清远市连南地区瑶族人群HLA-B1502基因表达分析

目的探讨连南地区瑶族遗传背景下HLA-B*1502基因的分布频率。方法选取2016年1月至2018年10月在连南瑶族自治县人民医院住院的805例患者为研究对象。采用实时定量聚合酶链反应检测患者HLA-B*1502的表达,比较瑶族人群和非瑶族人群HLA-B*1502基因阳性率、基因频率,分析影响瑶族人群HLA-B*1502基因阳性率的因素。结果广东省清远市连南地区瑶族人群HLA-B*1502基因阳性率为13.39%,基因频率为0.103;而非瑶族人群的HLA-B*1502基因阳性率为16.35%,基因频率为0.123。两组患者的HLA-B*1502基因阳性率比较,差异无统计学意义(χ~2=1.079,P=0.299)。HLA-B*1502阳性的瑶族患者的平均年龄为(51.63±17.87)岁,明显高于HLA-B*1502阴性的瑶族患者的平均年龄[(47.07±20.92)岁,t=2.187,P=0.029]。结论广东省清远市连南地区瑶族人群HLA-B*1502基因频率为0.103,且HLAB*1502携带情况与年龄存在一定关系。     

HLA-B新等位基因B~*4069的确认

目的识别和确认中国人群的HLA新等位基因。方法使用PCR-SSO技术进行HLA分型工作,发现反应格局异常的新等位基因,采用DNA双向测序技术测定新等位基因的核苷酸序列,并与已知等位基因进行序列比对分析。结果检出1个样本HLA-B位点反应格局异常,DNA测序结果显示HLA-B位点的1对等位基因分别为B*5801和1个核苷酸序列与已知HLA等位基因均不同的新等位基因。该基因序列与同源性最高的HLA-B*400101基因序列相比在第2外显子区域中263位碱基发生C>T突变,导致64位编码氨基酸由苏氨酸(Thr)>异亮氨酸(Ile)。结论该等位基因为新的HLA-B位点等位基因,2006年9月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*4069。     

奥卡西平导致的皮肤不良反应与HLA-B*1502、HLA-B*1301基因的关系

目的 探讨奥卡西平(oxcarbazepine,OXC)导致的皮肤不良反应(cutaneous adverse reactions,cADRs)与HLA-B*1502、HLA-B*1301基因的关系.方法 采用病例对照研究,联合多中心于2017年1月至2020年12月募集服用OXC后出现cADRs的患者、OXC耐受患者...     

中国北方汉族人群HLA-Cw~*高分辨等位基因频率分析

本研究从基因水平了解HLA-Cw*位点在中国北方汉族人群中的分布频率,分析HLA-Cw*等位基因的群体遗传学特点及基因频率分布的地区差异。采用PCR-SSP分型技术对420名中国北方汉族人群HLA-Cw*位点进行高分辨基因分型,并对其分布规律进行统计学分析。结果表明:共检出30个HLA-Cw*等位基因,分布频率最高的有Cw*0102;0702;0602(0.1776;0.1217;0.1150),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,0801,0303,0302,0401,1402。首次在该人群中检测到HLA-Cw*0506,0810,1510,1601和1701较少见等位基因。统计分析表明,HLA-Cw位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(p0.05)。结论:采用高分辨等位基因分型,可准确了解HLA-Cw*位点等位基因在我国北方汉族群体中的分布规律和特征,为HLA-Cw*座位的相关研究提供了依据。     

HLA-B新等位基因B*3936的确认和测序分析

本研究确认HLA新等位基因HLA—B％3936并分析其序列。先证者为脐血造血干细胞捐献者，样本DNA抽提采用PEL—FREEZ抽提试剂盒，利用单链特异性引物PCR方法扩增先证者HLA—B基因的第2—4外显子，对PCR产物直接进行第2、3、4外显子双向测序分析。结果显示：先证者样本中存在2个HLA—B等位基因，其中1个等位基因为HLA—B％4002，另1个经Blast验证确定为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（DQ242650，DQ24265l，DQ242652）。与最接近的B％3901等位基因比较，新的等位基因在第3外显子上有4个核苷酸的差异，其中第527位T→A、第538位C→T、第539位T→G、第544位A→G，这引起氨基酸第152位缬氨酸（Val）→谷氨酸（Glu）、第156位异壳氨酸（Ile）→色氨酸（Trp）、第158位苏氨酸（Thr）→丙氨酸（Ala）。实验结果提示该等位基因为新的HLA-B等位基因，已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA—B％3936。     

湖南地区汉族健康人群HLA-B*27基因多态性调查

目的 调查湖南地区汉族健康人群中HLA-B* 27基因多态性.方法 对3488名湖南汉族健康造血干细胞志愿捐献者进行HLA -B基因测序分型,对HLA-B* 27健康携带者亚型分布情况进行分析.结果 3488名湖南汉族志愿捐献者中,共检出HLA-B*27基因健康携带者99名,在人群中的分布比例为2.84％,男女比例无明显差异.99名健康携带者中,共检出HLA-B*27基因亚型6种,其中以HLA -B*27∶04为主(68/100),其次是HLA-B* 27∶05(18/100),HLA -B*27∶06(7/100),HLA-B* 27∶ 07(3/100),HLA-B* 27∶ 02 (2/100),HLA-B*27:24(2/100).结论 湖南地区汉族健康人群HLA-B* 27基因亚型以B*27∶04、B*27∶05为主.     

HLA-B新等位基因B~*4608的核苷酸序列分析

目的分析1个HLA-B位点有异常反应格局样本的核苷酸序列。方法采用DNA快速抽提试剂盒抽提样本基因组DNA,PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第1-8外显子,PCR产物直接经TOPO TA克隆到质粒载体中以获得单链,对克隆所得产物进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。结果先证者样本克隆测序得到两个等位基因,其中1个等位基因为B*5502,另1个经Blast验证为新等位基因,其序列已递交Genbank(DQ177521,DQ177522,DQ177523)。与最接近的B*4601等位基因序列相比,新等位基因在第3外显子上有2个核苷酸不同,即第538位T→C和第539位G→T,并由此导致1个氨基酸改变:第156位色氨酸→亮氨酸。结论该新HLA-B等位基因已WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*4608。     

HLA新等位基因HLA-B*35:155的确认

目的发现和认定一个人类白细胞抗原(HLA)新等位基因。方法应用多聚酶链式反应—基于测序的分型技术(polymerase chain reaction-sequence based typing,PCR-SBT)进行HLA常规分型,HLA-B位点分型结果与等位基因B*35:03:01,51:01:01在112位有一个碱基不匹配,不能指定为任何HLA-B位点等位基因,用针对于B*35、B*51的序列特异性SSSP引物测序,确认与同源性最高的HLA等位基因序列的差异。结果测序结果表明该等位基因与其同源性最高的等位基因B*35:03:01的差异是在第2外显子112位的C>T,其突变导致密码子CGG>TGG,结果造成B*35:03:01氨基酸序列中14位的精氨酸(R)变为色氨酸(W)。结论该等位基因为HLA-B位点的一个新等位基因,世界卫生组织(WHO)HLA命名委员会将其正式命名为HLA-B*35:155。     

HLA-B*2705重链的原核表达和活性鉴定

本研究探讨HLA-B*2705重链的原核表达及活性鉴定。从HLA-B*2705全长cDNA中PCR扩增出膜外区片段并克隆进入pGEM-T载体,序列测定后构建原核融合表达载体pET32a( )-B*2705,并转化大肠杆菌。Western Blot和阻断抗体反应鉴定它们在体外是否具有HLA-B27抗原活性。结果表明:HLA-B*2705重链融合蛋白在大肠杆菌中获得高效融合表达,表达产量占细菌总蛋白的50%以上;通过Western Blot和阻断抗体反应鉴定它们在体外具有HLA-B27抗原活性。结论:本研究获得了HLA-B*2705重链融合蛋白,为今后的相关研究打下了基础。     

中国汉族人群HLA-B*40组的多态性研究

为了研究中国汉族人群HLA—B^*40等位基因的分布特点，探讨其可能对临床供者选择的影响，从中华骨髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者，用PCR—SSO方法进行HLA—B基因分型；另从已分型的1270例供者中选出低分辨率结果为B^*40纯合子的样本。所有B^*40阳性标本采用PCR—SBT及PCR—SSP方法进行高分辨率分型。结果表明：随机抽取的381例样本通过Hardy—Weinberg平衡检验，HLA—B^*40的基因频率为0．1692。在实验中仅检测到B^*4001，B^*4002，B^*4003，B^*4006，其血清学特异性分属B60，B61。各等位基因相对频率B^*4001为0．1192，B^*4002为0．0154，B^*4003为0．0038．B^*4006为0．0308。B^*40纯合子在高分辨水平上检测，其等位基因表现出一定的规律性，低分辨结果为B^*40XX(B^*4001组)，一，高分辨都是B^*4001；低分辨为B^*40XX(B^*4002组)．一，高分辨则为B^*4002或B^*4006或二者杂合子。结论：中国汉族人群B^*40基因家族中B^*4001占绝对优势。为了选择最适供者，建议临床配型中使用高分辨率基因分型。     

四川骨髓库汉族人群HLA-B~* 15等位基因分布

目的采用聚合酶链反应-序列分析基础上的HLA分型(polymerase chain reaction-sequence based typ-ing,PCR-SBT)方法,研究中国造血干细胞捐献者资料库(以下简称为中华骨髓库,CMDP)四川分库中四川籍汉族人群HLA-B*15组等位基因的分布特点。方法从四川骨髓分库中汉族人群中/低分辨分型HLA-B*15阳性样本中按不同血清学特异性分层抽取107例样本,应用PCR-SBT技术进行测序分型,获得四川籍汉族人群B*15组高分辨分型结果。应用方根法计算HLA-B*15各等位基因频率,同时与其他人群资料进行比较。结果共检测到16种已知HLA-B*15等位基因和1例未知等位基因。本研究中检出的16种等位基因有:B*15010101(B62),B*1502(B75),B*1503(B72),B*1505(B62),B*1507(B62),B*151101(B75),B*1512(B76),B*1513(B77),B*1517(B63),B*1518(B71),B*1525(B62),B*1527(B62),B*1529(B15),B*1532(B62),B*1546(B72),B*1558(B62)。其中以B*1502(36.2%)最常见,其次为B*15010101(21.6%),B*151101(9.5%),B*1518(6.9%),B*1525(6.0%),这5种等位基因占B*15等位基因家族的80%。在B*15等位基因家族中,表达B75抗原的等位基因B*1502和B*151101共占45.7%,但表达B62抗原的B*15等位基因多态性最强,共检出7种等位基因。此外,本研究发现1例未知等位基因,该等基因序列与目前所有已知的B*15或B*46等位基因序列均不相同,在外显子3的116位处存在1个点突变C->T。结论研究表明在四川籍汉族人群中HLA-B*15等位基因水平表现出丰富的多态性和特有的分布特征。     

广东汉族人群HLA-B~* 15等位基因分布

目的了解广东献血者汉族人群HLA-B*15等位基因的多态性。方法从1 691名广东汉族献血者中采用中/低分辨分型获得带有HLA-B*15基因型466例样本,进一步应用PCR-SBT技术进行测序分型,获得广东汉族人群B*15高分辨分型结果。应用PyPop软件计算HLA-B*15各等位基因频率,同时与其他人群资料进行比较。结果共检测到16种已知HLA-B*15等位基因,其中以B*15∶02(64.75%)最常见,其次为B*15∶01(13.26%),B*15∶25(4.554%),B*15∶27(4.158%),B*15∶12(3.960%),这5种等位基因占B*15等位基因家族的90.69%。在B*15等位基因家族中,表达B75抗原的等位基因B*15∶02、B*15∶11和B*15∶21共占67.92%,但表达B62抗原的B*15等位基因多态性最强,共检出6种等位基因。结论广东汉族人群中HLA-B*15等位基因表现出高度的多态性及其特有的分布特征。     

新的HLA-B*4061等位基因的核苷酸序列分析

本研究探讨HLA新的等位基因HLA-B＊4061的分子基础。采用盐析法抽提样本DNA，利用PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第1-8外显子，PCR产物直接经TOPO克隆到质粒载体中得到单链，对所得克隆进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。应用PCR-SSP方法证实测序所发现的突变。结果表明：先证者样本克隆测序得到2个等位基因，其中1个等位基因为B＋4601，另1个经blast验证其为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（DQ089628，DQ089629，DQ089630）。与最接近的B＊400101等位基因序列相比，新的等位基因仅在第2外显子上有1个核苷酸不同，即第272位C→A，导致第67位氨基酸Ser→Tyr。结论：HLA-B＊4061等位基因为新的HLA-B等位基因，已荣获世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名。     

HLA—B＊27基因亚型与强直性脊柱炎临床特征的相关性

目的比较不同HLA—B＊27亚型的强直性脊柱炎患者的临床症状、实验室和影像学检查结果,分析其与基因亚型的相关性。方法应用PCR—SSP方法检测HLA—B＊27抗原阳性的强直性脊柱炎患者（ankylosing spondylitis,AS）70例,应用Olerup高分辨PCR—SSP试剂检测HLA—B＊27的基因亚型,并分析亚型与临床特征的相关性。结果70例样本共检出B＊270447例（67．1％）、B＊270520例（28．6％）两种基因亚型,另有3例因为等位基因同质性而无法判定型别。HLA—B＊2704与B＊2705亚型患者的临床表现、实验室参数之间的差异无统计学意义。结论本地区AS患者HLA—B＊27亚型以B＊2704和B＊2705为主,且B＊2704最多见：HLA—B＊27各弧珏5I与临床特征的相关件无统计学意义．     

山东地区强直性脊柱炎患者 HLA-B27 基因高分辨分型结果分析

目的研究山东省强直性脊柱炎(AS)与亚型水平的HLA-B27等位基因的相关性。方法应用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术进行山东省AS患者HLA-B27基因高分辨分型。结果30例AS患者HLA-B27高分辨分型均为B*2704或B*2705,其中B*2704阳性11例,B*2705阳性19例,构成比分别是36.67%、63.33%。结论不同地区、不同人群的AS患者,HLA-B27各亚型分布频率存在差异性;山东地区AS患者HLA-B27等位基因以B*2704和B*2705为主,且B*2705最多见。     

中国北方汉族骨髓供者HLA-B＊15组基因多态性的PCR-SBT分型研究

为了研究中国北方汉族骨髓供者HLA—B＊15等位基因的分布特征，探讨其可能对临床供体选择的影响，从中华骨髓库陕西分库内随机抽取815名已知低分辨分型结果中国北方汉族骨髓供者，采用聚合酶链反应-碱基序列直接测序（PCR—SBT）方法对其中206例HLA—B＊15阳性样本和另外附加17例样本进行HLA—B位点DNA测序分析，并应用同源模建分子模拟技术对所有结果模拟出三维结构，用计算机软件Swiss—PdbViewer比较模拟结构间的差异大小。结果表明：随机抽取的815例样本HIJA—A、B、DRB1基因分布符合Hardy—Weinberg平衡定律，HIJA—B＊15基因频率为0．1379，总共检出16种HIJA—B＊15等位基因，分属7种血清学特异性，以B＊1501、B＊1511、B＊1502和B＊1518为主，频率分别为0．0485、0．0215、0．0178和0．0160，累计频率构成比占全部B＊15的75．11％，其余12种B＊15等位基因频率均〈0．0100。19例HIJA—B＊15，-测序分析表明，其中10例中低分辨水平上的纯合子中仅4例为真正意义上的B＊15xx，-纯合子，且均由各自优势基因构成。三维结构模拟分析发现同一血清型中既存在结构差异微小的等位基因，如B＊1501、1505、1507、1525、1527、1532（RMSD≤0．02nm），也存在差异较大的等位基因，如B＊1502、1511、1521之间以及B＊1503、1546之间（RMSD均为0．29nm），而一些分属不同血清型的等位基因之间结构却近似（RMSD值≤0．02nm）。结论：本研究应用PCR—SBT，首次取得了中国北方汉族样本量最大的高分辨水平HLA—B＊15基因多态性分布特征，这将有助于临床患者寻找合适供者，并为移植免疫及本地区群体遗传学等方面的研究提供了重要依据，且对于临床选择最适供者，像HLA—B＊15这样血清学特异性及基因亚型高度多态性的家族进行准确的高分辨分型是必要的。     

强直性脊柱炎患者HLA-B~* 27基因亚型及序列研究

目的研究已确诊的强直性脊柱炎(AS)患者HLA-B*27亚型的43个等位基因分布情况,为本地区临床诊断AS提供理论和实践基础。方法经HLA-B*27低分辨基因检测阳性的AS确诊患者标本70份应用PCR-SSP检测;在判读结果为B位点杂合子的27份中随机抽取17份,加上因HLA-B位点多态性及试剂盒局限性而无法判定确切结果的3份标本应用PCR-SBT检测。结果 50名患者表达HLA-B*2704阳性(包括纯合子31名,杂合子19名)2,1名患者表达HLA-B*2705阳性(包括:纯合子10名,杂合子11名),其中1名患者同时表达HLA-B*2704/2705杂合。HLA-B*2704合计阳性率为71.42%,占总标本数的70.41%;HLA-B*2705合计阳性率为30.01%,占总标本数的29.59%。通过直接计算法得出B*2704等位基因频率为0.578 6,B*2705等位基因频率为0.285 7。结论上海地区AS就诊患者HLA-B*27基因亚型为HLA-B*2704和HLA-B*2705此2种,以HLA-B*2704为主。配合应用PCR-SSP与PCR-SBT此2种分型方法具有互补意义,可以获得较为准确的分型结果。