金属硫蛋白和FasL在大肠癌组织中表达及临床意义的研究

目的探讨金属硫蛋白（MT）和FasL表达与大肠癌淋巴结及肝转移的关系。方法采用免疫组化和定量RT-PCR方法检测93例大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶MT、FasL表达。结果大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中MT表达阳性率分别为：58．1％、32．3％、81．1％、64．3％。FasL表达阳性率分别为：41．9％、19．4％、62．3％、92．9％。癌原发灶、肝转移灶和转移淋巴结中MT、FasL表达阳性率高于正常肠黏膜组织（X^2=35．2421、57．5152,P〈0.01）。转移淋巴结MT表达阳性率高于癌原发灶（X^2=8．0565,P〈0.01）。肝转移灶FasL表达阳性率高于转移淋巴结和癌原发灶（X^2=8．6674、22．4455,P〈0．01）。Dukes′C、D期MT、FasL表达阳性率高于Dukes′A、B期（X^2=18．8871、25．1650,P〈0．01）。低分化腺癌和黏液腺癌MT、FasL表达阳性率高于高分化和中分化腺癌（X^2=11．1546、9．2239,P〈0．05）。转移淋巴结中MT mRNA表达高于FasL mRNA表达。肝转移灶中FasL mRNA表达水平高于MT mRNA表达。结论MT、FasL增强表达与大肠癌淋巴结转移和肝转移有关,检测MT、FasL表达可作为大肠癌预后评价指标。     

蛋白激酶Cα、βⅡ、ε、ζ在结肠癌组织中的表达及意义

为探讨蛋白激酶C（proteinkinaseC,PKC）α、βⅡ、ε、ζ在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌发生、发展及转移的关系,采用免疫组织化学SP法检测64例原发性结肠癌（其中管状腺癌52例,包括高分化腺癌9例,中分化腺癌28例,低分化腺癌15例;黏液腺癌12例）及其淋巴结转移灶中PKCα、βⅡ、ε、ζ的表达情况。结果显示,PKCα、βⅡ在管状腺癌组织中的阳性表达率均高于黏液腺癌,P〈0．05;而PKCε在管状腺癌组织中的阳性表达率低于黏液腺癌,P〈0．05。在结肠癌淋巴结转移灶中PKCα的阳性表达率明显低于原发灶,P〈0．05。PKCε在管状腺癌高分化组的阳性表达率明显低于低分化组,P〈0．05,在各个肿瘤类型中,PKCζ的阳性率均较高,在90．0％以上。结果表明,PKCα、βⅡ、ε表达可能与结肠癌病理类型有关,而PKCε在黏液腺癌组织中的高表达可能与黏液分泌有关;PKCα可能在结肠癌的浸润、转移中起重要作用;PKCε高表达可能与结肠癌分化程度有关,PKCζ的阳性率较高,可能与肿瘤细胞的增殖或凋亡有关。     

精氨酸酶在结直肠癌原发灶及转移灶组织中的表达及意义

目的研究精氨酸酶在结直肠癌原发灶及转移灶组织中的表达及其意义,探究其在结直肠癌转移中的作用及临床应用价值。方法应用免疫组化方法检测正常肠粘膜、结直肠癌原发灶、淋巴结转移灶及肝转移灶中人精氨酸酶的表达,并进行数据统计分析。结果在不同分期的结直肠癌不同组织中,人精氨酸酶的表达有规律性的变化。癌组织中人精氨酸酶的表达显著高于正常肠粘膜组织（P〈0．01）,转移癌组织中人精氨酸酶阳性表达率比Ⅱ期癌原发灶组织明显增高（P〈0．05）;肝转移灶组织与淋巴结转移灶组织中人精氨酸酶的表达率无明显差异（P〉0．05）。结论人精氨酸酶在Ⅲ期、Ⅳ期结直肠癌原发灶组织及各种转移组织中高表达,可能与结直肠癌的转移相关。     

肝细胞生长因子及其受体c—Met表达与结直肠癌同时性肝转移的相关性研究

目的探讨肝细胞生长因子及其受体c-Met（HGF-cMet）的表达与结直肠癌同时性肝转移的关系。方法2001年6月至2010年6月间有30例结直肠癌同性性肝转移患者在山东省肿瘤医院接受原发癌和肝转移癌一期根治性切除术,根据其是否伴有区域淋巴结转移分为实验Ⅰ组（T1～T4N1～N2M1,21例）和实验Ⅱ组（T1-T4N0M1,9例）。并选取与实验I组匹配的T4-T4N1-N2M0患者（21例）和T1～T4N0M0患者（21例）以及与实验Ⅱ组匹配的T1-T4N0M0患者（9例）作为对照。应用免疫组织化学方法检测原发灶、淋巴结转移灶及其肝转移灶中HGF和c-Met的蛋白表达水平。结果实验Ⅰ组（T1～T4N1-N2M1）原发灶HGF阳性表达率[71％（15／21）]明显高于其匹配的T1～T4N1～N2M0对照组[43％（9／21）]和T1～T4N0M0对照组[19％（4／21）]（均P〈0．05）;且c—Met阳性表达率[90％（19／21）]也明显高于T1～T4N0M0对照组[43％（9／21）,P〈0．05],但与T1-T4N1-N2M0对照组[86％（18／21）]的差异则无统计学意义（P〉0．05）。实验Ⅱ组（T1～T4N0M1）与其对照组（T1～T4N0M0）原发灶HGF阳性表达率（6／9比5／9．P〉0．05）和c-Met阳性表达率（8／9比6／9,P〉0．05）的差异均无统计学意义。实验Ⅰ组患者原发灶、淋巴结转移灶及肝转移灶中HGF和c—Met表达一致率分别为81％（17／21）和76％（16／21）。结论HGF及其受体c—Met可能对存在区域淋巴结转移的结直肠癌同时性肝转移的发生具有一定作用,而对无淋巴结转移的结直肠癌发生肝转移的作用可能较小。     

非小细胞肺癌中HIF-1α蛋白的表达与多药耐药蛋白相关性的研究

目的　检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中乏氧诱导因子 (HIF) 1α、P 糖弹白 (gp)、多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ,探讨HIF 1α对P gp和MRP表达的影响。 方法　免疫组织化学技术检测 47例非小细胞肺癌中HIF 1α、P gp、MRP的表达情况。 结果　 (1)HIF 1α、P gp、MRP在NSCLC中的阳性表达率为 5 7.45 %、72 .3 4%、70 .2 1% ;(2 )HIF 1α、P gp、MRP在中高分化的肿瘤中的表达率明显高于低分化的肿瘤 (P <0 .0 5 ) ;(3 )在腺癌和鳞癌中HIF 1α、P gp、MRP的表达差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;(4 )HIF 1α的表达阳性标本中P gp和MRP表达率和HIF 1α的表达阴性标本中P gp和MRP表达率差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。结论　HIF 1α蛋白的表达与P gp和MRP的表达存在明显的相关性。     

缺氧诱导因子-1α和P糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、肺耐药相关蛋白在胃癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子（HIF）-1α与耐药蛋白P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药相关蛋白（LRP）在胃癌中的表达及HIF-1α在胃癌耐药中的作用。方法通过免疫组织化学方法研究含有168例的胃癌病例和27例正常胃组织的组织芯片中HIF-1α和耐药蛋白P-g、MRP1、LRP的表达及其关系。结果HIF-1α和耐药蛋白P-gp、MRP1、LRP在胃癌中的阳性表达率分别为51、8％、51．8％、45、8％、55．4％,均明显高于在正常胃组织中的表达（P〈0．05）。HIF-1α与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移显著相关。HIF-1α和P-gp,MRP1之间显著正相关（P〈0．05）。Kaplan-Meier分析显示HIF-1α和P-gp、MRP1阳性组的预后较阴性组差（P〈0.05）,COX回归多因素分析显示浸润深度,淋巴结转移和远处转移是独立预后因素。结论缺氧可能通过HIF-1α上调耐药蛋白P-gp、MRP1的表达参与胃癌化疗耐药形成。HIF-1α、P-gp和MRP1可能成为评价胃癌预后和耐药的有价值指标。     

耐药基因相关蛋白在胃癌术后辅助化疗及预后评价中的意义

目的探讨多药耐药基因（MDR）相关产物在胃癌组织中的表达及其对胃癌根治术后辅助化疗及预后评价的意义。方法用免疫组织化学方法检测99例胃癌组织中拓扑异构酶Ⅱ（ToPo Ⅱ）、多药耐药相天蛋白（MRP）和谷胱甘肽-S-转移酶（GST-π）的表达,分析其与胃癌临床病理特征的关系。将ToPo Ⅱ阴性表达、MRP阳性表达和GST-π阳性表达作为3个可能的危险因素,并将本组患者分成高危耐药组（2～3个危险因素）和低危耐药组（0～1个危险因素）,比较两组患者术后复发情况、生存率及辅助化疗的有效性.结果ToPo Ⅱ阳性表达率为74．7％．与胃癌组织类型及分化程度有关：MRP阳性表达率为40．4％,与胃癌临床病理因素均无关;GST-π阳性表达率为49．5％．与患者性别和胃癌分化程度有关。3种蛋白各自表达的阳性组与阴性组比较,术后复发率、复发时间及5年生存率的差异均无统计学意义（均P〉0．05）。高危耐药组术后有25例（55．6％）复发．复发时间为（15．2±8．1）个月,与低危耐药组比较,复发率差异无统计学意义（44．4％,P〉0．05）,但复发时间早于低危耐药组[（21．3±11．1）个月,P〈0．05];两组患者术后5年生存率分别为44．4％和55．6％．差异无统计学差异（P〉0．05）．高危耐药组中化疗患者与未化疗患者术后5年生存牢分别为45.8％和42．9％．差异无统计学意义（P〉0．05）;低危耐药组中化疗患者与未化疗患者术后5年生存率分别为70．4％和40．7％．差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MDR基因相关产物ToPo Ⅱ、MRP和GST-π的表达与胃癌根治术后辅助化疗的有效性有关．对于高危耐药的患者进行辅助化疗并不能改善预后,     

乳腺癌组织中HER2、ERα、ERβ、PR的表达及其相关性分析

目的探讨雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）在乳腺癌组织中的表达及其与TNM分期和腋窝淋巴结状况的关系。方法随机选择我院在2004年12月至2007年12月收治的HER2高表达（＋＋＋）51例与无表达（-）53例乳腺浸润性导管癌病例，分别检测乳腺癌组织的ERα、ERβ、PR的表达水平，分析其与TNM分期、腋窝淋巴结转移等临床指标的相关性。结果104例乳腺癌患者，TNM分期为I期的占14．42％，Ⅱ期占62．50％，Ⅲ期占19．23％，Ⅳ期占3．85％；HER2阳性的淋巴结转移率为41．18％，HER2阴性的转移率为47．5％；ERα、ERβ、PR的阳性表达率分别为52．88％、63．46％、73．08％。ERβ与ERα、PR的表达呈正相关（P〈0．01），与HER2的表达负相关（P〈0．01）；ERα与PR的表达正相关（P〈0．01），与HER2负相关（P〈0．01），PR与HER2的表达负相关（P〈0．05）；ERα、ERβ、PR、HER2的表达与淋巴结转移情况及TNM分期无显著相关性。结论HER2作为乳腺癌预后不良的重要指标与作为乳腺癌预后良好的重要指标ERα、ERβ、PR的表达呈负相关，与TNM分期及腋窝淋巴结转移状态未显示明显相关性。     

HIF-1α和MMP-7在直肠癌组织中的表达及相关性的研究

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxiainducible factor-1α，HIF-1α）和基质金属蛋白酶-7（matrix metal oproteinase-7，MMP-7）在直肠癌组织中的表达及相关性．并评价二者在直肠癌进展中的作用。方法：采用免疫组织化学SP法检测52例直肠癌组织中HIF-1α和MMP-7蛋白表达情况，分析二者的相关性及与临床病理特征的关系。结果：直肠癌组织中HIF-1α蛋白阳性表达率为67．3％，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）．且与淋巴结转移、Dukes分期情况相关（P〈0．01）。MMP-7蛋白在直肠癌组织中阳性表达率为71.2％。显著高于对照组（P〈0．01），且与淋巴结转移和Dukes分期情况也相关（P〈0．05） HIF-1α与MMP-7呈正相关（r=0．478，P〈0．01）。结论：HIF-1α和MMP-7在直肠癌的进展中起重要作用，HIF-1α可能通过调节MMP-7的过度表达参与直肠癌的发生发展。     

趋化因子受体CXCR1及CXCR2在胃癌腹膜转移中的表达及意义

目的检测趋化因子受体CXCR1及CXCR2在胃癌原发灶、癌旁组织和腹膜转移灶中的表达情况,分析其在胃癌腹膜转移中的临床意义。方法免疫组化法检测趋化因子受体CXCR1、CXCR2在胃癌腹膜转移患者原发灶、转移灶、癌旁组织和未转移患者原发灶中的表达情况;对胃癌腹膜转移的患者进行随访,比较趋化因子受体CXCR1及CXCR2阳性和阴性表达的中位生存时间;Logistic回归多因素分析胃癌腹膜转移的危险因素。结果CXCR1、CXCR2在胃癌腹膜转移组原发灶和癌旁组织中的表达有统计学差异（均P〈0．05）。发生腹膜转移和未发生腹膜转移的原发灶间,CXCR2的表达也有统计学差异（P〈0．05）,而CXCR1的表达差异则无统计学意义（P〉0．05）。CXCR2在胃癌腹膜转移灶中的阳性表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、肿瘤大小相关（均P〈0．05）;CXCR1在胃癌腹膜转移灶中的表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、肿瘤大小、肿瘤部位、淋巴转移、年龄、性别均无相关性（均P〉0．05）。CXCR2表达阳性的患者的术后生存时间低于CXCR2表达阴性的患者。原发肿瘤的大小、浸润深度、分化程度,以及原发灶中CXCR2的表达是胃癌腹膜转移的危险因素。结论趋化因子受体CXCR1、CXCR2的表达水平与胃癌的生长有关;而CXCR2的表达与胃癌腹膜转移有关。     

逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的研究进展

目的 介绍目前mdr1基因导致肿瘤对化疗药物产生多药耐药性的研究进展。方法 采用文献回顾的方式对肿瘤研究中采用的各种方法逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的文献进行综述。结果 mdr1基因及其表达产物P-糖蛋白的过度表达是导致肿瘤具有多药耐药性的重要原因，可以从mdr1基因的mRNA和P-糖蛋白两个方面进行有效的逆转肿瘤多药耐药性。结论单一阻抑mdr1基因或P-糖蛋白的表达，以逆转肿瘤多药耐药性的临床试验结果并不满意，多种方法联合应用是今后逆转肿瘤对化疗药物多药耐药性的研究热点。     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞多药耐药的影响

目的观察乙肝病毒（HBV）X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响，探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3／HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株，噻唑蓝（MTr）法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率，An—nexin／PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用后的凋亡指数（AJ），逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下，转染了peDNA3／HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组（P〈0．05）。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是（9．83±1．50）％VS（17．79±1．70）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞，转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190％、68％、95％；而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64．3％、87．5％和90．8％。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达，从而促进肝癌多药耐药性的产生。     

边缘群细胞在肝癌耐药中的作用及其机制

目的 观察肝癌细胞株Li-7中边缘群在肝癌耐药中的作用,并分析其可能机制.方法 流式细胞术分选边缘群和主群细胞后,MTS法比较阿霉素作用下两亚群细胞增殖能力,流式分析ABCG2/BCRP表达,观察边缘群细胞的耐药作用.利用P13K抑制剂LY294002,分析Akt信号通路对边缘群细胞表型及耐药现象的作用.结果 边缘群细胞占Li-7细胞总数(2.07±0.22)%,阿霉素作用后其增殖能力高于主群细胞,吸光度值第9天(0.33±0.06比0.05±0.02,P<0.05),第12天(0.58±0.09比0.04±0.02,P<0.01),ABCG2/BCRP荧光强度高于主群细胞(212.72±21.01比96.36±18.36,P<0.05).LY294002作用后,边缘群细胞比例降至(0.96±0.21)%,阿霉素作用后细胞存活率由(64.93±6.96)%降至(38.73±5.25)%(P<0.01).结论 Li-7细胞边缘群耐药性较强,其机制与有功能的ABCG2/BCRP及Akt信号通路有关.     

单基因人肝癌耐药细胞株(HepG2/MRP1)的构建及其生物学意义

目的 对抗肿瘤药的天然耐药和化疗过程中产生的继发性耐药是肝癌化疗敏感性差的重要原因之一,为探讨体外逆转肝癌多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的新方法,笔者建立了单因素人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/mrp1,并研究其牛物学特性.方法 双酶切克隆质粒pGEMmrp1获得人全长多药耐药相关蛋白基因(mrp1),并将其插入哺乳动物表达载体pCI-neo的多克隆位点,构建重组载体,利用质脂体法将重组载体转入人肝癌细胞HepG2,建立单基因耐药细胞株HepG2/mrp1.观察细胞的生长规律;MTT法检测其多药耐药性;流式细胞仪检测细胞表面多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)的表达;RT-PCR检测MRP1 mRNA表达量.结果 与HepG2细胞相比较,HepG2/mrp1细胞的倍增时间延长30.86 h.该细胞对多种抗肿瘤药耐药,HepG2/mrp1对阿霉素和柔红霉素的耐药指数比亲本细胞增加了11.4倍和8倍,细胞表面MRPl的表达明显增加,mrp1 mRNA明显增加.结论 HepG2/mrp1细胞稳定高表达MRP1,具有多药耐药性,为进一步研究肝癌的多药耐药构建了一个技术平台.     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒的构建及其应用的初步研究

目的　构建携带反义多药耐药相关蛋白 (MRP)的重组腺病毒并转染人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药的基因治疗提供实验研究基础。方法　将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack CMV上 ,与骨架质粒在细菌体内进行同源重组 ,经 2 93细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp ,再用其转染人肝癌耐药细胞株SMMC 772 1 /ADM。结果　成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒 ,病毒滴度为 2 .5× 1 0 9efu/ml,多重感染复数为 1 0 0时对SMMC 772 1 /ADM细胞株转导效率可达 90 %以上。结论　构建的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp可望有效地将反义MRP导入人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药机理及其逆转方式的研究提供实验基础。     

黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24促进阿霉素杀伤肝癌细胞MHCC-97L机制的研究

目的 探讨黑色紊瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(MDA-7/IL-24)基因促进阿霉素(ADM)杀伤肝癌细胞,逆转肝癌细胞多药耐药(MDR)的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97L为实验对象,使用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪比较Ad. MDA-7联合ADM处理组与ADM组、Ad. MDA-7组对肝癌细胞MHCC-97L和正常肝细胞L02的作用差异.观察MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用.荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MDR-1、STAT-3、bcl-2、bax mRNA的变化.Western blot检测gp-170、STAT-3、bcl-2、bax蛋白的表达的变化.结果 MTT表明Ad. MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用(P>0.05).LO2细胞Ad. MDA-7联合ADM组与ADM组细胞生存率差异无统计学意义(P>0.05).低浓度(100 VP/cell)的Ad. MDA-7联合正常肝细胞的IC50浓度的ADM(1.5 mg/L)使得细胞抑制率从ADM组的17.46%上升到79.50%,生长抑制逆转4.55倍(P<0.05).MDR-1mRNA相对表达量从(16.49±0.11)下降至(5.48±0.05).STAT-3 mRNA相对表达量从(13.17±0.08)上升至(21.57±0.11).bcl-2及BAX表达与其他实验组比较差异均有统计学意义(P<0.05).联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,而磷酸化STAT-3蛋白的表达量亦增加.结论 Ad. MDA-7具有逆转肝癌细胞MHCC-97L多药耐药的作用,其下调MDR-1 mRNA的表达的同时,并通过活化STAT-3信号通路的表达促进肝癌细胞凋亡.     

多药耐药真核表达载体的构建及其生物学特性

目的 构建携带多药耐药相关蛋白（MRP）全长基因的真核表达载体，并研究其在人肝癌细胞株HepG2中的表达特性。方法 双酶切克隆质粒pGEM-mrp1，获得含mrp1全长的cDNA片段，再将此片段定向克隆到哺乳动物真核表达载体pCI-neo的多克隆位点，经脂质体法转染HepG2细胞，G418筛选获得稳定表达的转基因细胞系HepG2／mrp1。RT—PCR检测HepG2／mrp1细胞mrp1 mRNA表达，流式细胞仪检测HepG2／mrp1细胞MRP的含量。结果 本实验所构建的携带mrp1全长基因的表达载体pCI-mrp1能在HepG2细胞中表达，形成稳定的多药耐药细胞系HepG2／mrp1，其多药耐药性、MRP含量及mrp1mRNA表达均较未转染该载体的HepG2细胞显著增加。结论 将携带全长人多药耐药相关蛋白基因mrp1的载体导人人肝癌细胞株能够建立高效、稳定的多药耐药细胞株，为进一步研究多药耐药的机理及逆转多药耐药提供理想的细胞模型。     

蛋白激酶Cα-cDNA对肾癌细胞786-0多药耐药基因表达的影响

目的探讨蛋白激酶Cα（PKCα）基因对肾癌细胞多药耐药（MDR）基因的影响。方法采用基因工程技术构建整合有PKCα基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的真核表达载体，利用脂质体介导法在体外将PKCα基因导入人肾癌786-0细胞，利用荧光倒置显微镜、Western blot方法检测基因转录和表达情况。同时检测PKCαcDNA对肾癌786-0细胞转染前后细胞中MDR相关基因MDR1、MRP1、LRP的表达变化。结果PKCα基因转染786-0细胞后，Western blot显示转基因细胞中有PKCα的高表达；荧光倒置显微镜观察证实转基因细胞中有绿色荧光蛋白的阳性高表达。RTPCR结果表明肾癌转染细胞系PKCα／786-0的MDR1表达水平高于肾癌786-0细胞。结论PKCα-cDNA可上调肾癌细胞786-0 MDR1表达量，可能导致肾癌多药耐药性的提高。     

9种耐药相关蛋白在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞癌（HCC）及癌旁肝组织中9种多药耐药（MDR）相关蛋白表达的差异，并结合肿瘤的病理学特征进行分析。方法未经化疗的98例肝癌及其癌旁肝组织构建组织芯片，应用免疫组织化学方法检测P-gp、MRP3、LRP、GST-π、Cycfin D1、Cycfin E、p16^INK4a、p21^WAF1和p27^Kip1共9种耐药相关蛋白的表达水平。结果除Cyclin D1外，其余8种耐药相关蛋白在HCC与癌旁肝组织中的表达差异均有统计学意义（P〈0．01）；CyclinD1在伴门静脉癌栓HCC中的表达显著高于不伴癌栓组（P〈0．01）。结论HCC的天然耐药现象具有复杂性和多样性，CycfinD1的高表达可能与HCC的转移和预后有关。