CIK细胞对人肺腺癌AS49／DDP耐药细胞株的抗增殖及诱导凋亡形态学研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对A549／DDP肺癌耐药细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法应用细胞计数法设计细胞浓度,通过相差显微镜下观察CIK细胞对A549／DDP肺癌耐药细胞株形态学影响。结果随着CIK细胞与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强,CIK细胞作用于肺癌细胞24h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死。结论体外制备的CIK细胞对肺癌耐药细胞株A549／DDP具有抑制增殖和促进凋亡作用。     

17-AAG协同顺铂抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的：观察热休克蛋白90（HsPg0）抑制剂17-AAG与顺铂（cispiatin,DDP）联用对肺腺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度17-AAG、顺铂及两药联用对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并应用中效原理评价两药联用效应。结果：顺铂和17-AAG均对A549细胞的生长有较好的抑制作用,并呈现一定的剂量依赖性,顺铂作用48h时,其IC50值为69．627μmol／L;17-AAG的1C5。值为0．455ttmol／L。顺铂联合17-AAG显示更强的抑制作用,特别是在低剂量下协同作用更明显。结论：17-AAG联合顺铂对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应。     

顺铂降低铜离子转运蛋白1表达诱导人食管鳞癌细胞耐药

目的诱导对顺铂耐药的人食管鳞癌细胞株,并进一步研究细胞耐药性产生的机制。方法逐渐增加顺铂浓度处理人食管鳞癌细胞HKESC-1,诱导顺铂耐药细胞株HKESC-1/cis。MTT法观察顺铂的细胞毒作用以及细胞的生长曲线。电感耦合等离子体质谱检测细胞内顺铂的蓄积和Pt-DNA加合物的形成。Western blot检测铜离子转运蛋白(copper transporter 1,CTR1)的表达。结果顺铂耐药细胞株HKESC-1/cis较其亲代细胞HKESC-1对顺铂引起的细胞毒作用敏感性下降,耐药指数为2.9。顺铂耐药细胞株HKESC-1/cis与其亲代细胞HKESC-1的生长速度相似。然而,HKESC-1/cis细胞内顺铂蓄积和Pt-DNA加合物的形成较HKESC-1细胞减少,并且CTR1蛋白表达水平降低。结论顺铂通过降低细胞膜CTR1蛋白的表达,抑制顺铂进入细胞,导致细胞耐药性的产生。     

Twist1基因在A549与A549/DDP细胞中的表达及意义

目的　检测人Twist1 基因在A549 与A549/DDP 细胞株中的表达,探讨Twist1 与肺腺癌顺铂耐药的相关性。方法　通过细胞计数,观察不同浓度梯度顺铂干预24 h 后A549 细胞和A549/DDP 细胞的生长情况;用RIPA 裂解液裂解A549、A549/DDP 细胞,充分游离细胞总蛋白,用BCA 法检测总蛋白浓度,ELISA法检测Twist1 转录因子的浓度。结果　定义m 值（m=Twist1 转录因子浓度/ 总蛋白浓度）。浓度为0、10、20、30、40、50 mg/L的顺铂干预下,分别测得A549 与A549/DDP 的m 值为3.01/3.31、2.17/2.82、1.63/2.94、1.73/1.99、-/1.31、-/-,A549/DDP 细胞的m 值显著大于A549 细胞（P<0.05）。结论　Twist 1 基因在人顺铂耐药肺腺癌细胞中表达增高,提示Twist1 可能与肺腺癌顺铂耐药相关。     

善宁联合抗肿瘤药物对肺腺癌细胞株Spc—al生长影响的实验研究

目的观察不同浓度生长抑素类似物善宁与数种抗肿瘤药物在体外对肺腺癌细胞株Spc-al生长的影响。方法用MTT法检测不同浓度善宁联合抗癌药物对肺腺癌细胞Spc-al抑瘤试验。结果善宁对肺腺癌Spcal细胞作用效应与其不同浓度的药物剂量呈明显正相关（P=0．0001）;不同浓度善宁与顺铂1．0μg·mL^-1及羟基喜树碱1．0μg·mL^-1联用时有统计学差异（P值分别为：0．001．0．046）;结论在体外善宁可有效抑制肺癌细胞Spc．al生长。与顺铂和羟基喜树碱药物配伍有累积抗癌效应。     

瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株耐药及凋亡的影响

目的探讨瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡率及耐药基因表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物、顺铂分别及联合处理人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP,用MTT法检测肺癌细胞凋亡率、实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance protein1,MRP1)基因mRNA水平以及用Westernblot检测多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein1,MRP1)的表达水平。结果不同浓度瑞香狼毒水提取物作用相同时间或相同浓度作用不同时间对A549和A549/DDP的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒处理前后A549/DDP细胞株与A549细胞株相比,对顺铂的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);同时两细胞株与瑞香狼毒和顺铂联合孵育后MRP1mRNA水平及MRP1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒水提取物有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对肺癌耐药具有一定的逆转作用。     

人鼻咽癌耐药裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的：优化建立人鼻咽癌CNE-1／顺铂耐药裸鼠移植瘤模型的方法,并检测其药耐药性,为后续鼻咽癌的耐药机制研究奠定基础。方法采用顺铂诱导鼻咽癌CNE-1细胞,建立其多药耐药细胞株CNE-1／顺铂细胞;将3个不同浓度的耐药细胞分别接种于裸鼠皮下,观察其成瘤性及转移情况;蛋白印迹法检测LRP、VEGF、Bcl-2在CNE-1细胞、CNE-1／顺铂耐药细胞和移植瘤的表达情况。结果经顺铂诱导建立了鼻咽癌CNE-1／顺铂耐药细胞株;其对顺铂、长春新碱和紫杉醇的耐药性分别增加35．83、23．74和10．54倍。5×106／ml的耐药细胞成瘤率为83．33％,其他2个浓度耐药细胞未见成瘤,所有裸鼠均未见肝、肺等器官出现转移瘤。 LRP、VEGF和Bcl-2蛋白在耐药细胞和移植瘤中的表达均高于CNE-1细胞（ P ＜0．05）。结论 CNE-1／顺铂耐药细胞的成瘤性与细胞浓度有关,CNE-1耐药细胞移植瘤依然保持很好的耐药性,可为鼻咽癌耐药逆转剂的研究提供较理想的动物模型。     

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。     

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg&#183;ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23&#177;0．04）μg&#183;ml^-1和（0．26&#177;0．02）μg&#183;ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63&#177;0．31）μg&#183;ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

电感耦合等离子质谱法测定肺腺癌细胞内顺铂浓度及其在耐药研究中的应用

目的：检测肺腺癌细胞内顺铂浓度，从而研究肺腺癌对顺铂的耐药与细胞内顺铂浓度的关系。方法：用四甲基偶氮唑蓝（methyhhiazolyl tetrazolium，MTT）法测定A549／DDP细胞的耐药倍数，用ICP—MS测定细胞内顺铂（diammine dichloroplatinuln，DDP）含量。结果：铂浓度在0．5～50μg&#183;L^-1范围内线性关系良好，铂最低检出限为0．029μg&#183;L^-1，RSD为0．41％～4．7％，回收率为98．2％～99．7％。耐药细胞A549／DDP内顺铂的浓度显著低于A549细胞？结论：首次建立了ICP—MS测定细胞内顺铂浓度的方法。本方法准确、灵敏、简便，可用于测定细胞内顺铂浓度及肿瘤细胞耐顺铂的研究。     

左旋一叶蔌碱诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬机制的研究

目的：研究左旋一叶荻碱诱导人非小细胞肺癌A549、细胞自噬的机制。方法：常规体外培养人非小细胞肺癌A549细胞株,取对数生长期的细胞传代24h后加入不同浓度（6．25、12．5、25、50、100、200μMol／L）左旋一叶荻碱处理,分别继续培养24、36、48h后,用CCK-8法测定细胞增殖活性;倒置显微镜下观察对照组和各实验组的细胞形态变化;分别用不同浓度（0、20μmol／L）左旋一叶荻碱作用A549细胞48h后,进行单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine,MDC）染色,分别通过荧光显微镜检测细胞自噬发生情况;荧光定量RT-PCR法检测Beclin1在mRNA水平表达变化情况。结果：左旋一叶荻碱可以抑制A549细胞增殖,并且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。其中,21．204μmol／L左旋一叶荻碱作用A549细胞48h后,细胞死亡率接近50％;倒置显微镜观察到药物作用后细胞形态发生了明显变化;随着左旋一叶荻碱剂量增加,MDC阳性细胞的荧光强度及细胞内MDC荧光颗粒数目明显增加。另外,研究还发现随着药物浓度的上升,自噬基因Beclin 1的表达明显增强。结论：左旋一叶荻碱具有抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖、诱导细胞自噬性凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性。左旋一叶荻碱上调自噬基因Beclin 1 mRNA的表达水平可能是其诱导A549细胞自噬性凋亡的机制之一。     

羟基喜树碱联合长春地辛及顺铂治疗晚期非小细胞肺癌26例疗效观察

目的观察羟基喜树碱联合长春地辛及顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效。方法将我院晚期非小细胞肺癌的患者分为两种,VP组20例：予长春地辛50mg静脉推注第1天及第8天、顺铂40mg静脉滴注第1天至第3天;VPH组26例：予羟基喜树碱10mg静脉滴注第1天至第5天。长春地辛和顺铂用法同VD组,观察两组患者的疗效。结果 VP组9例有效,有效率45%,VPH组16例有效,有效率61.5%,两组比较,疗效有显著差异（P〈0.05）。结论羟基喜树碱联合长春地辛及顺铂治疗晚期非小细胞肺癌,疗效好,毒副反应不大,价格适中,值得基层医院试用。     

西妥昔单抗治疗不同性别大肠癌患者的疗效观察

目的:观察西妥昔单抗治疗不同性别大肠癌患者的疗效。方法:回顾性分析我院2013年1月-2014年3月住院手术治疗的表皮生长因子受体(EGFR)阳性的KRAS野生型的大肠癌患者92例,以性别分成男、女两组,均采用FOLFIRI+西妥昔单抗方案治疗,临床病理学特征、治疗效果及不良反应与性别之间的关系。结果:大肠癌患者中男女比例1.42∶1;高分化腺癌男组33例(61.11%)、女组9例(23.68%),中分化腺癌男组9例(16.67%)、女组19例(50.00%),两组间差异均有统计学意义(P<0.05);女组客观有效率(ORR)为34.21%,较男组(14.81%)高(P=0.029),女组疾病控制率(DCR)为73.68%,较男组(50.00%)高(P=0.023),两组间差异均有统计学意义(P<0.05);女组患者治疗后皮疹发生率(57.89%)明显高于男组(33.33%),差异有统计学意义(P=0.019),而其他不良反应在患者性别间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:大肠癌以男性多见,男组病理学分型高分化腺癌明显高于女组;女性患者在接受FOLFIRI标准化疗+西妥昔单抗治疗后获益更明显;女性大肠癌患者使用西妥昔单抗后更易发生皮疹。     

纤维支气管镜检查在诊断青年肺癌中的应用

目的探讨纤维支镜下青年肺癌的临床特点,组织学类型与年龄段、性别、部位和镜下表现间的关系。方法对46例40岁以下青年肺癌纤维支气管镜检查资料进行回顾性分析。结果男女比例为2.07：1;主要症状以出现咳嗽者最多,32例（69.6%）;组织学分型腺癌28例最多见（60.9%）,其次为鳞癌11例（23.9%）。结论纤维支气管镜检查是诊断青年肺癌的重要手段,有助于早期发现和早期诊断。     

243例青年肺癌的纤维支气管镜检查应用

目的探讨纤维支镜下青年肺癌的临床特点,组织学类型与年龄段、性别、部位和镜下表现间的关系。方法对243例40岁以下青年肺癌纤维支气管镜检查资料进行回顾性分析。结果男女比例为1.8：1;主要症状是出现咳嗽、咳痰117例,痰中带血82例,总数199例（81.9%）;组织学分型小细胞癌115例最多见（47.3%）,其次为鳞癌60例（24.7%）,再次为腺癌26例（10.7%）。结论纤维支气管镜检查是诊断青年肺癌的重要手段,有助于早期发现和早期诊断。     

紫杉醇联合奈达铂或顺铂周方案同步放化疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的临床研究

目的观察每周小剂量紫杉醇联合奈达铂或顺铂同步放化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及不良反应。方法 58例不能手术Ⅲ期非小细胞肺癌患者(Ⅲa期22例,Ⅲb期36例),随机分为观察组29例:接受紫杉醇45mg/m2 d1+奈达铂25 mg/m2 d1化疗,每周一次。对照组29例:接受紫杉醇45mg/m2 d1+顺铂25 mg/m2 d1化疗,每周一次。两组同期行肺部三维适形放疗(GTV:6600cGy/30f/6+w、CTV:6000 cGy/30F/6+w、PTV:5400 cGy/30F/6+w)。结果同步放化疗后评价疗效:观察组:CR1例;PR17例,总有效率(CR+PR)66.7%。对照组:CR0例;PR15例,总有效率(CR+PR)71.4%。χ2=0.02,P>0.05,两组比较差异无统计学意义。白细胞减少;贫血;肝功损害;放射性肺炎及放射性食道炎发生率两组比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。肾功损害,恶心;呕吐及体质量下降>10%,发生率观察组明显低于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇联合奈达铂与紫杉醇联合顺铂同步放化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌疗效确切,但紫杉醇联合奈达铂比紫杉醇联合顺铂患者耐受性更好。     

多西他赛联合顺铂、氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的临床观察

目的：观察多西他赛联合顺铂、氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的临床疗效及不良反应。方法：68例晚期胃癌患者采用多西他赛75mg·（m2）-1静脉滴注,第1天,化疗前预处理,顺铂20mg·（m2）-1,静脉滴注,第1～5天,氟尿嘧啶500mg·（m2）-1,静脉滴注,第1～5天,21天为1个周期,治疗至少2周期评定疗效。结果：完全缓解（CR）4例（5.9%）,部分缓解（PR）29例（42.6%）,病情稳定（SD）9例（27.9%）,病情进展（PD）16例（23.5%）,总有效率（CR＋PR）为48.5%,临床受益率69.1%,中位生存期8.1个月,其中初治组有效率为54.2%（26/48）,复治组有效率为35%（7/20）,无CR病例,两组无显著差异（P〉0.05）。不良反应为胃肠道反应、骨髓抑制及脱发。其中Ⅲ～Ⅳ度粒细胞计数减少占14.7%,Ⅲ～Ⅳ度恶心呕吐占8.8%,脱发100%,大部分患者可以耐受。结论：多西他赛联合顺铂、氟尿嘧啶治疗晚期胃癌疗效高,耐受性好。     

顺铂联合吉西他滨或多西他赛对晚期非小细胞肺癌的近期疗效和不良反应的观察

目的 比较顺铂联合吉西他滨或多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效和不良反应.方法 选取浙江省舟山医院2009年1月至2012年3月晚期非小细胞肺癌化疗初治患者120例,完全随机分为GP组（吉西他滨±顺铂）和DP组（多西他赛±顺铂）,每组60例.2组均给予顺铂30 mg/m^2,静脉滴注,第1～3天;GP组给予吉西他滨1 000 mg/m^2,静脉滴注30 min,第1、8天;DP组给予多西他赛75 mg/m^2,静脉滴注60 min,第1天.21 d为1个周期,共化疗2个周期.评价近期疗效和不良反应.结果 2组均无完全缓解病例.GP组和NP组的总缓解率分别为41.7％ （25/60）和43.3％（26/60）,差异无统计学意义（P＞0.05）.GP组白细胞下降、肌肉酸痛的发生率明显低于DP组,差异有统计学意义[白细胞下降：63.3％ （38/60）比81.7％（49/60）,肌肉酸痛：0比31.7％ （19/60）,P＜0.05];血小板减少、皮疹的发生率明显高于DP组,差异有统计学意义[血小板减少：73.3％ （44/60）比33.3％（20/60）,皮疹：36.7％（22/60）比0,P＜0.05].结论 以顺铂为基础联合吉西他滨或多西他赛的双药化疗方案的近期疗效相当,不良反应各有侧重点,化疗过程中对不良反应应针对性地观察、预防和治疗.     

肺癌常规放疗与适形放疗致急性放射性肺炎的比较

目的：比较肺癌适形放疗和常规放疗所致的急性放射性肺炎。方法：2008年11月～2009年3月,26例非小细胞肺癌,适形放疗N14例,普通放疗组12例。观察急性放射性肺炎。结果：26例患者均顺利完成治疗。常规放疗与适形放疗所致放射性肺炎总的发生率分别为16．7％（2／12）、21．4％（3／14）。结论：非小细胞肺癌,适形放疗比常规放疗所致急性放射性肺炎基本相同,差异无显著性。     

白英乙醇提取物诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白英乙醇提取物对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及凋亡相关基因fas和caspase-3表达的影响。方法:采用体外培养人肺癌SPC-A-1细胞,随机分为正常对照组、白英乙醇提取物处理组(浓度分别为2.5、5、10mg.L-1)和阳性对照组(顺铂);药物处理48h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测细胞凋亡率,半定量反转录-聚合酶链反应检测fas和caspase-3mRNA表达水平。结果:与正常对照组比较,白英各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01),fas和caspase-3mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物可能通过上调fas和caspase-3基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SPC-A-1细胞增殖。