12.70)/0.002mm3对(158.42±10.92)/0.002 mm3;P＜0.01],微血管总面积显著增加[(833 89±4 026)μm2/0.002 mm3对(73 349±3 986)μm2/0.002 mm3;P＜0.01].免疫组化染色(n=6)显示,汉黄芩素干预组缺血脑组织BrdU阳性细胞数量较PBS对照组显著增多[(24.62±3.25)个/高倍视野对(9.87±2.89)个/高倍视野;P＜0.01].透射电镜观察显示,汉黄芩素干预组细胞间隙炎性水肿较PBS对照组明显减轻.结论 汉黄芩素可显著改善慢性脑缺血大鼠空间学习和记忆能力,其可能的机制包括促进缺血区细胞增殖和血管发生,减轻炎症反应.     

缺血后大鼠脑内神经血管单元病理损害的研究

目的观察慢性缺血后大鼠脑内神经血管单元的病理损害。方法将30只Wistar大鼠随机分为假手术组5只和缺血组25只。缺血组大鼠分别在缺血3、7、14 d、1、3个月时间段,各取5只灌注取脑,采用HE染色观察大鼠神经细胞的病理改变;免疫组织化学半定量检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)和层黏连蛋白(Laminin)的含量,观察其动态变化规律。结果缺血早期神经元皱缩、肿胀,后期嗜酸性变和坏死。星形胶质细胞早期肿胀、断裂,随着缺血时间的延长胶质细胞开始增生,形成瘢痕组织,同时伴有血管新生。与假手术组比较,缺血组大鼠5个时间段GFAP表达进行性增加;缺血3 d VEGF表达开始增加,7、14 d增加明显(P0.05),1、3个月VEGF表达虽有减少但仍高于假手术组(P0.05)。缺血3 d Laminin明显减少,7 d减少更明显,14 d、1、3个月表达逐渐增加(P0.05)。结论慢性脑缺血后在不同时间段,神经元、GFAP、VEGF、Laminin呈规律变化。脑部缺血后不仅是神经元的变化,还有胶质细胞、血管内皮细胞及基底膜的变化。     

间断性常压低氧后适应对慢性脑血流低灌注大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响

目的探讨间断性常压低氧后适应(intermittent normobaric hypoxia postconditionning,INHP)对慢性脑血流低灌注大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响。方法选择健康成年雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、INHP1组和INHP2组,每组8只。Morris水迷宫用于评价大鼠的认知功能,Klüver-Barrera染色用于评价脑白质损伤的严重程度,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、Iba-1抗体分别用于免疫标记脑白质中星形胶质细胞和小胶质细胞。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现认知功能障碍、脑白质中髓鞘脱失、空泡形成,并有星形胶质细胞、小胶质细胞活化;与模型组比较,INHP1组大鼠参考记忆力较差、脑白质损伤较重,脑白质中GFAP阳性星形胶质细胞、Iba-1阳性小胶质细胞较多(P<0.05),而INHP2组大鼠参考记忆力较好、脑白质损伤较轻,脑白质中GFAP阳性星形胶质细胞、Iba-1阳性小胶质细胞较少(P<0.05)。结论延迟INHP可改善慢性脑血流低灌注导致的认知功能障碍和脑白质损伤,而早期INHP是有害的。